G蛋白信号调节蛋白2在肝癌组织中的表达及其对细胞增殖和糖酵解的影响

背景与目的:癌基因和肿瘤抑制因子失调是肝癌发生和发展的关键因素.既往研究表明G蛋白信号调节蛋白2 (GPSM2)在肺癌中起抑癌作用,而在乳腺癌和胰腺癌中发挥癌基因作用.然而,GPSM2在肝癌中的表达及其生物学功能尚未见报道.本研究旨在探讨GPSM2在肝癌组织中的表达及其对细胞增殖和糖酵解的影响.方法:用qRT-PCR和...     

纳米金对人体表皮细胞增殖作用的体外实验研究

目的：探讨纳米金对人体表皮细胞的增殖作用,为纳米金材料在皮肤组织相关医学领域的开发应用提供科学依据。方法：首先运用柠檬酸钠还原法制备纳米金溶胶,然后观察培养液中含有不同终浓度纳米金溶胶体溶液对人正常皮肤表皮细胞增殖的影响。结果：培养液中纳米金含量在0.48mg/L时就能显著促进表皮细胞增殖,随着纳米金含量增加,细胞增殖率增加,在含量达到12mg/L时,细胞增殖达到高峰,此后,细胞增殖率逐步下降。结论：培养液中纳米金含量在一定范围内具有促进人体皮肤组织表皮细胞增殖的作用。     

微血管周细胞的功能及潜在成骨能力

周细胞由星状间充质细胞所形成，并包在微血管内皮细胞外面。周细胞除有收缩作用，起干细胞作用参与伤口愈合、吞噬及防止渗漏等功能外，尚有成骨能力。应用Monastral蓝作标记，可以观察到周细胞演变为成骨细胞的过程。将周细胞作体外培养，可以具有成骨细胞表型的表达。     

ERK1／2MAPK通路在甲羟戊酸促进人类肾小球系膜细胞增殖中的作用

目的探讨甲羟戊酸（MVA）促进人类肾小球系膜细胞（HMC）增殖中，细胞外信号调控蛋白激酶1／2（ERK1／2）丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路的作用及机制。方法将体外培养的HMC根据不同的处理因素分为正常对照组、MVA组（100nmol／L）、MVA（100nmol／L）加PD98059（50μmol／L）组即MVA加PD组，以不含干预因素正常培养细胞为对照组，分别于干预后12、24h收集各组细胞，应用Western blot法检测P-ERK1／2、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果①p-ERK1／2蛋白的表达：MVA组在各个时间点的表达均明显上调，且随时间延长，蛋白表达增加（P〈0．05）；而MVA加PD组在各个时间点的表达均无明显变化（P〉0．05）。②Bcl-2与Bax蛋白的表达：MVA组与MVA加PD组在各个时间点Bcl-2蛋白表达均明显上调，且随时间延长表达增加（P〈0．05）；而各个时间点Bax蛋白的表达均明显下调（P〈0．05）；但随时间延长，MVA组表达下降（P〈0．05），而MVA加PD组表达下降不明显（P〉0．05）；③Bcl-2／Bax：MVA组与MVA加PD组在各个时间点均升高，且随时间延长Bcl-2／Bax升高（P〈0．05）；而在各个时间点，MVA加PD组较MVA组Bcl-2／Bax明显下降（P〈0．05）。结论MVA可通过Ⅱ水1／2信号转导通路促进HMC增殖；ERK1／2信号转导通路促进HMC增殖可通过上调Bcl-2及下调Bax的表达，并最终通过上调Bcl-2／Bax而实现。     

