高糖对乳鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨高糖对乳鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,以20mmol/L终浓度的葡萄糖干预48h后,激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术检测心肌细胞凋亡;荧光定量PCR检测高糖对凋亡相关基因P53、Pax3、Bmp4、Slug、Msx1表达的影响。结果:激光共聚焦显微镜观察可见高糖组心肌细胞凋亡明显增加;TUNEL检测心肌细胞凋亡指数,高糖组为(19.67±3.45)%,明显高于对照组(1.12±0.24)%(P<0.05);流式细胞术显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.05);荧光定量PCR表明高糖能上调P53、Msx1基因的表达,下调Pax3、Bmp4、Slug基因的表达。结论:高糖可能通过影响凋亡相关基因P53、Pax3、Bmp4、Slug、Msx1的表达而诱导心肌细胞凋亡。     

缺氧对乳鼠心肌细胞的损伤作用研究

目的　探讨缺氧对心肌细胞的损伤作用及其机制。方法　原代培养乳鼠心肌细胞 ,使其缺氧 5、10、2 0和 30分钟 ,分别检测各时相组心肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)、ATP含量以及孵育液中 L DH含量 ;用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率 ;台盼蓝染色检测细胞活力 ;原位杂交检测 bcl- 2基因表达。结果　各缺氧组心肌细胞 [Ca2 + ]i、孵育液 L DH含量、凋亡率及活力明显增加 ,ATP含量明显降低 ,缺氧 10分钟组心肌细胞 bcl- 2 m RNA表达明显降低 ,与对照组相比差异有显著性 (P<0 .0 1)。结论　缺氧可引起乳鼠心肌细胞严重受损 ,bcl- 2基因在其损伤过程中起重要作用     

高糖对乳鼠心肌细胞葡萄糖转运载体-4的影响

目的 应用不同葡萄糖浓度干预心肌细胞探讨高糖对大鼠心肌细胞摄糖能力的影响以及葡萄糖转运载体-4 (Glucose transporters-4, Glt-4)在其中的可能作用。方法 1.不同葡萄糖浓度干预心肌细胞（5.5mM、11.0mM、16.5 mM、22.0mM、27.5 mM和33.0mM）48 h;2.放射同位素法检测3H-DG的摄取,免疫细胞化学、Rt-PCR和Western blot方法检测Glt-4表达。结果 1.与5.5mM 葡萄糖比较,除11.0mM 葡萄糖（P=0.075）外,其余不同葡萄糖浓度均可显著降低心肌细胞摄糖能力(P均<0.01);2.高糖干预时心肌细胞Glt-4 mRNA和蛋白的改变均没有统计学意义(P>0.05);3.与5.5mM 葡萄糖比较,除11.0mM 葡萄糖（P=0.051）外,其余不同葡萄糖浓度干预均可显著降低心肌细胞膜Glt-4蛋白表达 (P<0.05);4.心肌细胞摄糖能力AR和细胞膜 Glt-4 蛋白（r=0.419, P=0.049）显著正相关。结论 高糖可能通过抑制Glt-4膜转位减弱心肌细胞摄糖能力。     

氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10～50mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降,与高糖组相比,抗氧化剂组LDH,MDA含量明显下降,SOD含量显著升高;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降。结论:氧化应激是高糖诱导心肌细胞凋亡的一个重要机制。     

吡格列酮抑制体外高糖培养乳鼠心肌细胞炎症作用的研究

目的 探讨吡格列酮对高糖培养乳鼠心肌细胞炎症的抑制作用。方法 SD乳鼠原代心肌细胞培养至90%融合,换上无血清的DMEM培养基,并随机将细胞分为正常组、高糖模型组、吡格列酮低剂量组(10μmol/L)和高剂量组(20μmol/L),继续培养48h后,分别收集细胞培养液及心肌细胞,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、炎症因子IL-6、TNF-α的含量以及心肌细胞中蛋白P38MAPK的表达量和NF-κB的活性。结果 高糖下的细胞经吡格列酮药物处理后LDH、IL-6、TNF-α的含量、P38MAPK的表达量和NF-κB的活性均明显下降。结论 吡格列酮能抑制高糖培养下心肌细胞炎症作用。     

锌对高脂血清培养乳鼠心肌细胞的作用

本实验研究了高脂血清和锌对培养的乳鼠心肌细胞作用。结果表明：高脂血清培养的心肌细胞搏动部位数明显减少，细胞出现明显的超微结构改变。同时心肌细胞脂质过氧化物（ＬＰＯ）明显增多，加锌则能明显增加细胞自发博动部位数，减少细胞内ＬＰＯ，并使细胞损伤明显减轻，结果提示高脂血清对培养的心肌细胞损伤与心肌细胞脂质过氧化有关，锌对高脂血清所致的心肌细胞损作胃保护作用。     

