明日叶查尔酮对胰岛素抵抗细胞PI3K-Akt-GLUT4信号通路的影响

目的研究明日叶查尔酮(Angelica keiskei chalcones,AC)对胰岛素抵抗L6细胞磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶-葡萄糖转运体4(PI3K-Akt-GLUT4)信号通路的影响。方法采用高浓度胰岛素诱导的胰岛素抵抗L6细胞,分别加入5、10、20μmol/L终浓度的明日叶查尔酮共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测细胞PI3K和Akt的mRNA表达水平,蛋白印迹法检测GLUT4和Akt的蛋白表达水平。结果胰岛素抵抗组细胞培养液的葡萄糖含量显著高于空白对照组(P0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则降低(P0.05);中、高剂量AC组细胞培养液葡萄糖含量均低于胰岛素抵抗组(P0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则升高(P0.05)。结论明日叶查尔酮可上调L6细胞胰岛素抵抗模型PI3K-AktGLUT4信号通路的表达水平,增强其对葡萄糖的摄取利用,改善胰岛素抵抗。     

慢性酒精摄入对大鼠脂肪组织胰岛素敏感性影响

目的观察不同剂量酒精对雄性大鼠脂肪组织胰岛素敏感性的影响,并研究其可能的分子机制。方法用不同浓度(v/v)的酒精灌胃19 w,检测大鼠血清中胰岛素、葡萄糖含量,计算胰岛素抵抗程度;采用RT-PCR检测脂肪组织中磷脂酰肌醇-3-磷酸激酶(PI3K)mRNA、葡萄糖转运体4(GLUT4)mRNA表达水平。结果与对照组相比,中、高剂量组空腹葡萄糖浓度升高有统计学意义(P<0.05),低、中剂量组胰岛素浓度升高有统计学意义(P<0.05);各剂量组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的升高均有统计学意义(P<0.05)。各剂量组的PI3K mRNA和GLUT4 mRNA表达均升高。结论长期过量酒精摄入引起胰岛素抵抗,引起脂肪组织胰岛素信号转导途径中磷PI3K mRNA和GLUT4 mRNA的表达升高。     

辣椒素在小鼠瘤βTC-6细胞中降糖机制的研究

目的探讨辣椒素对小鼠瘤βTC-6细胞胰岛分泌功能的作用及其相关的降糖机制。方法(1)辣椒素对小鼠瘤βTC-6细胞增殖率的影响:在不同浓度的辣椒素(0、10、50、100、200、300μmol/L)作用下,测定小鼠瘤βTC-6细胞的增殖率、胰岛素分泌量和胞内Ca2+的浓度;(2)辣椒素受体(TRPV1)调控试验:筛选合适剂量辣椒素(50μmol/L)和辣椒卓平(15μmol/L),培养48 h后测定TRPV1、胰腺十二指肠同源异形盒1(PDX-1)、胰岛素受体底物1(IRS1)、胰岛素受体底物2(IRS2)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)在βTC-6细胞中的蛋白水平。结果辣椒素能够抑制βTC-6细胞增殖,其胞内Ca2+浓度与胰岛素分泌功能密切相关,且辣椒素能显著上调TRPV1、PDX-1、IRS1、IRS2和GLUT2的蛋白水平,但TRPV1通道被辣椒卓平阻断后,这种上调作用显著减弱。结论 (1)在辣椒素剂量为0~50μmol/L条件下,βTC-6胞内Ca2+浓度与其胰岛素分泌量正相关;(2)辣椒素对胰岛细胞的刺激是其降糖作用的主要来源,与胰岛细胞的增殖无关,且胰岛细胞中可能存在TRPV1–PDX-1–GLUT2/IRS1信号通路。     

