钩吻生物碱成分的研究进展

目的对钩吻中生物碱成分的研究进展进行综述,为钩吻生物碱成分的进一步研究奠定基础。方法查阅国内外相关文献47篇,从其中化学成分的理化常数、结构式、提取分离方法、药理作用、毒性以及开发前景等方面对钩吻生物碱类成分的研究进展进行综述。结果与结论钩吻中含有生物碱成分44种,主要为吲哚类生物碱;主要提取分离方法为硅胶柱层析和重结晶;钩吻生物碱具有免疫调节、抗肿瘤、镇痛镇静等药理活性;钩吻中的毒性成分也为生物碱类成分,这给广大研究人员带来了严峻的挑战与机遇。     

钩吻生物碱钩吻素子的提纯及其抗神经病理性疼痛的作用

神经病理性疼痛(NPP)的新型治疗药物以及治疗靶点亟待研究。中国钩吻为马钱科植物胡蔓藤的全草,盛产于闽、粤、桂等地。钩吻的主要有效成分为吲哚类生物碱,含有数十种生物碱单体,其中钩吻素子(koumine,KM)为国产钩吻生物碱单体中含量最高的一种有效成分。民间一直应用钩吻原植物治疗各类疼痛,尤其神经性疼痛与癌性疼痛。有报道,钩吻总碱具有显著的镇痛效果,但治疗指数小,有效量与中毒量较接近。本文拟从国产钩吻分离纯化获取钩吻素子,并报道其抗神经病理性疼痛作用及其机制。选取本地采集的钩吻根和茎,提取钩吻总生物碱;应用高速逆流色谱等技术分离纯化钩吻总碱获得钩吻素子单体,纯度达99%;经紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱、质谱分析、元素分析以及熔点测定等确证其化学结构,钩吻素子分子式为C20H22N2O,分子量306.3。钩吻素子原料药对光、温度、湿度稳定,钩吻素子水溶液在pH值3～8以及温度在室温、40℃、60℃条件下稳定。在大小鼠坐骨神经慢性束缚损伤(CCI)模型和脊神经结扎模型上,以动物机械阈值、热阈值和自发痛行为为指标,首次观察到ig或sc钩吻素子具有显著的抗NPP作用,有效剂量远低于中毒剂量(小鼠sc钩吻素子LD50为99 mg·kg-1)。脊髓可能是钩吻素子抗NPP的重要作用部位;脊髓神经活性甾体3α,5α-四氢孕酮(3α,5α-THP)参与调控NPP,钩吻素子可显著提高CCI模型大鼠脊髓腰段内3α,5α-THP的水平;3α-羟化类固醇脱氢酶(3α-HSD)是催化3α,5α-THP合成的关键酶,钩吻素子可显著上调脊髓3α-HSD酶的表达。上述结果表明,钩吻素子具有显著的抗NPP作用;增强脊髓3α-HSD酶的表达,促进脊髓3α,5α-THP的生成,可能是其发挥抗NPP作用的机制之一。     

钩吻根脂溶性化学成分的分离与鉴定

目的对钩吻根脂溶性部位的化学成分进行研究。方法通过乙醇回流提取、溶剂分步萃取得到钩吻根粗提物,利用硅胶柱、ODS柱、Sephadex LH-20、Toyopearl HW-40F等多种色谱柱进行分离纯化,利用NMR等现代波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果分离得到10个化合物,分别鉴定为钩吻素子(koumine,1)、钩吻绿碱(gelsevirine,2)、胡蔓藤碱乙(humantenine,3)、钩吻内酰胺(gelsemamide,4)、12β-羟基-孕甾-4,16-二烯-3,20-二酮(12β-hydroxy-pregna-4,16-diene-3,20-dione,5)、正三十一烷醇(n-hentriacontyl alcohol,6)、十四碳酸甲酯(methyl myristate,7)、6,7-二甲氧基香豆素(6,7-dimethoxycoumarin,8)、3,4,5-三甲氧基苯甲醇(3,4,5-trimethoxybenzyl alcohol,9)、5-甲基间苯二酚(5-methylresorcinol,10)。结论化合物6-10为首次从胡蔓藤属中分离得到。     

