PARP-1抑制剂5-AIQ对实验性结肠炎小鼠Treg/Th17的调节作用

[目的]探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的实验性结肠炎小鼠Th17/Treg平衡的调节作用及其机制。[方法]将30只C57 BL/6 J小鼠随机分为3组:空白组、DSS组、5-AIQ组,每组10只;小鼠自由饮用质量浓度为30 g/L的DSS共7 d,组建UC模型。空白组:正常饮水的同时给予0.9%氯化钠溶液,腹腔注射7 d;DSS组:造模同时给予0.9%氯化钠溶液,腹腔注射7 d;5-AIQ组:造模同时给予5-AIQ(1.5 mg/kg),腹腔注射7 d。观察各组小鼠体质量、大便黏稠度及出血情况、计算结肠炎相关的疾病活动指数(disease activity index,DAI)和结肠组织病理评分,RT-PCR检测小鼠结肠组织中的炎症因子IL-10、IL-17、IL-21、IL-35,同时检测小鼠结肠组织中Th17和Tregs细胞分化相关转录因子RORγt、STAT3、Foxp3、Smad3表达。[结果]与DSS组相比,空白组和5-AIQ组中DAI降低(P0.01);5-AIQ组结肠病理损伤明显改善;与空白组相比,DSS组IL-10、IL-35、Foxp3、Smad3蛋白下调,IL-17、IL-21、RORγt、STAT3蛋白上调;5-AIQ组与DSS组比较,IL-10、IL-35、Foxp3、Smad3蛋白上调,IL-17、IL-21、RORγt、STAT3蛋白下调,差异有统计学意义(P0.01)。[结论]PARP-1抑制剂5-AIQ可能通过调控实验性结肠炎小鼠Treg/Th17免疫平衡起到抑制肠道炎症,保护结肠黏膜的作用。     

普拉梭菌及其上清液对葡聚糖酸钠诱导的结肠炎小鼠Treg/Th17平衡的影响

目的探讨普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii,F.prausnitzii)及其上清液对葡聚糖酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠Treg/Th17平衡的影响。方法将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、结肠炎对照组、F.prausnitzii活菌干预组、F.prausnitzii上清干预组,每组10只,正常组正常饮水,其余各组均饮用质量浓度为25 g/L的葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎模型,同时分别用磷酸缓冲盐溶液(PBS)、F.prausnitzii、F.prausnitzii上清灌胃。流式细胞术检测各组小鼠脾脏中的Treg、Th17比例,并计算各组Treg/Th17比值;ELISA法检测外周血清中IL-10、IL-17水平;RT-PCR检测结肠组织中Foxp3、ROR-γt mRNA的表达。结果与结肠炎对照组相比,F.prausnitzii活菌干预组和F.prausnitzii上清干预组的Treg细胞比例上升,Th17细胞比例下降,Treg/Th17比值升高;且血清中IL-10水平升高,IL-17水平降低(P0.05)。与结肠炎对照组相比,F.prausnitzii上清干预组Foxp3 mRNA表达上升(P0.05),但F.prausnitzii活菌干预组Foxp3 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05);两干预组肠组织中ROR-γt mRNA表达较结肠炎对照组下降(P0.05)。结论 F.prausnitzii及其上清液可调控T细胞亚群,其机制可能为通过提高Foxp3 mRNA表达,抑制ROR-γt mRNA的表达调节Treg/Th17的平衡。     