性激素结合蛋白、胰岛素受体底物、葡萄糖转运蛋白表达及在妊娠期糖尿病发病过程中的作用分析

目的探讨妊娠期糖尿病孕妇胎盘组织中性激素结合球蛋白(SHBG)、胰岛素受体底物(IRS)、葡萄糖转运蛋白(GLUT)的表达及在妊娠期糖尿病发病过程中的作用,为临床诊治提供参考依据。方法收集2017年1月-2018年6月在南开医院产科定期产检,择期行剖宫产手术的单胎足月孕妇,其中妊娠期糖尿病孕妇120例为妊娠期糖尿病组,糖代谢正常孕妇120例为正常对照组。应用实时PCR (qPCR)和Western blot技术检测两组孕妇胎盘组织中SHBG、IRS-1、IRS-2、PI3K-p85β、GLUT1、GLUT3、GLUT4 mRNA和蛋白的表达水平,并分析各指标间的相关性。结果妊娠期糖尿病组孕妇胎盘组织中SHBG、IRS-2、PI3K-p85β、GLUT3、GLUT4 mRNA表达水平明显低于正常对照组,差异有统计学意义(均P0. 05);两组孕妇胎盘组织中IRS-1、GLUT1 mRNA表达水平差异无统计学意义(均P0. 05)。妊娠期糖尿病组孕妇胎盘组织中SHBG、IRS-1、GLUT3、GLUT4蛋白表达水平明显低于正常对照组,差异有统计学意义(均P0. 05);两组孕妇胎盘组织中IRS-2、PI3K-p85β、GLUT1蛋白表达水平差异无统计学意义(均P0. 05)。Pearson分析显示,SHBG与IRS-2、PI3K-p85β、GLUT3、GLUT4 mRNA表达呈正相关; IRS-2与GLUT1、GLUT4 mRNA表达呈正相关; IRS-1与PI3K-p85β、GLUT3 mRNA表达呈负相关。SHBG与IRS-2、GLUT3、GLUT4蛋白表达呈正相关; IRS-2与GLUT1、GLUT4蛋白表达呈正相关; IRS-1与GLUT3蛋白表达呈负相关。结论妊娠期糖尿病孕妇胎盘组织中SHBG、IRS及GLUT表达异常; SHBG浓度降低可能通过影响胰岛素信号传导通路导致胎盘葡萄糖利用障碍,最终引发妊娠期糖尿病。     

高胰岛素血症诱导胰岛素抵抗与血糖浓度增加有关

目的 探讨高浓度胰岛素和高浓度葡萄糖共同作用对原代培养老鼠脂肪细胞的糖转运活动、细胞内胰岛素信号肽及葡萄糖转运子4（GLUT4）易位的影响。方法 分离的老鼠脂肪细胞在胰岛素（10^4μU/ml)和不同浓度葡萄糖（5、10、15、25mM)培养基中孵育24h,然后测定糖的转运活动;用Western blot方法测定这些细胞内胰岛素受体底物（IRS）1／2、肌醇磷脂－3－激酶85亚单位（p85)、蛋白激酶B（PKB）和GLUT4的蛋白表达。结果 胰岛素和不同高浓度葡萄糖培养24h,以一种剂量依赖的方式诱导糖摄取率的减少,抑制了IRS蛋白表达,而不影响p85、PKB和GLUT4的表达,但抑制了GLUT4易位至质膜;胰岛素加正常或不同高浓度葡萄糖治疗,均抑制了IRS2蛋白表达。结论 慢性胰岛素治疗诱导的胰岛素抵抗与周围环境中葡萄糖浓度增加有关,可能影响了胰岛素受体底物蛋白表达以及GLUT4易位等。     

