肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对人乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA (siRNA)对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP4基因siRNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-35、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株TROP-2 mRNA分别是1.362±0.057、2.207±0.056、2.997±0.052、0.136±0.045、0.122±0.025、0.194±0.028和2.706±0.039,以MCF-7细胞最高;以TROP-2 siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附实验结果显示,5、10、20 nmol/L siRNA组黏附率分别为(52.9±2.5)％、(25.6±2.3)％、(12.8±2.2)％(P＜0.01);Transwell实验结果显示,5、10和20 mol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为78±17、39±15、19±16,而对照组分别为136±25、139±21(P＜0.01).结论 TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力.     

Osteopontin RNAi对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为的影响

目的 观察乳腺癌细胞MDA-MB-231 osteopontin (OPN) RNA靶向干扰效果.方法 采用OPN mRNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞,建立OPN基因沉默细胞株,采用RT-PCR、蛋白质印迹法从mRNA和蛋白水平检测乳腺癌细胞OPN表达量的变化,侵袭试验检测OPN下调对细胞侵袭能力的影响,MTT法测细胞增殖能力的改变,裸鼠成瘤后观察OPN RNA干扰对肿瘤细胞生长的影响及对移植瘤乏氧程度的影响.结果 与MDA-MB-231细胞相比,OPN沉默细胞在常氧和乏氧状态下OPN表达均显著下调(均P＜0.05),OPN稳定沉默细胞侵袭力和增殖能力下降(均P＜0.01),OPN RNAi能明显抑制裸鼠移植瘤的生长(P＜0.05),且移植瘤内乏氧程度降低(P＜0.05).结论 OPN RNA干扰可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞侵袭力和增殖能力,降低移植瘤的乏氧程度.     

小干扰RNA介导的蛋白激酶Cε基因沉默对肾透明细胞癌769P细胞增殖及迁移侵袭的影响

目的 观察下调蛋白激酶Cε(PKCε)基因对肾透明细胞癌细胞株769P细胞的生长、侵袭及迁移能力的影响.方法 用脂质体将PKCε小干扰RNA (siRNA)转染至769P细胞中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析PKCε基因及蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)及单细胞克隆试验测定细胞的生长;划痕及侵袭试验检测细胞的侵袭和迁移能力.结果 通过siRNA下调769P细胞中PKCε的表达后,细胞的增殖能力下降明显(P＜0.05);同时,细胞的侵袭和迁移能力较正常细胞降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PKCε可影响人肾透明细胞癌细胞株769P细胞的生长及细胞侵袭、迁移能力.     

小干扰RNA沉默血管内皮生长因子对ACHN肾癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响

目的 观察小干扰RNA (siRNA)沉默血管内皮生长因子(VEGF)对ACHN肾细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 化学合成针对VEGF的小干扰RNA,实验分4组,转染后收集细胞,通过蛋白印迹方法检测VEGF的表达,噻唑蓝(MTT)比色法、细胞黏附实验、划痕实验及Transwell法测定细胞的增殖、黏附、迁移及侵袭能力.结果 siRNA 1～2组VEGF表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组;在24、48、72 h,siRNA 1～2的增殖抑制率均高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05),其中以siRNA2组最为显著;与空白对照组比较,siRNA 1～2组的细胞黏附数量明显下降[(81.5±3.1)％比(40.5±2.6)％、P＜0.05,(81.5±3.1)％比(22.5±2.4)％、P＜0.05],其中以siRNA2组最为明显;siRNA1～2组的细胞迁移数量明显下降(162±9比81±5,P＜0.05;162±9比38±4,P＜0.05);siRNA1～2组细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05),且siRNA 2组的细胞侵袭能力明显低于siRNA 1组(P＜0.05).结论 VEGF基因在肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以靶向VEGF的siRNA转染肾细胞癌细胞,可抑制肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