慢性乙型肝炎患者外周血中调节性T淋巴细胞、Ⅰ型调节性T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞17的表达特点及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+(Treg)、CD4+CD25+IL-10+(Tr1)和CD4+IL-17+(Th17)的表达特点及其与CHB病情的关系。方法选取2013年1月至2014年6月解放军第一八○医院收治的轻中度CHB患者和重度CHB患者各40例,另选取同期无肝病诊断史的健康人40例为对照。分别抽取CHB患者及对照者的外周血,以流式细胞术检测外周血中Treg、Tr1和Th17表达水平,real time-PCR检测血清中Foxp3、RORγt mRNA水平,ELISA检测患者血清中TGFβ1、IL-10、IL-17表达水平。计量资料组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果轻中度和重度CHB患者与对照组相比,Treg、Tr1和Th17的百分率,转录因子Foxp3、RORγt表达水平,细胞因子TGFβ1、IL-10、IL-17水平均明显高于健康对照组(P值均0.05);而Treg/Th17和Foxp3/RORγt值显著低于对照组(P值均0.05)。与轻中度CHB患者相比,重度CHB患者Treg、Tr1和Th17的百分率,Foxp3、RORγt表达水平,TGFβ1、IL-10、IL-17水平均显著升高(P值均0.05);Treg/Th17和Foxp3/RORγt值显著降低(P值均0.05)。结论 CHB患者中Treg(特别是Tr1)和Th17的表达失衡程度与CHB病情进展呈正相关,因此,对于CHB患者,纠正Treg(特别是Tr1)和Th17表达失衡可能是很重要的治疗措施,同时监测Treg(特别是Tr1)和Th17的表达比例改变,对于估计CHB患者病情预后、指导临床治疗有积极作用。     

老年缺血性脑卒中患者氧化型低密度脂蛋白与辅助性T细胞和调节性T细胞轴的关系

目的探讨老年缺血性脑卒中患者氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)与辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)轴功能平衡的关系。方法选择老年缺血性脑卒中患者141例,其中缺血性脑卒中初次发作79例(初发组),复发62例(复发组),另外选择无缺血性脑卒中老年人76例(对照组)。检测各组血浆ox-LDL水平和外周血Th17/Treg频率及相关效应因子表达水平。结果与对照组比较,初发组ox-LDL、白细胞介素(IL)-17及TNF-α显著升高,Treg、Foxp3mRNA及IL-10显著降低;复发组ox-LDL、Th17、Th17/Treg、RORγt mRNA、IL-17、IL-6、IL-23及TNF-α显著升高,Treg、Foxp3mRNA及IL-10显著降低(P0.05)。相关及回归分析显示,ox-LDL与Th17、Th17/Treg、RORγt mRNA、IL-17、IL-6、IL-23及TNF-α呈显著正相关(r=0.482,r=0.528,r=0.419,r=0.439,r=0.233,r=0.262,r=0.459,P0.05);ox-LDL与Treg、Foxp3mRNA及IL-10呈负相关(r=-0.466,r=-0.478,r=-0.406,P0.05)。ox-LDL是影响Th17/Treg轴相关指标的独立因素(P0.01)。结论ox-LDL升高是老年缺血性脑卒中患者Th17/Treg轴功能平衡失调的重要影响因素。     

CHB患者Th17-Treg失衡中IL-21的作用及机制

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周Th17/调节性T细胞(Treg)失衡中IL-21的作用及其初步机制。方法流式细胞仪分别检测59例CHB患者和20例健康人外周血细胞中Th17细胞和Treg细胞频数,同时以ELISA法检测血清细胞因子IL-21、IL-17、IL-10、TGF-β水平。体外分别以IL21、IL-2刺激CHB患者外周血单核细胞(PBMC),以实时PCR检测培养细胞转录因子RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平,以ELISA法检测培养上清细胞因子IL-17、IL-10和TGF-β水平。结果与正常人群相比,IL-21、IL1 7、TGF-β水平显著升高(P均0.05),CHB患者外周Th17/Treg比例显著升高(P0.05),IL-21水平与Th1 7/Treg比例呈正相关(P=01.008)。与IL-2相比.IL-21刺激CHB患者PBMC的RORγt mRNA表达水平明显升高(P=0.016)而Foxp3 mRNA表达水平明显降低(P=0.018),相对应的培养上清中,IL-1 7水平显著上升(P=0.049)而IL-10、TGF-β水平明显降低(P=0.017,P=0.004)。结论 C、HB患者中IL-21能通过提高RORγt mRNA表达,同时抑制Foxp3 mRNA表达进而促进Th1 7/Treg失衡。     

