肌球蛋白ATP酶组化染色法及其应用

近年来,肌肉组织化学技术已成为诊断肌病的主要工具之一。肌球蛋白的ATP酶染色是鉴别Ⅰ型和Ⅱ型肌纤维最理想的反应酶,肌肉收缩     

酸性和碱性预孵育处理对骨骼肌肌纤维分型的影响—肌球蛋白ATP酶法

为比较分别经酸性和碱性预孵育液处理的肌球蛋白ATP酶反应法对骨骼肌肌纤维分型的影响．采用酸性（pH4．5）和碱性（pH10．4）预孵育肌球蛋白ATP酶法对大鼠躯干的腹外侧荐尾肌、后肢的处长伸肌相邻切片分别染色，然后比较相邻切片的相同肌纤维类型。结果显示两种预孵育液对ⅡA型肌纤维的分型设有影响，而酸性预孵育液处理后所鉴别的Ⅰ型和ⅡB型肌纤维，在经碱性预孵育液后有少数分别呈现为ⅡB型和ⅡA型肌纤维。本研究表明酸和碱性预孵育ATP酶染色对骨骼肌肌纤维的分型没有完全对应的“镇相”结果，这可能提示肌球蛋白ATP酶的活性在不同的酸性和碱性环境中有不同的稳定性。     

大鼠胸深肌肌纤维型的组成及分布

目的探讨SD大鼠胸深肌的肌纤维型组成和分布,借以了解该肌功能。方法采用Guth-Samaha肌球蛋白ATP酶组织化学染色法并稍做改良,对成年SD大鼠胸深肌冰冻切片进行肌纤维分型研究。结果大鼠胸深肌经肌球蛋白ATP酶组织化学染色后可明确分出2型肌纤维,即明亮色白的Ⅰ型纤维(慢缩纤维)和幽暗深褐的Ⅱ型纤维(快缩纤维),并且,两种纤维在肌内呈棋盘样均匀分布;图像分析仪下计数Ⅱ型纤维达到65%±6%,而Ⅰ纤维仅占35%±5%,前者明显高于后者(P<0.01)。结论大鼠胸深肌以Ⅱ型纤维为主,属于力量和速度型肌。     

背阔肌的组织化学特征研究

本文用酸碱预孵育肌球蛋白ATP酶法、乳酸脱氢酶法、油红O法、PAS法,研究了20只犬的背阔肌.结果表明,用肌球蛋白ATP酶法可将肌纤维分为Ⅰ型和Ⅱ型.Ⅰ型可分为3个亚型,Ⅱ型可分为ⅡA、ⅡB和ⅡC3个亚型.Ⅱ型肌纤维在背阔肌中占的比例大.Ⅱ型肌纤维含有较多糖原,Ⅰ型肌纤维含有较多脂肪颗粒.通过酶的染色观察,Ⅰ型、ⅡB和ⅡC亚型肌纤维的乳酸脱氢酶活性强弱无明显差别,ⅡA亚型肌纤维乳酸脱氢酶活性较弱.本文对背阔肌组织化学特征进行了讨论.     

实验大鼠斜方肌肌纤维型组成及分布研究

目的探讨大鼠斜方肌的肌纤维型组成和分布,借以了解该肌功能。方法取成年SD大鼠斜方肌升部肌组织进行冰冻切片(8μm厚),采用Guth-Samaha肌球蛋白ATP酶组织化学染色法并稍做改良,对其进行肌纤维分型研究。结果SD大鼠斜方肌经肌球蛋白ATP酶组织化学染色后可明确分出2种肌纤维型,即白色的Ⅰ型纤维(慢缩纤维)和深褐色的Ⅱ型纤维(快缩纤维),2种肌纤维在肌内呈棋盘样均匀分布;图像分析计数其Ⅰ型纤维占(48.8±6.9)%,Ⅱ型纤维比例为(51.2±6.9)%,2者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论SD大鼠斜方肌2型肌纤维所占比例均等,与其维持颈背部姿势的作用一致。     

牵张延长下颌骨对二腹肌纤维型构成影响的研究

目的 :研究牵张延长下颌骨前后二腹肌的组织化学特征。方法 :应用肌球蛋白ATP酶 (pH9.4)染色法 ,观测了牵张前后 8只狗的二腹肌肌纤维类型 ,并用VIDAS图像分析仪测量其横截面积。结果 :ATP酶染色 ,二腹肌肌纤维分为Ⅰ型和Ⅱ型 ,Ⅰ型纤维数量较Ⅱ型纤维少。牵张延长下颌骨后 ,Ⅰ型纤维数量显著性增多 ,Ⅱ型纤维数量显著性减少。牵张成骨后 ,Ⅰ型纤维、、Ⅱ型纤维的横截面积与术前比较没有显著性差异。结论 :牵张延长下颌骨后 ,与牵张方向平行的二腹肌肌纤维型分布发生了与功能变化相适应的改变     

