小鼠脑垂体TSH细胞和ACTH细胞的体视学研究

用免疫组织化学PAP法,对小鼠脑垂体TSH细胞、ACTH细胞进行双重染色,在同一切片上同时显示两种细胞,观察细胞形态,并用体视学方法对两种细胞进行定量测定。结果显示,TSH细胞体积较大,呈多边形;ACTH细胞体积略小,呈不规则形。TSH细胞的体积密度、面数密度、数密度均高于ACTH细胞的相应数值,而TSH细胞的相邻细胞百分比则低于ACTH细胞的相应数值。     

人类羊膜细胞表达神经细胞和脂肪细胞表型

目的 探索羊膜组织来源的细胞向神经细胞分化的可能性,为神经移植探寻新的细胞来源。方法 采用组织块培养法培养羊膜细胞,酶消化法对细胞进行传代,应用免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。结果 从羊膜组织成功培养出细胞,细胞贴壁生长,在体外短期内可以稳定增殖和传代,传代细胞在神经于细胞的培养基中可以形成典型的球状结构,类似神经于细胞的神经球。细胞表达波形蛋白和巢蛋白两种神经于细胞的标志物,也表达神经元的标志物神经元特异性烯醇化酶和βⅢ管蛋白;大部分细胞表达多巴胺能神经元的标志物酪氨酸羟化酶。少数细胞表达星型胶质细胞的标志物胶质纤维酸性蛋白。部分细胞可以随机分化为平滑肌细胞,表达平滑肌肌动蛋白;在诱导条件下,羊膜细胞也可以分化为脂肪细胞。结论 羊膜组织来源的细胞可以表达神经细胞的标志物,能够分化为脂肪细胞和平滑肌细胞,这种细胞对于神经移植有潜在的应用前景。     

人胎盘细胞滋养细胞的超微结构观察——明细胞与暗细胞

虽然应用电镜研究人胎盘滋养细胞的超微结构早有报道,但对细胞滋养细胞的电子致密度描述不一。本文对5周至41周人胎盘标本进行了动态观察,发现人胎盘细胞滋养细胞有明细胞与暗细胞之分,并对暗细胞型细胞滋养细胞的意义略加讨论。     

小鼠B淋巴细胞在ConA反应中的辅佐作用

小鼠脾细胞经两次贴壁除去巨噬细胞,再经两次尼龙毛柱纯化T细胞,尼龙毛粘附的B细胞用抗θ血清加补体去除残余的T细胞后,得到高度纯化的B细胞,在体外用细胞重组实验方法观察B细胞在ConA反应中的作用。结果表明,静止B细胞和细菌脂多糖活化的B细胞均能非常显著地辅佐T细胞对ConA刺激的增殖反应,B细胞这种作用不受组织相容性抗原约束。B细胞还能辅佐T细胞产生IL-2,这证明B细胞具有辅佐细胞功能。     

骨转移瘤中侧群细胞的初步分析

目的研究骨转移瘤原代细胞中是否存在干细胞样侧群细胞(SP细胞)。方法对乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、肾癌及宫颈癌骨转移瘤原代细胞进行Hoechst33342染色,应用荧光显微镜直接进行观察,检测骨转移瘤原代细胞中是否存在SP细胞及非SP细胞,并给予维拉帕米拮抗剂,观察各骨转移瘤瘤细胞中SP细胞亚群染色变化情况。结果所检测的乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、肾癌及宫颈癌骨转移瘤原代细胞中均存在SP细胞。荧光显微镜下,SP细胞体积较非SP细胞小,SP细胞胞核蓝色荧光呈淡染或消失;非SP细胞经染色后发出较强的蓝色荧光。给予维拉帕米拮抗剂后,各骨转移瘤细胞中胞核发蓝色荧光的细胞数目明显增多。结论乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、肾癌及宫颈癌骨转移瘤原代细胞中存在干细胞样的SP细胞。     

HBV的宫内传播与人绒毛膜滋养层细胞的HBV感染和凋亡关系的研究

目的检测HBV感染后人绒毛膜滋养层细胞的HBV标志物的表达和细胞的形态学变化,探讨HBV对滋养层细胞的感染与HBV宫内传播的关系。方法将HBV感染的血清与原代培养的人早孕绒毛膜滋养层细胞及传代细胞JEG-3共同孵育8～48h,通过倒置显微镜观察细胞的形态及细胞间连接,细胞免疫荧光方法检测滋养层细胞中HBsAg的表达,荧光定量PCR方法检测细胞中的HBVDNA,TUNEL方法检测滋养层细胞的凋亡。结果滋养层细胞与HBV感染的血清共同孵育后,滋养层细胞的形态及细胞间连接无明显变化;但通过免疫荧光方法检测到滋养层细胞中HBsAg的阳性表达,并通过荧光定量PCR方法检测到滋养层细胞中HBVDNA的存在;同时,细胞凋亡检测结果表明,与HBV感染的血清共同孵育后,滋养层细胞的凋亡数量明显增加。结论HBV可以感染体外培养的滋养层细胞;HBV感染可以诱导滋养层细胞凋亡,滋养层细胞的感染和凋亡可能与HBV的宫内传播机制有关。     