黄连素干预妊娠期糖尿病AMPK/GLUT4信号通路改善胰岛素抵抗的实验研究

目的观察黄连素对妊娠期糖尿病胎盘滋养层细胞AMPK/GLUT4信号通路和葡萄糖摄取能力的影响。方法以32例妊娠期糖尿病患者为研究对象,35例健康孕产妇为对照组,提取胎盘滋养层细胞,体外培养24 h,观察细胞24 h糖消耗量,测定腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(P-AMPK)、葡萄糖转运体4(GLUT4)蛋白表达水平。同时设梯度浓度干预实验,观察不同浓度黄连素干预对各个指标的影响。结果妊娠期糖尿病患者胎盘滋养层细胞的24 h糖消耗量明显少于对照组,P-AMPK/AMPK、GLUT4表达低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。黄连素干预后,其24 h糖消耗量有所增加,P-AMPK/AMPK、GLUT4表达有所升高,且随着干预浓度的递增变化程度依次增大,差异均有统计学意义(P0.05)。结论黄连素可以促进AMPK磷酸化,从而激活AMPK/GLUT4信号通路,促进细胞对葡萄糖的摄取能力,可能为其改善妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的重要机制之一。     

罗格列酮及饮食干预对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌GLUT4转位的影响

目的　探讨罗格列酮对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白 4(GLUT4)转位的影响。方法　利用高脂饲料喂养 ,使Sprague -Dawley(SD)大鼠产生胰岛素抵抗 ,用罗格列酮及饮食干预治疗 4周后 ,取骨骼肌组织 ,应用Western -bloting印迹法分析骨骼细胞膜GLUT4表达量。结果　在胰岛素刺激下 ,胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞膜GLUT4表达较正常大鼠下降 5 2 72 %(P <0 0 0 1) ,罗格列酮及饮食干预组 ,细胞膜GLUT4表达较未干预胰岛素抵抗大鼠分别增加 49 5 3 %、5 0 3 4%(P <0 0 0 1)。结论　罗格列酮可促进胰岛素刺激的GLUT4转位 ,从而改善高脂喂养所引起的骨骼肌组织胰岛素抵抗     

芒果苷对L6细胞葡萄糖消耗的影响及其作用机制研究

目的观察芒果苷对L6细胞葡萄糖消耗的影响,并探讨其分子机制。方法以芒果苷干预L6肌管细胞,葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,western-blot方法检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达量及其急性转位作用,免疫共沉淀(IP)联合western-blot方法检测AKT激酶活性。结果芒果苷处理可激活L6细胞的AKT激酶(与对照组比,P=0.001),提高L6细胞的葡萄糖消耗(P=0.011或P=0.000)且呈剂量-反应关系(P=0.000),上调GLUT4的蛋白表达量(P=0.001或P=0.000)并促进GLUT4在细胞内发生急性转位(P=0.005,P=0.001或P=0.026),使该蛋白由胞浆经细胞骨架转位至细胞膜。结论芒果苷可促进L6细胞的葡萄糖消耗量,调节GLUT4的表达及其在细胞内的急性转位,激活AKT激酶活性,因此,芒果苷具有潜在的辅助降血糖作用。     

细胞核中的丙酮酸脱氢酶复合体在高糖引起的胰岛素分泌障碍中的作用及机制

目的研究细胞核中的丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)在高糖引起的β细胞胰岛素分泌障碍中的作用及机制,为预防和治疗2型糖尿病提供新的科学依据。方法体外培养小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞(β-TC6),设立对照组、低糖组和高糖组,分别用不同浓度葡萄糖(0、5.5、33.3 mmol/L)干预细胞72 h后,用丙酮酸脱氢酶(E1)活性试剂盒检测各组β-TC6细胞中E1的活力。采用不同siRNA转染细胞,利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组β-TC6细胞核内乙酰辅酶A的生成水平;采用染色质免疫共沉淀技术(ChIP)富集乙酰化H3结合的DNA片段,采用实时荧光定量PCR技术(qPCR)比较各组胰岛素增强结合因子-1(Islet1)、胰岛素(Ins)和胰岛素启动子因子-1(Pdx1)3种基因的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组相应蛋白的表达水平。采用SPSS 21.0软件进单因素方差分析和LSD-t法检验。结果高糖培养下,高糖组β-TC6细胞E1活力低于对照组和低糖组,差异均有统计学意义(P0.05)。采用丙酮酸脱氢酶小干扰RNA(E1-siRNA)转染细胞后,β-TC6细胞核内乙酰辅酶A的生成量(E1-siRNA组)明显低于未转染细胞(空白组)和无关小干扰RNA转染细胞(Scrambled siRNA组),差异均有统计学意义(P0.05)。E1-siRNA组胰岛素分泌相关基因Islet1、Ins和Pdx1启动子区DNA的量和ISLET1、INS和PDX1蛋白相对表达水平也低于空白组和Scrambled siRNA组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论高糖会引起E1活力下降,PDC功能损伤,进而造成细胞核内乙酰辅酶A生成减少,胰岛素分泌相关基因启动子区域DNA量下降,乙酰化水平受抑制,蛋白表达水平降低,导致胰岛素分泌障碍。     