特异性siRNA下调Cr-1基因表达对人结直肠癌细胞侵袭的影响

目的探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默Cr-1(Cr-1)基因对人结直肠癌细胞侵袭的影响。方法应用Cr-1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理结直肠癌SW480细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹检测Cr-1基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。结果 siRNA转染组Cr-1mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。体外试验发现,Cr-1siRNA可有效抑制结直肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P<0.05)。结论 Cr-1在结直肠癌细胞侵袭中起着重要的作用,采用Cr-1siRNA转染可抑制结直肠癌细胞侵袭。     

利用RNA干扰抑制CXCR4基因表达对乳腺癌细胞转移和侵袭能力的影响

目的探讨抑制趋化因子受体CXCR4基因对乳腺癌细胞转移和侵袭能力的影响。方法将人乳腺癌细胞株MDA-MB-31分为未干扰组、CXCR4干扰组、B-actin干扰组和空白载体干扰组。设计并合成了针对CXCR4基因的发夹式siRNA模板,体外合成siRNA表达框架（siRNA expression cassettes,SECs）,经脂质体转染CXCR4干扰组细胞,采用Western blot免疫印迹法和逆转录聚合酶链反应检测各组的抑制效果,用Biocdat Mamgel侵袭能力检测仪检测MDA-MB-231细胞的转移侵袭能力。结果SECs在mRNA水平和蛋白水平均明显抑制CXCR4基因的表达。CXCR4表达被抑制后,癌细胞侵袭能力受到明显抑制,与未干扰组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SECs可以高效特异地抑制人乳腺癌细胞中CXCR4基因的表达。CXCR4基因高表达与乳腺癌细胞的转移密切相关,抑制细胞中CXCR4的表达可以抑制乳腺癌细胞转移和侵袭能力。     

小干扰RNA沉默Kruppel样转录因子8对胃癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 观察小干扰RNA (siRNA)沉默Kruppel样转录因子8(KLF8)基因对胃癌细胞MKN-28增殖及侵袭能力的影响.方法 构建针对KLF8的小干扰RNA(si-KLF8),应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Westem blot技术检测转染后胃癌细胞中KLF8 mRNA和蛋白的表达,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测转染24、48、72 h的细胞增殖能力的变化,应用Transwell小室实验检测转染48 h后胃癌细胞侵袭能力的变化.结果 si-KLF8和阴性对照siRNA (si-CTRL)成功转染至胃癌细胞;si-KLF8组KLF8 mRNA和蛋白的表达量明显低于阴性对照组和正常对照组(P＜0.05);si-KLF8组增殖能力下降,24、48、72 h的吸光度值分别为0.125±0.003、0.193±0.005、0.223±0.005、0.267 ±0.003、0.315±0.006,穿膜细胞数为(42.0±3.6)个,均明显低于阴性对照组和正常对照组(P＜0.05);阴性对照组和正常对照组比较,上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 si-KLF8可抑制人胃癌细胞的增殖和侵袭能力,提示KLF8在胃癌的发生发展过程中发挥着重要的作用.     

RNA干扰畸胎瘤源性生长因子基因对食管鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨RNA干扰畸胎瘤源性生长因子（PCDGF）基因对食管鳞癌细胞Eca-109的影响.方法 脂质体介导PCDGF-shRNA的表达载体转染Eca-109细胞,应用RT-PCR、Westernblot检测转染后细胞PCDGF mRNA及蛋白的表达情况,分别采用Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒和Boyden小室法检测转染后Eca-109细胞的增殖能力和侵袭能力.结果 转染组PCDGF mRNA和蛋白表达水平均较其他组下调.转染24、48和72 h转染组细胞增殖均受到抑制,抑制率分别为20.4％、21.1％和20.9％,其细胞增殖活性较未转染组、阴性质粒组和脂质体组均明显降低（均 P＜0.05）.未转染组、阴性质粒组、脂质体组和转染组的细胞迁移数分别为118.8±12.0、100.8±9.0、114.3±4.7和 53.5±16.3,转染组与其余3组比较,差异均有统计学意义（P=0.001,P=0.002,P=0.002）.结论 RNA干扰PCDGF基因可抑制食管鳞癌细胞的体外增殖及侵袭能力,PCDGF基因可能成为基因治疗的新靶点.     

