SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1在不同放射敏感度鼻咽癌细胞中的表达

目的 建立鼻咽癌放射抗拒亚系CNE-2S,研究SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路在鼻咽癌细胞系CNE-2和CNE-2S中表达的差异,探讨鼻咽癌放射敏感度变化的分子机制.方法 通过X线大剂量低分割照射技术建立鼻咽癌放射抗拒亚系(子代,CNE-2S1),观察亲代(CNE-2)和子代细胞的形态学和生长动力学差异,检测亲代及子代细胞系放射敏感度相关参数,分析亲代及子代细胞系各自细胞周期分布,同时检测亲代与子代细胞系SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路中各因子的蛋白质表达水平.结果 通过X线大剂量低分割照射技术成功建立鼻咽癌放射抗拒亚系CNE-2S1,且CNE 2及CNE-2S1放射敏感度相关参数具有延续性.同时CNE-2S1细胞S期比例较CNE-2细胞明显增高,G1期细胞明显减少,G2-M期细胞比例变化不明显.此外SHP-1、CDK6以及CylinD1在CNE-2S1细胞中的蛋白表达水平明显上调,p21表达水平则明显下调,其与CNE-2细胞之间的差异具有统计学意义.结论 SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路可能在调控鼻咽癌放射敏感度和细胞周期分布方面发挥一定作用.     

可溶性CD40配体对白血病HL-60细胞Caspase-3及Caspase-8表达的影响

目的 Caspase-3和Caspase-8在多种肿瘤中异常表达,与白血病的疗效等密切相关.本研究分析可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,sCD40L)对人白血病HL-60细胞Caspase-3及Caspase-8表达的影响,探讨其对HL-60细胞的作用机制.方法 2.0、4.0和6.0 mg/L的sCD40L作用HL-60细胞48 h,采用流式细胞术检测HL-60细胞凋亡水平及细胞周期,RT-PCR检测HL-60细胞中Caspase-3和Caspase-8基因的表达水平,蛋白质免疫印迹法检测HL-60细胞中Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达.结果 2.0、4.0和6.0 mg/L的sCD40L作用HL-60细胞48 h后,浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡,凋亡率分别为(48.17±3.22)％、(60.73±5.46)％及(71.26±5.83)％,与对照组(36.42±2.75)％比较,差异有统计学意义,F=36.373,P=0.003.sCD40L阻滞HL-60细胞在G0/G1期,RT-PCR结果显示,Caspase-3和Caspase-8 mRNA的表达上调;蛋白质印迹法结果显示,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达增强.结论 sCD40L在体外能够以浓度依赖性促进HL-60细胞凋亡,阻滞细胞在G0/G1期,其可能机制是通过激活Caspase-3和Caspase-8.     

抗CXCR4单克隆抗体对与正常骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞增殖活性的影响

目的:本文通过抗CXCR4单克隆抗体12G5阻断SDF-l活性,检测增殖相关指标,探讨SDF-1在维持HL-60细胞存活、增殖中的作用.方法:培养HL-60细胞并与正常骨髓基质细胞共培养,采用12G5(10μg/ml)阻断SDF-1生物学活性.孵育24h后,通过流式细胞仪观察HL-60细胞增殖周期的变化,免疫组化染色检测其PCNA蛋白表达的变化,并通过台盼蓝拒染观察白血病细胞存活、增殖的变化.结果:1)实验组中G0/G1期细胞比例为(56.71±4.9)%,S期为(32.42±4.1)%,G2/M期为(10.87±5.2)%;对照组中G0/G1期细胞比例为(43.63±2.2)%,S期为(45.86±3.7)%,G2/M期为(10.51±2.6)%.2)台盼蓝拒染显示,12G5抑制HL-60细胞的存活及增殖.3)免疫组化染色结果显示,实验组及对照组中PCNA阳性细胞率分别为(42.1±3.9)%和(67.4±8.5)%.结论:SDF-1可在一定程度上维持HL-60细胞的存活及增殖进程.     