中国钩吻中生物碱:钩吻碱子的结构

自1931年赵承嘏等从钩吻(Gelsemium elegansBenth)中分离出钩吻碱子(Koumine)以来,其结构式一直未确定。作者采用X-射线结晶分析法进行钩吻碱子的结构鉴定。钩吻碱子(Koumine),C_(20)H_(22)N_2O,熔点172°(丙酮),[α]_D-272°。UV(EtOH)λ_(max)220,262nm(log∑4.32,3.84); IR1700cm~(-1),MS Mm/e     

钩吻素子在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学研究

目的建立体外实验法研究钩吻素子在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学。方法以钩吻碱甲标准品为内标,采用液质连用(UPLC/MS)的方法测定钩吻素子在体外代谢30min后剩余钩吻素子的含量。UPLC采用BEH C18色谱柱(2.1×50mm,1.7μm),流动相为0.1%甲醇酸-0.1%甲醇水(20∶80),流速为0.3mL·min-1,进样量为1μL,柱温为40℃,MS采用正离子、多反应监测(MRM)模式监测,离子监控通道m/z307.1>69.76(钩吻素子),m/z 323.1>69.76(钩吻碱甲),毛细管电压2.8kV,锥孔电压35V,离子源温度110℃,脱溶剂温度300℃,锥孔气(N2)流速50L·h-1,脱溶剂气(N2)流速450L·h-1。用Linewrave-Burk作图分析数据,计算酶促动力学参数。结果钩吻素子在0.5～30uM范围内线性良好Y=0.1544X+0.0593,r=0.9939结论此方法简单、快速、可靠,适用于钩吻素子的体外代谢研究。     

钩吻素子对大鼠焦虑行为的影响

目的进一步明确钩吻素子是否具有抗焦虑作用。方法以大鼠高架十字迷宫实验为动物模型,评价钩吻素子单次皮下注射给药和连续皮下注射给药的抗焦虑活性及特点。结果钩吻素子能显著增加大鼠进入高架十字迷宫开臂次数和在开臂的停留时间百分率(P<0.05,P<0.01);钩吻素子在实验剂量下对大鼠自主运动活性无影响(P>0.05)。结论钩吻素子可能具有抗焦虑作用。     

瑶药风湿骨痛喷雾剂Ⅲ的质量标准研究

目的:建立瑶药风湿骨痛喷雾剂Ⅲ的质量标准。方法:对制剂中钩吻进行薄层色谱法定性鉴别;用高效液相色谱法测定制剂中钩吻素子。结果:在薄层色谱中能检出钩吻;钩吻素子在0.199 2～3.187μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7)。平均回收率为98.58%,RSD为1.41%(n=6)。结论:所建立的方法稳定可靠,可有效控制该制剂的质量。     

UPLC测定钩吻素子的含量及其水溶液稳定性

目的建立超高效液相色谱法测定钩吻素子的含量,并考察其水溶液在室温条件下的稳定性。方法采用Agilent Extend-C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.2%正丁胺水溶液(30∶70)为流动相,流速0.5 m L·min?1,检测波长256 nm,测定3个批次钩吻素子的含量,并考察钩吻素子水溶液在室温条件下稳定性。结果钩吻素子分离度良好;在10.19~112.2μg·m L?1内线性关系良好(r=0.999 7),定量限为0.1μg·m L?1;平均回收率为100.4%(RSD=0.45%,n=9);3个批次钩吻素子平均含量为99.97%;钩吻素子水溶液室温条件下连续7 d稳定性良好。结论该方法简单易行、专属性强,准确可靠,适用于钩吻素子含量测定,且本品水溶液稳定性良好。     