锌对L6细胞葡萄糖消耗量和蛋白激酶B/糖原合酶激酶3β表达的影响（英文）

目的以L6细胞为研究对象,观察锌对正常L6细胞及棕榈酸诱导的胰岛素抵抗L6细胞葡萄糖消耗量及胰岛素信号通路关键分子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase,GSK3β)表达的影响。方法培养L6成肌细胞,分化后用0.4 mmol/L棕榈酸作用24h造胰岛素抵抗细胞模型,用100 nmol/L胰岛素和不同浓度的锌(0,10,20,50,100μmol/L)作用3h,葡萄糖氧化酶法测定基础状态和胰岛素刺激状态下细胞对葡萄糖的摄取量;用100 nmol/L胰岛素和不同浓度的锌(0,10,20,50μmol/L)作用15 min,Western blot法检测磷酸化AKT及磷酸化GSK3β表达水平。结果 10⁵0μmo/L的锌能明显提高正常L6细胞葡萄糖的消耗量和AKT/GSK3β的磷酸化表达,锌与胰岛素共刺激能显著激活AKT/GSK3β;而对于胰岛素抵抗L6细胞,1050μmo/L的锌能明显提高正常L6细胞葡萄糖的消耗量和AKT/GSK3β的磷酸化表达,锌与胰岛素共刺激能显著激活AKT/GSK3β;而对于胰岛素抵抗L6细胞,10⁵0μmo/L锌单独作用可明显提高其葡萄糖消耗量和GSK3β的磷酸化,1050μmo/L锌单独作用可明显提高其葡萄糖消耗量和GSK3β的磷酸化,10⁵0μmo/L锌与胰岛素共刺激能激活AKT的磷酸化表达。结论1050μmo/L锌与胰岛素共刺激能激活AKT的磷酸化表达。结论10⁵0μmol/L的锌可提高L6细胞的葡萄糖消耗量,这种作用可能与其增强AKT和GSK3β磷酸化水平有关。     

小檗碱对胰岛素抵抗HepG2细胞11β-羟基类固醇脱氢酶1mRNA表达的影响

目的研究小檗碱对胰岛素抵抗模型肝细胞11β-羟基类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）mRNA表达的影响。方法应用高浓度胰岛素孵育HepG2细胞24h,建立胰岛素抵抗肝细胞模型。将模型细胞分别置于含不同浓度胰岛素和小檗碱的培养液中培养24h,以葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）法测定培养液中的葡萄糖浓度,计算细胞对葡萄糖的吸收率。应用RT-PCR检测小檗碱作用前后模型细胞11β-HSD1mRNA的表达。结果以含10-7mol／L胰岛素的培养液孵育HepG2细胞24h后,细胞对葡萄糖的吸收明显降低,表明建模成功。模型细胞经高浓度（10μmol／L）小檗碱处理后,葡萄糖吸收率明显增加[（42．53±1．99）％VS（28．16±1．99）％,t=12．9457,P〈0．01],并且高浓度小檗碱与胰岛素对模型细胞有协同促进葡萄糖吸收的作用。模型细胞11β—HSD 1mRNA表达显著高于非胰岛素抵抗细胞（相对表达量：4．60±0．96 vs 0．67±0．42,t=4．9476,P〈0．05）。经高浓度小檗碱干预24h后,模型细胞11β-HSD1mRNA表达降低,与非胰岛素抵抗HepG2细胞相比差异无统计学意义（相对表达量：1．12±0．35VS0．67±0．42,t=1．1394,P〉0．05）。低浓度（1μmol／L）小檗碱则作用不明显。结论浓度依赖性地下调11β—HSD1mRNA表达是小檗碱改善胰岛素抵抗的作用机制之一。     

