双酚A体外诱导雄性小鼠生殖细胞凋亡及其分子机制

目的采用双酚A(BPA,一种典型的环境雌激素)体外诱导雄性小鼠生殖细胞凋亡,并探讨其分子机制。方法对体外培养的雄性小鼠生殖细胞以不同剂量的BPA(10-7、10-6和10-5mol/L)进行诱导,检测细胞的凋亡状况;并应用RT-PCR和免疫蛋白印记技术检测凋亡相关基因(Bax/Bcl-2、Fas/FasL)的表达变化。结果低剂量的BPA(10-7mol/L)即能够引起支持细胞和精子细胞凋亡,但精原细胞对于BPA的作用却不敏感;随着BPA处理浓度的升高,支持细胞和精子细胞中Fas/FasL、Bax表达上调,Bcl-2表达下调,而精原细胞中基因表达变化不明显。结论BPA诱导的睾丸生殖细胞凋亡,不仅是依靠调节Fas/FasL系统起作用,Bax/Bcl-2基因也能够参与这一过程的调节。     

龙葵碱对小鼠睾丸生殖细胞线粒体损伤的研究

目的：研究龙葵碱对小鼠睾丸的毒性作用。方法：30只雄性小鼠,体质量20～24 g。随机分成5组,每组6只。采用ip龙葵碱对小鼠进行染毒,染毒剂量分别是1/8 LD₅₀（5.25 mg/kg）、1/4 LD₅₀（10.5 mg/kg）、1/2LD₅₀（21 mg/kg）。另设阴性对照组（生理盐水组）,阳性对照组（环磷酰胺,CP,给药剂量40 mg/kg）,龙葵碱不同浓度组连续染毒14 d。应用紫外分光光度法测定睾丸中SDH、MDA、SOD、GSH的活力。结果：龙葵碱染毒两周后,GSH的量仅1/2LD₅₀染毒剂量组与空白组相比较呈非常显著性差异（P＜0.01）;随着染毒剂量的增加, MDA含量增加,1/2 LD₅₀、1/4 LD₅₀、1/8 LD₅₀染毒剂量组与空白组比较呈非常显著性差异（P＜0.01）;随着染毒剂量的增加SOD的活性降低明显,1/2 LD₅₀、1/4LD₅₀染毒剂量时,SOD活性的降低与空白组比较呈非常显著性差异（P＜0.01）;随着染毒剂量的增加SDH的活性降低明显,1/2LD₅₀、1/4LD₅₀染毒剂量时,SDH活性的降低与空白组比较呈非常显著性差异（P＜0.01）。结论：龙葵碱能够使SDH、MDA、SOD、GSH活力降低,从而导致自由基增多,呼吸链和氧化磷酸化脱偶联,三羧酸循环被阻断,线粒体基质渗透压升高,内膜肿胀,使线粒体的功能发生障碍,线粒体氧化损伤。     

电离辐照损伤对小鼠睾丸组织氧化磷酸化信号通路的影响

目的比较电离辐照损伤小鼠与正常小鼠的睾丸组织差异表达蛋白质,分析所得差异蛋白涉及的信号通路,以期从蛋白质组学角度阐述电离辐照对睾丸组织损伤的作用机制。方法采用~(60)Coγ射线辐照建立小鼠电离辐照损伤模型。运用比较蛋白质组学方法、iTRAQ联合LC-MS/MS检测技术,提取出小鼠辐照组与正常组睾丸组织比较后的差异表达蛋白质,进一步利用David6.8、String10.5和Cytoscape3.6.1数据库,对差异蛋白进行KEGG富集分析和相互作用分析。结果 KEGG富集分析鉴定出21条生物信号通路(P<0.05),其中富集于氧化磷酸化信号通路的差异蛋白有13个,均为表达下调。该通路涉及ATP合成酶、细胞色素、NADH脱氢酶这3类蛋白的多个亚基,它们主要参与线粒体电子传递、线粒体呼吸链复合物I装配、ATP生物合成等过程。结论电离辐照引起小鼠睾丸组织氧化磷酸化信号通路所涉及的13个差异蛋白均出现低表达,导致细胞机体ATP的合成障碍是辐射损伤的重要机制。     