Th17、Treg在肺纤维化小鼠外周血、肺组织中的表达及意义

目的观察CD4+IL-17+辅助性T细胞(Th17)及Th17/CD4+CD2+5Foxp3+调节性T细胞(Treg)在博来霉素皮下注射致小鼠肺纤维化模型外周血及肺组织的表达及意义。方法 20只雌性BALB/c小鼠随机分为模型组和对照组各10只:模型组皮下注射博莱霉素4周,对照组相同条件下注射0.1 mL PBS。采用HE染色和Masson’s染色观察两组肺组织炎症和纤维化的病理改变;流式细胞术检测两组肺组织及外周血Th17、Treg及Th17/Treg的表达;应用酶联免疫吸附试验检测两组血清IL-17水平;免疫荧光定量PCR法检测两组肺实质组织中IL-17和维甲酸相关孤独受体(RORγt)的mRNA的表达,并分析上述各指标的相互关系。结果模型组肺部纤维化评分、肺组织炎症程度和羟脯氨酸的含量均显著高于对照组(P均<0.01);外周血和肺组织Th17、Th17/Treg及外周血IL-17含量较对照组均显著增高(P均<0.01);肺实质RORγt和IL-17 mRNA水平较对照组明显增高(P均<0.05)。相关性分析结果显示,外周血和肺组织Th17及Th17/Treg、外周血IL-17的水平与肺组织羟脯氨酸水平、肺部纤维化评分、肺组织炎症反应均呈显著正相关(P均<0.01)。结论肺纤维化模型Th17及Th17/Treg表达均增高;Th17可能通过分泌IL-17参与肺纤维化的发病,Th17/Treg失衡可能通过加重肺纤维化免疫炎症,促进肺部胶原纤维的沉积,在肺纤维化的发病发挥重要作用。     

白细胞介素-6在溃疡性结肠炎模型小鼠Th17/Treg细胞失衡中的作用

目的研究白细胞介素-6(IL-6)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型小鼠结肠固有层黏膜局部Th17和调节性T细胞(Treg)失衡中的作用。方法制备葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的UC模型小鼠(UC组,n=5),检测UC组小鼠和正常对照组小鼠(NC组,n=5)结肠固有层黏膜单个核细胞中Th17细胞及Treg细胞的水平,用CBA检测细胞培养上清IL-6、IL-10、IL-17等细胞因子的水平。结果在DSS诱导的UC小鼠结肠固有层黏膜中,Th17细胞水平均高于NC组(P0.05);IL-17A水平高于NC组(P0.05);Treg细胞水平显著高于NC组(P0.05)。UC模型小鼠结肠固有层黏膜单核细胞培养上清液中IL-10表达水平均低于NC组(P0.05)。UC模型小鼠血清及结肠固有层黏膜单核细胞中,IL-6的水平高于NC组(P0.05),而在其他组织中,两组差异无统计学意义(P0.05);在UC模型小鼠中,血清及结肠固有层单核细胞中IL-6的水平高于其他组织(P0.05)。结论在UC模型小鼠结肠固有层黏膜中存在Th17/Treg细胞的失衡,局部IL-6升高参与了Th17/Treg细胞间的分化失衡,从而在UC模型小鼠的免疫异常发病中起重要作用。     

