稳定转导反义增殖细胞核抗原基因对膀胱癌细胞体外增殖活性的调控作用

目的　探讨反义增殖细胞核抗原 (PCNA)基因对膀胱癌细胞增殖活性的影响。方法脂质体介导PCNA反义真核表达载体转染膀胱癌EJ细胞 72h后 ,G41 8筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/AP ,采用SABC免疫组织化学方法和逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)法检测PCNA基因表达 ,噻唑蓝 (MTT)比色分析、3H 胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)掺入法、流式细胞仪、克隆形成实验检测癌细胞体外增殖活性。结果　同EJ细胞比较 ,所获亚克隆EJ/AP中PCNA蛋白及mRNA表达完全抑制 ,癌细胞体外增殖活性抑制 49.38% (P <0 .0 5) ,DNA合成速率降低 47.71 % (P <0 .0 1 ) ,细胞周期阻滞于G0 /G1 期 ,克隆形成能力抑制 64 .73 % (P <0 .0 1 )。结论　稳定转染反义PCNA基因能有效抑制膀胱癌细胞体外增殖活性 ,有望成为膀胱癌基因治疗的有效策略     

进展期胃癌SOX新辅助化疗敏感性相关基因及信号通路的生物信息学分析

目的:探讨与进展期胃癌对替吉奥胶囊联合奥沙利铂(SOX)新辅助化疗敏感性有关的基因及信号通路。方法:收集15例III期胃癌患者术后标本,其中6例SOX新辅助化疗后缓解(缓解组)、6例SOX新辅助化疗后未缓解(未缓解组),3例未行新辅助化疗(未化疗组),在用高通量基因芯片法检测各组标本基因表达谱后,以DNA损伤修复和叶酸代谢方面为重点分析对象,用系统性生物信息学技术筛选出差异基因,并通过KEGG来解释每个差异表达基因所在通路。结果:3组标本的基因表达谱存在明显差异。缓解组与未缓解组间的差异基因主要集中在细胞因子相互作用和NK细胞介导的细胞毒性作用通路上。与未缓解组比较,缓解组与DNA损伤修复相关的3个基因(HUS1、RECQL5、XRCC4)明显上调和1个基因(GADD45G)明显下调;3组间在叶酸代谢方面未找到任何差异基因。结论:影响进展期胃癌SOX新辅助化疗敏感性的基因可能与免疫信号传导有关,相关的基因检测对评估胃癌SOX新辅助化疗效果有一定的意义。     

9-顺-维A酸对肺鳞癌细胞株A2细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨9-顺-维 A酸(9-cis RA)对肺鳞癌细胞株A2细胞周期影响和诱导凋亡作用并检测细胞周期相关基因 Cyclin D1、Rb的表达,探讨9-cis RA的抗癌作用机制。方法 体外培养 A2细胞,随机分为两组,实验组加入 9-cis RA使其终浓度为 5μmol/L,对照组加入二甲亚砜使其终浓度为 0.1％,两个组别均按 0、12、24、36、48、72 h共 6个时相培养,用流式细胞仪技术分别检测肿瘤细胞G0/G1期比率、S期比率及凋亡发生率,同时检测Cyclin D1、Rb基因表达率,作对比研究。结果 9-cis RA作用于肺癌细胞 A2后 G0/G1期细胞比率增高,S期细胞比率下降。9-cis RA作用于 A2细胞后凋亡发生率明显升高,Rb基因表达增强,Cyclin D1基因表达受抑制,在 48 h时药物作用达最高峰。凋亡发生率与Rb基因表达呈正相关(r=0.647,p<0.05),与Cyclin D1基因表达呈负相关(r=-0.723,P<0.05)。结论 9-cis RA可能通过激活 Rb基因表达和抑制 Cyclin D1基因表达途径使肺癌细胞明显阻滞在 G0/G1期,抑制肺癌细胞增殖。9-cis RA可明显诱导肺癌细胞调亡,Rb和Cycin D1基因同样在其中发挥着重要作用。     