siRNA沉默ERK5基因对MC 3 T3-E1成骨细胞增殖及 BMP2/BMP7的影响

目的观察ERK5信号通路对MC3T3-E1成骨细胞的增殖,及功能分化蛋白BMP2/BMP7的影响。方法应用小RNA分子干扰技术(siRNA)沉默ERK5基因,分别将浓度为20、40、60、80 nmol/L的ERK5 siRNA干预MC3T3-E1成骨细胞,筛选ERK5 siRNA转染的最佳浓度。噻唑蓝实验(MTT)检测转染后12 h、24 h、36 h和48 h细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR检测ERK5、BMP2和BMP7 mRNA的表达。Westernblot检测不同干预组BMP2及BMP7蛋白的表达变化。结果当ERK5siRNA浓度为60 nmol/L时,MC3T3-E1成骨细胞的ERK5 mRNA的表达下降最为显著,沉默率为76.8±2.2%(P0.01)。ERK5 siRNA转染后12 h、24 h、36 h,成骨细胞的增殖受到明显抑制(P0.05),但48 h转染组未发现明显变化(P0.05)。ERK5 siRNA转染24 h后,实时荧光定量PCR结果显示:空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7 mRNA变化水平无显著性差异(P0.05),但ERK5 siRNA转染组的BMP2/BMP7 mRNA明显降低(P0.05);Westernblot结果显示,空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7蛋白未发现明显变化(P0.05),但转染组成骨细胞的BMP2/BMP7显著降低(P0.05)。结论 ERK5 siRNA对MC3T3-E1成骨细胞的增殖以及骨形态蛋白BMP2和BMP7的表达有明显抑制作用。     

咪唑立宾对大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨咪唑立宾（MZ）对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其对细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物p27^kip1表达的影响。方法大鼠系膜细胞同步后分为无血清组、20％FCS刺激组、20％FCS＋MZ组。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞数。BrdU标记法检测S期细胞。流式细胞仪检测细胞周期。Western印迹检测p27^kip1蛋白的表达。结果MZ可抑制20％FCS刺激所致的系膜细胞增殖，呈剂量依赖性。与20％FCS刺激组比较，20％FCS＋MZ组S期细胞的百分比显著降低[（10．28±1．26）％比（21．04±5．38）％，P〈0．05]。MZ可改善由20％FCS刺激诱导的GO／G1期细胞减少[（83．53±2．50）％比（71．15±1．25）％]和S期细胞增加[（12．22±1．22）％比（23．19±0．38）％，P〈0．051。20％FCS刺激后p27^kip1蛋白表达显著下降，MZ上调p27^kip1蛋白表达。结论MZ能够有效抑制系膜细胞增殖，作用时相在G1／S期转化，其抑制系膜细胞增殖的作用部分是通过上调p27^kip1蛋白表达实现的。     

肾周脂肪解偶联蛋白1表达对肾透明细胞癌患者预后的影响

目的评估肾周脂肪解耦连蛋白1(UCP1)表达对肾透明细胞癌(ccRCC)患者预后的影响。方法选取2013年2月至10月及2015年3月至10月收治的行后腹腔镜根治性肾切除术的ccRCC患者共98例,通过术前CT图像评估肾周脂肪厚度及黏连度。术后RT-qPCR检测肿瘤周围肾周脂肪UCP1,依据肾周脂肪UCP1 mRNA值,将患者分成高UCP1表达组(42例)与低UCP1组表达组(56例)。比较两组患者的一般临床资料、肾周脂肪厚度及黏连度,进一步采用Kaplan-Meier曲线评估两组间无进展生存期(PFS)的差异。采用单变量和多变量Cox回归分析确定PFS的潜在独立预后因素。结果高UCP1表达组的肾周脂肪厚度、肾周脂肪黏连比例、Fuhrman分级中Ⅲ~Ⅳ级比例和T分期中>T2期比例高于低UCP1表达组[(13.84±2.41)vs(10.75±1.99),42.86%vs 16.07%,28.57%vs 8.93%,21.43%vs 5.36%;P值分别为0.000,0.003,0.011,0.037]。随访期间(中位时间62.0个月),15例患者(12例高UCP1表达组,3例低UCP1表达组)发生肿瘤进展。Kaplan-Meier曲线显示,高UCP1表达组较低UCP1表达组PFS更差(71.43%vs 94.64%,P=0.001)。Cox回归分析显示,高UCP1表达和高T分期与低PFS显著相关(β=1.334,RR=3.796,95%CI=1.009~14.280,P=0.048;β=2.886,RR=17.930,95%CI=5.538~58.047,P=0.000)。结论肾周脂肪UCP1表达增加可能为ccRCC患者肿瘤进展的独立危险因素。术后联合肾周脂肪棕色化评估可能有助于临床更好的判断ccRCC患者的预后。     