影响睾丸生殖细胞凋亡的理化因素

环境污染日趋严重,不孕不育症发病率呈上升态势。睾丸生殖细胞凋亡是无精少精的机制之一。睾丸生殖细胞凋亡受许多内外因素的多重影响,本文就影响睾丸生殖细胞凋亡的一些外在理化因素作一简要概述。     

丙烯腈对雄性小鼠生殖细胞凋亡的影响

目的观察丙烯腈对雄性小鼠生殖细胞凋亡的诱导作用。方法用腹腔注射染毒的方法,对125只6~8周龄的雄性小鼠分别给予丙烯腈0,1.25和2.5,5 mg/kg,染毒5 d,在初次染毒后7、142、1、28和35 d分别用流式细胞仪检测凋亡细胞的数量;于染毒后35 d检测血清中睾酮含量及电镜观察睾丸组织超微结构。结果(1)丙烯腈各染毒组在染毒后各时段的凋亡细胞百分比均高于阴性对照组,中、高剂量组于染毒后212、8、35 d与阴性组比较,差异有显著性(P<0.05),各剂量组均以第21天细胞凋亡率最高;(2)丙烯腈各染毒组血清睾酮为(669.1±59.4)、(258.2±18.5)和(314.8±38.7)ng/L,中、高剂量组与阴性对照组比较,差异有显著性(P<0.01);(3)电镜下观察到精原细胞、精母细胞、精子细胞及Sertoli细胞凋亡的早期形态学改变及细胞器的改变。结论提示丙烯腈可诱导雄性小鼠生殖细胞凋亡。     

双酚A损伤睾丸支持细胞的实验研究

目的观察双酚A(BPA)在不同剂量与处理时间条件下对支持细胞存活率、囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)表达水平、痛敏肽表达水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,初步探讨BPA损伤雄性生殖系统功能的机制。方法小鼠睾丸支持细胞TM4细胞系传代增长至对数期时,经不同剂量(5、10、100、500和1 000μg/ml) BPA处理2、8和24 h,MTT法检测细胞存活率、微量酶标法检测LDH活性、ELISA法检测CFTR与痛敏肽表达水平。采用方差分析比较不同BPA剂量、处理时间各自的主效应及其交互作用。结果与阴性对照组相比,各处理组睾丸支持细胞存活率均明显降低(P0. 01);处理剂量与时间的交互作用对LDH活性与CFTR表达水平均有影响;处理24 h后,BPA剂量为100μg/ml时LDH活性、痛敏肽表达水平最低,CFTR蛋白表达水平最高,组间差异有统计学意义(P0. 05)。结论 BPA对睾丸支持细胞有一定毒性作用,可能影响支持细胞对精子细胞的能量供给与营养支持。     

双酚A对雄性小鼠生殖系统的影响

工业时代的到来,给人类社会带来了高度的物质文明,但也给人类的生存环境带来了种种问题.越来越多的证据表明,存在于环境中一些人工合成的化学物质具有体内雌激素的生物效应,可以干扰鸟类、爬行类以及哺乳类野生动物或实验动物正常的内分泌功能,改变动物在发育和成年阶段胞内信号过程,并由此造成动物的雌雄性别的改变以及畸形等病变,人们称这类物质为环境雌激素、内分泌干扰剂、内分泌活性化合物或分泌干扰化合物等[1] . 环境雌激素是指一类外源性化合物进入机体后,具有干扰体内正常分泌物质的合成、释放、转运、代谢、结合等过程,激活或抑制内分泌系统功能,从而破坏其维持机体稳定性和调控作用的物质[2].在环境污染物中有许多物质具有雌激素活性.世界范围内对有关数据的统计目前尚无准确之论,大约有50～70种[3],主要有农药(如DDT及其代谢产物) 、工业化学物(如非离子表面活性剂和多氯联苯)、人工合成的药用雌激素(如DES)、植物雌激素( 如类异黄酮、玉米赤霉烯酮)和环境污染物(如二NFDA2NFDA3)[4].大量研究表明人和动物接触环境雌激素对健康可产生危害作用.BPA(bisphenol A),又称双酚A,是塑料工业制造聚碳酸脂、环氧树脂、聚酚树脂及聚氧树脂等的重要原料.近年来有报道,表明其具有雌激素样作用,影响生殖功能[5].但是,关于BPA对雌性生殖系统的影响研究较多,而对于雄性生殖系统的影响报道很少.因此,为了解BPA对雄性哺乳类生殖系统的影响及其作用机制 ,我们对染毒小鼠精子数量、活动力及形态,并对睾丸的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 活力、脂质过氧化物(LPO)含量进行了检测.     

