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阿糖胞苷(Ara-C)是治疗急性粒细胞白血病的首选药物,但临床相当高比例的病人对Ara-C产生耐药性,致使化疗失败。因此,我们采用逐渐提高药量和连续传代的方法,建立了L615小鼠白血病体内Ara-C耐药模型(L615/Ara-C),最终耐药剂量稳定在150mg/kg。其生物学特性表现为L615/Ara-C小鼠经Ara-C治疗比L615小鼠经Ara-C治疗组存活时间明显缩短,流式细胞术检测证明G_0/G_1期细胞增加,S期细胞减少。有意义的是L615/Ara-C细胞对辐射的敏感性比L615细胞增高。 相似文献
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新型bcl-2反义寡核苷酸F951提高白血病细胞对阿糖胞苷的敏感性 总被引:3,自引:0,他引:3
为了研究新型bcl-2反义寡核苷酸F951提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,用不同浓度的F951及F951联合小剂量Ara—C与HL-60细胞共培养后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法检测HL-60细胞增殖;用流式细胞术和RT-PCR法检测Bcl-2蛋白及其mRNA表达;以DNA片段化分析和TdT酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞。结果表明,F951与Ara—C联用组细胞生长抑制率最高,药物处理96小时后,台盼蓝拒染率明显低于单纯Ara—C处理组;MTT检测A值与未处理组相比,FNS对照组、Ara—C组、F951组、F951 Ara—C组细胞抑制率分别为:2墙%、27.63%、37.66%、57.24%,F951处理后HL-60细胞Bcl-2mRNA水平下降,Bcl-2蛋白减少,凝胶电泳可见典型的梯形带,F951与Ara—C联用后,诱导DNAladder的作用更加明显,凋亡细胞多见.结论:F951可下调bcl-2基因表达,促进细胞凋亡而增强Ara—C的抗肿瘤作用。 相似文献
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目的研究bcl-2、Bax、Fas/Apo-1基因在急性白血病(AL)细胞中的表达及其与AL的分型、临床特征、疗效及预后因素的关系.方法采用免疫组化方法检测54例初治AL骨髓细胞bcl-2、Bax、Fas/Apo-1蛋白表达情况.结果 AL骨髓细胞中bcl-2基因的表达显著高于正常对照组(P<0.05),而Bax、Fas/Apo-1基因的表达显著低于正常对照组(P<0.05).bcl-2、Bax、Fas/Apo-1基因表达在急性髓系白血病(AML)与急性淋巴细胞白血病(ALL)无显著差异;在AML亚型中,bcl-2在M4及M5中的表达高于M1、M2和M3(P<0.05);而Bax及Fas/Apo-1的表达在各亚型中无显著性差异(P>0.05).bcl-2的表达与初诊时的白细胞数呈正相关(r=0.44,P<0.05),与疗效呈负相关(r=-0.40,P<0.05),Bax的表达与骨髓白血病细胞数呈负相关(r=-0.39,P<0.05),与髓外浸润呈负相关(r=-0.45,P<0.05),急性淋巴细胞白血病中 Fas/Apo-1的表达与疗效呈正相关(r=0.34,P<0.05),与骨髓原始细胞数呈负相关(r=-0.71,P<0.05).结论 bcl-2、Bax、Fas/Apo-1基因的紊乱可能在AL的发病中起着重要作用,还与白血病的某些临床特征、疗效及预后因素密切相关. 相似文献
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目的 比较伴t(8;21)和正常核型的急性髓系白血病(AML)M2患者在诱导缓解后,应用含大剂量阿糖胞苷(HD-Ara-C)方案进行强化巩固治疗的疗效.方法 伴t(8;21)(q22;q22)AML-M2患者21例,正常核型AML-M2患者23例,在诱导缓解后,给予4个疗程HD-Ara-C方案强化治疗:Ara-C 3.0 g/m2,每12 h 1次,静脉滴注持续3 h,第1~3天,同时交替联合使用其他药物(米托蒽醌7mg·m-2·d-1第1~3天或阿克拉霉素30 mg·m-2·d-1第1~3天或依托泊甙70 mg·m-2·d-1第1~3天等).结果 伴t(8;21)患者组复发率29%,3年总体生存(OS)率76%,3年无病生存(DFS)率71%;正常核型组复发率57%,3年OS率65%,3年DFS率43%.两组患者复发率及3年DFS率差异有统计学意义(P《0.05),3年OS率差异无统计学意义(P>0.05).结论 伴t(8;21)AML-M2患者诱导缓解后,应用4个疗程含HD-Ara-C方案进行强化巩固治疗,复发率低,可以提高DFS率. 相似文献