从Th1/Th2、Treg/Th17之间的平衡研究轻、中度慢性乙型肝炎患者CD4~+T淋巴细胞的免疫失衡状态

目的从Th17及其相关细胞因子与Th1、Th2、Treg的相互关系,探讨轻、中度CHB患者CD4~+T淋巴细胞的整体免疫失衡状态。方法选择轻、中度CHB患者,与健康志愿者进行比较,观察其外周血各免疫细胞(Th17、Th1、Th2、Treg、Th1/Th2、Treg/Th17)、相关细胞因子(IL-17、IL-6、TGF-β、IFN-γ、IL-4)、主要效应分子(穿孔素、颗粒酶B)和核转录因子(孤独核受体RORγt、Foxp3等)的变化及其相互关系。结果与健康志愿者相比,CHB患者CD8~+T淋巴细胞比例更高,CD4~+/CD8~+比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th1细胞比例更高,Th1/Th2显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th17细胞比例更高,Treg/Th17比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者穿孔素和颗粒酶B的表达更高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者FOXP3、IL17mRNA和RORγt的表达差异无统计学意义(P0.05);与健康志愿者相比,CHB患者TGF-B1、IL-6、IL-17显著增高,差异有统计学意义(P0.01);IFN-γ和IL-4的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论轻、中度CHB患者在免疫细胞及其相关细胞因子、效应分子等各环节,尤其是Treg/Th17比例,均处于严重的免疫失衡状态。     

肠源性内毒素血症对慢性乙型肝炎患者调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞17的影响

目的探讨肠源性内毒素血症(IETM)对慢性乙型肝炎(CHB)患者调节性T淋巴细胞(Treg)/辅助性T淋巴细胞(Th)17的影响。方法选取2014年12月-2015年10月在山西医科大学第一医院住院治疗的CHB患者(CHB组)80例,同时选取健康体检者(HC组)20例作为对照。根据内毒素(ET)水平将CHB组分为ET阳性组和ET阴性组。测定外周血单个核细胞中叉头样转录因子(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)mRNA的表达,Treg和Th17百分比,以及ALT、HBV DNA水平。计量资料两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果 CHB组Treg、Th17百分比、Foxp3、RORγt相对表达量与HC组比较均明显增高[(6.51±1.18)%vs(5.91±1.29)%,(4.99±1.07)%vs(4.18±0.87)%,2.12±0.83 vs 1.60±0.70,1.56±0.77 vs 1.09±0.59],P值均0.05。ET阳性组Treg、Th17百分比、Foxp3、RORγt相对表达量、Th17/Treg、RORγt/Foxp3、ALT水平与ET阴性组比较均明显增高[(6.75±1.17)%vs(6.21±1.14)%,(5.39±1.03)%vs(4.48±0.91)%,2.29±0.90 vs 1.91±0.70,1.84±0.76 vs 1.23±0.64,0.82±0.19 vs 0.74±0.16,0.95±0.38 vs 0.74±0.54,(220.16±115.82)U/L vs(170.86±99.69)U/L],P值均0.05。ET阳性组HBV DNA载量比ET阴性组增高,但差异无统计学意义(P0.05)。相关分析表明,CHB患者ET水平与Th17、Treg及ALT呈正相关(r值分别为,P值均0.05),而与HBV DNA无相关性。结论 CHB患者体内存在的IETM可能通过调控Foxp3、RORγt mRNA表达增加,导致外周血Treg、Th17百分比升高,进而Treg/Th17比例失衡,使HBV难以清除而导致慢性化。     

肝癌大鼠体内TH17/Treg失衡及意义

目的观察肝癌大鼠体内TH17/Treg失衡状态,从而探讨免疫细胞在肝癌疾病的发病机制。方法观察大鼠肝癌模型和对照组,提取脾脏单个核细胞,流式细胞术检测CD3、CD4、CD8,TH17及Treg比例,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血液上清白细胞介素(IL)-17及肿瘤坏死因子(TNF)-β含量变化,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测RORγT及Foxp3含量。结果与对照组相比,肝癌组体内单个核细胞CD8表达量显著升高,CD3、CD4表达量显著降低,CD4/CD8比例显著降低(P均0.05);TH17细胞表达量显著升高,Treg细胞表达量显著降低(P均0.05);IL-17含量显著升高,TNF-β含量显著降低(P均0.05);RORγT含量显著升高,Foxp3含量显著降低(P均0.05)。结论肝癌大鼠TH17/Treg失衡,具体表现为TH17细胞及相关细胞因子增多,而Treg细胞及相关细胞因子降低,提示TH17/Treg失衡与肝癌疾病具有相关性。     

