siRNA沉默PKM2抑制人胃腺癌SGC-7901细胞增殖能力和糖酵解水平

背景:M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈特异性高表达,与肿瘤的生长和糖酵解水平密切相关,是潜在的治疗靶点。目的:探讨siRNA沉默PKM2对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及糖酵解水平的影响。方法:选择未转染SGC-7901细胞、转染空质粒pU6 SGC-7901细胞以及转染PKM2 siRNA的SGC-7901细胞,采用蛋白质印迹法和Real-time PCR检测PKM2 mRNA和蛋白表达;免疫荧光法检测PKM2在细胞内的表达和分布;CCK-8法、流式细胞分析、细胞迁移和细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭能力;蛋白质印迹法、分光光度法分别检测葡萄糖转运蛋白-1(Glut-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达以及葡萄糖、乳酸浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:与其余两组相比,PKM2 siRNA转染组细胞PKM2 mRNA和蛋白表达明显下降(P0.05),胞内表达明显减弱,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降,细胞凋亡明显增加(P0.05),Glut-1、LDHA蛋白表达明显下降(P0.05),葡萄糖摄取率、乳酸产量、LDH活性明显减低(P0.05)。结论:RNA干扰能抑制胃癌SGC-7901细胞PKM2mRNA和蛋白表达,进而抑制胃癌细胞的增殖能力和糖酵解水平。     

LncRNA MEG3在胃癌中的表达及其与糖酵解相关性的研究

背景：糖代谢异常是肿瘤的恶性特征之一,Lnc RNA在肿瘤有氧糖酵解过程中发挥重要作用。目的：探讨Lnc RNA MEG3在胃癌组织中的表达及其与胃癌糖酵解之间的相关性。方法：应用RT-q PCR法检测胃癌和癌旁组织中MEG3 m RNA表达,免疫组化En Vision法检测胃癌和癌旁组织中PKM2、LDHA、m TOR、HIF-1α蛋白表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系。采用Spearman相关性分析评估MEG3与胃癌糖酵解水平的相关性,并初步探讨其作用机制。结果：胃癌组织中MEG3表达明显低于癌旁组织(P<0.05),并与淋巴结转移有关(P<0.05);PKM2、LDHA、m TOR、HIF-1α的阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05),并与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、p TNM分期等相关(P<0.05)。Spearman相关性分析示MEG3与PKM2、LDHA、m TOR、HIF-1α表达均呈负相关(r=-0.346,r=-0.306,r=-0.389,r=-0.338;P<0.05)。HIF-1α⁺/m TOR     

熊果酸通过AMPK/STAT3/COX-2信号通路抑制胃癌细胞增殖

背景:前期研究发现,熊果酸通过下调环氧合酶2(COX-2)表达抑制胃癌细胞增殖,但熊果酸抑制COX-2表达的分子机制尚未完全明确。目的:探讨单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/信号转导与转录活化因子3(STAT3)/COX-2信号通路在熊果酸抑制胃癌细胞增殖中的作用。方法:构建AMPK-pLVX、AMPK-shRNA、STAT3-pLVX、STAT3-shRNA质粒,分别转染胃癌细胞株SGC-7901和MKN-45,并给予不同浓度或不同培养时间的熊果酸进行培养。以蛋白质印迹法检测磷酸化AMPK、磷酸化STAT3和COX-2表达,CCK-8法检测胃癌细胞增殖。结果:在SGC-7901和MKN-45细胞中,熊果酸呈剂量和时间依赖性地促进AMPK磷酸化、抑制STAT3磷酸化和COX-2表达。敲除AMPK基因能阻断熊果酸抑制STAT3磷酸化和COX-2表达的作用,过表达STAT3基因能逆转熊果酸抑制COX-2表达的作用。敲除AMPK基因和过表达STAT3基因均可逆转熊果酸抑制胃癌细胞增殖的作用。结论:熊果酸可能通过AMPK/STAT3通路下调COX-2表达而抑制胃癌细胞增殖。     