细胞外信号调节蛋白激酶介导醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖

Objective To determine the role of extracellular signal-regulated kinases (ERK1/2) in aldosterone-induced rat mesangial cells (RMCs) proliferation. Methods RMCs were obtained from intact glomeruli of 4- to 6-week-old Sprague-Dawley rats and characterized according to published methods. RMCs between passages 5 and passages 10 were used. Protein levels of mineralocorticoid receptor(MR) in RMCs were analyzed by Western blotting. The cells were divided into the following groups: control group, PD98059(10 ?滋mol/L) group, eplerenone (1 ?滋mol/L) group, aldosterone (100 nmol/L) group, aldosterone (100 nmol/L) ＋PD98059 (10 ?滋mol/L) group, aldosterone(100 nmol/L)＋eplerenone (1 ?滋mol/L) group. ERK1/2 activity was measured by Western blotting. Cell proliferation of RMCs was evaluated by [3H]-thymidine uptake measurements. Results MR protein expression in RMCs was confirmed by Western blotting. Aldosterone activated ERK1/2, and the maximal ERK1/2 activation induced by aldosterone was at a concentration of 100 nmol/L. Aldosterone (100 nmol/L)-induced activation of ERK1/2 peaked at 10 minutes (P<0.05). Pretreatment with a selective MR antagonist eplerenone (1 ?滋mol/L) significantly attenuated aldosterone-induced ERK1/2 phosphorylation. Aldosterone (100 nmol/L) treatment for 30 hours increased [3H]-thymidine incorporation of RMCs (135%±8% of controls, P<0.05). Cellular proliferation induced by aldosterone could be prevented by pretreatment with eplerenone or an ERK (MEK) inhibitor PD988059. Conclusion Aldosterone induces RMCs proliferation through MR and ERK1/2 activation, which may contribute to the pathogenesis of glomerular mesangial injury.     

靶向细胞外信号调节激酶2短发夹式RNA对人食管癌Eca109细胞增殖的影响

目的 观察靶向细胞外信号调节激酶2(ERK2)短发夹式RNA(shRNA-ERK2)对人食管癌细胞株Eca109细胞增殖的影响.方法 构建重组质粒pGeneClipTM-shRNA-ERK2脂质体介导重组质粒转染人食管癌Eca109细胞,荧光倒置显微镜观察转染效率;噻唑蓝(MTT)比色法检测转染食管癌Eca109细胞后细胞的增殖能力;Western blot检测转染后食管癌Eca109细胞ERK2基因的表达和凋亡抑制基因Survivin的表达.结果 测序证实载体构建成功,荧光倒置显微镜观察转染后72 h转染效率50%～70%;转染重组质粒96 h后食管癌Eca109细胞生长抑制率最高为10.45%,与阴性对照组(非特异性序列对照)和空白对照组比较抑制效果明显(P＜0.05);转染重组质粒72 h和96 h后食管癌Eca109细胞株中ERK2和Survivin的表达与U0126对照组和阴性对照组比较均下降(P＜0.05).结论 重组质粒pGeneClipTM-shRNA-ERK2在食管癌Eca109细胞株中能发挥靶基因沉默作用,影响Survivin基因的表达,抑制食管癌细胞增殖.     

金雀异黄素对血小板源生长因子诱导大鼠肾小球系膜 细胞增殖及细胞外基质的影响

大量研究证实血小板源生长因子（PDGF）尤其PDGFBB能调节多种肾脏疾病肾损害和修复的病理过程。如介导肾小球系膜细胞（MC）增殖，促进细胞外基质（ECM）积聚，促进炎症介质和细胞因子的释放等。故拮抗PDGF的作用可能是延缓肾病进展的有效方法。金雀异黄素（genistem）可影响多种细胞尤其肿瘤细胞的细胞周期调节蛋白的表达而调控细胞的增殖与凋亡．并通过调节ECM降解系统酶的活性影响基质的积聚。我们拟研究不同浓度的金雀异黄素对大鼠MC增殖、ECM合成和降解的影响，为今后的进一步研究提供依据。     

