低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白2表达的影响

目的:观察桥粒芯糖蛋白2(desmoglein2,Dsg2)在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用Dsg2抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃温度条件下保存皮肤组织结构保存较好,Dsg2含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤可能与Dsg2破坏有关。     

低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白1表达影响的实验研究

目的观察桥粒芯糖蛋白1（Desmogleinl,Dsg1）在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法用Dsg1抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H．E染色观察皮肤的组织结构变化。结果与新鲜皮片组相比,-196℃条件下皮肤组织结构保存较好,Dsg1含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论皮肤低温保存冷冻损伤可能与桥粒跨膜蛋白Dsg1破坏有关。     

皮肤低温储存后纤维连接蛋白和层黏连蛋白表达的研究

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用FN、LN抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量，并用H．E染色观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，FN、LN含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存后冷冻损伤与细胞外基质中FN、LN破坏有关。     

低温储存对皮肤组织E-钙黏素和β-连接素表达的影响

目的：观察黏附分子E-钙黏素(E-cadherin)、β-连接素(β-catenin)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用E-cadherin、β-catenin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃ H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，E-cadherin、β-catenin含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存冷冻损伤与黏附分子破坏有关。     

低温保存皮肤组织中纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)在不同温度保存皮肤组织中的分布及表达，探讨其与皮肤冷冻保存的关系．方法：用FN，LN抗体对新鲜皮肤以及4℃，-20℃，-80℃或-196℃保存的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定并比较它们在表皮组织中的含量，并通过HE染色比较观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮肤组相比，-196℃，H抗冻液中皮肤组织结构保存较好，FN，LN含量变化不明显，而4℃，-20℃，-80℃保存皮肤的组织结构均有明显破坏，FN，LN含量亦明显下降。结论：皮肤低温冷冻保存时细胞外基质中FN，LN发生丢失。     

低温冷冻对皮肤α-tubulin、β-tubulin和cytoskeratin表达的影响

目的:探讨低温冷冻对皮肤骨架蛋白中α-微管蛋白(α-tubu lin)、β-微管蛋白(β-tubu lin)和高分子量角蛋白(cytoskeratin)表达的影响,从而进一步揭示皮肤低温损伤的机制。方法:用-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,采用计算机图像分析技术进行定量分析。并进一步采用透射电镜观察-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin的超微结构的变化。结果:α-tubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin在4℃组、-20℃组、-80℃组均表达显著下降,且超微形态结构及分布改变明显。在-196℃组储存时三种成分含量下降较少,形态改变亦不显著。结论:皮肤的低温损伤与骨架蛋白-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin的破坏有关。     

两种低温保护剂对皮肤储存后α-辅肌动蛋白表达及活力的影响

目的比较两种不同低温保护剂对皮肤组织α-辅肌动蛋白（α-actinin）低温保存后表达的影响,为寻求皮肤组织低温保护剂的最佳配方提供实验依据。方法新鲜成人皮肤组织分为3组,新鲜对照组和海藻糖-二甲基亚砜（T—D）组、二甲基亚砜-丙二醇（D-P）低温保护剂保存组,-196％液氮冻存7d、14d复温,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。同时对各组皮片进行氧耗量测定。结果0．5mol／L海藻糖-二甲基亚砜能够很好保护皮肤组织,α-actinin的表达量与新鲜皮肤组相似。结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用对皮肤组织α-actinin的保护作用优于传统组。     

低温冷冻对皮肤高分子量角蛋白表达的影响

目的 研究皮肤低温储存后表皮层高分子量角蛋白的变化,从而分析皮肤组织细胞骨架的低温生物学效应.方法 将新鲜成人皮肤分为新鲜组、4℃组、-20℃组、-80C组和-196℃组,于冻存后第14天复温,运用免疫组织化学染色和电镜观察角蛋白的改变,并用图像分析仪测定表皮组织中的含量变化.结果 随着保存温度的降低,4℃、-20℃、-80℃组的角蛋白均表达下降,而-196℃组与新鲜皮肤组表达相似.结论 皮肤组织的低温损伤与细胞骨架结构密切相关,角蛋白在该低温生物学机制中发挥着重要作用.     