茵陈蒿汤抑制JAK2/STAT3信号通路调控肝癌细胞增殖与凋亡

目的探索茵陈蒿汤的抗肝癌作用及其机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞,分为对照组和茵陈蒿汤低、中、高浓度(12.5、25、50μg/mL)组。通过CCK-8检测细胞活力、EdU染色观察茵陈蒿汤对HepG2肝癌细胞增殖的影响,钙黄绿素/PI细胞染色观察茵陈蒿汤对肝癌细胞存活能力的影响。通过Western blot检测茵陈蒿汤对肝癌细胞内JAK2/STAT3信号通路及其下游细胞增殖和抗凋亡相关靶蛋白的变化。结果CCK-8和EdU染色结果发现与对照组相比,茵陈蒿汤治疗降低了HepG2细胞的细胞增殖能力。钙黄绿素/PI细胞染色结果发现茵陈蒿汤减弱细胞存活能力,诱导肝癌细胞死亡。最后,Western blot结果显示茵陈蒿汤显著抑制HepG2肝癌细胞内JAK2/STAT3信号通路的激活,同时进一步抑制了JAK2/STAT3信号通路下游增殖相关蛋白Cyclin D1、c-Myc以及抗凋亡相关蛋白Mcl-1、Bcl-XL的表达水平。结论茵陈蒿汤通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

c-Myc在胆管癌细胞抵抗接触抑制中的作用

目的探讨c-Myc信号调控对胆管癌(CCA)细胞接触抑制的影响及其机制。方法培养人正常胆管上皮细胞HIBEC和CCA细胞QBC939与RBE,分析高低密度培养对3种细胞增殖的影响。在采用c-Myc抑制剂10058-F4(F4)抑制c-Myc活性或siRNA干扰c-Myc表达的基础上,利用流式细胞术和Western印迹分析c-Myc对QBC939和RBE细胞接触抑制的影响及其机制。结果人正常胆管上皮细胞HIBEC在高密度培养时发生接触抑制,而CCA细胞QBC939与RBE在高密度培养时依然维持高增殖能力。c-Myc在接触抑制的HIBEC细胞表达下调,但在高密度培养的CCA细胞QBC939与RBE中维持高表达,抑制c-Myc可使CCA细胞恢复接触抑制。抑制c-Myc和干扰c-Myc表达能够抑制高密度培养时QBC939与RBE细胞中雷帕霉素靶蛋白(m TOR)活性,而抑制m TOR能够重建QBC939与RBE细胞的接触抑制。c-Myc在高密度QBC939与RBE细胞中的异常高表达受控于YAP信号通路。结论 YAP/c-Myc通过调控m TOR促进CCA细胞抵抗接触抑制。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路对大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控作用探讨

目的:探讨磷脂酰肌醇-3(PI3K)/蛋白激酶(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路对大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖的调控作用。方法:体外培养大鼠MC,随机分为正常对照组、表皮生长因子(EGF)(10ng/m L)组、PI3K抑制剂LY294002组(2μg/m L)、EGF联合LY294002组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测4组MC的增殖,流式细胞术检测MC周期,免疫荧光法检测系膜细胞m TOR的表达。结果:与正常对照组相比,EGF组能显著促进大鼠MC增殖,G0/G1期细胞减少,S期及G2/M期细胞增加,且m TOR表达增加;LY294002组大鼠MC增殖受抑制,G0/G1期细胞增加,S期及G2/M期细胞减少,且m TOR表达降低;与EGF组比较,EGF联合LY294002干预组MC增殖受抑制,G0/G1期细胞增多,S期及G2/M期细胞减少,且m TOR表达降低。结论:m TOR信号通路参与了大鼠肾小球MC增殖的调控,抑制该信号通路的活化可显著抑制MC的增殖和MC周期的进程。     