营养性肥胖对大鼠睾丸生殖细胞Fas/FasL基因表达及凋亡的影响

<正>肥胖是指人体内脂肪堆积过多,是一种多因素共同作用导致的全身性疾病。研究表明,由于久坐的生活方式和饮食习惯的改变,肥胖的患病率日益增加,并且成为健康的不利影响因素之一[1]。肥胖是目前公认的女性不孕的危险因素之     

硒对酒精所致小鼠睾丸组织酶损伤影响的实验研究

目的通过实验,研究硒对酒精性睾丸损伤小鼠的保护作用。方法采用分光光度法对小鼠睾丸组织琥珀酸脱氢酶和丙二醛进行检测。结果硒中剂量组和硒高剂量组琥珀酸脱氢酶含量高于空白对照组和白酒对照组;空白对照组、硒低剂量组、硒中剂量组和硒高剂量组丙二醛含量低于白酒对照组。并且高剂量的硒对琥珀酸脱氢酶作用更明显,中剂量的硒对丙二醛的作用更明显。结论硒有效地降低酒精对小鼠的睾丸组织酶的损伤。     

灵芝孢子粉对镉致雄性大鼠睾丸生殖细胞DNA氧化损伤的拮抗作用

目的研究镉致雄性大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤及灵芝孢子粉的影响。方法 48只SD雄鼠,随机均分为4组:对照组、Cd组、灵芝孢子粉低拮抗组(GLSL+Cd)和灵芝孢子粉高拮抗组(GLSH+Cd)。灵芝孢子粉高低拮抗组分别灌胃1和0.5 g/kg灵芝孢子粉,对照组与Cd组灌胃等量生理盐水,1次/d。Cd组、GLSL+Cd和GLSH+Cd组腹腔注射Cd Cl22 mg/kg,隔天1次。对照组腹腔注射等量生理盐水。60 d后分两批处死,间隔为30 d。硫代巴比妥酸(TBA)法和BCA法分别测定丙二醛(MDA)含量和蛋白浓度,WST-1法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力,单细胞凝胶电泳检测睾丸细胞DNA损伤(测定慧尾长、慧尾DNA百分含量及Olive尾矩)。结果 (1)与对照组比较,Cd组、GLSL+Cd组体重、睾丸重均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)与Cd组比较,GLSL+Cd组、GLSH+Cd组睾丸组织MDA含量降低,SOD活力增加,DNA损伤程度均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。但GLSH+Cd组DNA损伤程度高于GLSL+Cd组,差异有统计学意义(P0.05)。结论灵芝孢子粉对镉致雄性大鼠睾丸细胞DNA损伤有保护作用,但是发挥作用的最优剂量和时间还需要进一步探索。     

苯对雄性小鼠生殖细胞损伤的研究

以浓度为30mg/m~3、300mg/m~3、30,00mg/m~3和30,000mg/m~3的苯给小鼠吸入染毒,做精子畸形、初级精母细胞染色体畸变、精原细胞SCE三项试验。三个试验的结果一致,表明苯有性腺毒性作用,可诱发雄性小鼠生殖细胞突变。     

盐酸法舒地尔对大鼠单侧睾丸扭转/复位后双侧睾丸生殖细胞凋亡的影响

目的 研究盐酸法舒地尔对大鼠单侧睾丸扭转双侧复位后睾丸生殖细胞的保护作用.方法 选用质量250～300g健康SD大鼠24只,随机分为4组,建立扭转睾丸动物模型.术后24h获取双侧睾丸标本,分别以原位缺口末端标记法(TUNEL)和HE染色检测生精细胞凋亡和睾丸组织病理学改变.结果 盐酸法舒地尔组被膜血管扩张不明显,散在的曲细精管变性、间质中度水肿,明显好于其他各组.结论 复位前使用盐酸法舒地尔可以有效减轻再灌注后生精细胞凋亡和保护生精功能的作用.     