人脐带来源的基质细胞分化为神经细胞

目的探索人脐带组织来源的基质细胞向神经细胞分化的可能性,为神经移植探寻新的细胞来源。方法采用组织块培养法培养人脐带基质细胞,酶消化法对细胞进行传代,应用免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。结果从脐带组织成功培养出基质细胞,这种细胞可以随机分化为平滑肌细胞,表达平滑肌肌动蛋白;丹参注射液诱导基质细胞向神经细胞分化,分化的神经元样细胞具有典型的神经细胞的形态,早期表达巢蛋白、β-管蛋白和神经元特异性烯醇化酶,后期表达神经微丝200;在合适的诱导条件下,分化的神经元样细胞的比例在90％左右,分化的细胞中星型胶质细胞的比例在1％左右,无髓鞘基础蛋白的表达,说明无少突胶质细胞产生。结论脐带组织来源的基质细胞可以表达神经细胞的标志物,在体外能够分化为形态复杂的神经元样细胞,这种细胞有可能成为神经移植的种子细胞。     

八宝丹抑制胃癌细胞增殖与诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨八宝丹（BBD）对人胃癌细胞增殖与凋亡的影响。方法体外培养胃癌细胞AGS和MGC-803,采用不同浓度的BBD（0、0.25、0.5、0.75、1 mg/m L）进行干预,MTT法检测细胞活力,计算BBD对细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞生长密度;台盼蓝染色法检测细胞数量;细胞集落形成实验检测细胞集落形成能力;Hoechst染色检测细胞凋亡。结果 BBD可显著抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的细胞活力,抑制细胞增殖,使细胞密度下降,减少细胞数量,抑制细胞集落形成能力,诱导细胞凋亡。结论 BBD可显著抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的增殖及诱导细胞凋亡。     

不同来源骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞生物学特性的影响

目的观察正常及急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞生物学特性的影响。方法收集与正常及急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞微环境共培养10d的Jurkat细胞,观测Jurkat细胞增殖、细胞周期分布、凋亡、分化及DNR摄药量的改变。结果白血病骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞黏附、趋化及降低摄药量的作用强于正常骨髓基质细胞微环境;抑制增殖及促分化作用弱于正常骨髓基质细胞微环境。白血病骨髓基质细胞微环境抑制Jurkat细胞凋亡,而正常骨髓基质细胞微环境促进其凋亡。结论正常骨髓源基质细胞微环境较白血病源骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞具有更强的促进凋亡、分化及抑制增殖的作用,增加Jurkat细胞对DNR的敏感性。     

早孕期蜕膜组织中细胞的形态学及组织化学研究

用多种组织化学方法对人早孕期蜕膜组织的细胞种类和各类细胞的化学成份作了研究。蜕膜组织内有两类细胞:大细胞和小细胞,其数量各占一半,大细胞胞质内含有丰富的糖原、脂类、脂酶,碱性磷酸酶以及3-β-羟基甾体脱氢酶,小细胞的胞质内含有丰富的酸性磷酸酶和三磷酸腺苷酶,部分小细胞内含有酸性粘多糖。含颗粒的小细胞占小细胞的20.7％,不含颗粒的小细胞有待进一步研究,研究表明,大细胞是形态一致,功能多样的细胞,而小细胞是形态各异和功能不一的细胞。     

外周T细胞淋巴瘤治疗进展

广义的外周 T 细胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤的一种,起源于异质性的成熟T细胞,属于侵袭性淋巴瘤,包括非特异性外周 T 细胞淋巴瘤(PTCL-U)、NK/T 细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤等,以PTCL-U最为常见.一般我们认为的外周T细胞淋巴瘤为PTCL-U.PTCL-U是指在PTCL中除已明确类型(如NK/T 细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、肠病相关T细胞淋巴瘤、间变大细胞性淋巴瘤、蕈样霉菌病等)的外周T细胞淋巴瘤外,缺乏其他特征,未能独立分型的一类T细胞来源淋巴瘤.本文主要讨论PTCL-U的治疗研究进展.     