AMPK信号通路在高糖诱导肾小管上皮细胞间质转化中的作用

目的探讨AMP激活的蛋白激酶(AMPK)及其下游信号通路分子雷帕霉素靶蛋白(m TOR)与高糖诱导的肾小管上皮细胞间质转化(TEMT)间的关系。方法采用HG-DMEM培养基(含D-葡萄糖的DMEM培养基)、AMPKα亚基特异激活剂AICAR和AMPK特异siRNAs处理肾小管上皮细胞(HK)-2细胞。采用Western印迹检测HK-2细胞中AMPK及其下游信号通路分子m TOR的磷酸化活化水平。采用激光共聚焦实验检测HK-2细胞中与EMT相关的生物标志物α-SMA和E-钙黏蛋白的变化情况。结果同0 mmol/L的D-葡萄糖处理组相比,10、20和30 mmol/L的D-葡萄糖均可显著抑制HK-2细胞中AMPK的磷酸化活化水平,并上调HK-2细胞中m TOR的磷酸化活化水平,且这种作用具有计量依赖性。同时D-葡萄糖可促进HK-2细胞中EMT相关的生物标志物α-SMA的表达,抑制E-钙黏蛋白的表达。AMPKα亚基特异激活剂处理HK-2细胞可部分抵消促D-葡萄糖处理所致的EMT作用,AMPK特异siRNAs敲低HK-2细胞中AMPK表达后,可抵消AMPKα亚基特异激活剂抑制D-葡萄糖诱导HK-2细胞EMT的作用。结论 D-葡萄糖通过抑制AMPK通路,上调AMPK下游m TOR通路,从而促进HK-2细胞EMT作用。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响

目的探究半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CYSC)与自噬相关通路磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)在缺氧/复氧(H/R)状态下对心肌细胞凋亡/自噬的影响。方法用H9C2细胞为模型,建立H/R诱导的损伤模型,以正常培养的H9C2为对照组,检测CYSC表达与AMPK磷酸化水平变化的关系。用RNAi抑制CYSC或外源过表达CYSC,提取细胞全蛋白,在蛋白水平上检测AMPK信号通路变化及细胞自噬、凋亡水平的变化。结果与对照组细胞相比,在H/R损伤后细胞中CYSC及P-AMPK表达量上升(P 0.01),磷酸化的雷帕霉素靶蛋白激酶(P-mTOR)表达量下降。与H/R损伤组细胞相比,敲降CYSC后促进细胞凋亡而抑制自噬,敲降CYSC使凋亡相关蛋白Bax表达升高,而抑制了Bcl-2、LC3-2/LC3-1及自噬相关蛋白Beclin-1的表达,而过表达CYSC与对照组细胞相比促进自噬及自噬相关蛋白表达。此外,敲降CYSC可通过降低P-AMPK信号促进m TOR信号活化,过表达则相反。结论 CYSC在H/R诱导的心肌损伤中可以通过促进AMPK激活抑制m TOR信号通路促进保护性的自噬来抑制心肌损伤。     

低浓度葫芦素-I诱导胃癌细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡及其机制研究

背景:葫芦素-I通过抑制STAT3信号通路在多种恶性肿瘤中发挥强大的抗癌作用,但其在胃癌中是否同样具有抗癌作用及其作用机制,目前仍不清楚。目的:通过体外实验评估低浓度葫芦素-I对人胃癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响并初步探讨其可能作用机制。方法:以低浓度葫芦素-I处理人胃腺癌细胞株AGS和HGC-27,采用CCK-8试验和集落形成试验评估其对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期转换相关蛋白表达以及caspase-3/PARP细胞凋亡途径、STAT3、GADD45α和JNK/p38 MAPK信号通路激活情况。结果:低浓度葫芦素-I可在不抑制STAT3信号通路的情况下发挥强大的胃癌细胞生长抑制作用,此作用是通过诱导细胞周期G2/M期阻滞和细胞凋亡实现的。机制研究发现葫芦素-I可通过上调GADD45α和激活JNK/p38 MAPK信号通路诱导细胞凋亡,发挥抗胃癌作用。结论:本研究揭示了葫芦素-I抗胃癌作用的新机制,证明葫芦素-I是一个具有临床应用前景的化疗药物。     