冷冻保存连续冰冻切片在免疫组化染色中的应用

[目的]探讨科研工作中使用连续冰冻切片进行免疫组化染色时切片的保存方法。[方法]将不能马上完成染色的连续冰冻切片采用干燥、密封的方法置于-80℃保存,需要时取出自然干燥后进行常规免疫组化染色。[结果]使用冷冻保存的冰冻切片进行免疫组化染色,组织结构清晰完整,细胞境界分明,染色对比度好,特异性抗原标记明显,与未经冷冻的新鲜切片比较各项观察指标无明显差异。[结论]-80℃冷冻保存冰冻切片的方法是可行的。     

急性心肌缺血大鼠心肌α辅肌动蛋白含量变化及其与心功能的关系

目的观察大鼠心肌缺血及再灌注过程中心肌细胞骨架蛋白α辅肌动蛋白(α-actinin)含量的变化及其与心功能的关系。方法 Wistar大鼠随机分为假手术组(sham),缺血30min组(I30min),缺血1h组(I1h),缺血1h再灌注2h组(IR),每组各8只。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血及再灌注模型,记录左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压上升最大速度(+dp/dtmax)、左室内压下降最大速度(-dp/dtmax)。采用免疫组化方法检测各组心肌中α-actinin含量和分布。ELISA法定量检测各组心肌组织磷酸肌醇3激酶(PI3K)和磷脂酶C(PLC)含量。急性分离大鼠心肌细胞,并用PI3K抑制剂(LY-29400)和PLC抑制剂(U-73122)处理细胞,观察其对心肌细胞收缩舒张能力及对α-actinin含量的影响。结果 (1)随缺血时间延长,大鼠LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax下降,LVEDP升高;再灌注后LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax回升,LVEDP回落,但不能恢复到缺血前水平。(2)免疫组化染色观察到随缺血时间延长,α-actinin出现点状、片状缺失,含量下降。(3)急性缺血过程中PI3K和PLC含量逐渐增加(P<0.05)。(4)应用LY-294002及U-73122后单个心肌细胞收缩幅度较缺血组明显增加(P<0.05)。(5)应用LY-294002及U-73122后心肌细胞α-actinin免疫荧光强度较缺血组增加(P<0.001)。结论心肌缺血时心肌细胞骨架蛋白α-actinin的含量减少可能与缺血后PI3K和PLC含量增加有关,并且α-actinin结构与含量变化可能是导致心肌功能障碍的原因之一。     

低温下皮肤力学信号相关蛋白表达与活力关系研究

目的:探讨皮肤力学信号相关蛋白整合素(integrin)、踝蛋白(talin)在不同低温条件下的表达与皮肤活力改变的关系,进一步揭示皮肤低温损伤的机制。方法:从同一个体取标本后用5种不同的温度保存,分为新鲜组、4℃组、-20℃组、-80℃组和-196℃组,并在保存48 h后进行实验观察,用integrinβ1、talin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,图像分析方法定量,同时采用氧耗量的方法对不同低温保存后皮肤活力进行检测。结果:新鲜组、-196℃组、-80℃组、-20℃组、4℃组活力依次下降,同时-80℃组、-20℃组、4℃组两种蛋白表达亦有明显下降。结论:低温保存后活力的改变与皮肤力学信号相关蛋白的表达下降关系密切。     

两种方法保存同种异体髌腱移植重建膝关节交叉韧带的光镜电镜观察

目的从实验角度观察采用程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存同种异体髌腱及移植重建膝关节交叉韧带后的组织学变化,为临床同种异体腱移植提供理论依据。方法分别将兔的1/2骨-髌腱-骨复合体经程序冷冻液氮保存2周和-80℃深低温保存2周后,观察冻存变化差异并行同种异体移植重建前交叉韧带,分别于术后3周和8周在光镜和电镜下观察其组织学变化。结果光镜和电镜下可见,经程序冷冻液氮保存方法处理后,冷冻损伤较-80℃深低温保存方法轻微; -80℃深低温保存组和程序冷冻液氮保存组的移植物在术后愈合过程中的组织学行为均与自体移植组相似,而程序冷冻液氮保存组更接近于自体移植组。结论经程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存方法冻存的兔异体髌腱重建膝关节交叉韧带后愈合过程和自体韧带移植重建过程相似,但程序冷冻液氮保存法优于传统的-80℃深低温保存法。     