多囊卵巢综合征患者促排卵治疗后子宫内膜组织GLUT4的表达及意义

目的:观察多囊卵巢综合征(PCOS)患者经过胰岛素增敏剂和促排卵治疗后子宫内膜葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)在基因水平和蛋白水平的表达,探讨改善胰岛素敏感性对PCOS子宫内膜的影响。方法:应用免疫组织化学法、反转录聚合酶链法(RT-PCR)比较PCOS组(20例PCOS患者)和对照组(15例月经规则的育龄妇女)子宫内膜GLUT4、胰岛素(INS)和胰岛素受体(INS-R)蛋白和基因水平的表达。结果:GLUT4、INS及INS-R的蛋白和mRNA在两组子宫内膜中均有表达,PCOS组GLUT4蛋白和mRNA表达强度均低于对照组(P<0.05、P<0.05),INS蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01、P<0.01),INS-R蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05),INS-R mRNA表达水平与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:PCOS患者经过胰岛素增敏剂和促排卵治疗后,子宫内膜GLUT4蛋白和基因水平的表达与对照组相比有差异,推测PCOS患者子宫内膜GLUT4的表达和转位受多因素影响。     

TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达的影响

[目的]观察TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达水平以及胰岛素刺激下的葡萄糖摄取率的影响.[方法]体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞后,应用不同浓度(10、25、50 ng/mL)重组TNF-α干预成熟脂肪细胞16 h,或以10 ng/mL重组TNF-α分别干预24、48、72 h,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测TNF-α干预后3T3-L1脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因mRNA表达水平;另外,采用[3H]-2-脱氧葡萄糖掺入法检测TNF-α干预24、48、72h后成熟脂肪细胞葡萄糖摄取率.[结果]1)不同浓度TNF-α均能显著上调3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达(P均<0.001),在0～25 ng/mL浓度范围内呈现浓度依赖性,随TNF-α干预浓度增高,NYGGF4小鼠同源基因的表达水平逐渐升高;2)TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因的表达调节具时间反应性,呈现随干预时间延长该基因表达逐渐上调的特征,10 ng/mL TNF-α干预人成熟脂肪细胞24 hNYGGF4小鼠同源基因mRNA表达水平即显著上调(P<0.001);3)TNF-α干预48 h,3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率与未干预组比较下降50%以上,干预72 h,胰岛素刺激的葡萄糖摄取受到进一步抑制.[结论]TNF-α可以上调3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因[目的]表达,抑制3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素刺激下的葡萄糖摄取.     