罗格列酮对体外高糖培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨罗格列酮对体外高糖培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 SD乳鼠进行原代心肌细胞培养48h后,换无血清的DMEM培养基并转移到24孔板上,随机分为3组,分为培养心肌细胞不加入葡萄糖组,加入25mmol/L葡萄糖组,加入25mmol/L葡萄糖以及10μmol/L罗格列酮组.48h后,分别测定各组心肌细胞乳酸脱氢酶含量;四唑盐比色法测定各组心肌细胞的生长情况及增殖活性;流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡情况.结果 与正常对照组相比较,经过罗格列酮干预后,乳酸脱氢酶含量显著下降;四唑盐比色结果显示心肌细胞存活率增高;流式细胞仪检测发现坏死细胞和凋亡细胞明显减少.结论 罗格列酮能够抑制体外高糖培养的乳鼠心肌的细胞凋亡.     

葡萄糖浓度对乳鼠心肌细胞自噬的影响

目的观察葡萄糖浓度对乳鼠心肌细胞自噬的影响。方法建立体外培养乳鼠心肌细胞模型,随机分成对照组（5．5mmol／L）,高糖组（25mmol／L）,对照＋雷帕霉素组（100nmol／L）,高糖＋雷帕霉素组（100nmol／L）。分别测定各组心肌细胞面积;用RT-PCR检测心肌肥大标记基因[心房利钠肽（ANP）、β-肌球蛋白重链（13-MHC）]表达情况;运用Western印迹检测自噬标记性蛋白微管相关蛋白3（LC-3）的表达。结果（1）高糖组心肌细胞肥大相关指标较对照组升高,高糖组LC-3的表达较对照组减低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）高糖＋雷帕霉素组心肌细胞肥大相关指标较对照＋雷帕霉素组升高,高糖＋雷帕霉素组LC-3较对照＋雷帕霉素组减低,但差异均无统计学意义。（3）高糖＋雷帕霉素组心肌细胞肥大相关指标较高糖组减低,高糖＋雷帕霉素组LC-3表达较高糖组升高,差异均有统计学意义。结论（1）培养基中葡萄糖浓度升高可导致心肌细胞肥大,同时合并有心肌细胞自噬水平的下降。（2）在高糖培养基中加入雷帕霉素可升高心肌细胞的自噬水平,同时抑制高糖导致心肌细胞肥大效果。（3）培养基中葡萄糖浓度升高导致心肌细胞肥大的效果可能与心肌细胞自噬水平的改变相关。（4）结合本实验的研究结果,自噬在糖尿病性心肌病方面可能起一定作用。     

维拉帕米对高糖与去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌细胞，观察维拉帕米对高浓度葡萄糖与去甲肾上腺素共同诱导的肥大心肌细胞的影响，并推测其作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后，用[^3H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成；利用计算机图象分析系统测心肌细胞的体积。结果 一定浓度的维拉帕米在对高糖和去甲肾上腺素诱导的肥大心肌细胞的蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。结论 维拉帕米能有效抑制高糖与去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大。     

淫羊藿苷改善高糖培养乳鼠心肌细胞活性的线粒体相关机制

目的研究淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导乳鼠心肌细胞的损伤及其潜在的线粒体相关机制。方法SD乳鼠心肌细胞分别在含5.5mmol／L葡萄糖（正常对照组）、5．5mmol／L葡萄糖＋20.0mmol／L甘露醇（高渗对照组）、25.5mmol／L葡萄糖（高糖损伤组）、25.5mmol／L葡萄糖＋10μmol／L淫羊藿苷（低剂量淫羊藿昔保护组）和25.5mmol／L葡萄糖＋100μmol／L淫羊藿苷（高剂量淫羊藿苷保护组）的培养基中进行原代培养48h后,检测细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）含量、细胞活性氧自由基（ROS）生成、超氧化物歧化酶（SOD）活性,同时检测心肌线粒体跨膜电位,并检测线粒体通透性转换孔（MPTP）开放值。结果与正常对照组比较,高糖培养组心肌细胞活性、细胞SOD活性及心肌线粒体跨膜电位水平均显著下降（P〈0．01）,而培养上清液LDH含量、细胞ROS生成及心肌细胞MPTP开放值则明显升高（P〈001）。淫羊藿苷干预减轻了高糖对心肌细胞各项指标的损伤,尤其是高剂量淫羊藿苷保护组的细胞活性、LDH漏出量、ROS生成值、SOD活性、MPTP开放值、线粒体跨膜电位均有明显改善。高渗对照组各项指标与正常对照组相比差异无统计学意义。结论淫羊藿苷对体外高糖培养乳鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高细月旬抗眚化能力．减少ROS诱导的心肌MPTP开放程度．维持线粒体正常跨膜电位而实现的。     