阿尔采默病患者皮肤α-微管蛋白的免疫细胞化学与胶体金免疫电镜观察

目的观察阿尔采默病(AD)患者皮肤基底细胞α-微管蛋白的变化.方法取患者背部皮肤,用免疫细胞化学和胶体金免疫电镜技术观察,并进行定量分析.结果免疫细胞化学染色显示,对照组皮肤免疫阳性染色主要位于表皮层基底细胞的胞质内,棘细胞层和颗粒层可见少量的阳性细胞;AD组基底细胞内着色深,棘细胞层和颗粒层亦有表达,但数量少.胶体金标记结果显示,对照组基底细胞可见较丰富的微管,标记的胶体金散在于胞质.AD组微管较对照组减少;标记的金颗粒数量较对照组明显增多.定量结果显示,AD组α-微管蛋白免疫细胞化学染色的AOD值(1.165±0.079)、VIOD值(186.000±15.853)均较对照组(0.814±0.152,96.020±14.755)明显增高(P＜0.01);α-微管蛋白胶体金标记颗粒数目AD组(20.74±3.99)亦较对照组(15.50±3.41)增多明显(P＜0.01).结论AD患者皮肤基底细胞内微管数量的减少,结构破坏,对皮肤组织的观察可能间接反映神经组织的改变.     

血管紧张素转换酶2在大鼠移植肝保存性损伤中的表达及意义

目的:观察血管紧张素转换酶2(ACE-2)在大鼠移植肝中的表达及其与移植后保存性损伤(PI)的相关性,初步探讨局部肾素-血管紧张素系统(RAS)在肝移植PI中的可能作用。方法:根据供体肝冷保存时间将移植大鼠分为冷保存(CP)组及未进行冷保存(NCP)组,未进行肝移植的假手术组作对照;组织学检查观察肝脏保存性损伤程度,实时定量RT-PCR、蛋白质印迹、免疫组化法分别检测术后1、24、48 h肝组织ACE-2的mRNA、蛋白水平表达及其组织定位,哌莫硝唑免疫组化染色检测组织缺氧程度。结果:肝移植后存在不同程度组织损伤,CP组更明显;与假手术组相比,肝移植组术后ACE-2 mRNA及蛋白水平均显著升高(P<0.01或P<0.05),且CP组明显高于NCP组(P<0.05);免疫组化染色显示移植组在肝静脉周围呈阳性表达,染色阳性程度与ACE-2 mRNA表达明显正相关(r=0.78,P<0.001)。结论: ACE-2表达与冷保存导致的移植肝保存性损伤的组织缺氧密切相关,局部RAS可能参与了移植肝保存性损伤。     

低温微创冷冻减脂动物模型的构建

目的：探讨建立大鼠皮下脂肪微创冷冻减脂实验的动物模型。方法：将大鼠随机分为低温组（0 ℃组、-20 ℃组、-40 ℃组、-60 ℃组、-80 ℃组）以及室温对照（Control组）,利用不同低温干预造成大鼠皮下脂肪局部冷损伤,观察脂肪厚度及病理学改变。结果：超声示各低温组均有不同程度脂肪厚度减少,在无皮肤损伤情况下低温-60 ℃干预60 s时脂肪厚度减少最为明显（P ＜0.01）。病理学显示局部冷冻后随着温度的降低,炎症细胞浸润与脂肪细胞破坏愈加明显,在低温-60 ℃干预60 s 3 d后脂肪组织炎症细胞浸润达到峰值（P ＜0.01）。与Control组比,-60 ℃组脂肪组织内NF-κB-p65在第2 周时表达明显上升,TGF-β1在第4周时阳性表达明显上升（P ＜0.01）。-20 ℃组TUNEL染色细胞凋亡逐渐增多,-60 ℃组干预60 s3 d后细胞凋亡最明显（P ＜0.01）。结论：采用低温探针技术在低温-60 ℃干预60 s条件下,可建立稳定的SD大鼠皮下脂肪微创冷冻减脂模型。     

辛伐他汀对慢性心力衰竭兔α-辅肌动蛋白2的影响

目的观察辛伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)兔α-辅肌动蛋白2(α-actinin2)表达的影响。方法雄性大耳白兔45只,随机分为正常对照组、CHF模型组和辛伐他汀治疗组。CHF模型组及辛伐他汀治疗组注射盐酸阿霉素2 mg·kg-1,每周1次,连续10周,建立慢性心力衰竭模型;正常对照组给予相同容量的生理盐水。辛伐他汀治疗组在首次注射盐酸阿霉素时给予辛伐他汀,剂量为1.5 mg·kg-1·d-1,持续至第12周;CHF模型组和正常对照组给予相同容积的生理盐水灌胃12周。心脏彩色超声测量兔左心室结构和功能。处死动物留取左心室室壁观察心肌细胞结构的变化,免疫组织化学染色后检测α-actinin2表达水平。结果与正常对照组比较,辛伐他汀治疗组、CHF模型组的左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)明显增大,左心室射血分数(LVEF)明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与CHF模型组比较,辛伐他汀治疗组LVESD、LVEDD减小,LVEF升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,辛伐他汀治疗组、CHF模型组α-actinin2表达明显减少(P<0.05),辛伐他汀治疗组与CHF模型组相比表达明显增多(P<0.05)。结论辛伐他汀可明显改善CHF兔左心室重塑,提高其心功能,其机制可能与增加α-actinin2表达有关。     