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迄今对于难治或复发急性髓系白血病(AML)尚未取得共识的有效治疗方案。本研究评价环磷酰胺、阿糖胞苷和拓扑替康联合组成的CAT方案治疗37例难治、复发AML患者的疗效和安全性,其具体化疗方案为:环磷酰胺300mg/m^2,静脉滴注,每12小时1次,第1至第3天;拓扑替康,1.25mg/(m^2·d),静脉滴注,第2至第6天,阿糖胞苷,500mg/(m^2·d),静脉滴注,第2至第6天。结果表明:37例患者均完成1疗程化疗,完全缓解(CR)12例(32.4%),部分缓解(PR)2例(5.4%),总有效率达37.8%,其余23例未缓解(NR)(62.2%)。在18例复发病例中,CR6例(33.3%),PR2例(11.1%),NR10例(55.6%)。19例原发难治性AML患者中,6例获CR(31.6%),NR13例(68.4%)。复发组和原发难治组患者的治疗有效率分别为44.4%、31.6%,其差别无统计学意义(P=0.42)。大部分患者经历了Ⅲ-Ⅳ度血液学毒性,最常见的严重非血液学毒性(Ⅲ-Ⅳ度)是感染和口腔黏膜炎,发生率分别达到86.5%和37.8%。观察期(停化疗28天)内死亡1例。中位随访时间为4(0—33)月,总体中位生存时间4(1.8—6.2)月,有效患者和无效患者的中位生存期分别为9(5.7-12.3)月、2(0—5.0)月(P=0.00)。结论:CAT方案治疗难治、复发AML疗效确切,患者耐受性良好,值得进一步扩大临床试验。 相似文献
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目的:了解类芳烃受体核转位蛋白2(BMAL2)在急性髓系白血病(AML)中的表达及与患者预后的关系,分析其对AML细胞有氧糖酵解和增殖的影响。方法:应用实时定量PCR法检测AML患者和正常对照组的骨髓单个核细胞中BMAL2的表达情况。利用美国国家生物技术信息中心公共数据库分析BMAL2表达与AML患者预后的相关性。通过慢病毒系统敲低AML细胞系HL-60和Kasumi-1中BMAL2的表达,葡萄糖摄取实验、乳酸含量实验、CCK-8法、细胞集落形成实验检测其对细胞糖代谢、细胞增殖的影响。结果:BMAL2 m RNA在AML中的表达水平显著高于正常对照组(P<0.01)。BMAL2表达高的AML患者总生存时间较低表达患者明显缩短(P<0.05)。敲低AML细胞系HL-60和Kasumi-1中的BMAL2后,细胞葡萄糖摄取减少,乳酸生成减少。RT-PCR及Western blot检测结果显示,BMAL2通过增强HIF1A的表达来促进AML细胞有氧糖酵解,进而促进细胞增殖。结论:BMAL2高表达于AML中,通过HIF1A增强AML细胞有氧糖酵解从而促进细胞增殖。 相似文献
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目的:定量研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中BCL2L10基因启动子区异常甲基化状态,探讨其与AML的临床关系.方法:应用焦磷酸测序法,对62例原发AML患者的骨髓进行BCL2L10基因启动区甲基化水平的定量检测,并以10例缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血的骨髓标本及10例健康人外周血标本作为对照.结果:62例AML中32例标本BCL2L10基因启动区高甲基化,阳性率为51.6%,而20例对照组中1例标本BCL2L10基因启动区高甲基化,阳性率为5.0%;BCL2L10基因在AML患者中的高甲基化阳性率显著高于对照组(P< 0.01);BCL2L10基因的甲基化状态与AML患者的年龄、性别及临床分型间均未出现显著相关性(P>0.05).结论:BCL2L10基因启动子区异常甲基化在AML中普遍存在,其可能是引起AML的分子机制之一. 相似文献
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目的探讨脂氧合酶抑制刑对HepG2细胞增殖的影响及其相关机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞,应用不同浓度脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)处理HepG2细胞,利用MTT比色法、生长曲线、细胞克隆形成试验观察NDGA对HepG2细胞增殖的影响。结果NDGA对HepG2细胞具有明显的生长抑制作用,不同浓度的NDGA(50、100、150、200μmol/L)处理HepG2细胞72h的抑制率分别为27.34%、41.76%、57.08%和69.17%,其IC50值为109.13μmol/L。细胞克隆形成率分别为21.63%。17.33%,12.53%,7.97%,明显低于对照组的31.70%。结论NDGA对HepG2细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖。 相似文献
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维甲酸诱导HL-60细胞Fas蛋白表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)和9顺式维甲酸(9cisRA)对HL60细胞Fas表达水平及维甲酸对抗Fas抗体诱导的细胞凋亡敏感性的影响。方法:用流式细胞仪检测HL60细胞膜Fas蛋白表达水平;分别采用形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪检测抗Fas抗体诱导的细胞凋亡。结果:HL60细胞Fas弱表达。经10-6mol/LATRA或9cisRA分别预处理4天后,HL60细胞Fas表达水平及对抗Fas抗体诱导凋亡的敏感性均显著提高。9cisRA提高HL60细胞对抗Fas抗体诱导凋亡的敏感性的能力强于ATRA。结论:维甲酸可上调HL60细胞表达Fas,这可能与维甲酸诱导HL60细胞分化相关。进一步深入探讨其分子机制,将为肿瘤治疗,特别是自体骨髓移植中骨髓净化提供新方法 相似文献
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c-myc在大黄素抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡中的作用 总被引:8,自引:0,他引:8
