甘肃地区的血红蛋白病研究

本文总结了甘肃河西走廊沿线酒泉、张掖、武威、天水等地区血红蛋白病的类型及分布特点。分析该地区57例异常血红蛋白的一级结构,确定β链变异体7种,α链变异体6种,其中Hb Tianshui为世界新种异常血红蛋白。对27例β地中海贫血进行了基因鉴定,发现4种突变型,以CD17（A→T）基因突变为主,检出的β地中海贫血[-28(A→G）、CD17（A→T）／N]双重突变杂合子,为同一条染色体上基因的双重突变,极为罕见。根据河西走廊沿线血红蛋白病的地理及民族分布特点,作者认为①该地区的汉族人融合了部分其他高加索人种和蒙古人种的血缘。②推测β地中海贫血CD17的突变基因可能起源于甘肃陇西地区,随华人的迁徒传入东南亚各地。③该地众多的异常血红蛋白变异体和地中海贫血基因突变型,说明这一地区遗传背景十分复杂,其基因的传递且具有高度异质性。     

用于血红蛋白病遗传筛查的实验室诊断技术

血红蛋白病是世界上最为常见的人类单基因遗传病。它主要包括异常血红蛋白和地中海贫血（地贫）两组疾病，其中地贫是我国南方严重影响人口健康的致死性出生缺陷。我国长江以南的广大地域，特别是广东、广西和海南三省（区）则是该病的高发区，重型地贫患儿的出生已成为上述地区的公共卫生问题。通过基于人群水平的遗传筛查（即检出疾病基因携带者）和针对发现的高风险家庭实施产前诊断是目前公认的降低该病出生率的有效途径。本文主要就用于血红蛋白病遗传筛查的实验室诊断技术，特别是针对地贫的遗传筛查技术的应用和研究进展进行综述。     

血红蛋白电泳诊断血红蛋白H病90例临床研究

目的介绍应用血红蛋白电泳诊断血红蛋白H病(HbH病)的要点.方法应用血红蛋白电泳诊断90例血红蛋白H病.结果100%病例出现快速HbH区带,45.6%(42/90例)出现快速Hb Bart's区带,16.7%(15/90例)可见Hb CS(Hb Constant spring)区带;结论血红蛋白电泳是诊断HbH病的必备条件,而电泳结果受多因素影响,应控制好各实验条件.     

离子交换高效液相色谱法检测糖化血红蛋白异常峰原因分析与对策

目的 分析使用离子交换高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)过程中出现异常峰图的情况,探索HbA1c异常峰与各种疾病之间的联系.方法 选择2017年至2020年首都医科大学附属北京世纪坛医院进行HbA1c检测的175304例患者的临床资料进行回顾性分析,统计HbA1c结果及疾病分布情况;分别使用HPLC和毛细管电泳法(capillary electrophoresis,CE)对159例出现异常峰图的样本进行检测.结果 不同疾病中HbA1c升高人数所占比由高到低前三名依次为:内分泌、营养和代谢疾病62.00％(21646/34913)、肿瘤38.41％(910/2369)和循环系统疾病24.00％(11380/47418).在不同疾病中HbA1c异常峰占比由高到低前三名依次为:呼吸系统疾病0.16％(9/5760)、泌尿生殖系统疾病0.14％(3/2136)和肿瘤0.13％(3/2369).出现异常峰的159例样本使用HPLC与CE检测结果差异存在统计学意义(P<0.05).结论 在HPLC检测HbA1c过程中,呼吸系统疾病、泌尿生殖系统疾病等与HbA1 c异常峰的关系较为密切.     

全自动毛细管血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的作用

目的探讨全自动毛细管血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的作用。方法对我院送检1605份患者标本应用法国Sebia毛细管电泳分析系统进行血红蛋白电泳检测地中海贫血,通过自动扫描系统分析,检测血红蛋白（Hb）各组分的含量。结果在送检的1605例标本中,应用全自动血红蛋白电泳检出α地中海贫血表型阳性181例,阳性率为11.21%;β地中海贫血表型阳性224例,阳性率为13.96%;α、β混合地中海贫血6例,阳性率0.37%;其他血红蛋白病17例,阳性率1.06%。结论全自动毛细管血红蛋白电泳电泳区带清晰,扫描定量准确,可以定量检测HbA,HbF,HbA2的含量。可以将地中海贫血初步分类为α地中海贫血或β地中海贫血,有效地筛查出高危患者,为地中海贫血的诊断提供重要依据。     