高糖对肾小球系膜细胞Smurf2表达的影响

目的观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾小球系膜细胞胞内Smad泛素调节因子2(Smurf2)的表达,探讨泛素化降解在糖尿病肾病中的作用。方法将体外培养的大鼠肾系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、20 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖组、甘露醇组。分别用real ti me quantitative PCR法和细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞Smurf2的mRNA和蛋白的表达。结果(1)正常对照组系膜细胞Smurf2的mRNA和蛋白表达较弱。(2)高糖组Smurf2的mRNA和蛋白表达较正常对照组增强(P<0.05),呈浓度依赖性。结论高糖可诱导肾系膜细胞Smurf2表达增强。提示泛素-蛋白酶体途径可能参与了糖尿病肾病的病理进程。     

高糖对视网膜色素上皮细胞Toll样受体2表达的影响

目的观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响及机制。方法各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48 h,正常糖浓度组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、中度高糖组(15.5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5 mmol/L D-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5 mmol/L D-葡萄糖加10 mmol/L Go6976 PKC-α抑制剂)、高渗对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖加20 mmol/L甘露醇)。Western blot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况;Real-time PCR分析各组ARPE-19细胞TLR2的mRNA表达水平。结果与正常糖浓度组相比,高糖组和中度高糖组TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α转位均增加(P<0.05),并且高糖组高于中度高糖组(P<0.05)。与高糖组比较,PKC-α抑制剂组的TLR2蛋白表达降低(P<0.05),PKC-α蛋白转位显著降低(P<0.01)。结论高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,刺激PKC-α转位;高糖可能是通过PKC-α通路上调ARPE-19细胞TLR2表达。     

缺氧复合烧伤血清刺激对新生大鼠心肌细胞粘弹特性影响的初步研究

目的：了解烧伤后因缺氧、烧伤血清对心肌细胞骨架的损伤机制及由此而产生的损伤效应和意义。方法：通过心肌细胞骨架免疫组化、骨架蛋白流式细胞术及心肌细胞粘弹性测定技术，动态观察体外培养乳鼠心肌细胞致伤前后的变化。结果：大鼠严重烧伤早期，即可引起心肌细胞弹性下降，骨架蛋白的荧光强度降低，中间丝及部分微管阳性信号减弱，培养心肌细胞呈脱落前征象。结论：心肌细胞骨架对维持心肌细胞的完整性是必需的，细胞骨架损伤可引起细胞脆性增加，细胞粘弹性下降，导致细胞生物力学特性改变，而这种变化可能直接参与烧伤后心肌损害的发生发展和转归过程。     

低血流心肌缺血诱导GLUT4基因表达

目的：探讨低血流心肌缺血促进葡萄糖摄取增加的机制。方法：采用Northrn印迹法观察缺血心肌葡萄转运子4（GLUT4）mRNA的表达,并利用蛋白质印迹法分析心肌GLUT4多肽的表达,结果：局部心肌低血流缺血后,心肌GLUT4mRNA和GLUT4多肽表达明显增加;同时伴随缺血心肌葡萄糖摄取明显增多。结论：心肌缺血能刺激GLUT4 mRNA和GLUT4多肽表达,使GLUT4数增加,进而促进心肌葡萄糖摄取增多,使缺血心肌能量需求得以平衡,有助于缺血心肌功能的恢复,提示低血流缺 刺激心肌GLUT4表达是一个重要的代偿性保护机制。     

姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法:以大鼠系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为7组:①正常对照组(5 mmol/L葡萄糖,NG组),②高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组),③高糖 6.25 μmol/L姜黄素组,④高糖 12.5 μmol/L姜黄素组,⑤高糖 25μmol/L姜黄素组,⑥高糖 50 μmol/L姜黄素组,⑦高糖 100μmol/L姜黄素组.分别作用24 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,用Western Blot法测定细胞内FN蛋白表达.结果:作用24 h后,高糖明显诱导MCs增殖并上调细胞内FN表达.不同浓度姜黄素均能抑制高糖诱导的细胞增生,并抑制FN蛋白表达增加.结论:姜黄素能抑制高糖诱导的MCs增殖,并下调FN蛋白表达,提示姜黄素可能通过阻抑FN表达减少细胞外基质积聚,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用.     