目的研究中药大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的影响及探讨c—myc基因在其中的作用。方法应用MTT法绘制细胞生长曲线;细胞集落培养观察大黄素对HL-60细胞增殖的影响;DNA倍体分析、线粒体细胞凋亡检测法、末端缺失原位标记(TUNEL)法及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡;RT—PCR及Western blot检测大黄素作用前后c—myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果大黄素能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)约为20μmol/L;DNA片段化、亚G1峰(凋亡峰)的检出及线粒体细胞凋亡检测等证实大黄素能有效诱导HL-60细胞凋亡,细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关。大黄素与HL-60细胞作用后c—myc基因mRNA及蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖,诱导其凋亡;c—myc基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。 相似文献
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槲皮素对白血病细胞中PML基因及蛋白表达的影响和定位的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
目的 探讨PML基因及蛋白在白血病细胞中的表达和细胞内分布定位。方法 经全反式维甲酸(ATRA)、槲皮素处理后的NB4、HL-60、K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright染色法及荧光染色法;PML蛋白细胞分内分布定位采用免疫荧光技术;PML mRNA表达的检测采用RT-PCR法。结果 (1)ATRA处理后,NB4和HL-60细胞形态学上出现分化表现,K562细胞无变化;经槲皮素处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。(2)ATRA处理后,NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白恢复定位,HL-60、K562细胞内PML蛋白定位分布无变化;槲皮素处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白聚积于POD结构,随后降解,在HL-60及K562细胞,PML蛋白发生相似改变。(3)ATRA、槲皮素对各组细胞PMLmRNA表达均无显著影响。结论 在不同诱导剂刺激下,PML在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡、控制细胞生长的作用。 相似文献
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p53基因诱导白血病细胞凋亡的机制研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中内源性TGF-β1、TNF-α、端粒酶活性、Bcl-2表达的改变及其意义。方法:利用脂质体将温敏型p53基因[pN53cG(Val135)]导入p53基因缺失的白血病细胞系HL-60、K562细胞,经G418筛选,获得稳定表达p53蛋白的抗性克隆细胞HL-60pN53cG,K562-pN53cG细胞。采用缺口末端标记法、片段化DNA分析、RT-PCR、定量PCR、ELISA、PCR-ELISA、流式细胞术等方法检测外源性p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中TGF-β1、TNF-α、bcl-2、端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA表达变化、细胞上清TGF-β1水平和端粒酶活性及。TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS对白血病细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:①外源性野生型p53基因诱导细胞凋亡过程中内源性。TGF-β1和TNF-α mRNA表达上调,bcl-2及hTERT mRNA表达下调,细胞培养上清TGF-β1蛋白水平明显升高,端粒酶活性水平下降;②TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS能够明显抑制野生型p53基因诱导细胞凋亡的发生,并使细胞bcl-2 mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平。结论:p53基因诱导白血病细胞凋亡可通过上调内源性TGF-β1和TNF-α水平,下调hTERT mRNA表达及端粒酶活性,抑制bcl-2基因表达而发挥作用。 相似文献
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蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2、Survivin、Smac/DIABLO表达的影响 总被引:9,自引:0,他引:9