65例血红蛋白H病电泳及血液学分析

目的 分析血红蛋白H病(HbH病)在血红蛋白电泳及血液学中的特点。方法 应用血红蛋白电泳及血液学实验分析65例HbH病。结果 所有HbH病例碱性电泳时均在HbA前出现一快速区带，经酸性电泳证实为HbH区带。50．7％(33／65例)可见HbBart‘‘‘‘s区带，16．9％(11／65例)可见HbCS(HbConstant Spring)区带，HbA及HbA2量降低。Hb、MCV、MCH、及红细胞脆性结果均明显降低，RET明显增高。结论 HbH病在血红蛋白电冰及血液学中均出现明显改变。     

高效液相色谱技术检测α地中海贫血价值初探

目的探讨应用高效液相色谱技术(HPLC)快速诊断小儿α地中海贫血(α地贫)的可行性。方法收集经分子生物学方法诊断为α地贫的87例患儿EDTA-K2抗凝血标本2ml,采用HPLC方法测定各血红蛋白组分含量,对α地贫进行非基因检测。结果HPLC检出30例11天至3个月α地贫患儿均有一血红蛋白Bart′s(HbBart′s)峰,14例血红蛋白(HbH)病患儿均有一HbH峰。剩余的43例4个月至11岁标准型或静止型α地贫患儿未检出有任何异常峰。结论HPLC与基因分析对诊断3个月以内的α地贫以及HbH病患儿有很好的符合率。而对于4个月以上的标准型与静止型α地贫患儿无诊断意义。     

高效液相色谱法诊断地中海贫血的阈值探讨

目的探讨高效液相色谱法(HPLC)诊断地中海贫血的HbA;2和HbF最佳阈值,提高HPLC诊断地贫携带者特异性,减少漏诊与误诊。方法病例组收集平均红细胞体积(MCV)≤82fl和/或平均红细胞血红蛋白含量(MCH)≤26pg的EDTA;2K2抗凝血2272份;对照组收集MCV>82fl,MCH>26pg抗凝血1903份。用HPLC方法测定血红蛋白亚型HbA;2和HbF含量;对HbA;2≤2.5%血样进行α地中海贫血常见缺失型基因检测,对HbA;2≥3.5%和/或HbF≥2.3%血样采用反向点杂交(RDB)法进行CD41-42M,-28M,IVS-2-654M,CD71-72M等17种常见突变基因检测。结果当HbA;2≤2.5%,α地贫携带者检出率为90.73%(460/507);HbA;2>2.5%,α地贫携带者检出率为47.03%(830/1765),两组差别有统计意义(P<0.001),与对照组差别有统计意义。当HbA;2≥3.8%时,HPLC诊断β地贫的灵敏度和特异度最佳,常见突变型β地贫携带者的检出率为99.08%(536/541);当HbF≥2.3%时,常见突变型β地贫携带者的检出率仅为4.00%(1/25);当HbA;2≥3.8%结合HbF≥2.3%时,检出率98.78%(163/165),三组间比较差别有统计意义(P<0.001)。结论 HPLC是诊断β地贫的有效方法。HbA;2≥3.8%且HbF≥2.3%为HPLC诊断β地贫的最佳阈值,HPLC诊断β地贫敏感度与特异度的综合评价性能最理想。     

1000例产前检查地中海贫血,异常血红蛋白和G6PD缺乏的研究

本文对本院产检孕１０００例进行了Ｇ６ＰＤ活性及血红蛋白电泳常规检测，其中Ｇ６ＰＤ缺乏的发生率为３．３％，异常血红蛋白ＨｂＥ ０．２％，α地中海贫血的发生率为５．０％，β地中海贫血的发生率为０．９％。产前检查有利于预防遗传的发生，提高人口素质。     