质子泵抑制剂抑制糖酵解和谷氨酰胺代谢影响胃癌细胞增殖、凋亡机制的研究

背景:已有研究发现质子泵抑制剂(PPI)可抑制空泡型质子泵(V-ATPases)表达、影响胃癌细胞糖酵解水平。V-ATPases对肿瘤恶性生物学行为具有重要意义。目的:探讨PPI通过抑制糖酵解和谷氨酰胺代谢作用于胃癌的机制。方法:在细胞实验部分,对胃癌细胞株进行PPI加药处理并沉默相关分子,以CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,定量PCR和蛋白质印迹法分别检测mRNA和蛋白表达。在动物实验部分,将裸鼠分为空白对照组、0.9%Na Cl溶液灌胃组、泮托拉唑钠溶液灌胃组、PKM2干扰组,观察小鼠体质量、摄食行为、肿瘤大小以及肿瘤组织内相关通路分子表达情况。结果:PPI可抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡; PPI可抑制胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢相关分子表达;干扰PKM2或PI3K均可抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;沉默V-ATPases可抑制胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢相关分子表达。PPI灌胃治疗荷瘤小鼠可延缓肿瘤生长、缓解小鼠恶病质情况。结论:PPI可抑制V-ATPases和PI3K信号通路表达,进而影响胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢水平,影响胃癌细胞增殖和凋亡水平,从而发挥抗肿瘤作用。     

基于内质网应激介导高糖条件下血管生成素2敲减对大鼠血管内皮细胞凋亡的影响及PI3K/Akt信号通路的作用机制

目的研究血管生成素2(Ang-2)敲减对高糖环境下内质网应激(ERS)介导的大鼠血管内皮细胞凋亡的影响及对PI3K/Akt信号通路的影响和作用机制。方法用shRNA敲减大鼠血管内皮细胞中Ang-2的表达。检测Ang-2敲减对高糖诱导细胞和ERS诱导剂毒胡萝卜素(TG)诱导的内质网损伤细胞的保护作用。采用CCK8法检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。采用重氮反应法检测细胞上清液一氧化氮(NO)水平;ELISA检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)分泌的影响。流式细胞仪检测CD144+内皮微粒的比例。Western blot和RT-PCR分别检测ERS相关基因蛋白表达水平和mRNA表达水平的变化。结果 Ang-2敲减下调高糖和TG处理条件下RAOEC的凋亡水平,减弱高糖和TG处理对RAOEC细胞增殖的抑制作用;Ang-2敲减阻滞MCP-1的分泌,同时促进TG处理后NO水平的升高,但敲减Ang-2的表达对CD144+内皮微粒的释放水平没有明显影响。Ang-2敲减下调ERS相关基因ATF6,iNOS,ORP150,Bip和EIF2α的表达。PI3K/Akt通路中PI3K和Akt的表达水平也随着Ang-2的敲减而下调。结论 Ang-2敲减可下调高糖和TG诱导的ERS相关基因的表达,对细胞有保护作用。     

LY294002对人胃腺癌细胞株BGC-823糖酵解水平的影响及其机制探讨

背景:有氧糖酵解是肿瘤细胞的特征性表型之一,靶向糖酵解有望成为一种有效的肿瘤治疗策略。M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈高表达,参与肿瘤细胞的有氧糖酵解。缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是调控肿瘤细胞糖酵解相关基因表达的重要转录因子,而PI3K信号在肿瘤细胞中可上调HIF-1α表达。目的:探讨PI3K特异性抑制剂LY294002对人胃腺癌细胞增殖和糖酵解水平的影响及其可能机制。方法:以不同浓度LY294002(10～100μmol/L)在不同条件下(常氧或缺氧)处理人胃腺癌细胞株BGC-823,CCK-8实验和流式细胞分析检测细胞增殖和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测p-Akt、p-mTOR、HIF-1α、PKM2表达,比色法检测反映糖酵解水平的胞内乳酸脱氢酶活性和胞外乳酸浓度。结果:LY294002可呈浓度和时间依赖性地抑制BGC-823细胞增殖,在较高浓度时可诱导细胞早期凋亡。LY294002可呈浓度依赖性地抑制p-Akt、p-mTOR、HIF-1α表达,在较高浓度时可抑制PKM2表达,同时降低糖酵解水平。缺氧诱导可消除LY294002对HIF-1α、PKM2表达和糖酵解水平的抑制作用。结论:LY294002可通过阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制人胃腺癌细胞增殖及其糖酵解水平,而HIF-1α介导了糖酵解的抑制过程。     