促肝细胞再生磷酸酶-1基因对肺癌细胞侵袭的影响

目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶-1(PRL-1)基因对肺癌细胞侵袭的影响及其机制.方法 应用PRL-1基因小干扰RNA(siRNA)转染处理肺癌细胞株A549后,分别采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测PRL-1基因和基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-7和MMP-9 mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养实验和Boyden小室模型实验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力.结果 siRNA转染组PRL-1 mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性(P＜0.01).软琼脂集落形成实验显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组集落形成数分别为17.8±1.6、13.6±1.5、8.8±1.4,而对照组为22.6±1.8(P＜0.05);Boyden小室模型实验显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为33.6±2.1、19.5±1.9、8.1±1.8,而对照组为49.4±2.3(P＜0.05).同时发现,转染组细胞MMP-2、MMP-7、MMP-9基因mRNA和蛋白水平明显下调.结论 PRL-1 siRNA转染可抑制肺癌细胞侵袭,其机制可能与下调MMP-2、MMP-7、MMP-9表达有关.     

RNA干扰沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因对结直肠癌细胞基质金属蛋白酶2和9表达的影响

目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)基因对结直肠癌细胞侵袭的影响和可能机制.方法 应用PRL-3基凶小干扰RNA(siRNA)转染处理结直肠癌细胞系HCT116后,分别采用实时定量PCR和Western印迹检测PRL-3基因和基质金属蛋白酶家族(MMP)-2、MMP-9的mRNA和蛋白水平;分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力;其次,将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察其在体内生长情况.结果 体外实验结果显示,PRL-3 siRNA可有效抑制结直肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P＜0.05,P＜0.01));转染组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白水平明显下调(P＜0.05).体内实验结果显示,对照组裸鼠组织癌细胞侵袭横纹肌和血管,而转染组未见这些现象.结论 采用PRL-3siRNA转染可抑制结直肠癌细胞侵袭,其机制可能与下调MMP表达有关.     

RNA干扰下调midkine基因表达对人乳腺癌细胞粘附和侵袭力的影响

目的 探讨中期因子(midkine,MK)基因siRNA对乳腺癌细胞生物学行为的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCCI、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测MK基因mRNA表达;筛选出MK表达最高者.采用MK siRNA...     

RNA干扰下调肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因表达对胃癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 培养人胃癌MGC-803、HGC-27及BGC-823细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP-2基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以计数法检测细胞黏附,以划痕法观察癌细胞迁移、以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果 荧光实时定量PCR方法显示,3株胃癌细胞中,TROP-2均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以TROP-2 siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白明显下降,且呈浓度依赖性;细胞黏附结果显示,转染组细胞黏附数量明显下降;划痕试验和Boyden试验结果显示,细胞迁移和侵袭力明显下降.结论 TROP-2基囚在胃癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的:探讨慢病毒介导的siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞株PANC-1侵袭能力的影响。方法:运用HER2基因小干扰RNA(siRNA)的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞,荧光定量RT-PCR和Western blotting观察HER2 mRNA和蛋白表达的改变,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞可显著抑制HER2 mRNA和蛋白表达;体外侵袭实验显示siRNA沉默HER2后,PANC-1细胞侵袭能力明显下降。结论:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒能有效抑制HER2的表达,抑制胰腺癌细胞体外侵袭能力。siRNA沉默HER2可能为预防和治疗胰腺癌的侵袭转移提供一种新的策略。     