联合应用MCV、MCH、HPLC方法筛查HbE 60例

目的联合应用MCV、MCH、高效液相色谱（HPLC）方法筛查血红蛋白E（HbE）。方法收集EDTA2K2抗凝血,先行血常规检测平均红细胞体积（MCV）和平均红细胞血红蛋白含量（MCH）初筛,再行HPLC检测HbE,如HPLC结果提示为HbE,进一步行PCR-RBD检测。结果 60例HbE的初筛结果为HBG 122.18±18.37g/L,MCV 76.76±4.19 fl,MCH 25.01±1.72pg;HPLC筛查结果为：HbA2/E洗脱峰含量为26.35±3.16%,滞留时间为3.69±0.03min;基因确诊结果为αα/αα,HbE 52例,合并α地贫8例,HPLC结果与基因诊断结果符合率为100%。结论联合应用MCV、MCH、HPLC法是筛选HbE的有效方法。     

制备型高效液相色谱在生物医药制品领域的应用

 制备型高效液相色谱（preparative high performance liquid chromatography，Prep-HPLC）是一种使用高压、大流量液体输送系统在高分辨率、大内径、高载量分离柱上进行样品高纯度分离的液相色谱制备方法。应用该方法分离的产品在纯度、回收率、分离效率等方面远远优于传统的制备方法，因此在生物制品和药物研究、生产领域得到广泛应用^[1-3]。本文就近年来 Prep-HPLC 方法的研究进展及其在生物医药制品领域的应用做一综述。 1 Prep-HPLC 在蛋白质和多肽分离制备中的应用 蛋白质和肽类药物活性强，生物功能明确，特异性高，有利于临床应用，已成为医药产业中的一大类重要产品。但这些产品无论是来自于生物体内还是由化学合成，往往都带有复杂的混合成分，而总目的蛋白或肽类的丰度又低，给分离纯化带来困难，需要多种方法联合使用以获得纯度满意的产品。在此过程中，Prep-HPLC 通常在分离的最后阶段被用作获得高纯度产品的关键方法^[4]。......     

应用变性高效液相色谱技术进行肝豆状核变性的基因突变筛查及产前诊断

目的 探讨变性高效液相色谱(denature high performance liquid chromatography,DHPLC)技术在肝豆状核变性(Wilson's disease,WD)的突变筛查及产前诊断中的临床应用.方法 以6个WD家系中的患者及其父母的DNA为模板,采用PCR技术扩增ATP7B基因的21个外显子及5'非翻译区,PCR产物经DHPLC技术进行突变筛查,对峰型有改变者进行测序验证.在确定了先证者突变类型的基础上,采用相同方法对其中4个家系(1个双胎和3个单胎)进行产前诊断.结果 6例患者中检测出5种已知的致病突变及8种多态类型.患者的父母均为相应突变类型的携带者.产前诊断结果显示,两例妊娠为异常胎儿,其中1例双胎为Arg778Leu/IVS4-1G>C双重杂合子,1例单胎为Ser975Tyr/Pro992Leu双重杂合子,这两对妊娠夫妇选择了终止妊娠.另两例妊娠中,1例为Ser975Tyr杂合子,1例完全正常,他们选择了继续妊娠,出生了表型正常儿.结论 DHPLC在Wilson病的突变检测和产前诊断中有良好的应用前景.     

反相高效液相色谱法和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的比较研究

目的比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同。方法将《伯杰细菌鉴定手册》中载入的49种分枝杆菌模式株接种于改良罗氏培养基上,置于最适温度下孵育。挑取生长良好且无污染的培养物,一部分经皂化和酸化提取分枝菌酸并衍生后,采用反相高效液相色谱法进行分枝菌酸指纹图谱构建;另一部分经裂解和PCR扩增,获得DNA,纯化后,采用核酸分析仪进行16S rRNA序列测定。结果 49种分枝杆菌模式株中,采用RP-HPLC分析时,单簇峰的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和胃分枝杆菌,双簇峰的爱知分枝杆菌和罗德岛分枝杆菌,三簇峰的南非分枝杆菌和母牛分枝杆菌共7种因各组内相对保留时间和相对峰高比值相近而难以进行鉴别;采用16S rRNA序列分析法分析时,产鼻疽分枝杆菌和塞内加尔分枝杆菌、溃疡分枝杆菌和海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌、龟亚分枝杆菌和龟脓分枝杆菌以及结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌和非洲分枝杆菌)共12种因各组内基因序列相似性百分比为100%而难以进行鉴别。通过两种分型鉴别方法的比较,可见除结核分枝杆菌和牛分枝杆菌外,两种分型方法相互补充,可将49种分枝杆菌模式株中的47种进行明确鉴别。结论分枝菌酸RP-HPLC和16S rRNA序列分析法均为分枝杆菌的分型鉴定提供了准确和有效的技术方法。两种方法相互借鉴能准确地将大多数分枝杆菌鉴定到种。     