苯肾上腺素对体外培养人前列腺平滑肌细胞增殖及凋亡的作用

目的探讨苯肾上腺素（PE）对体外培养人前列腺平滑肌细胞增殖及凋亡的作用。方法将原代培养得到的3—5代人前列腺平滑肌细胞随机分组，各组加入浓度为0．1μmol／L～100μmol／L的PE和／或10μmol／L a1受体阻滞剂酚妥拉明（Ph），以噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖情况．原位凋亡法（TUNEL）检测细胞凋亡情况。结果PE浓度大于1μmol／L时对前列腺平滑肌细胞有诱导增殖和抗凋亡作用（P均〈0.05），并且存在浓度依赖性。r分别为0．90和-0．893（P均〈0．05）；10μmol／L Ph能够拮抗PE的诱导增殖和抗凋亡作用（P〈0．01）。结论PE可以通过a1受体信号传导途径诱导体外前列腺平滑肌细胞增殖增加和凋亡减少。     

富含半胱氨酸酸性分泌糖蛋白及其肽段对人系膜细胞增殖和凋亡的作用

目的 研究富含半胱氨酸酸性分泌糖蛋白（SPARC）的全长蛋白及其2．1肽段对人肾小球系膜细胞（HMC）增殖、凋亡及细胞周期的影响，初步探讨SPARE全长蛋白及其肽段对HMC作用的可能机制。方法 采用体外传代培养的HMC，用不同浓度的SPARC全长蛋白及其肽段分别作用不同时间。采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡；应用Western印迹检测SPARC全长蛋白及肽段对HMC细胞周期调控蛋白cyclin D1、p21^Wafl表达的影响。结果 （1）与对照组比较，不同浓度（12．5、25、50μg／ml）SPARC全长蛋白及其肽段作用48h都能明显抑制HMC的增殖，并呈剂量和时间依赖性，96h达到高峰。（2）12．5μg／ml SPARC全长蛋白及其肽段作用96h，能明显影响细胞周期，使G0／G1期细胞增加，S期细胞减少，可使HMC的细胞周期阻滞在G0／G1期。（3）SPARC全长蛋白及其肽段可在体外诱导HMC细胞凋亡。（4）cyclin D1的表达明显减弱、而p21^Wafl的表达明显增强。结论 SPARC全长蛋白及其肽段可剂量依赖性地抑制HMC的增殖，其作用可能通过抑制cyclin D1的表达、上调p21^Wafl的表达，使细胞周期阻滞在G0／G1期。这为临床治疗原发性、继发性系膜增生性肾小球肾炎提供了线索。     

雷帕霉素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察雷帕霉素(RAPA)对人骨肉瘤细胞U-2OS和Saos-2增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 体外培养骨肉瘤细胞株U-2OS和Saos-2;噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测不同浓度雷帕霉素对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响;Western blot检测雷帕霉素作用后骨肉瘤细胞Fas蛋白表达的变化.结果 MTT检测显示雷帕霉素可抑制入骨肉瘤细胞增殖,在雷帕霉素浓度达到20 nmol/L时,抑制作用显著提高(P＜0.05),增殖抑制率分别达到31.2％和28.7％.流式细胞检测显示在雷帕霉素浓度达到20 nmol/L时,其诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用显著增强(P＜0.05).Western blot检测显示经雷帕霉素作用48 h后的骨肉瘤细胞Fas蛋白的表达明显增强.结论 雷帕霉素对入骨肉瘤细胞株U-2OS和Saos-2的增殖有抑制作用并可诱导其发生凋亡,其可能是通过上调Fas蛋白的表达而发挥作用的.     