RNA干扰转录因子激活蛋白4基因表达对结肠癌细胞株SW480的影响

目的观察转录因子激活蛋白4（AP-4）基因对结肠癌细胞株SW480生物学行为的影响。方法设计合成针对AP-4基因外显子7的小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒,用脂质体转染SW480细胞,通过RT-PCR技术、Western印迹、四甲基偶氮唑盐实验（MTT法）、流式细胞仪和Transwell体外侵袭实验等检测该siRNA对SW480细胞基因表达、细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡能力和浸润转移能力等生物学行为的影响。结果AP-4siRNA转染SW480细胞96h后,其AP-4mRNA水平下降了58%,培养液上清AP-4蛋白浓度下降了75%（P〈0.01）。细胞增殖受到明显抑制,抑制率达61%～78%;流式细胞仪检测结果显示,AP-4siRNA组SW480细胞凋亡率为（21.70±2.51）%,显著高于阴性对照组的（2.31±0.14）%（P〈0.01）,G0-G1期细胞比例增加（P〈0.01）,G2-M期细胞减少（P〈0.05）;Transwell体外侵袭实验显示,AP-4siRNA能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力（P〈0.01）。结论应用siRNA技术沉默AP-4基因能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为以AP-4为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。     

携Jagged 2基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其转染对胰腺癌细胞影响

目的:构建携带Jagged 2(JAG2)基因siRNA的慢病毒表达载体,并观察其转染人胰腺癌细胞生物学特性的影响。方法:采用基因重组技术构建若干携JAG2基因siRNA片段的慢病毒表达载体,将其转染经酶解法从胰腺癌组织标本中原代分离的胰腺癌细胞;选择对JAG2基因抑制效率最高的siRNA片段,通过MTT法、流式细胞术、Transwell小室实验观察其转染对原代胰腺癌细胞生长、凋亡、细胞周期及侵袭转移能力的影响。结果:所构建的携JAG2基因siRNA片段的慢病毒表达载体均能不同程度降低原代胰腺癌细胞JAG2 mRNA与蛋白的表达。JAG2 siRNA转染后,胰腺癌细胞的增殖明显降低、凋亡与S期阻滞明显增强、侵袭转移能力明显减弱(均P0.05)。结论:成功构建携JAG2基因siRNA慢病毒表达载体,其转染能有效削弱人胰腺癌细胞的恶性生物学特征。     

小干扰RNA抑制雄激素受体基因表达对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察小干扰RNA技术(siRNA)抑制雄激素受体(AR)基因的表达对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响.方法 化学合成针对AR的siRNA,用脂质体转染T24细胞.采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测AR mRNA和蛋白的变化.转染细胞48 h后用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞体外增殖活性的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡状况.结果 成功的转染T24细胞,实时荧光定量RT-PCR筛选出一条AR mRNA抑制效率最高的siRNA,行Western blot检测可抑制AR蛋白表达至70.3%.转染细胞48 h后,T24细胞增殖活性抑制率达到(25.9±5.4)%,细胞凋亡率达到21.61%.结论 应用siRNA干扰技术能有效的抑制AR基因的表达,同时可抑制人膀胱癌T24细胞的体外增殖活性及促进其凋亡的发生.     

下调HDAC6表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制

目的：探讨下调HDAC6表达对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响及其分子机制。 方法：分别用HDAC6 siRNA和阴性siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞,以未处理的MCF-7细胞为空白对照,分别用RT-PCR和Western blot方法检测细胞HDAC6与p21基因和蛋白的表达,CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测细胞增殖与细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡。 结果：干扰效果验证结果显示,HDAC6 siRNA转染能有效降低MCF-7细胞HDAC6 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）,而阴性siRNA无此作用（P>0.05）。与空白对照组比较,HDAC6 siRNA组细胞增殖受到明显抑制,细胞G0/G1期比例增加,S期比例减少,细胞的凋亡率明显增加（均P<0.05）;阴性siRNA组无上述改变（均P>0.05）。HDAC6 siRNA组细胞p21 mRNA与蛋白的表达均较空白对照组和阴性siRNA组明显升高（均P<0.05）。 结论：下调HDAC6的表达能抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞,并促进细胞凋亡,其机制可能与升高p21表达有关。