乳腺癌细胞MDA-MB-435s中侧群细胞的分选及其与非侧群细胞的生物学特点比较

目的 分离乳腺癌细胞MDA-MB-435s中的侧群细胞(side population cells,SP),并比较侧群细胞和非侧群细胞(non-side population cells,NSP)的基本生物学特点.方法 经Hoechst33342染色后,利用流式细胞技术分选乳腺癌细胞MDA-MB-435s中SP和NSP 2个细胞亚群,比较2群细胞的形态、增殖和周期等特点.结果 分选得到的SP细胞约占5.2％,其增殖速度较NSP细胞快,且细胞形态较粗大.NSP细胞的G1期所占比例为73.63％,高于SP细胞的G1期所占比例为54.16％.结论 SP和NSP细胞的形态有差异,SP细胞的增殖速度快于NSP细胞,NSP细胞的周期阻滞在G1期,提示SP细胞可能在乳腺癌细胞的生长过程中具有重要的作用.     

人宫颈癌侧群细胞的分选及其生物学特性的研究

目的通过人宫颈癌细胞中侧群细胞的富集、分离和鉴定,确定其肿瘤干细胞特性,探讨以侧群细胞作为宫颈癌干细胞研究切入点的可行性。方法收集40例宫颈癌患者的手术标本,通过原代培养、流式细胞荧光激活分选法将宫颈癌细胞分为侧群(side population,SP)细胞和非侧群细胞(non-side population,NSP)2个亚群,观察2组细胞的增生和分化能力,并进行裸鼠接种以观察其成瘤能力,化疗药物顺铂以不同浓度作用于SP细胞和NSP细胞后计算细胞抑制率,以评价2组细胞对化疗药物的耐受性。结果人宫颈癌细胞中侧群细胞的比例约为2.04%±0.93%,侧群细胞的比例随分化程度的降低而下降(P<0.05)。细胞生长曲线(MTT法)显示,SP细胞的体外增生能力明显强于NSP细胞(P<0.05);行裸鼠接种时,SP细胞表现出较强的致瘤性,只需1×103个即可致瘤,其致瘤能力是NSP细胞的100倍,且成瘤时间显著缩短;化疗药物顺铂以不同浓度分别作用于SP细胞与NSP细胞24h后,SP细胞的抑制率明显低于NSP细胞(P<0.05)。结论人宫颈癌细胞中存在外排Hoechst 33342荧光染料的SP细胞,分化越差的肿瘤细胞其SP细胞比例越低。宫颈癌SP细胞体外增生能力和裸鼠成瘤能力均强于NSP细胞,对化疗药物具有较强的耐受性,具备肿瘤干细胞的特性,可作为宫颈癌干细胞研究的切入点。     

肝脏中自然杀伤细胞的表型及功能

自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,也是机体抗感染和防止细胞恶性转化的重要免疫调节细胞。与T淋巴细胞不同,NK细胞无需肿瘤特异性抗原识别便可以直接杀伤肿瘤细胞,是肿瘤免疫治疗的重要效应细胞。在肝脏中,NK细胞占很大比例,最近研究表明,NK细胞通过直接作用或生物信号间的协同作用活化树突状细胞或直接影响T细胞来调节T细胞的反应。肝脏NK细胞功能主要是通过激活抑制性受体的表达和炎性细胞因子的分泌调节,特别是与脾脏NK细胞相比,肝内NK细胞对白细胞介素(IL)-12、IL-18反应较低。同时,肝脏中含有较多的抑制性受体NK细胞受体2A抗体,缺乏组织相容性复合体Ⅰ类/Ly49受体。     

适用于单细胞RNA测序的半月板细胞提取方法的优化

目的 优化半月板细胞提取的方法,缩短细胞提取时间,稳定地获取细胞数量多和细胞活率高的细胞悬液,使获得的细胞悬液悬液适用于单细胞RNA测序。方法 比较细胞悬液的细胞数量及细胞活率评价不同细胞提取方法的有效性,细胞提取方法包括传统半月板细胞提取法（短时间消化和长时间消化）和优化提取法;通过分析单细胞RNA测序数据集评价优化提取法获取的细胞悬液的稳定性;通过比较优化提取法获得的单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集,分析优化提取法的可靠性。结果 在3次重复实验中,优化提取法获得细胞数量最多的细胞悬液,细胞数量超过105,且细胞活率最高,平均达80%。通过分析单细胞RNA测序数据发现每个样本中80%以上细胞的线粒体基因含量少于20%。CD34+,MCAM+细胞以及COL1A1+胞均存在每个单细胞RNA测序数据集中。在比较基于优化提取法单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集时发现,优化提取法也能捕获COL3A1+细胞,COL1A1+细胞,MYLK+细胞,BMP2+细胞,CD93+细胞和CDK1+细胞。结论 优化细胞提取方法能稳定地获得适用于10×Genomics平台的单细胞RNA测序技术的单细胞悬液。     