乳腺肿瘤患者 TK 同功酶活性增加

胸腺嘧啶核苷激酶(TK)是嘧啶利用过程中去氧胸腺嘧啶核苷磷酸化作用的催化酶,其活性随着DNA 合成的增加而相应升高。作者测定正常乳腺组织,纤维腺瘤组织以及乳腺癌组织中的 TK 活性及其同功酶活性。     

p55PIK N末端24个氨基酸抑制甲状腺癌细胞增殖的研究

目的 观察P55PIK的N端的24个氨基酸抑制甲状腺癌细胞增殖的作用.方法 构建含有P55PIK-N端24个氨基酸的腺病毒载体Ad-N24-p55PIK-GFP及对照病毒Ad-GFP,以其感染甲状腺癌YTC236细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU掺人的方法 检测其对细胞DNA合成的影响,通过建立体内肿瘤裸鼠移植瘤模型,进一步证实Ad-N24p55PIK-GFP的抗肿瘤作用.结果 对照腺病毒Ad-GFP感染的细胞中G0/G1期细胞为(69.83±3.50)%,S期和G2/M期细胞数分别为(18.56±3.10)%和(11.61±2.90)%,而带有插入目的 基因的腺病毒Ad-N24p55PIK-GFP感染后的细胞G0/G1期细胞减少为(45.81±2.10)%,S期和G2/M期细胞增加至(30.12±2.60)%和(24.07±2.90)%,BrdU掺入显示BrdU阳性的细胞数由(21.2±3.0)%降至(8.1±2.2)%,FTC236细胞裸鼠移植瘤模型局部应用Ad-N24p55PIK-GFP后肿瘤生长显著减慢.结论 在FTC236细胞中,过表达p55PIK的N末端的24个氨基酸可有效阻滞细胞周期进程,抑制细胞DNA合成,体外有效抑制甲状腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长.     

DNA聚合酶α反义寡聚脱氧核苷酸抑制人胃癌细胞生长的研究

反义药物的研究为肿瘤的特异性治疗开拓了广阔的前景。DNA聚合酶α是真核细胞DNA合成的关键酶,与肿瘤的发生及发展密切相关。我们用DNA聚合酶α(DNA pol-α)mRNA作靶核酸,合成反义聚脱氧核苷酸(ASODN),作用于胃癌细胞系SGC-7901和MGC-803,结果发现互补于pol-α mRNA翻译起始区的ASODN可特异地抑制二株人胃癌细胞系的生长,而对正常人脐静脉内皮细胞则不起作用。流式细胞仪分析癌细胞G0/1期比率升高,S期及G2M期比率降低,说明ASODN通过抑制DNA pol-α表达而抑制了细胞DNA合成。     

聚集素在前列腺癌细胞不同周期时相的表达

目的探讨凋亡相关基因聚集素（clusterin）在前列腺癌不同周期时相的差异表达及意义。方法应用改良的胸腺嘧啶核苷（TdR）和高压笑气双阻断法将前列腺癌细胞系PC-3同步在不同的周期时相，应用流式细胞术检测同步化的效率。应用RT-PCR及Western blotting方法检测不同周期时相聚集素在mRNA和蛋白水平的表达。结果前列腺癌细胞系PC-3的M、G1、S和G2期细胞同步化效率分别为92．1％、87．0％、80．2％和75，9％；聚集素在不同周期时相均有表达且存在差异，G1和S期表达水平较低，M期和G2期表达水平较高，RNA和蛋白表达具有一致性。结论细胞周期对聚集素的表达有较大的影响，对于采用聚集素途径治疗前列腺癌具有指导意义。     