IL-17、IL-23、IL-6、TGF-β1和Foxp3在实验性结肠炎中的表达

目的 观察2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠结肠炎模型中结肠Foxp3、TGF-β1的表达及外周血清IL-17、IL-23和IL-6的表达,以探讨Th17细胞在IBD的作用.方法 10只SD大鼠以三硝基苯磺酸(TNBS)/L醇溶液灌肠诱导结肠炎模型.另取10只大鼠作为正常对照组(0.9%NaCl溶液灌肠).干预2周后行结肠大体损伤指数(CMDI)和组织学损伤指数(TDI)评分,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白介素-6(Interteukin 6,IL-6)、IL-17和IL-23水平,以免疫组化方法(SP法)检测结肠组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和叉头样转录因子-3(Foxp3)表达.结果 与正常组相比,结肠炎模型组CMDI和TDI显著升高(P<0.01),血清IL-6、IL-17和IL-23水平明显升高(P<0.05),结肠组织TGF-β1和Foxp3明显降低(P<0.05).结论 在TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎中,IL-6可能通过介导T细胞向Th17或Treg细胞的分化,促进或抑制肠道炎症.     

雷公藤甲素对小鼠实验性结肠炎Th17／Treg的调节作用

目的探讨雷公藤甲素对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的结肠炎小鼠肠道Th17／Treg平衡的调节作用。方法40只BALB／c小鼠随机分为4组：对照组、模型组、雷公藤甲素低剂量组和高剂量组。模型组、雷公藤甲素低剂量组和高剂量组用TNBS诱导小鼠结肠炎模型,造模后,雷公藤甲素低剂量组和高剂量组分别腹腔注射35肛g·kg^-1·d^-1、70μg·kg^-1·d。雷公藤甲素,模型组每天腹腔注射生理盐水。对照组用50％乙醇溶液灌肠后每天腹腔注射生理盐水。2周后处死各组小鼠,评估各组小鼠结肠组织的大体和组织学评分,实时荧光定量RT-PCR检测结肠组织IL-17、RORC和Foxp3mRNA表达水平。结果雷公藤甲素低剂量和高剂量组小鼠结肠组织大体和组织学评分显著低于模型组（P〈0．05）,结肠组织IL-17、RORCmRNA表达显著低于模型组（P〈0．05）,Foxp3mRNA表达显著高于模型组（P〈0．05）,雷公藤甲素低剂量、高剂量组与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论雷公藤甲素可能通过下调RORC表达抑制Th17细胞分化、IL-17产生,上调Foxp3促进Treg细胞形成,从而调节结肠炎小鼠Th17／Treg平衡,抑制肠道炎症。     

淋巴细胞功能相关抗原-1调节Treg细胞对炎症性肠病的疗效观察

背景:Treg细胞对炎症性肠病(IBD)具有免疫保护作用,淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)参与了IBD时Treg细胞的分化和迁移。目的:探讨LFA-1调节Treg细胞对IBD疗效的影响。方法:将LFA-1基因缺失小鼠和相同遗传背景野生型小鼠各20只分别随机分为炎症组和治疗组。小鼠饮用2.5%DSS溶液诱导结肠炎模型,治疗组小鼠通过尾静脉回输体外诱导的Treg细胞。观察小鼠一般情况和结肠组织学表现,流式细胞术检测外周血、脾脏、肠系膜淋巴结中Treg细胞比例,ELISA法检测血清TGF-β1、IL-10、IL-17A、IFN-γ水平,实时PCR检测结肠组织TGF-β1、IL-10mRNA表达。结果:LFA-1缺失治疗组结肠组织学评分与野生型治疗组无明显差异。LFA-1缺失治疗组肠系膜淋巴结Treg细胞比例显著高于相应炎症组(P0.05);LFA-1缺失治疗组外周血、脾脏、肠系膜淋巴结Treg细胞比例显著低于野生型治疗组(P0.05)。与相应炎症组相比,野生型和LFA-1缺失治疗组血清TGF-β1、IL-10以及结肠组织TGF-β1 mRNA表达显著升高(P0.05),IL-17A、IFN-γ以及IL-10 mRNA表达显著降低(P0.05)。野生型治疗组血清TGF-β1、IL-10以及TGF-β1、IL-10 mRNA表达显著高于LFA-1缺失治疗组(P0.05),IL-17A、IFN-γ显著降低(P0.05)。结论:LFA-1参与了Treg细胞功能的调控,能促进Treg细胞分泌抗炎因子TGF-β1、IL-10等。Treg细胞治疗LFA-1缺失结肠炎小鼠的疗效低于野生型小鼠,可能与Treg细胞功能和细胞因子的分泌受到抑制相关。     