大鼠生后发育期间胰岛胰多肽细胞与胰高糖素细胞免疫组织化学双重染色观察

用免疫组织化学双重染色法,在一张切片上同时显示胰岛PP细胞与A细胞。观察生后发育期间大鼠全胰PP细胞、A细胞和PP-Glu共存细胞的形态、分布和数量。结果表明,PP细胞突起可伸达A细胞,PP和Glu在胞质内共存呈分散或分区两种形式,胰岛可分为PP细胞型、A细胞型和PP-A细胞型,PP细胞和PP-Glu共存细胞的计数表明,在生后7天最低,28天最高。     

骨髓基质细胞成年大鼠脑内移植

【目的】研究骨髓基质细胞脑内移植后的分布和移行 ,为细胞移植治疗疾病奠定基础。【方法】常规培养大鼠骨髓基质细胞 ,应用免疫组织化学方法对细胞进行鉴定 ,Hoechst332 5 8标记细胞 ,立体定向移植到大鼠的纹状体 ,经过一段时间后处死大鼠 ,脑组织切片 ,直接在荧光显微镜下检查存活的细胞。【结果】细胞移植到大鼠脑内能够长时间存活 ,移植细胞与宿主细胞有很好的相容性 ,宿主脑组织的结构无破坏 ,移植细胞能够移行一段距离 ,说明脑内存在的信号诱导细胞向一定的方向迁徒。【结论】骨髓基质细胞脑内移植后 ,能够与宿主脑组织整合在一起 ,无细胞过度增生和胶质瘢痕形成 ,这种细胞可能成为中枢神经系统自体移植的细胞来源。     

细胞粘附分子与动脉粥样硬化

机体内细胞与细胞、细胞与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)相互作用是由存在于细胞膜表面的细胞粘附分子(celladhesion molecules,CAMs)所介导。细胞粘附分子是位于细胞膜表面的糖蛋白,其数量、亲和力和扩散率的改变可调节细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的作用,有重要的生理功能及病理意义。本文着重对它在动脉粥样硬化发生发展机理中的重要作用进行讨论。     

人脐血CD34+细胞体外Dexter基质细胞培养后细胞表面分子变化的动态观察

目的动态观察人脐血CD34 细胞Dexter基质细胞培养后细胞表面分子的变化情况.方法应用MACS磁珠分离系统分离脐带血CD34 细胞,按照Dexter法行脐血基质细胞培养,观察不同时间基质细胞的生长状态及细胞表面分子的变化情况.结果脐血基质细胞在生长情况、细胞形态与骨髓基质细胞有不同之处,但其细胞表面分子的表达特点却与骨髓基质细胞有类似之处.结论脐血CD34 细胞在生长因子的辅助下能促进基质细胞集落的形成,有望成为新的基质细胞来源.     

Notch信号分子在人NK细胞淋巴瘤细胞中的表达及其意义

目的：探讨Notch信号分子及下游靶基因在人NK/T细胞淋巴瘤、NK细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和B细胞淋巴瘤细胞中的表达,阐明Notch信号分子在NK细胞肿瘤中的作用及意义。方法：选择NK/T细胞淋巴瘤细胞SNK-6、NK细胞淋巴瘤细胞YTS、人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat和人Burkitt’s淋巴瘤细胞 Raji,通过实时荧光定量PCR技术检测上述细胞中Notch信号分子的表达水平。结果：Notch 1,3,4信号分子在YTS和SNK-6细胞中表达量均不同程度高于Raji和Jurkat淋巴瘤细胞（P<0.01）,但是在SNK-6中的表达量均不同程度低于在YTS细胞中的表达（P<0.01）。Notch 2信号分子在YTS、SNK-6细胞中的表达量高于Jurkat细胞（P<0.01）,但是与Raji细胞比较差异无统计学意义（P>0.05）。Notch 下游靶基因Hes1的表达量,YTS细胞高于Raji和Jurkat细胞（P<0.05,P<0.01）,而SNK-6细胞则低于Raji和Jurkat细胞（P<0.01）。结论：在NK细胞肿瘤细胞中Notch 信号分子表达异常,且明显区别于B、T细胞淋巴瘤细胞。