TSA抑制人胰腺癌PANC1细胞生长的实验研究

目的研究去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人胰腺癌PANC-1细胞生长的影响及其作用机制。方法用不同浓度的TSA处理PANC-1细胞。MTT法检测肿瘤细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Western免疫印迹及荧光定量RT-PCR分析抗凋亡基因bcl-2和肿瘤抑制基因p21WAF1/CIP1的表达。结果TSA作用于PANC-1细胞能明显抑制细胞的增殖,且具有明显的剂量依赖性;TSA处理72 h的PANC-1细胞其早期凋亡率明显提高(P0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05)。TSA在转录和翻译水平上能明显下调bcl-2的表达(P0.05),上调p21WAF1/CIP1的表达(P0.05)。结论TSA可以通过诱导胰腺癌细胞的凋亡和周期阻滞而抑制癌细胞生长;其发生机制可能与下调抗凋亡基因bcl-2和上调肿瘤抑制基因p21WAF1/CIP1的表达有关。     

抑制核纤层蛋白A/C表达对牵张刺激下成骨细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察小干扰RNA技术(siRNA)抑制核纤层蛋白A/C(lamin A/C)表达对牵张刺激下小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖及凋亡的影响.方法 化学合成3条针对lamin A/C靶点的siRNA序列,脂质体转染MC3T3-E1细胞,实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测lamin A/C mRNA和蛋白变化.细胞转染72 h后行牵张刺激6 h,Hoechst 33258检测DNA含量来反映细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果 筛选出的siRNA-2显著抑制lamin A/C mRNA和蛋白产物表达(P＜0.01).未转染细胞经牵张刺激,DNA合成随时间推移而增加;细胞G0/G1期比例为65.19%;S期为22.57%,细胞凋亡率为11.49%;转染细胞经牵张刺激后,DNA合成较未转染细胞显著性减少(P＜0.01);G0/G1期比例提高至85.82%;S期降低至11.37%,凋亡率达19.32%(P＜0.01).结论 抑制lamin A/C表达会导致牵张刺激诱导的促增殖作用减弱,细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞的凋亡.     

胃癌细胞增殖活性与浸润转移及预后关系的研究

目的探讨溴化脱氧脲嘧啶核苷(BrdUrd)/DNA双参数流式细胞术检测胃癌细胞增殖的临床价值,研究胃癌细胞BrdUrd标记指数(LI)、G2/M期细胞比率(G2/MPF)和DNA含量与胃癌临床病理学及预后的关系。方法用BrdUrd/DNA双参数流式细胞术检测60例胃癌新鲜标本。结果浆膜受侵者较未受侵者BrdUrdLI明显增高(P<0.01),两者5年生存率比较,差异有显著性意义(P<0.01)。淋巴管浸润阳性者和淋巴结转移阳性者均较阴性者BrdUrdLI和G2/MPF明显增高(P<0.01),其5年生存率与阴性者比较,差异也有显著性意义(P<0.01)。异倍体癌淋巴结阳性者明显增多(P<0.05)。异倍体癌与二倍体癌比较5年生存率,差异有显著性意义(P<0.05)。腹膜播散阳性者5年生存率较阴性者明显降低(P<0.01);静脉浸润阳性较阴性者G2/MPF明显增高(P<0.01)。结论胃癌细胞BrdUrdLI、G2/MPF和DNA含量与胃癌浸润深度、淋巴管浸润、淋巴结转移、腹膜播散、静脉浸润及预后有关。     

EB病毒感染上调胃癌BGC823细胞的增殖和侵袭能力

目的 探讨EB病毒感染对胃癌细胞增殖状况和侵袭能力的影响。方法 用B95-8细胞体外培养获得EB病毒并感染人胃癌BGC823细胞，MTT法检测细胞增殖状况，羊膜侵袭实验检测细胞侵袭能力，流式细胞技术测定细胞周期变化，RT-PCR法检测感染后胃癌细胞中的病毒基因。结果 EB病毒感染胃癌BGC823细胞后，代表细胞增殖能力的4比值提高34．34％，体外侵袭羊膜的细胞数增加28．72％。S期细胞比例自36．7％增高为41．9％，G0／G1，期细胞比例减少，在EB病毒感染的BGC823细胞中可以检测到EB病毒核抗原1和EB病毒编码RNA1两种病毒基因，未检测到潜伏膜蛋白1和EB病毒核抗原2。结论 EB病毒感染能够促进胃癌细胞的增殖和侵袭能力、干扰其细胞周期，有可能在胃癌的发生、发展过程中发挥作用。     