白芍总甙对大鼠实验性结肠炎Th17细胞相关因子的作用

目的:观察白芍总甙(TGP)对实验性结肠炎干预的治疗效果,探讨TGP对实验性结肠炎的抗炎作用.方法:40RSD大鼠以三硝基苯磺酸(TNBS)/醇溶液灌肠诱导结肠炎模型,均分为结肠炎模型组、正常对照组(0.9%NaCl溶液灌肠)、TGP组(100mg/kg)和5-ASA药物对照组(100mg/kg).连续灌胃14 d后行结肠大体损伤指数(CMDI)和组织学损伤指数(TDI)评分,ELISA检测血清IL-6、IL-17及IL-23水平,免疫组织化学SP法检测结肠组织TGF-β1与Foxp3的表达.结果:与结肠炎模型组相比,正常组CMDI、TDI,血清IL-6,IL-17及IL-23含量明显低,结肠组织TGF-β1和Foxp3含量明显高.5-ASA与TGP能显著降低CMDI和TDI(2.78分±2.11分,3.56分±1.94分 vs 6.88分±0.84分,均P<0.05;2.22分±0.83分,2.44分±1.51分 vs 5.63分±0.74分,均P<0.05),降低血清IL-6,IL-17和IL-23含量(5-ASA:t=5.998,2.438,2.670,均P<0.05;TGP:t=5.203,3.013,2.962,均P<0.05).升高结肠组织中TGF-β1和Foxp3(5-ASA:t=6.026,3.022,均P<0.05;TGP:t=6.198,2.734,均P<0.05).TGP组与5-ASA组无明显统计学差异.结论:TGP可能通过上调TGF-β1和Foxp3水平,促进Treg细胞的表达,抑制Th17细胞群的活化,下调IL-6,IL-17和IL-23的表达,减轻TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎的症状和结肠炎性损伤.     

Th17细胞因子在CD大鼠结肠不同炎性时期的差异表达

目的:观察不同次数三硝基苯磺酸(trinitrobenzene-sulfonic acid,TNBS)灌肠刺激对大鼠肠道炎症程度及结肠组织Th17细胞因子白介素(interleukin,IL)-6、IL-17A、IL-21、维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)表达的影响.方法:30只清洁级♂SD大鼠,160 g±10 g,随机分为正常对照组(NG)、1 wk造模组、2 wk造模组、3 wk造模组、4 wk造模组.按照Morris等方法制备克罗恩病(Crohn's disease,C D)大鼠模型,T N B S灌肠液由5%T N B S与500 m L/L的乙醇按2∶1比例混合而成,1次/wk.采用结肠一般形态和HE病理观察TNBS对结肠黏膜的病理损伤程度,荧光定量P C R、免疫组织化学等技术观察各组大鼠结肠黏膜中RORγt、IL-17A的表达,ELISA法观察血清中IL-6、IL-21含量的变化.结果:大鼠结肠IL-17A m RNA水平在第1次TNBS诱导后表达为下降,在3 wk时,IL-17A m RNA与蛋白水平明显升高(P0.05),第4次诱导后达到最高.大鼠结肠RORγt蛋白随着刺激次数的增加而表达量逐渐增高(P0.05),第4次诱导后达到最高(P0.05);血清中I L-6、I L-21含量也均在1 w k时间点即开始显著上升(P0.01),在第4周达到最高值.模型大鼠结肠组织大体形态评分和组织损伤评分显著增加(P0.01).结论:TNBS诱导CD模型过程中,Th17细胞因子IL-6、IL-17A、IL-21、RORγt的含量随着刺激次数的增加而逐渐增加,并伴随结肠炎症程度的加重而逐渐加重.     