β-地中海贫血合并δ β-地中海贫血一个家系的产前诊断

目的对1例β-地中海贫血合并δβ-地中海贫血的家系进行产前诊断。方法用PCR-反向点杂交和长链PCR技术对胎儿进行产前基因诊断。结果母亲为β-珠蛋白基因密码子41/42（？TTCT）突变杂合子,父亲为缺失型Gγ＋（Aγδβ）0突变杂合子,胎儿基因型正常。结论对一个家系中出现重型β-地中海贫血患者,但用常规方法只能找到一个基因突变时,应考虑缺失突变的可能,并用合适的方法验证,然后才能产前诊断。     

应用反向高效液相色谱分析离体心脏灌流大鼠心肌组织中的多胺

目的：建立苯甲酰氯柱前衍生反向高效液相色谱分析大鼠心肌组织中多胺的方法。方法：以1，6-己二胺为内标，经苯甲酰氯柱前衍生，氯仿提取衍生物。高效液相色谱分析条件： Hypersil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm) 为固定相，甲醇与水（V∶V，65∶35）为流动相；流速0.4 mL/min；紫外检测波长229 nm，20 min完成洗脱。结果：多胺标准品浓度1-20 μmol/L，浓度与峰面积比呈良好的线性关系，相关系数(r)均大于0.998。多胺日内及日间变异系数分别为2.96%-5.48%、4.22%-9.30%。离体灌流大鼠心肌多胺含量在纳摩尔水平。结论：建立一种快速、准确、灵敏苯甲酰氯衍生反向高效液相色谱分析心肌组织中多胺的方法，此方法为分析其他生物样品中多胺提供参考。     

应用变性高效液相色谱技术检测parkin基因突变

目的应用变性高效液相色谱技术(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)检测早发性帕金森综合征(early-onset parkinsonism,EOP)致病基因parkin突变。方法散发EOP患者82例,提取外周血细胞DNA,通过PCR扩增parkin基因的12个外显子,应用DHPLC进行变异筛查,峰形异常者进行DNA测序以明确序列变异的种类和位置。结果以100名健康者为正常对照,在82例EOP患者中检测出3种突变,均为点突变,内含子区突变包括IVS1-39G→T和IVS9 18C→T;编码区突变为T1422C,导致所编码的441位氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸(Cys441Arg)。结论在散发EOP患者中发现3个杂合型点突变,探讨应用DHPLC在EOP患者中开展parkin基因诊断的可行性。     

高效液相色谱法测定聚乳酸中乳酸单体残留量

目的通过高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定聚乳酸材料中乳酸单体的残留量,完善此类材料的质量评价方法。方法用三氯甲烷溶解聚乳酸材料样品后,加入等体积磷酸二氢钾水溶液(20 mmol/L,pH=2.87)涡旋振荡,静置分层后取上清液,采用C18 Synergi4u Hydro-RP 80A色谱柱,进样20μL,以流速0.6 m L/min,磷酸二氢钾水溶液为流动相,柱温30℃,紫外检测波长210 nm,外标法定量并进行方法学研究,包括液相色谱系统适应性、线性范围、检出限、定量限、回收率。结果本方法中理论塔板数为10660,拖尾因子为1.32,分离度为3.81,重复性相对标准偏差为0.54%(n=5),乳酸在浓度1.05~105μg/m L范围内与峰面积保持良好的线性关系(r=0.999979),检出限为0.42μg/m L,定量限为1.05μg/m L,萃取平均回收率为94.76%(n=6),其相对标准偏差为3.04%。聚乳酸样品中乳酸单体平均残留量为144.17μg/g。结论高效液相色谱法测定聚乳酸中乳酸单体残留量具有良好的线性范围,准确度高,重复性好,萃取回收率较高且操作简单,可用于聚乳酸材料中乳酸单体残留量测定。