钩吻素子对坐骨神经慢性束缚损伤模型大鼠脊髓3α-羟化类固醇脱氢酶表达的影响

目的观测在钩吻素子治疗CCI大鼠NPP过程中脊髓3α-HSD的表达动态变化规律。方法:在大鼠CCI诱导的NPP模型上,于术后第3天开始,皮下注射给予钩吻素子(0.28,1.4,7 mg·kg-1)连续7 d,以免疫组织化学方法,观测脊髓3α-HSD蛋白水平的动态变化;以Realtime-PCR法测定脊髓3α-HSD基因表达水平的动态变化。结果免疫组织化学方法显示,3α-HSD在脊髓灰质均有分布;与sham组相比,CCI组、钩吻素子(7,0.28 mg·kg-1)大鼠脊髓背角3α-HSD蛋白表达随术后时间延长有上升趋势,其中钩吻素子(7 mg·kg-1)治疗组和CCI组相比,术后第9天脊髓3α-HSD蛋白表达的升高具有显著性差异,并且持续至第13天(停药后4 d)。Realtime-PCR显示,治疗组大鼠3α-HSD mRNA表达随术后时间延长逐渐增强趋势。CCI大鼠钩吻素子(7 mg·kg-1)给药治疗后,术后第4天3α-HSD mRNA表达就有显著提高;术后第6天CCI组、钩吻素子(7,0.28 mg·kg-1)治疗组的3α-HSD mRNA表达均显著提高,但钩吻素子(7,0.28 mg·kg-1)治疗组与CCI组相比无显著差异;术后第9、13天,与Sham组相比,CCI组、钩吻素子(7,0.28 mg·kg-1)治疗组的3α-HSD mRNA表达均进一步显著提高,其中钩吻素子(7 mg·kg-1)治疗组与CCI组、钩吻素子(0.28 mg·kg-1)治疗组相比均有显著差异。结论钩吻素子抗NPP作用可能与上调脊髓3α-HSD酶表达有关。     

钩吻中毒的应急检验方法研究与思考

目的 探讨钩吻中毒的应急检验方法。方法 选取导致2022年3月广东普宁市鸡矢藤煲汤中毒事件的涉案样品为研究对象,采用性状、显微、薄层色谱和液相色谱-质谱鉴别等检验方法鉴定致毒中草药。结果 样品外皮具深纵沟及横裂隙,截面具放射状纹理,含有石细胞和草酸钙簇晶,提示其为钩吻。涉案样品与钩吻对照药材及钩吻素子、钩吻素甲对照品在薄层色谱相应位置显相同颜色的斑点,并在液相色谱-质谱中检测到涉案样品含有钩吻素子和钩吻素甲。结论 本次中毒事件是由于误食混入鸡矢藤药材的钩吻而导致。基于长期从事有毒中草药中毒应急检验的经验,总结钩吻等有毒中草药中毒应急检验的常用方法,对有毒中草药监管和应急检验工作提出思考与建议,加强精准识别和快速筛查方法的研究等,为误用有毒中草药中毒应急检验提供参考,以期进一步避免钩吻等剧毒中草药中毒事件的发生。     

钩吻总碱对肝癌细胞氯通道的激活作用

目的探讨钩吻总碱对肝癌(HepG_2)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法活细胞图像法观察记录钩吻总碱作用后HepG_2细胞容积的变化;全细胞膜片钳技术记录钩吻总碱对HepG_2细胞膜电流的作用,通过细胞外灌流高渗液,氯通道阻断剂tamoxifen和5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)研究电流的生理学及药理学特性。结果细胞外灌流钩吻总碱50min,细胞体积减小(12.48±2.2)%(P<0.01),该现象可被氯通道阻断剂tamoxifen抑制。膜片钳结果显示,细胞外灌流钩吻总碱(2μmol·L~(-1))可激活HepG_2细胞膜氯电流,该电流有明显外向优势,无电压及时间依赖性失活,其翻转电位为(-3.21±0.67)mV,接近氯离子平衡电位(-0.9mV),可被氯通道阻断剂tamoxifen和NPPB抑制,细胞外灌流47%高渗溶液亦可明显抑制该电流。结论钩吻总碱可引起肝癌HepG_2细胞体积缩小,诱导凋亡性容积缩小(AVD)发生,该作用可被氯通道阻断剂明显抑制,提示氯通道可能为钩吻总碱抗癌作用的靶点之一。     