慢性心力衰竭病人外周Th17细胞功能检测的临床意义

目的探讨慢性心力衰竭病人外周血中CD_4~+IL-17+Th17细胞及白介素-6(IL-6)、白介素-22(IL-23)、白介素-17(IL-17)、RORγt的表达变化及其与慢性心力衰竭病程进展的关系。方法选取2013年1月—2014年6月在我院心血管内科确诊的慢性心力衰竭病人60例,同期无心脏疾病的健康人30名为对照。分别抽取不同心功能分级的慢性心力衰竭病人及对照者外周血,以流式细胞术检测外周血中CD_4~+IL-17+Th17细胞表达水平,real-time PCR检测外周血单核细胞(PBMC)中IL-6、IL-23、IL-17、RORγt基因表达变化。结果慢性心力衰竭病人CD_4~+IL-17+辅助性T细胞17(Th17)百分率、Th17细胞特异性转录因子RORγt和IL-6、IL-23、IL-17基因表达水平均明显高于健康对照组(P0.05);与心功能分级为Ⅰ级~Ⅱ级慢性心力衰竭病人相比,心功能分级为Ⅲ级~Ⅳ级慢性心力衰竭病人Th17细胞百分率以及RORγt、IL-6、IL-23、IL-17基因表达水平均显著升高(P0.01)。结论慢性心力衰竭病人中Th17细胞及其功能相关细胞因子表达情况与慢性心力衰竭病人病情的进展呈正相关,心力衰竭越严重,Th17表达率越高。因此,抑制Th17细胞及其功能相关细胞因子的表达是治疗慢性心力衰竭的重要措施。     

Th17及调节性T细胞及相关因子在颈动脉粥样硬化发生过程中的作用及其机制

目的探讨T辅助性17(Th17)细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞及相关因子在颈动脉粥样硬化(AS)患者外周血中的表达水平及Th17细胞影响AS发病的机制。方法选取2012年7月至2014年7月来该院治疗的AS患者(60例)为研究组,选取同期来该院体检的健康人群为对照组(40例),采用流式细胞术检测AS患者及正常人外周血中Th17细胞及Treg细胞水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组人群外周血中白介素(IL)-17以及转化生长因子(TGF)-β的水平;采用RT-PCR法检测两组人群外周血中转录因子RORγT及Foxp3的mRNA水平。结果 AS患者中Th17细胞比例,血清IL-17水平及外周血RORγT mRNA水平显著高于AS对照组;Treg细胞比例、血清TGF-β水平及外周血Foxp3mRNA水平显著低于对照组(P0.01)。结论 Th17细胞及相关因子可能参与促进AS的产生,Treg细胞及相关因子可能参与抑制AS的产生,阻断AS患者体内的IL-17可能作为治疗AS的潜在手段。     