不同固定方法对冰冻切片间接免疫荧光结果的影响

目的：寻找一种冰冻切片间接免疫荧光染色以及HE染色过程中最佳的组织固定方法。方法：取健康成年小鼠双侧睾丸冰冻切片,分别采用3种方法进行固定：①丙酮4℃固定15分钟,-20℃保存24h;②95％酒精4℃固定15分钟,-20℃保存24h;③切片-20℃保存24h后,再用4℃丙酮固定15分钟。然后做间接免疫荧光和HE染色,观察组织结构及染色情况。结果：4℃丙酮固定的组织切片HE染色以及间接免疫荧光效果良好。-20℃保存24h后,4℃丙酮固定15分钟的冰冻切片HE染色和间接免疫荧光结果最差。结论：酒精和丙酮都可以固定组织,但是4℃丙酮固定效果最好。     

氯丙嗪在大鼠肝脏低温保存中的保护作用

目的：研究氯丙在肝脏保温保存再灌损伤中的作保护作用。方法：大鼠肝脏保存于４℃＃Ｅｕｒｏ－ｃｏｌｌｉｎｓ液和氯丙嗪－Ｅｕｒｏ－ｃｏｌｌｉｎｓ液中，８ｈ后移植给受体大鼠，检测血清转氨酶与组织中钙、钠、钾含量，观察肝脏超微结构变化。结果：氯丙嗪具有维持正常肝脏结构与功能的作用，氯丙嗪组大鼠血清转氨酶水平及肝组织中钙含量明显降低，钾／钠比例明显升高，结论：可以提高肝脏的保存质量，维持下沉的结构与功能，延长     

齿科研磨粉尘致大鼠肺组织损伤的实验研究

目的评价钴铬钼金属(商品名:维他灵)、二氧化锆瓷、聚甲基丙烯酸甲酯树脂三种齿科研磨粉尘对大鼠肺组织损伤的影响。方法应用扫描电镜及激光粒度分析仪检测三种齿科粉尘的表面形态及粒径大小,并建立大鼠染尘动物模型;用吉姆萨染色及酶联免疫吸附测定法检测大鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数、巨噬细胞数及白细胞介素-6及白细胞介素-16的含量;应用HE染色观察肺组织切片病理学变化。结果三种齿科研磨粉尘颗粒的表面形态及粒径分布不同,精细研磨后粉尘粒径明显变小;与对照组相比,各染尘组白细胞数、巨噬细胞数以及白细胞介素-6、白细胞介素-16含量均明显增加,大鼠肺组织炎细胞浸润明显,肺组织结构破坏并纤维化;与未精细研磨组相比,维他灵及二氧化锆粉尘精细研磨组炎症细胞及炎性因子增加明显。结论三种齿科粉尘研磨前后,均能引起染尘大鼠肺组织炎性损伤及早期纤维化改变,且维他灵及二氧化锆粉尘精细研磨后较研磨前,对大鼠肺组织炎性损伤增强。     

发育和成熟大鼠心室肌细胞α-actinin和myomesin的表达及意义

目的观察发育和成熟大鼠心室肌细胞中α-辅肌动蛋白(α-actinin)和myomesin分布、强度和面积百分比增龄变化,探讨其生物学意义。方法选择胎鼠(孕约19 d)、新生(9 d)、青年(8个月)、老年(14个月)的SD大鼠,采用免疫组织化学技术研究不同年龄段大鼠心室肌细胞中α-actinin和myomesin表达部位和强度差异,用图像分析系统进行定量分析,并进行统计学处理。结果从发育到成熟阶段,α-actinin逐渐由肌浆中均质弥散分布转变为短棒状分布,新生鼠阳性表达强度和面积百分比与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.05);Myomesin表达部位及特点与α-actinin相似,新生鼠表达强度与青年和老年鼠相比差别具有统计学意义(P<0.05),新生鼠阳性面积百分比与其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠心室肌组织发育和成熟过程中,α-actinin和myomesin逐渐由胞浆内弥散分布转变为有规律的点状分布,不同年龄段表达强度和密度不同,这可能与肌组织行使功能和机体血流动力改变相关。