EGCG改善油酸诱导的SW872脂肪细胞胰岛素抵抗作用及机制

目的观察植物化学物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对胰岛素抵抗SW872脂肪细胞葡萄糖转运、胰岛素敏感性及炎症因子表达作用。方法利用油酸处理脂肪细胞诱导胰岛素抵抗模型,给予不同剂量EGCG(25、50、100μmol/L)处理24 h,利用激光共聚焦显微镜检测2–脱氧葡萄糖标记的葡萄糖摄取、Western–blot检测葡萄糖转运因子4(GLUT4)蛋白表达、实时荧光定量逆转录多聚酶联反应(RT–q PCR)检测肿瘤坏死因子α(TNF–α)、白细胞介素6(IL–6)、C反应蛋白(CRP)mRNA表达,酶标记免疫吸附测定法(ELISA)检测培养液中TNF–α、IL–6、CRP蛋白含量。结果与对照组比较,模型组脂肪细胞葡萄糖摄取和GLUT4蛋白表达明显降低(P<0.05),TNF–α、IL–6、CRP mRNA明显升高(P<0.01),TNF–α、IL–6、CRP蛋白分泌量[分别为(161.3±14.2)、(121.6±13.6)、(1.82±0.17)]明显升高(P<0.01);与模型组比较,EGCG组脂肪细胞葡萄糖摄取和GLUT4蛋白表达明显增加(P<0.05),TNF–α、IL–6、CRP mRNA明显下降(P<0.01),低、中、高剂量EGCG组脂肪细胞TNF–α、IL–6、CRP蛋白分泌量[分别为(148.8±13.3)、(93.3±10.4)、(1.74±0.12)pg/m L,(131.4±11.3)、(85.5±14.1)、(1.53±0.15)pg/m L和(119.5±12.1)、(73.9±11.3)、(1.36±0.12)pg/m L]明显降低(P<0.01),呈剂量效应关系。结论 EGCG可促进脂肪细胞葡萄糖摄取和增强胰岛素敏感性,进而改善胰岛素抵抗,其机制可能与降低脂肪细胞炎症因子表达有关。     

葡萄糖刺激胰岛素分泌中活性氧及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化情况

目的 研究葡萄糖刺激后胰岛素分泌过程中活性氧(ROS)及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化.方法 不同浓度葡萄糖(0、5、10、15、20、25 mmol/L)分别干预胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)细胞24、48 h后,采用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)荧光法检测细胞内ROS水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测胰岛素分泌,采用蛋白印迹(Western blot)法检测磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)及磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达.结果 随葡萄糖浓度的升高,INS-1细胞分泌胰岛素水平增加,细胞内ROS水平上升,不同葡萄糖浓度刺激组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).相同刺激条件下,细胞内PTEN蛋白表达逐渐下降,P-AKT表达逐渐升高,不同葡萄糖浓度刺激组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路可能为参与调节葡萄糖刺激胰岛素分泌的信号通路之一.     

来氟米特对转化生长因子β_1诱导的体培养的大鼠肾小球系膜细胞中Smad2表达的影响

目的观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β_1刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)表达Smad2过程中发挥的作用。方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定造模成功后第7代用于实验。按照对模型大鼠体外培养的肾小球系膜细胞的处理方式不同,将其分为TGF-β_1组(TGF-β_1 5 ng/mL),LEF-1组(LEF 5μg/mL+TGF-β_1 5 ng/mL),LEF-2组(LEF 50μg/mL+TGF-β_1 5 ng/mL)和对照组(无血清RPMI 1640培养液+20%胎牛血清)。分别于15 min,30 min,1 h,2 h和6 h收集标本,用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2(phosphorylation-Smad2,p-Smad2)蛋白表达变化;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2mRNA表达变化。结果对照组磷酸化Smad2蛋白少量表达,阳性细胞率为(21.40±1.51)%。TGF-β_1组阳性细胞率为(70.00±3.23)%,30 min时表达开始升高,1 h及2 h时表达明显增高,6 h表达开始下降。各时间点LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,阳性细胞率分别为(23.60±2.80)%和(25.81±1.29)%,细胞荧光强度呈减弱趋势。与TGF-β_1组相比,LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,差异有显著意义(P0.05)。但LEF-1组和LEF-2组与对照组比较,差异无显著意义(P0.05)。肾小球系膜细胞中Smad2mRNA相对表达量,TGF-β_1组显著高于对照组,2 h时达高峰。LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA显著低于TGF-β_1组,差异有显著意义(P0.01);但LEF-1组和LEF-2组间比较,差异无显著意义(P0.05)。LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA相对表达量1h时较低,之后逐渐升高,说明随时间延长,来氟米特对体外培养的肾小球系膜细胞干预作用逐渐减弱。结论经转化生长因子-β_1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化Smad2蛋白和Smad2mRNA相对表达量分别增加,来氟米特可降低Smad2蛋白和Smad2mRNA表达水平,为来氟米特的肾脏保护作用提供理论依据。     