丙烯腈对小鼠睾丸组织结构及精子质量的影响

目的探讨丙烯腈(acrylonitrile,ACN)对雄性小鼠睾丸组织的病理学损伤作用及超微结构的改变。方法将50只成年健康SPF级昆明种雄性小鼠,按体重随机分成阴性对照组(生理盐水0.01 ml/g),1.25、2.50和5.00 mg/kg ACN,连续腹腔注射5 d,1次/d;阳性对照组腹腔注射环磷酰胺(40 mg/kg)1次。于首日染毒后的第35天处死小鼠,取材,检测分析。结果 ACN各剂量组和阳性对照组精子密度和精子活率与对照组比较差异无统计学意义(P0.05),精子畸形率显著升高,且畸形精子构成都以无定型为主,无钩型次之。电子显微镜下可见睾丸支持细胞、间质细胞及精子细胞均有一定的变化,并且随着染毒剂量增加,其病变程度加重。结论 ACN能够诱导小鼠睾丸损伤,具有性腺毒性。     

双酚A对小鼠胚胎干细胞分化潜能的影响

目的探讨双酚A(BPA)对胚胎干细胞(ESC)分化潜能的影响,为合理评价BPA的安全性提供实验基础。方法制备及培养的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和小鼠ESC,用BPA 0.1,1,10,100和1000μmol·L-1持续培养8 d,CCK-8法检测MEF和ESC细胞存活率并计算IC50;通过实时荧光定量PCR检测ESC中α肌球蛋白重链m RNA表达并计算其半数最大分化抑制浓度(ID50)。悬滴悬浮法培养的拟胚体,用BPA 0.001,0.01,0.1和1μmol·L-1持续培养10 d,实时荧光定量PCR检测拟胚体各胚层标志基因表达的变化。结果 BPA对小鼠ESC的IC50为5.22×10-4mol·L-1,对MEF的IC50为6.25×10-4mol·L-1,对小鼠ESC体外心肌细胞定向分化的ID50为7.0×10-7mol·L-1。BPA 0.001和0.01μmol·L-1可以上调拟胚体的中胚层标志基因胎肝激酶1和球蛋白转录因子1的表达。结论 BPA属于强胚胎毒性化合物。低浓度BPA对小鼠ESC分化为中胚层细胞有促进分化的作用。     

绿麦隆复合体系对小鼠睾丸组织的影响

目的：研究绿麦隆复合体系对小鼠睾丸组织的影响。方法：雄性昆明小鼠经口染毒绿麦隆25d，取睾丸组织作为标本观察。结果：绿麦隆单体系及复合体系各剂量组对小鼠睾丸均有不同程度的改变。光镜观察所见：生精上皮细胞排列疏松、紊乱；生精细胞脱落，层次减少。电镜观察所见：生精细胞线粒体呈空泡样改变，核膜肿胀、弯曲，支持细胞数目减少，部分细胞紧密连接破坏。结论：小鼠睾丸呈细胞退行性改变趋势，随剂量增加及复合染毒，病变加重。     

双酚A对大鼠睾丸Leyding细胞的毒性作用

双酚Ａ ,又名 4 二羟基二苯基丙烷 ,属低毒性 ,是制造聚碳酸脂、环氧树脂、聚酚酚树脂及聚氧树脂的重要原料。近年来有报道表明其具有雌激素样作用 ,影响生殖功能[1,2 ] 。睾丸Ｌｅｙｄｉｎｇ细胞是合成和分泌睾酮的细胞 ,并具有高度的调节性 ,本实验在建立睾丸Ｌｅｙｄｉｎｇ细胞离体原代培养的基础上 ,对双酚Ａ的Ｌｅｙｄｉｎｇ细胞毒性进行了初步的探讨。1　材料与方法1 1　实验动物　成年雄性ＳＤ大鼠 ,体重 2 0 0 ｇ左右 ,由中英合资西普尔 /必凯 (ＳＩＰＰＲ ＢＫ)实验动物有限公司提供。1 2　含双酚Ａ培养液的制备　将双酚Ａ与吐温 8…     