目的 研究蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中,对线粒体凋亡途径相关基因Bcl-2、Bax、Survivin及Smac/DIABLO表达的影响。方法 采用锥虫蓝拒染法检测细胞存活情况,细胞形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析Bcl-2、Bax、Smac/DIABLO、Survivin及caspase-3蛋白表达,RT-PCR检测SurvivinmRNA表达。结果 蟾蜍灵抑制HL-60细胞增殖,24,48及72h的,IC50值分别为25.8,8.0及2.1nmol/L。蟾蜍灵大于50.0nmol/L时可明显诱导HL-60细胞凋亡。50.0nmol/L蟾蜍灵作用6,12,24及48h,Bcl-2蛋白表达分别下调至作用前的88.6%,53.3%,19.2%及9.5%,而Bax蛋白表达无明显变化,Bcl-2/Bax比值由2.0分别降至1.7,1.1,0.4及0.2。Survivin蛋白表达分别下调至作用前的75.2%,54.8%,37.5%及20.3%;Survivin mRNA表达在作用6,12和24h后分别下调至作用前的85.7%,39.4%和12.5%,在作用48h后几乎检测不到。50.0nmol/L蟾蜍灵作用12,24及48h,线粒体部分的Smac/DIABLO蛋白表达分别下调至作用前的77.5%,21.2%及15.3%,而胞浆部分的Smac/DIABLO蛋白表达分别上调至作用前的1.4,2.0.及3.5倍。蟾蜍灵作用8~48h可检测到caspase-3的活化亚基。结论 蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡与Bcl-2及Survivin表达下调、线粒体释放Smac/DIABLO及caspase-3活化有关。 相似文献
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高三尖杉酯碱启动白血病细胞凋亡的比较蛋白质组学研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:解码高三尖杉酯碱(HHT)启动白血病细胞凋亡相关蛋白。方法:在建立HHT启动HL-60细胞早期凋亡模型的基础上,分别提取未用和经HHT作用的HL-60细胞总蛋白,构建其相应的双向电泳图谱,应用图像扫描仪及图像分析软件获得差异蛋白斑点的信息,运用MALDI-TOF-MS分析呈显著性差异的蛋白斑点,将检测出的肽链质量输入蛋白质数据库获得差异蛋白质信息。结果:MHCI类抗原分子、钙结合蛋白D-28K、氯通道蛋白6、癌蛋白OP18、锌指蛋白HELIOS和凋亡抑制物样蛋白2与HHT启动白血病HL-60细胞凋亡相关。结论:运用比较蛋白质组学技术解码HHT启动白血病细胞凋亡相关蛋白,将有助于揭示HHT治疗白血病的机制,为开发HHT相关的以诱导白血病细胞凋亡为靶位的药物先导化合物提供参考。 相似文献
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目的观察32P体外照射对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡作用.方法通过光镜法、MTT、JAM及流式细胞法(FCM)分析3种不同剂量(0.02 mCi/mL,0.10 mCi/mL,0.50 mCi/mL)的32P分别处理HL-60细胞24、48、72 h后,对HL-60细胞增殖抑制和凋亡的影响.结果32P有明显抑制HL-60细胞增殖的能力,肿瘤细胞抑制率均随32P剂量的增加而增加,呈剂量依赖性(P<0.01),随照射时间的延长,细胞增殖抑制率增加,呈照射时间依赖性(P<0.05);光镜法显示实验组凋亡细胞和死亡细胞随照射剂量的增大而增多;JAM法分析细胞DNA的断裂程度,32P作用于HL-60细胞后随着辐射剂量的增加DNA断裂程度不断增加,实验组均高于正常对照组(P<0.05,P<0.01);流式细胞法检测不同剂量的32P处理HL-60细胞24、48、72 h后,除48 h的低剂量组外,其余实验组HL-60细胞凋亡率均明显高于正常对照组(P<0.01,P<0.05).结论32P在体外有明显的抑制HL-60细胞增殖和诱发细胞凋亡的作用,32P是一种很好的抗肿瘤放射性核素. 相似文献
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hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对 HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用。方法用流式细胞术检测 hTERT ASODN 转染 HL-60细胞72 h 后细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞 DNA 梯带;将转染及未转染寡核苷酸的 HL-60细胞分别接种BALB/c 裸鼠,观察成瘤情况,切片观察移植瘤组织形态;另取10只 BALB/c 裸鼠,改进成瘤方法使其均匀成瘤后分成两组,在瘤体局部分别注射 ASODN、磷酸盐缓冲液(PBS),经7d 治疗后测量瘤体并切片观察其细胞形态变化,采用 TUNEL 方法检测细胞凋亡。结果 hTERT ASODN 作用于 HL-60细胞72 h 后,流式细胞术检测出早期凋亡峰,琼脂糖凝胶电泳显示 DNA 梯形条带,SODN 组及空白对照组未检测出凋亡峰及 DNA 梯形条带 ASODN 转染的 HL-60细胞组 BALB/c 裸鼠接种后第16~17天成瘤,5只中2只成瘤,未转染组在第12~13天成瘤,5只中4只成瘤,成瘤后 ASODN 治疗组瘤组织间质及血管较少,PBS 治疗对照组瘤组织间质发达,血管丰富。成瘤后 ASODN 治疗前肿瘤体积为(100.9±24.6)mm~3,治疗后肿瘤与 PBS 对照组比较,生长明显减缓[瘤体积分别为(422.7±326.4)mm~3和(786.4±357.6)mm~3](P<0.05) 组织切片显示,ASODN 治疗组瘤组织中可见大量细胞呈现凋亡形态,PBS 治疗组则少见凋亡细胞 TUNEL 检测显示,ASODN 治疗组瘤组织中阳性细胞数较 PBS 治疗组明显增多(P<0.05)。结论 hTERT 基因 ASODN 能够诱导 HL-60细胞凋亡并降低其在 BALB/c 裸鼠体内的致瘤性,抑制移植瘤增长速度。 相似文献