异丙酚抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞黏附分子表达

 目的  研究异丙酚抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞黏附分子的表达并探讨其可能的机制。方法  采用Histopaque-1077溶液提取人外周血单核细胞。采用一氧化氮(NO)试剂盒检测脐静脉内皮细胞NO生成。采用Western blot检测内皮细胞黏附分子、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)(总蛋白,单体及双体)、eNOS磷酸化水平及caveolin-1表达。结果  高糖上调血管内皮细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)的表达,促进单核细胞-内皮黏附,并减少NO生成。异丙酚改善高糖环境下NO生成,并抑制VCAM-1表达及单核细胞-内皮黏附。异丙酚的作用可被eNOS抑制剂L-NAME所拮抗。异丙酚能上调高糖环境下eNOS-Ser1177磷酸化水平及双体/单体比值,下调高糖环境下eNOS-Thr495磷酸化水平及caveolin-1表达。结论  异丙酚通过调节高糖环境下eNOS的磷酸化水平、单体/双体比值及caveolin-1表达,改善内皮细胞NO生成,进而抑制内皮细胞黏附分子的表达及单核细胞-内皮细胞的黏附。     

Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响

目的:探讨Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L)?Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L)?高糖组(HG组,葡萄糖浓度30mmol/L)和高糖+Resveratrol组(HG+Res组,葡萄糖浓度30 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L),各组细胞分别培养72 h,用比色法测定细胞上清液丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,蛋白含量/细胞数比值评估系膜细胞大小,Western blot法检测细胞内p27蛋白表达的变化?结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均明显上调(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均降低(P < 0.05)?②与NC组相比,HG刺激72 h后,大鼠肾小球系膜细胞肥大?p27蛋白表达明显增加(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞细胞肥大减轻?p27蛋白表达减少(P < 0.05)?Res组和NC组之间p27蛋白表达无统计学意义(P > 0.05)?结论:Resveratrol可能通过缓解高糖诱导系膜细胞的氧化应激?抑制p27蛋白高表达,减轻糖尿病肾脏疾病早期的肾脏肥大?     

降钙素基因相关肽对培养心肌细胞作用的实验观察

目的　探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)对心肌细胞的毒性作用 .方法　将原代培养成活 4d后的大鼠心肌细胞分为 4组 ,A组为对照组 ,B,C,D3组分别加入 CGRP1×10 - 9,1× 10 - 8和 1× 10 - 7mol· L- 1 .实验开始后 0 .5 ,1.0 ,1.5及 2 .0 h评定心肌细胞搏动功能 ,观察细胞酶、培养液中电解质变化及形态学变化 .结果　 B,C,D组各时点搏动频率均较 A组各时点加快 ,D组在 2 .0 h细胞呈部分或无搏动 ,随剂量递增及作用时间延长 ,细胞形态学略有变化 ,但不明显 .乳酸脱氢酶 ,天冬氨酸转氨酶 ,肌酸激酶和 α-羟丁酸脱氢酶释放量、电解质含量及 CO2 含量均未见显著改变 .结论　CGRP在低浓度 (1× 10 - 9,1× 10 - 8mol· L- 1 )时呈正性变时、变力作用 ;高浓度 (大于 1× 10 - 7mol· L- 1 )时呈现一定的抑制作用     

不同浓度葡萄糖对MG63细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察不同浓度葡萄糖和高糖波动对具有人成骨细胞表型特征的MG63细胞增殖?细胞周期及凋亡的影响,探讨糖尿病性骨质疏松症的发病机制?方法:用不同浓度葡萄糖(5.5?33.3和5.5?33.3 mmol/L交替)分别刺激培养的MG63细胞24 h,MTT比色分析法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率?结果:①高糖及高糖波动可抑制MG63细胞的增殖,与高糖组相比,高糖波动组的抑制效应更加明显;②高糖及高糖波动可阻滞MG63细胞周期,使G1期细胞比例增加,S期比例减少,诱导细胞凋亡?高糖波动组作用更加明显?结论:高糖波动可抑制成骨细胞增殖,阻滞其细胞周期,诱导细胞凋亡?推测高糖波动可能通过对成骨细胞增殖及细胞周期?细胞凋亡的影响而参与糖尿病性骨质疏松症的发生发展     

左旋精氨酸对急性心肌缺血大鼠L-及P-选择素表达的影响

目的：探讨NO的前体左旋精氨酸（L-arg)对急性心肌缺血（AMI）大鼠心血肌有无保护作用及其作用机制,方法：采用垂体后叶素（Pit)性急性心肌缺血模型,建立正常对照组,阳性对照组,及L－arg治疗组,观察中性粒细胞（PMN）表面L－选择素及心肌微血管内皮细胞表面P－选择素的表达,并测定心肌梗死面积,PMN浸润数及血浆NO,MDA的浓度,结果：阳性对照组与正常对照组相比,其L－选择素及P－选择素表达上调,心肌PMN浸润数,血浆MDA的浓度明显升高,血浆NO的浓度降低,L－arg治疗组上述指标改变的程度明显轻于阳性对照组（P＜0．01）,心肌梗死范围小于阳性对照组,结论：外源性L－arg对急性心肌缺血有防治意义,其作用的机制与NO抑制选择素的表达有关。