钩吻中毒的机制、临床特点及处理

钩吻是毒性极强的外用中药,应用不当或误服可致中毒,有时还可致命。主要毒性成分是钩吻碱,以钩吻素子含量最高。钩吻中毒主要抑制延髓呼吸中枢,并抑制脑和脊髓的运动中枢。临床表现以呼吸系统、神经系统症状为主,可出现呼吸衰竭和呼吸肌麻痹,是钩吻中毒最常见的死因。目前尚无特效解毒剂,以对症支持治疗为主。洗胃时须注意监测呼吸情况,必要时先行气管插管再洗胃。     

榕产钩吻的生药学研究

目的研究榕产钩吻的生药学特征,建立其生药学鉴别方法与鉴别特征。方法采用植物形态鉴定、显微特征鉴定、理化性质鉴定等手段对榕产的钩吻进行生药学研究。结果榕产钩吻生药学鉴别特征主要有无毛、茎长、叶断面齐、淡黄色花漏斗状聚伞花序、味特异等性状特征,木质部宽广、含大量石细胞等显微特征,以及含有生物碱、紫外灯下呈现鲜亮的天蓝色荧光等理化性质特征,可与相近植物相区别。结论确立了榕产钩吻生药学鉴别方法与鉴别特征。     

常绿钩吻碱平衡溶解度、油水分配系数及解离常数的测定

目的 测定常绿钩吻碱(Sempervirine,SPV)在不同pH磷酸盐缓冲液（PBS）中的平衡溶解度和油水分配系数,考察常绿钩吻碱的解离常数,为常绿钩吻碱的剂型开发提供一定的依据。方法 采用超高效液相色谱法（UPLC）结合摇瓶法测定常绿钩吻碱在不同pH的PBS中的平衡溶解度和正辛醇-PBS中的油水分配系数;采用紫外分光光度法测定常绿钩吻碱的解离常数。结果 常绿钩吻碱在pH 1.2~7.4的PBS中的溶解度为285.356~557.945 mg?L^-1,油水分配系数在0.316~5.803,解离常数pKa为11.10。结论 pH值影响常绿钩吻碱平衡溶解度和油水分配系数,常绿钩吻碱的低溶解度与解离常数可能影响其体内吸收。     

大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱的研究

目的:研究用大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱中主要成分的方法和工艺条件。方法:采用不同型号的HPD系列大孔吸附树脂对钩吻总生物碱进行提取纯化,以高效液相色谱法检测钩吻总生物碱中主要成分的峰面积为指标,考察最佳工艺和参数条件。结果:HPD-500、HPD-600、HPD-800型大孔吸附树脂对钩吻总生物碱提取效果好,并得到HPD-800的最佳工艺和参数条件。结论:采用HPD-800型大孔吸附树脂及不同浓度乙醇洗脱的方法,可用于钩吻总生物碱的提取纯化。     

钩吻活性成分的提取分离及其体外抗真菌作用初步研究

目的 对钩吻提取物进行分离纯化,确定其有效部位,并初步考察其体外抗真菌作用,为进一步研究提供参考依据.方法 采用95％乙醇加热回流提取与石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取相结合的方法对钩吻进行提取分离,应用HPLC法对不同萃取部位进行比较,并以琼脂稀释法确定钩吻有效部位,测定有效部位对40株临床常见曲霉菌的最小抑菌浓度(MIC).结果 钩吻提取物各萃取部位中所合成分不一致,其中仅石油醚部位对曲霉菌有抑制作用,其对40株曲霉菌的MIC范围为4800～9600μg·mL-1,平均MIC为6960μg·mL-1.结论 体外实验表明,钩吻对曲霉菌的生长存在抑制作用,抗曲霉菌有效成分主要存在于石油醚部位中.     