大鼠腹外斜肌肌纤维型组成及分布研究

目的探讨大鼠腹外斜肌的肌纤维型组成和分布,借以了解该肌功能,并为运动训练模型的建立提供理论依据和研究平台。方法采用Guth-Samaha肌球蛋白ATP酶组织化学染色法并稍做改良,对成年SD大鼠腹外斜肌冰冻切片进行肌纤维分型研究。结果SD大鼠腹外斜肌经肌球蛋白ATP酶组织化学染色后可明确分出2型肌纤维,即明亮色白的Ⅰ型纤维(慢缩纤维)和幽暗深褐的Ⅱ型纤维(快缩纤维),并且,2种纤维在肌内呈棋盘样均匀分布;图像分析仪下计数Ⅱ型纤维达到(84.8±5.3)%,而Ⅰ纤维仅占(15.2±2.1)%,前者占绝对优势(P<0.01)。结论SD大鼠腹外斜肌以Ⅱ型纤维为主,除了起保护腹腔脏器作用外,还参与力量和速度运动。     

大鼠胸浅肌肌纤维型组成及其葡萄糖转运蛋白4表达特征

目的:研究大鼠胸浅肌不同肌纤维型的组成分布及其葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达差异,了解该肌功能。方法:采用Guth-Samaha肌球蛋白ATP酶染色法并稍做改良,对成年SD大鼠胸浅肌冰冻切片进行肌纤维分型研究,并用免疫组织化学法对肌纤维分型后的切片进行GLUT4表达分析。结果:大鼠胸浅肌经肌球蛋白ATP酶染色后可明确分出明亮色白的Ⅰ型纤维和幽暗深褐的Ⅱ型纤维,2种纤维在肌内呈棋盘样均匀分布;Ⅰ型纤维比例为(52·6±6·3)%,Ⅱ纤维为(48·4±5·7)%,两者比例均等。免疫组织化学显色结果显示,GLUT4主要存在于包裹肌束的肌膜和Ⅰ型纤维膜上,而Ⅱ型纤维膜表达不明显。结论:大鼠胸浅肌两型纤维比例均等,属耐力兼速度型肌;Ⅰ型纤维膜的GLUT4表达高于Ⅱ型纤维,表明前者葡萄糖摄取能力高于后者。     

退变性颈椎失稳颈后深部肌肉的组织化学特征及其临床意义

目的：研究颈后深部肌肉的肌纤维型分布和横切面积,探讨其生理功能和在退变性颈椎失稳发病中的作用。方法：应用肌球蛋白ＡＴＰ酶染色法,观察正常人（４例）和退变性颈椎失稳患者（４例）颈后深部肌肉各型肌纤维的比例和结构特征,并测量肌纤维的横切面积。结果：正常人和退变性颈椎失稳患者颈后深部肌肉Ⅰ型和Ⅱ型纤维交织排列,横切面呈多边形或椭圆形,Ⅰ型纤维数量及横切面积均显著大于Ⅱ型纤维。退变性颈椎失稳患者肌纤维边界不清,横切面上可见小空泡,Ⅰ型纤维减少,Ⅱ型纤维增多。结论：颈后深部肌肉对维持颈段脊柱的生理姿势和运动起重要作用,肌纤维病理学改变是退变性颈椎失稳发病的重要因素之一。     

慢性低氧大鼠膈肌纤维横截面积变化

本文通过建立慢性常压和减压低氧大鼠模型 ,采用肌球蛋白ATP酶 (mATP酶 )组化方法将肌纤维分为Ⅰ、ⅡA和ⅡB三种类型和显示毛细血管 ,用计算机图象分析系统测定肌纤维横截面积 (CSA)和毛细血管密度变化 ,观测慢性低氧大鼠膈肌不同类型纤维CSA变化 ,探讨其与毛细血管密度变化的关系。慢性低氧大鼠肌纤维CSA均不同程度缩小 ,CSA缩小与毛细血管密度增加显著相关。膈肌CSA缩小使毛细血管相对密度增加 ,有利于氧运输和弥散 ,膈肌氧化能力增强。     