光气诱发小鼠肺水肿的凋亡与氧化损伤机制

目的 光气属于窒息性毒剂,是一种在第一次世界大战就被使用的军用战剂,也是一种广泛用于医药、染料、农药等重要的化工原料。在我国,有许多生产光气或以光气为原料的企业,职业性接触人员众多,中毒事故时有发生。光气吸入中毒最显著的临床表现是肺水肿的形成,也是中毒人员致死的主要原因,但肺水肿形成机制还不清楚,目前认为可能与下面多种病理生理因素有关：（1）酰化作用;（2）自由基损伤;（3）肺泡Ⅱ型上皮细胞中毒损伤;（4）酸碱平衡失调;（5）Ca²⁺内流损伤等。针对以上机制,许多学者进行了光气肺水肿的治疗,但效果不佳。因此,进一步研究光气肺水肿机制,是光气肺水肿治疗的迫切要求。我们的前期工作和国外的最新报告都提示,光气中毒性肺水肿,存在肺内细胞凋亡和组织中氧化应激损伤现象。本课题在成功制作光气染毒小鼠肺水肿模型的基础上,比较系统的从细胞水平和分子水平上,探讨肺水肿发生中凋亡及氧化应激损伤、相关细胞因子的调控作用。方法 本研究在建立光气染毒BALB/C小鼠肺水肿模型及其原代肺AT-Ⅱ分离、培养方法的基础上,通过激光共聚焦、电镜、流式细胞术、单细胞凝胶电泳（彗星DNA实验）、DNA凝胶电泳、TUNEL染色等技术方法,测定和观察肺水肿相关的细胞凋亡征象,包括DNA损伤和AT-Ⅱ内Ca²⁺的浓度变化,从不同侧面和角度研究光气对小鼠肺脏细胞的凋亡诱导作用;采用小鼠血清、肺脏和肝脏的MDA, T-SOD和GSH作为氧化损伤指标,研究了不同剂量的光气染毒后的不同时间氧化应激损伤作用。 结果 （1）小鼠肺脏的湿干比增加和肺泡腔充满水肿液, 提示我们建立的光气肺水肿小鼠模型是成功的;通过鞣酸染色和电镜超微结构观察作为AT-Ⅱ鉴定方法,建立了本实验室小鼠AT-Ⅱ的分离、培养方法。（2）不同剂量的光气染毒后,随着时间的延长,小鼠血清和肺脏的MDA水平增高,血清和肺脏T-SOD活性显著升高,肺脏和肝脏的GSH明显降低。（3）光气染毒后小鼠AT-Ⅱ内质网扩张,板层小体呈囊泡样改变且减少;分离的AT-Ⅱ胞膜破裂,胞核崩解,有凋亡小体形成;AT-Ⅱ内Ca²⁺的浓度显著高于对照组;AT-Ⅱ DNA呈现由圆形、致密红色核心(彗头)和朝向阳极的尾端DNA碎片(彗尾)构成的彗星形状。（4）肺Ⅰ型细胞染色质边集成团块,呈月牙形;内皮细胞染色质固缩,边集;巨噬细胞染色质边集成团块,核膜完整;纤毛细胞染色质边集成团块,线粒体轻度肿胀;嗜酸性粒细胞染色质边集,细胞膜向外膨起形成小泡,细胞器部分溶解。结论 研究结果表明,肺内外氧化应激损伤加重、诱导肺内多种细胞凋亡,可能是造成光气肺水肿发生的主要原因之一。在细胞凋亡的基础上进一步引起血管功能改变、最终使肺泡组织特别是AT-Ⅱ失代偿,分泌功能和维持肺泡张力能力降低,导致肺水渗出、肺水肿发生,呼吸换气功能下降,构成了肺水肿发生的重要机制之一。本研究结果初步证实了光气等窒息性毒剂中毒是否存在凋亡、凋亡与氧化应激损伤是否有关,弥补了此方面文献的不足。从分子水平探讨了肺水肿中凋亡发生机制,对于研究光气中毒采取有效防治措施等,具有重要理论和实际的意义。