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Induction of caspase-3-dependent apoptosis in human leukemia HL-60 cells by paclitaxel 总被引:5,自引:0,他引:5
Lu KH Lue KH Liao HH Lin KL Chung JG 《Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry》2005,357(1):65-73
BACKGROUND: Paclitaxel, an antineoplastic drug, inhibits cell growth and cell cycle progression and induces apoptosis in human leukemia HL-60 cells. Caspase-3 plays a direct role in proteolytic cleavage of cellular proteins responsible for progression to apoptosis. METHODS: We examined the cell morphology and apoptosis in HL-60 cells after exposure to paclitaxel and measured caspase-3 activities with or without z-VAD-fmk (a broad-spectrum caspase inhibitor) pretreatment by flow cytometric analysis and Western blotting. RESULTS: Together, our results were (1) paclitaxel mainly induced G2/M cell cycle arrest in HL-60 cells (p<0.001); (2) time (p<0.001)- and dose-dependent (p<0.001) apoptosis of HL-60 cells was induced by paclitaxel; (3) in HL-60 cells, z-VAD-fmk blocked paclitaxel-induced apoptosis (12 h: p<0.001; 24 h: p<0.01; 48 h: p<0.01; 72 h: p<0.001) and caspase-3 activation (12 h: p<0.05; 24 h: p<0.01; 48 h: p<0.01; 72 h: p<0.01). CONCLUSIONS: These results suggest that paclitaxel can induce G2/M cell cycle transition and apoptosis via caspase-3 activity in HL-60 cells. 相似文献
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本研究探讨人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(hrsTRAIL)单用或联合阿糖胞苷(Ara—C)诱导HL-60细胞凋亡作用及其机制。在体外以人类急性白血病细胞株HL-60为研究对象,分5组进行细胞培养:对照组、Ara—C组、rsTRAIL组、同时给药组(Ara—C+rsTRAIL)、先后给药组(Ara—C→rsTRAIL)。采用MTT比色法测定细胞生长抑制率;应用Annexin V/PI染色和流式细胞术检测细胞凋亡率;使用流式细胞术检测不同浓度的Ara—C对细胞表面DR5表达水平的影响及rsTRAIL单药组、先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8活性。结果表明:rsTRAIL能抑制HL-60细胞生长并诱导HL-60细胞凋亡。先后给药组诱导HL-60细胞凋亡率大于同时给药组。先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8的活性高于rsTRAIL组。5mg/L、10mg/LAra—C作用于HL-60细胞24小时,其细胞表面DR5表达水平升高,大于对照组。结论:rsTRAIL抑制HL-60细胞生长.诱导HL-60细胞凋亡。Ara—C上调HL-60细胞表面DR5表达水平。增强rsTRAIL诱导HL-60细胞凋亡的作用。Ara—C和rsTRAIL联合用药时,在先加Ara—C、再加rsTRAIL组诱导HL-60细胞凋亡的效果比同时给药组效果好,其机制可能与Ara—C上调细胞表面DIL5表达水平和(或)增强细胞内caspase-8的活性有关。 相似文献