沉默RORα通过活化Wnt/β-catenin通路靶基因促进人胃癌细胞增殖

目的 探讨人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体(ROR)α与Wnt/β-连环素(catenin)通路的相互作用。方法 噻唑蓝(MTT)实验验证沉默RORα对胃癌细胞系MGC803的增殖作用；实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹与免疫共沉淀检测敲低RORα对Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达；荧光素酶报告检测c-Myc基因启动子活性。结果 敲低RORα可显著促进胃癌细胞增殖(P<0.05)。当RORα被敲低时可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);但对β-catenin无明显影响(P>0.05)。免疫共沉淀提示敲低RORα可显著降低RORα与β-catenin的结合效率(P<0.05)。RORα敲低后，核内β-catenin与转录因子(TCF)-4表达水平明显升高(P<0.05)。Wnt通路下游基因Axin、c-Myc、c-Jun和基质金属蛋白酶(MMP)-9的mRNA和蛋白水平显著上调(P<0.05)。荧光素酶报告提示，敲低RORα可显著增强c-Myc启动子活性(P<0.05)。结论 敲低RORα可...     

miR-140-3p通过靶向趋化因子受体4和抑制JAK2/STAT3通路减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的]探讨miR-140-3p对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。[方法]构建体外心肌细胞H/R模型,使用miR-140-3p mimics、趋化因子受体4(CXCR4)过表达质粒转染H9c2细胞。噻唑蓝法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应和Western blot检测细胞中miR-140-3p、CXCR4、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的激活以及凋亡相关蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与CXCR4的靶向关系。相应试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性和炎症因子、活性氧(ROS)的水平。[结果]体外H/R可抑制miR-140-3p的表达,上调CXCR4表达和JAK2/STAT3通路的磷酸化,诱导H9c2细胞凋亡而抑制H9c2细胞增殖,促进炎症因子和ROS的释放并上调LDH的活性。miR-140-3p可以通过靶向CXCR4 3′UTR抑制CXCR4表达,从而抑制JAK2/STAT3通路的磷酸化激活,抑制炎症因子和ROS的释放,下调LDH的活性,促进H9c2细胞增殖而抑制其凋亡。[结论]miR-140-3p可能通过靶向抑制CXCR4而抑制JAK2/STAT3通路,从而减轻缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤。     

siRNA沉默PKM2对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的抑制作用

在恶性肿瘤组织中,丙酮酸激酶（PK）的组织特异性同工酶（L型、R型、M1型PK）表达减少,而PKM2表达升高,在肿瘤细胞生长、增殖、迁移等方面发挥重要作用。目的：探讨siRNA沉默PKM2对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的抑制作用。方法：以蛋白质印迹法筛选出高表达PKM2的胃癌细胞株BGC-823。构建PKM2siRNA干扰质粒,稳定转染胃癌BGC-823细胞,同时以转染空质粒pU6作为阴性对照组。以荧光定量PCR和蛋白质印迹法在mRNA和蛋白质水平上验证干扰效果,以CCK8法和细胞迁移实验检测细胞增殖和迁移能力。结果：与阴性对照组相比,PKM2siRNA转染组PKM2mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力和迁移能力明显下降（P〈0．05）。结论：PKM2在人胃癌的发展中发挥重要作用,并对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移有一定的促进作用。     