低氧高糖条件下家兔骨骼肌Ⅰ型纤维向Ⅱ型纤维转化的作用

目的通过在体外对家兔骨骼肌两型肌纤维细胞进行不同培养方法的摸索和对其标志蛋白MHC同功型变化的检测,探索两型肌纤维细胞间的转化条件。方法运用改良的肌球蛋白ATP酶组织化学染色法对家兔骨骼肌的肌纤维类型进行染色并观察;应用RT-PCR方法检测在不同培养条件下家兔骨骼肌MHC亚型mRNA的表达情况。结果肌组织消化组:固有半膜肌表达MHCⅠ型及少量的MHCⅡ型,副半膜肌表达MHCⅡa和Ⅱb型。细胞培养组:常氧高糖组固有半膜肌表达MHCⅡa和Ⅱb,不表达MHCⅠ型;副半膜肌表达MHCⅡa和Ⅱb,不表达MHCⅠ型;低氧高糖组固有半膜肌表达MHCⅡa和Ⅱb,不表达MHCⅠ型;副半膜肌表达MHCⅡb,不表达MHCⅠ型。结论含15%FBS的常氧高糖培养基适宜骨骼肌细胞生长,并且在低氧高糖条件下,骨骼肌Ⅰ型纤维有向Ⅱ型纤维转化的趋势。     

人类四肢骨骼肌的肌纤维型分布

本世纪五十年代以来,形态学者利用电镜和组织化学技术对骨骼肌的红、白两种肌纤维重新进行了大量研究。1970年,利用肌球蛋白腺苷三磷酸酶(ATP_ase)反应法将哺乳动物骨骼肌分为Ⅰ、ⅡA、和ⅡB三型已得到普遍采用。1971年,Burke用电刺激单个α运动神经元研究各个运动单位的收缩特性发现由这条最后公路所产生的运动实际上存在三种性质,除了慢缩的运动单位外,快缩运动单位又有耐疲劳的和易疲劳的两种;再通过糖元消耗法和ATP酶反应法确认这三种不同生理特性的肌纤维与ATP酶反应所分的三型正相符合。1972年Peter等将ATP_ase反应、生理特性和肌纤维内氧化酶和磷酸化酶等含量相联系,又将肌纤维归入SO、FOG和FG三型(表1)。     

大鼠肋膈肌和脚膈肌毛细血管密度观察

目的：观察和比较大鼠肋膈肌和脚膈肌毛细血管密度特征和差异。方法：采用肌球蛋白ＡＴＰ（ｍＡＴＰ）酶组化进行肌纤维分类和显示毛细血管，通过计算机图象分析系统，测定大鼠肋膈肌和脚膈肌毛细血管密度（ＣＤ）并与肢体肌进行比较。结果：①大鼠肋膈肌ＣＤ显著大于脚膈肌，两者ＣＤ均大于肢体肌肉；②不同类型肌纤维中，Ⅰ型和ⅡＡ型ＣＤ大于ⅡＢ；③同类纤维比较，肋膈肌ⅡＢ纤维ＣＤ大于脚膈肌和肢体肌，但Ⅰ和ⅡＡ型纤维各肌肉间无显著差异。结论：大鼠肋膈肌和脚膈肌毛细血管密度有显著差异，反应了两者功能要求不同，提示前者具有更强的氧化能力和耐力。     

头半棘肌肌球蛋白腺苷三磷酸酶与琥珀酸脱氢酶染色比较

目的：研究大鼠、家兔和人头半棘肌的肌纤维型分布。方法：应用肌球蛋白腺苷三磷酸酶（ＡＴＰ酶）和琥珀酸脱氢酶染色法，观察比较各型肌纤维的组织化学特征。结果：（１）ＡＴＰ酶染色，大鼠、家兔、正常人颈后部肌肉肌纤维可分为Ⅰ型和Ⅱ型纤维，呈多边形或椭圆形，分别约占６０％和４０％。（２）琥珀酸脱氢酶染色，肌纤维呈蓝色，交错排列，可分为深染、中染和浅染三型，分别约占２５％、２５％和５０％。种系间无显著性差异。Ａ     

慢性低氧大鼠膈肌纤维截面积变化

本文通过建立慢性常压和减压低氧大鼠模型,采用肌球蛋白ATP酶（mATP酶）组化方法将肌纤维分为I、ⅡA和ⅡB三种类型和显示毛细血管,用计算机图象分析系统测定肌纤维横截面积（CSA）和毛细血管密度变化,观测慢性低氧大鼠膈肌不同类型纤维CSA变化,探讨其与毛细血管密度变化的关系。慢性低氧大鼠肌纤维CSA均不同程度缩小,CSA缩小与毛细血管密度增加显著相关。隔肌CSA缩小使毛细血管相对密度增加,有利于氧运输和弥散,膈肌氧化能力增强。     