钩吻素子和钩吻素甲的分离鉴定

钩吻为马钱科Loganiaceae植物断肠草（胡蔓藤）GelsemiumelegansBenth的根、叶[1]。其毒性大，以外用为主，能祛风、消肿、拔毒、杀虫和止痒[2]。近20年来，不少单位以口服钩吻粉或总碱来治疗胃癌、食道癌等。在镇痛方面也取得显著效果[3]。为了研究钩吻中多种生物碱，笔者用氯仿热提法[4]从福建长泰生长的约吻根中提取生物总碱，并用柱层析分离得到两种生物碱晶体,经光谱（IR、Ms）确定为已知生物碱钩吻素子（Koumine）和钩吻素甲（Gelsemine）。这两种生物碱是首次从福建长泰的钩吻中提取分离出来。1仪器：Kofler显微镜熔点测定仪，岛…     

钩吻配伍玉叶金花对大鼠脏器组织病理形态改变及扭体镇痛实验研究

目的研究钩吻与玉叶金花配伍后能否降低毒性保持镇痛药效。方法将SD大鼠分为空白对照组、钩吻组(0.36 g·kg-1)、钩吻与玉叶金花配伍组(0.36 g·kg-1+14.4 g·kg-1),灌胃给药7 d后取心、肝、脾、肺、肾,采用HE染色法检测大鼠各组织病理学改变。将昆明小鼠分成空白对照组、吲哚美辛组(0.01 g·kg-1)、钩吻组(0.27 g·kg-1)、钩吻与玉叶金花配伍组(0.27 g·kg-1+7.12 g·kg-1),各组灌胃给药30 min后腹腔注射0.6%醋酸溶液,记录15 min内出现扭体潜伏时间、次数,并计算镇痛率。结果钩吻组肺泡间隔明显增宽,部分肺泡腔呈实变状并且充有大量炎性细胞;脾脏皮质内有多量含棕褐色色素的巨噬细胞并可见巨核细胞;肝脏内有多量炎性细胞浸润,肝小叶内个别肝细胞坏死,核固缩;肾小球毛细血管数目减少,球囊腔扩张,并且肾小球局部多量炎性细胞浸润;心肌间质增宽,局部小灶性心肌细胞变性,少量炎性细胞浸润。而钩吻与玉叶金花配伍组病理表现均明显减轻,结构趋于正常空白对照组。与空白对照组相比,吲哚美辛组、钩吻组及其配伍组均能显著减少15 min内醋酸所致的小鼠扭体次数,扭体反应时间也明显延长。结论钩吻与玉叶金花配伍后可降低毒性,又能保持镇痛药效。     

钩吻的毒性及炮制减毒研究进展

目的 综述目前钩吻毒性及其炮制减毒的研究进展。方法 通过查阅国内外文献,对钩吻的毒性成分及其减毒存效的炮制方法进行了综述。结果 钩吻的毒性研究主要以成分结构研究及药理实验为主,在减毒方面主要从炮制、配伍、新型制剂技术几个方面开展研究,并取得一定的成效。结论 目前钩吻的减毒研究仍处于比较基础的阶段,需要进一步深入研究,使钩吻减毒存效技术广泛应用在钩吻开发及临床使用中,更好地造福人类健康。     

钩吻中毒31例临床分析

钩吻(Gelsemium elegans Benth)又名断肠草、胡蔓藤等,系马钱科植物,其全草各部均有剧毒,尤其嫩叶毒性很强。有人将它作为“杀虫剂”,还有人当作治疗“风湿病”的草药。我们自1959年至1979年收治钩吻中毒31例,现报告如下。