D-甲硫氨酸联合化疗对胃癌细胞株代谢周期的影响

目的:通过体外实验观察D-甲硫氨酸(D-Met)合并应用细胞周期特异性化疗药物对胃癌细胞株代谢周期的影响。方法:将人胃癌细胞株SGC-7901分别置于含L-Met、D-Met或以同型半胱氨酸替代Met(Met-Hcy+)的不同培养基中,或在上述诸培养基中分别加入5-氟脲嘧啶(5-FU)。培养48h后,应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡细胞的比例。结果:G0/G1期和G2/M期细胞的比例均示D-Met和Met-Hcy+组低于L-Met组,而S期细胞比例则示D-Met组最高,凋亡细胞比例也以D-Met组诸组为最高;与未加入化疗药物诸组相比,联合应用5-FU后,各组的G0/G1期细胞比例增高,S期和G2/M期细胞比例降低,凋亡细胞比例有所增高。结论:D-Met可干扰人胃癌细胞株的代谢周期,趋向阻滞肿瘤细胞于S期,有助于周期特异性化疗药物5-FU对此期肿瘤细胞的杀份。     

热缺血再灌注损伤影响肝脏细胞周期检查点调控的基因表达分析

目的动态观察肝脏热缺血再灌注损伤（WIRI）对细胞周期检查点基因的表达影响，研究其分子机制帮助了解那些与热缺血再灌注相关的疾病。方法采用成组对照的实验设计，利用微阵列芯片和逆转录-聚合酶链反应（PCR）联合分析技术，分析SD大鼠热缺血再灌注损伤处理后的基因表达变化（其中芯片分析8只、RT-PCR定量分析16只）；运用系统生物学分析方法对功能基因进行聚类。结果分别得到了热缺血再灌注损伤处理后肝脏的细胞周期各检查点基因及早期即刻基因表达数据，将其中与细胞周期密切相关的的功能基因（上调的223条、下调的62条变化幅度均大于3倍）做进一步分析。结论肝脏热缺血再灌注损伤通过细胞周期／检查点控制基因影响细胞周期G1／S、G2／M的运行，抑制DNA的合成和染色体的分裂。推测可能影响受损的DNA双链自我修复和后期的组织细胞再生、凋亡。     

血管紧张素Ⅱ1型受体在人胃癌细胞株中的表达及血管紧张素Ⅱ对MKN-28细胞增殖和周期的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)在人胃癌细胞株中的表达及AngⅡ对AT1R高表达胃癌细胞(MKN-28)增殖和周期的影响。方法 :采用Western印迹法检测AT1R在胃癌细胞中的表达。应用不同浓度的AngⅡ(10-10~10-5mol/L)、AT1R阻滞剂(氯沙坦)以及AngⅡ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R)阻滞剂(PD123319)作用于MKN-28细胞,以CCK-8法测定各处理组细胞的相对数目,计算增殖促进效应;应用流式细胞仪检测各处理组细胞周期变化,计算各处理因素对细胞周期的影响。结果:AT1R在多数胃癌细胞株中表达,其中MKN-28细胞株表达量最高,AngⅡ可明显促进MKN-28细胞增殖以及G1期细胞向S、G2期转化,氯沙坦可明显抑制AngⅡ对MKN-28细胞的促增殖及促进G1期细胞向S、G2期转化的作用,PD123319无此作用。结论:AngⅡ通过AT1R明显促进MKN-28细胞增殖,促进G1期细胞向S、G2期转化。     

小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响.方法 将实验组(E2F-1-siRNA)和阴性对照组(negative control-siRNA)转染进MGC803细胞,48 h后采用实时定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测MGC803细胞增殖的变化,流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化.结果 E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1 mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖,与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84.8%和85.3%(F=14.35,P＜0.05),蛋白降低T77.2%和79.6%,MGC803细胞增殖分别抑制了69.0%和81.6%,差异有统计学意义(F=170.18,P＜0.05);同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2/M期附近,G2/M期DNA含量比例为(54.98±3.46)%,与阴性对照组(44.70±3.82)%和未转染组(31.47±2.12)%比较,差异有统计学意义(F=88.90,P＜0.05).结论 E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达,使G1 期细胞的DNA含量下调,细胞分裂停滞在G2/M期附近,抑制胃癌细胞的增殖.     