人三角肌亚部化,肌纤维型分布及面积的研究

根据人三角肌的肌纤维起止、排列和神经支配特征,将该肌分为前、中、后3个亚部。用新鲜男性尸体标本16侧三角肌,按上述3个亚部的浅、深区分别取材,作恒冷箱冰冻横向切片,肌球蛋白ATP酶染色,将肌纤维分为Ⅰ型和Ⅱ型。检测各区的肌纤维型构成比例,并用图像分析仪测量各区两型肌纤维的横切面积和直径。结果发现,肌中部的I型纤维比例明显高于前、后两部,各亚部深区的I型纤维比例均比浅区高,而左、右侧之间无差异。各亚部及浅、深区。Ⅰ、Ⅱ型肌纤维的直径都相似(57～6lμm),仅中部深区Ⅱ型纤维直径(52.9μm)较其他各区肌纤维明显细小;除中部深区外,右侧两型纤维的直径均比左侧稍大,但统计学分析左右侧差异不显著。作者认为,三角肌纤维型分布的肌内差异,与该肌功能的分化密切相关。中部深区的Ⅰ型纤维比例较高,Ⅱ型纤维直径较细,可能提示该区的主要功能是维持肩关节稳定。     

ATP酶组织化学滴染法染色技术

目的改进经典的ATP酶组织化学染色法,以用于肌纤维分型研究和肌肉疾病病理诊断。方法肌肉组织行异戊烷-液氮冷冻,冰冻切片,组织化学染色采用ATP酶微量滴染技术。结果本改良的ATP酶组织化学滴染法能清楚地显示肌纤维的类型和分布,有助于肌肉疾病的诊断。结论该方法染色结果稳定,效果良好,明显减少了人力和试剂成本,可使ATP酶组织化学染色技术得到更广泛的应用。     

中央轴空病2例及文献复习

目的：探讨中央轴空病的病理特点,方法：通过HE、特殊染色及透射电镜的方法,观察2例中央轴空病患者的肌肉活检标本,并复习文献。结果：HE染色肌纤维中央有圆型深红色区,NADH－TR染色见肌纤维中央有圆型无着色的轴空区（尤其在Ⅰ型纤维）。该区PAS染色不着色,MGT染色呈紫色,电镜观察显示,轴空区肌节结构消失,肌丝排列紊乱,Z线物质呈水纹状,肌原纤维间未见线粒体,肌管,糖原和脂滴结构。结论：中央轴空病的确诊主要依靠肌活检病理诊断,组织化学,酶组织化学染色及电镜观察对该病确诊有重要意义。     

小圆肌和大圆肌的肌纤维型分布研究

目的：探讨小圆肌和大圆肌的肌纤维型分布特征和构成比例及其相关生理功能,为骨骼肌运动生理和临床应用提供形态学数据.方法：选取4例16～40岁（均死于非神经肌性疾病）死后12 h内的国人尸体两侧小圆肌和大圆肌,在肌腹中部取材共16块立即置入液氮,随后作恒冷箱冰冻横切片（-20℃,厚10 μm）,用肌球蛋白ATP酶法染色,研究两肌的肌纤维分型分布、测定各肌I型（慢缩）、Ⅱ型（快缩）肌纤维的构成比例.结果：（1）小圆肌和大圆肌的肌纤维分成Ⅰ型、Ⅱ型,两型肌纤维呈棋盘格式混杂分布;（2）两肌的Ⅰ型肌纤维平均百分率分别为57.9%和55.0%;（3）同型肌纤维的分布频率在左、右侧别之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：小圆肌和大圆肌以I型肌纤维分布稍占优势,为国人肌纤维型提供基础资料.     

骨关节病患者肌纤维萎缩类型及其与日常活动的相关性

背景：骨关节病患者因制动等原因可出现严重的肌纤维萎缩,但目前对这类肌纤维萎缩的微观分类及其与日常活动的研究较少。 目的：观察骨关节病患者肌肉萎缩类型以及其与日常活动的相关性。 方法：纳入24例老年女性骨关节病患者,应用功能独立性评定量表对患者习惯性的日常运动进行了评价,在进行关节置换过程中对患者肌纤维进行了测定并通过活检进行组织病理学侧量。同时选取同期因骨折需要进行修复的4例女性患者为对照组。观察患者的肌纤维(Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型)发生萎缩类型和比率变化。 结果与结论：骨关节病患者根据发生萎缩的肌纤维类型不同,分为1型、2B型何1+2AB型。Ⅰ型的肌纤维肌横截面积明显小于ⅡA型和ⅡB型肌纤维(P < 0.05)。大部分骨关节病患者在得病过程中仅发生同一种肌纤维类型的萎缩,而非所有的肌纤维均出现萎缩。功能独立性评定量表评分从1+2AB型,2B型和1型逐渐减少(P < 0.05)。结果证实,肌肉萎缩1+2AB型对骨关节病患者日常活动影响最大,而单纯的2B型影响最小。