妊娠期糖尿病患者肌肉组织中PI3K介导GLUT4跨膜易位的研究

目的:研究妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus GDM)患者肌肉组织中磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)的活性变化与葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)跨膜易位的相关性,探讨它们在妊娠期糖尿病发病机制中的作用。方法:RT-PCR法检测25例GDM患者(GDM组)、26例糖耐量正常孕妇(对照组)肌肉组织中GLUT4 mRNA的表达,western blot法检测各组肌肉组织细胞外膜上GLUT4易位的变化,采用ELISA法检测两组肌肉组织PI-3K的活性,并分析PI-3K的活性变化与GLUT4易位的相关性,采用葡萄糖氧化酶法检测两组空腹血糖(FPG)水平。结果:①基础状态和胰岛素刺激后GDM组和对照组肌肉组织GLUT4 mRNA的表达分别为(0.71±0.02,0.50±0.04)、(0.76±0.03,0.55±0.01),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。②基础状态和胰岛素刺激后GDM组GLUT4跨膜易位分别为(0.61±0.05,0.40±0.03),明显低于对照组(0.93±0.02,0.71±0.04),差异有显著性(P<0.01)。③基础状态和胰岛素刺激后GDM肌肉组织中PI-3K的活性为(3.1±0.2,2.1±0.3),明显低于正常妊娠组(5.2±0.5,3.0±0.6),二者比较差异有显著性,GLUT4跨膜易位与PI-3K活性呈明显正相关(r=0.76,P<0.01)。结论:GDM患者肌肉组织中GLUT4的易位降低与PI-3K的活性下降具有关联性,PI-3K的活性下降是GLUT4的易位降低导致GDM胰岛素抵抗的原因之一,参与了GDM的发病。     

葡萄糖和胰岛素对colon26肿瘤细胞VEGF mRNA表达的影响

目的本实验模拟糖尿病病程不同阶段患者体内葡萄糖和胰岛素浓度的变化,研究不同浓度葡萄糖、胰岛素对colon26肿瘤细胞VEGF mRNA表达的影响。方法体外常规培养colon26肿瘤细胞,分别给予不同浓度葡萄糖、胰岛素进行干预,根据所用培养液外加葡萄糖和胰岛素浓度的不同,将实验所用细胞分为4组(12亚组),培养48 h,收集细胞后抽提总RNA,RT-PCR同时扩增目的片段VEGF和内参照β-actin,进行琼脂糖凝胶电泳,扩增产物在凝胶成像系统上扫描分析,计算VEGF mRNA的相对表达量。结果胰岛素浓度为125mU/L的亚组和其加入不同浓度的葡萄糖的亚组VEGF mRNA的表达明显高于对照组(P<0.01);其他亚组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论高浓度胰岛素能够上调colon26肿瘤细胞VEGF mRNA的表达,不同浓度的葡萄糖对colon26肿瘤细胞VEGF mRNA的表达无明显影响。     

葡萄糖转运体4的定位、分布及影响因素

葡萄糖转运体4(GLUT4)是机体转运葡萄糖跨过细胞膜的重要载体,其介导的葡萄糖转运是外周组织利用葡萄糖的重要限速步骤之一,与2型糖尿病及其并发症的发生、发展关系密切。GLUT4主要分布于骨骼肌、心肌、脂肪组织等胰岛素敏感细胞,其结构异常、功能缺陷可导致受体后水平的胰岛素抵抗。胰岛素本身对GLUT4的合成与活性具有调节作用,同时,运动、饮食、药物等对其表达、功能等亦产生显著影响。     

黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响

目的观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80%后随机分组,加入TNF-α(10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子κB(NF-κB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达。结果在TNF-α组和TNF-α+CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA表达量,NF-κB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P<0.05)。结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-κB的激活。