Faecalibacterium prausnitzii对LFA-1基因敲除的结肠炎小鼠中Treg细胞和细胞因子的影响

背景:Faecalibacterium prausnitzii(Fp)可促进Treg细胞的分化,淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)亦参与Treg细胞的分化调节。目的:探讨Fp对LFA-1基因敲除(LFA-1~(-/-))的结肠炎小鼠中Treg细胞和细胞因子的影响。方法:将同样遗传背景下野生型小鼠和LFA-1~(-/-)小鼠随机分为野生型对照组、野生型治疗组、LFA-1~(-/-)对照组、LFA-1~(-/-)治疗组。小鼠饮用DSS溶液诱导结肠炎模型,治疗组小鼠予Fp灌胃。观察各组小鼠一般状况和组织病理学评分,以流式细胞术检测脾脏和肠系膜淋巴结中Treg细胞比例,ELISA法检测外周血清IL-10、TGF-β1含量,实时PCR法检测结肠组织IL-10、TGF-β1 mRNA表达。结果:与相应对照组相比,野生型治疗组结肠组织学评分显著下降(P0.05);野生型治疗组和LFA-1~(-/-)治疗组脾脏和肠系膜淋巴结中Treg细胞比例显著升高(P0.05),血清IL-10、TGF-β1含量显著升高(P0.01),TGF-β1 mRNA表达显著升高(P0.05);LFA-1~(-/-)治疗组IL-10 mRNA表达显著降低(P0.01)。与野生型治疗组相比,LFA-1~(-/-)治疗组血清TGF-β1含量显著降低(P0.05),IL-10、TGF-β1 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论:Fp在LFA-1~(-/-)小鼠中可上调Treg细胞比例,促进Treg细胞分泌抗炎因子IL-10、TGF-β1。Fp治疗野生型结肠炎小鼠的疗效优于LFA-1~(-/-)小鼠,可能与LFA-1缺失对Treg细胞功能的发挥和细胞因子分泌受限有关。     

Th1、Th2和Th17细胞失衡与克罗恩病的关系

背景:免疫功能紊乱是炎症性肠病发病的关键环节,研究发现Th1、Th2和Th17细胞比例失衡与肠道免疫失调相关。目的:探讨Th1、Th2和Th17细胞失衡与克罗恩病(CD)的关系。方法:收集2013年1月—2014年12月温州医科大学附属第二医院收治的CD患者36例,同期行肠息肉摘除术患者40例作为对照组,分别取病变部位肠组织和正常肠组织,采用real-time PCR和免疫组化法检测Th1、Th2、Th17细胞相关转录因子(T-bet、GATA-3、RORγt)和细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A)表达。结果:与对照组相比,CD组肠组织中T-bet、RORγt mRNA表达、IFN-γ、IL-17A mRNA和蛋白表达以及代表Th1/Th2、Th17/Th2比例的T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3比值均显著增高(P0.05),各转录因子与相应细胞因子表达呈显著正相关(P0.05)。IFN-γ和IL-17A免疫阳性物质均定位于细胞质,在CD患者中阳性细胞主要分布于上皮层和黏膜固有层。分层分析显示活动期CD的上述指标均显著高于缓解期(P0.05);活动期CD代表Th17/Th1比例的RORγt/T-bet比值亦较缓解期显著增高(P0.05)。结论:肠组织中Th1、Th2和Th17细胞失衡与CD密切相关,Th1、Th17细胞极化可能在其中起重要作用,活动期CD以Th17细胞极化为著。     

原发性非小细胞肺癌患者外周血中Th17的检测及其临床意义

目的通过检测非小细胞癌(NSCLC)患者与健康对照组外周血中Th17细胞及相关因子的表达水平,探讨其在NSCLC中的临床意义。方法流式细胞术检测外周血中Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例;RT-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17及孤独核受体γt(RORγt)mRNA的表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血浆中IL-17的水平。结果 NSCLC患者外周血Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例较对照组显著升高(P<0.01);PBMC中IL-17及RORγt mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01);外周血浆中IL-17的水平显著高于对照组(P<0.01)。不同病理类型之间Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平无统计学差异(P>0.05)。Ⅲ期患者Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平较Ⅰ^Ⅱ期患者显著增高(P<0.01)。结论 Th17细胞可能通过RORγt和IL-17参与NSCLC的发生,Th17相关指标对NSCLC的治疗及预后有指导意义。