AG1478对U87细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 观察表皮生长因子受体抑制剂Tyrphostin AG1478对人脑胶质瘤U87细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后的细胞生存率,流式细胞仪检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞周期分布和细胞凋亡.结果 5、10、15、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞生存率分别为(7 8.93±11.95)%、(46.42±4.12)%、(42.13±7.54)%和(37.48±4.69)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞凋亡率分别为(10.19±3.15)%、(32.02±1.60)%和(54.35±2.80)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞主要分布在G0～G1期,分别为(51.20±1.21)%、(78.61±1.57)%和(82.73±0.77)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Tyrphostin AG1478抑制体外人脑胶质瘤细胞增殖,阻滞细胞周期在G0～G1期,诱导细胞凋亡,均呈浓度依赖性.

Abstract：

Objective To investigate the effects of Tyrphostin AG1478 on glioma U87 cells proliferation, cells cycle and apoptosis. Methods U87 cells were cultured for 24 h in the medium which contained AG1478 with different concentrations (0, 5, 10, 15, 20 μmol/L). The methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to detect the survival rate, and the cells cycle and apoptosis of the cells were examined by using flow cytometry. Results The cells proliferation was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The survival rate of the cells in 5, 10, 15, 20 μmol/L AG1478 groups was (78.93 ±11.95)%, (46.42 ±4. 12)%, (42. 13 ±7.54)% and (37.48 ±4.69)% respectively, which was all significantly higher than that in 0 μ mol/L AG1478 group (P ＜0. 05 ). The apoptotic rate in 10, 25μmol/L AG1478 groups was (32.02 ± 1.60)% and (54. 35 ± 2. 80)% respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group ( P ＜ 0. 05 ). The cells cycle was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The percentage of cells treated with 10 and 20 μmol/L AG1478 in Go-G1 phase was ( 78. 61 ± 1.57 ) % and ( 82. 73 ± 0. 77 ) % respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group (P ＜ 0. 05 ). Conclusion The growth inhibition of glioma U87 cells caused by AG1478 may be associated with apoptotsis induction and the G0-G1 arrest. AG1478 was expected to become a new anti-tumor drug in human glioma.     

DHA对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制的研究

目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对人肝癌细胞株Bel-7402增殖和凋亡的影响及其机制。方法：用不同浓度的DHA（0,25,50,100,200 μmol/L）分别作用人肝癌Bel-7402细胞24,48,72 h后,用MTT法检测细胞的增殖情况、Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,并分别用流式细胞仪、real-time PCR和caspase-3活性检测试剂盒检测上述梯度浓度的DHA作用 Bel-7402细胞48 h后的凋亡情况、Bim基因表达和caspase-3活性。结果：不同浓度、不同时间DHA作用后,Bel-7402细胞增殖明显抑制,呈浓度和时间依赖性（均P<0.05）;细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达降低,呈明显浓度依赖性（均P<0.05）,但无明显时间依赖性（均P>0.05）。不同浓度DHA作用48 h后,Bel-7402细胞凋亡率、Bim基因表达和caspase-3的活性均明显增加,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。结论：DHA可抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

白花蛇舌草对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响及其机制

目的 观察白花蛇舌草在体外对胶质瘤U87细胞株增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 用不同浓度的白花蛇舌草含药培养基(0、5、10、15、20ml/L)处理U87细胞不同时间(24、72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对U87细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测对照组与实验组细胞的凋亡差异,免疫印迹法检测U87细胞中半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达水平的改变.结果 经白花蛇舌草5、10、15、20ml/L处理后,U87细胞增殖受到明显抑制,呈显著的剂量依赖性;经白花蛇舌草(5、10 ml/L)处理后U87细胞的凋亡率分别增加到(5.22±0.29)%、(8.38±0.65)%,明显高于对照组的(3.09±0.05)%(P＜0.01);白花蛇舌草可明显上调U87细胞中Caspase-3的蛋白表达,且呈浓度依赖性.讨论白花蛇舌草对胶质瘤U87细胞生长的抑制作用可能通过上调Caspase-3基因的表达从而诱导细胞凋亡实现.     