幽门螺杆菌Tipα蛋白的表达、纯化及对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的表达并纯化重组幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)肿瘤坏死因子-α诱导蛋白(tumor necrosis factor-α-inducing protein,Tipα),观察其对胃癌细胞增殖和迁移的影响以及IL-6/STAT3信号通路在其中的作用。方法采用IPTG诱导表达Tipα重组蛋白并通过Ni~(2+)亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;使用重组Tipα蛋白刺激胃癌SGC7901细胞,分别采用CCK8、流式细胞术、划痕伤口愈合试验和Transwell试验检测其对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。结果可溶性25×10~3重组Tipα蛋白被成功诱导表达且能被抗His-tag单克隆抗体所识别。与空白对照组相比,Tipα蛋白能够抑制SGC7901细胞凋亡(t=9.53;P0.05)。与PBS组相比,Tipα组细胞的增殖和迁移能力增加,而IL-6单克隆抗体或STAT3抑制剂SH-4-54预处理能够减弱Tipα诱导的细胞增殖和迁移(CCK8实验,F=103.194,P0.01;划痕伤口愈合试验,F=15.568,P0.01;Transwell试验,F=36.017,P0.01)。结论 Hp Tipα蛋白可促进胃癌细胞增殖和迁移,IL-6/STAT3信号通路在其中发挥重要作用。     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

敲减CCAAT/增强子结合蛋白α通过增加O-GlcNAc糖基化水平促进肝癌细胞体外增殖*

目的 探讨CCAAT/增强子结合蛋白α（C/EBPα）在肝癌细胞增殖中的作用及其机制。方法 利用靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞系,构建C/EBPα肝癌细胞系敲减模型。采用qRT-PCR和Western blot分别检测C/EBPα mRNA和蛋白表达水平,采用CCK-8检测敲减C/EBPα后对Hep3B细胞增殖的影响,采用在正常高葡萄糖（NG,4.5 g/L）和低葡萄糖（LG,1 g/L）条件下培养细胞的增殖变化,采用Western blot法检测不同葡萄糖浓度条件下在C/EBPα敲减细胞和对照细胞乙酰葡糖胺转移酶（OGT）、乙酰葡糖胺水解酶（OGA）和整个O-GlcNAc糖基化水平。结果 靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞后,C/EBPα mRNA水平下调了（7.5±2.3）倍（P<0.05）,蛋白表达水平下调了（8.8±0.25）倍（P<0.001）,提示C/EBPα敲减细胞系构建成功;敲减C/EBPα后明显促进肝癌细胞的体外增殖;在低葡萄糖条件下刺激48 h和72 h,敲减C/EBPα分别促进细胞增殖15.4%（P<0.05）和25.0%（P<0.01）;敲减C/EBPα后细胞OGA蛋白表达水平在正常高糖和低糖刺激24 h和48 h时分别下调了70.1% （P<0.01）、51.4%（P<0.05）和61.2%（P<0.05）,整体O-GlcNAc糖基化表达水平上调,在低糖刺激48 h时升高80.6%。结论 敲减转录因子C/EBPα可以提高细胞整体O-GlcNAc糖基化水平,从而促进肝癌细胞的体外增殖。     

大蒜素促进人子宫内膜癌细胞株(RL-952)细胞凋亡的机制

目的探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌细胞株(RL-952)细胞凋亡的相关机制。方法人子宫内膜癌细胞株RL-952经大蒜素或Janus激酶/信号传导及转录液活因子(JAK/STAT3)通路抑制剂AG490共培养后,MTT比色法检测药物对TL-952肿瘤细胞的抑制率;采用Real-time PCR和酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞中JAK/STAT3信号转导通路相关蛋白或mRNA及细胞凋亡蛋白的表达情况。结果大蒜素能够剂量和时间依从性地抑制人子宫内膜癌细胞株RL-952的增殖;且大蒜素和AG490孵育人子宫内膜癌RL-952细胞株后细胞内JAK/STAT3转导通路相关蛋白JAK和STAT3的表达明显减弱,同时促细胞凋亡蛋白Bax、P53的表达明显增高、抑制凋亡蛋白Bcl2表达明显降低,且与对照组细胞差异显著(P0.01)。结论大蒜素能够有效抑制肿瘤细胞增殖的作用,且其可能的机制是通过抑制JAK/STAT3信号转导通路实现。