丙谷胺阻断胃泌素促胃癌细胞增殖作用的机制研究

目的 探讨丙谷胺治疗胃癌的可行性。方法 应用ＭＫＮ４５胃癌细胞株进行体外培养,经胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺作用后,观察细胞增殖率、周期分布以及细胞内ＣＡＭＰ浓度变化。结果 胃泌素可明显促进ＭＫＮ４５细胞的增殖、促进细胞由Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ、Ｇ２／Ｍ期转化,经胃泌素作用０．５小时后细胞内ＣＡＭＰ浓度增加,与对照组相比Ｐ〈０．０１,而丙谷胺能完全阻断上述作用。结论胃泌素通过其受体介导了细胞内信号传导,促     

Effects of selected chemotherapeutic agents on PCNA expression in prostate carcinoma cell lines

Bivariate flow cytometric analysis of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was performed on prostate carcinoma cell lines (PC-3, DU-145). For both cell lines 100% methanol fixation provided optimal fluorescence intensity of PCNA. The ratio of PCNA/DNA increased in late G1 through early S/phase, followed by a decrease in mid- and late S and enhancement in G2/M phase. PCNA expression was increased in G2/M phase cells treated for 48 h with vinblastine. A slight decrease in PCNA expression was observed with cyclohexamide treatment. Hydroxyurea induced an increase in S-phase fraction along with enhanced PCNA expression. Methotrexate and Adriamycin had little effect on the cell cycle compartments of PC-3 or DU-145; however, methotrexate decreased PCNA expression, while Adriamycin enhanced it. Cisplatin increased S-phase in both cell lines, increasing PCNA expression in PC-3 and decreasing it in DU-145 cells. The data on the effects of drug treatment point to a dissociation between PCNA expression and S-phase fraction as calculated from the DNA distribution. In some cases, e.g., the cisplatin studies, different effects were obtained in the two different cell lines treated with the same drugs. Whether changes in PCNA expression will provide more useful information than S-phase fraction for evaluation of potential antitumor drugs is not known.Supported by NIH grants Ro-1-CA 14134     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株HCT-8和HT29的抑制作用及影响机制

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对结肠癌细胞株HCT－8细胞和HT29细胞增殖的抑制作用,研究其对HESl与JAGl基因表达的影响。方法体外培养HCT-8细胞和HT29细胞,采用不同浓度的EGCG（10、20、35mg／L）对其进行干预,MTT法检测EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞增殖的抑制作用：用流式细胞仪检测EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞细胞凋亡和细胞周期的影响。实时荧光定量PCR检测EGCG干预后的HCT-8细胞和HT29细胞的HESl与JAGl基因的表达情况。结果EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞增殖及凋亡均有影响,3个EGCG浓度对HCT-8增殖抑制率分别为（28．894±5．076）％,（34．903±1．794）％和（39．028±0．105）％;对HT29的增殖抑制率分别为（14．682±4．244）％、（22．429±3．847）％和（29．840±5．076）％。EGCG能将HCT-8细胞阻滞在G／M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制其细胞增殖。EGCG可下调两株细胞HESl的基因表达,但差异均无统计学意义（P〉0．05）：EGCG能上调两株细胞JAGl的基因表达,但只有HCT．8细胞的基因表达差异有统计学意义（O．201±0．018比0．440±0．077．P=0．029）。结论EGCG对体外培养的HCT-8细胞和HT29细胞的增殖有明显抑制作用．且能诱导细胞凋亡和影响细胞周期。其作用机制可能与上调JAGl的基因表达有关。