Effects of anaesthesia on proliferation,invasion and apoptosis of LoVo colon cancer cells in vitro

Tumour cell proliferation, invasion and apoptosis are crucial steps in tumour metastasis. We evaluated the effect of serum from patients undergoing colon cancer surgery receiving thoracic epidural and propofol anaesthesia on colon cancer cell biology. Patients were randomly assigned to receive propofol anaesthesia with a concomitant thoracic epidural (PEA, n = 20) or sevoflurane anaesthesia with opioid analgesia (SGA, n = 20). Venous blood was obtained before induction of anaesthesia and 24 hours postoperatively. The LoVo colon cancer cells were cultured with patient serum from both groups and the effects on proliferation, invasion and apoptosis were measured. Twenty‐four hours after surgery, the absorbance value of LoVo cells at 10% serum concentration from PEA was decreased when compared with SGA (0.302 (0.026) vs 0.391 (0.066), p = 0.005). The inhibitory rate of LoVo cells at 10% serum concentration from PEA was higher than that from SGA (p = 0.004) 24 h after surgery. The number of invasive LoVo cells at 10% serum concentration from PEA was reduced when compared with SGA (44 (4) vs 62 (4), p < 0.001). Exposure of LoVo cells to postoperative serum from patients receiving PEA led to a higher luminescence ratio (apoptosis) than those receiving SGA (0.36 (0.04) vs 0.27 (0.05), p < 0.001). Serum from patients receiving PEA for colon cancer surgery inhibited proliferation and invasion of LoVo cells and induced apoptosis in vitro more than that from patients receiving SGA. Anaesthetic technique might influence the serum milieu in a way that affects cancer cell biology and, thereby, tumour metastastasis.     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的：观察去甲二氢愈创木酸（NDGA）对人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞增殖,分化和凋亡的影响。方法：采用噻唑蓝（MTT）法,流式细胞仪法检测细胞增殖抑制怕情况,利用光镜和电镜观察,免疫组织化学及原位末端标记法（TUNEL）法检测培养细胞分化和凋亡的情况。结果：在200μmol/L浓度范围内,NDGA可使SHG－44细胞增殖受阻于G1→S期,且NDGA液浓度越高,这种作用越明显,即呈明显的剂量依赖性;光镜和电镜观察,免疫组织化学结果显示,NDGA对SHG－44细胞有明显的诱导分化作用;TUNEL法检测结果显示,一定浓度的NDGA处理SHG－44细胞12－96h,均可诱导SHG－44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数值增加越明显。结论：NDGA对SHG－44细胞有明显的增殖抑制,诱导分化和促进凋亡作用,但其确切机制有待进一步深入研究。     

左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖和凋亡的影响

目的观察左旋肉毒碱(L-carnitine,L-C)对人成骨细胞增殖和凋亡的作用。方法以3H掺入法(3H-TdR)测定左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖的影响;以吖啶橙/溴化乙啶染色和细胞凋亡ELISA(酶联免疫吸附法)试剂盒测定左旋肉毒碱对人成骨细胞凋亡的影响;以免疫印记法检测左旋肉毒碱干预前后活化型Caspase-3、-9蛋白质表达水平的改变。结果10~100mmol/L左旋肉毒碱能促进人成骨细胞增殖。吖啶橙/溴乙啶染色法示100mmol/L左旋肉毒碱干预使人成骨细胞凋亡细胞明显减少。ELISA结果示10~100mmol/L左旋肉毒碱干预可显著抑制人成骨细胞凋亡。10~100mmol/L左旋肉毒碱干预可抑制无血清饥饿诱导的人成骨细胞caspase-3、9活化增加。结论左旋肉毒碱促进人成骨细胞增殖,并通过下调Caspase-3、-9的活化抑制人成骨细胞凋亡。     

不同年龄人骨髓间充质干细胞体外增殖及成骨分化的研究

目的 :观测年龄对人骨髓间充质干细胞 (humanmesenchymalstemcells ,hMSCs)体外增殖、成骨分化的影响。方法 :使用密度梯度离心法分离不同年龄人骨髓MSCs进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察细胞生长情况 ,检测其增殖活性、碱性磷酸酶活性 (ALP)、诱导后骨钙素定量测定。结果 :低龄hMSCs较高龄hMSCs体外生长快、MTT、ALP及骨钙素浓度高。结论 :hMSCs的增殖和成骨分化的能力和活性随着年龄的增加而降低。