肾细胞癌中cyclin D1、cyclin E和p21cip1的mRNA表达

目的探讨细胞周期素D1、E(cyclin D1、cyclin E)、p21cip1在pTNM Ⅰ期普通型肾细胞癌(CRCC)发生发展中的作用.方法用半定量RT-PCR方法,检测23例pTNM Ⅰ期CRCC组织和7例正常肾组织中cyclin D1、cyclin E及p21cip1的mRNA含量;用免疫组化方法检测CRCC中p53及ki-67的表达;并将以上指标与临床病理特征进行统计分析.结果 CRCC组织中cyclin D1、cyclin E、p21cip1mRNA含量分别为0.484±0.416、0.472±0.340、0.356±0.215,均高于正常对照组(0.078±0.051,P＜0.01;0.063±0.063,P＜0.01;0.178±0.114,P＜0.05);Cyclin D1含量低者肿瘤直径小于3 cm(P＜0.01);Cyclin E含量低者肿瘤常有坏死(P＜0.05),细胞核分级较高(P＜0.01);p21cip1低表达者细胞核分级较高(P＜0.05);p21cip1与cyclin E呈正相关(γ=0.602,P＜0.01).结论 pTNM Ⅰ期CRCC组织中cyclin D1、cyclin E、p21cip1mRNA含量升高,可能影响肿瘤的生物学行为及预后.     

抗CXCR4单克隆抗体12G5对HL-60细胞粘附及增殖的影响

背景与目的:近年研究发现,骨髓基质细胞分泌的趋化因子SDF-1通过其分布于白血病细胞膜表面的生理性受体CXCR4可能参与了白血病细胞的髓内屏障,然而,SDF-1/CXCR4系统与白血病细胞之间的相互关系尚不清楚,因此,本研究采用抗CXCR4单克隆抗体12G5阻抑SDF-1活性,观察与白血病骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞粘附性及细胞增殖的变化,以探讨从阻抑SDF-1活性入手治疗残留白血病的可能性。方法:培养并共培养HL-60细胞,采用12G5(10μg/ml)阻断SDF-1生物作用,观察HL-60细胞在骨髓基质层上的粘附情况并测定细胞粘附率,通过流式细胞仪检测凋亡率,并观察其增殖周期的变化;应用台盼蓝拒染法检测细胞存活情况,绘制细胞生长曲线。结果:(1)12G5孵育后24h,骨髓基质对HL-60的粘附率为(39.4±7.9)%,对照组为(51.4±5.9)%,二者具有显著差异(P<0.05)。(2)比较细胞增殖周期及凋亡率,实验组中G0/G1期细胞比例为(55.2±4.9)%,S期为(30.4±4.1)%,G2/M期为(14.4±5.2)%,细胞凋亡比例为(9.0±1.7)%;对照组中G0/G1期细胞比例为(44.7±2.2)%,S期为(45.3±3.7)%,G2/M期为(10.0±2.6)%,细胞凋亡比例为(4.0±2.4)%。(3)12G5孵育48h后,HL-60细胞生存率明显下降,增殖减缓。结论:12G5能在一定程度上抑制HL-60细胞的粘附性及增殖活性,因此,通过1     

大肠癌CDK4、Ki-67表达与Cyclin D1、p16蛋白表达的相关性及临床意义

目的　探讨CDK4、Ki 6 7蛋白表达与临床病理因素、预后的关系及其与CyclinD1、p16蛋白表达的关系。方法　采用sp法对 89例大肠癌标本进行CDK4、Ki 6 7、CyclinD1、p16蛋白免疫组化检测。结果　CDK4核表达在组织学分级Ⅲ级与Ⅰ、Ⅱ级之间的差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,与术后三年生存率未见明显相关 ,与CyclinD1、p16蛋白表达明显相关 (P <0 .0 5 )。Ki 6 7强阳性表达在组织学分级Ⅲ级与Ⅰ、Ⅱ级之间及临床分期D期与B、C期之间的差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,与术后三年生存率及CyclinD1表达明显相关 (P <0 .0 5 ) ,与p16蛋白表达无明显相关。CDK4核表达组Ki 6 7强阳性表达明显增高。结论　大肠癌CDK4核表达具有癌基因蛋白的特性 ,对组织分化及细胞增殖有一定的影响 ,Ki 6 7强阳性表达对评估预后、组织分化、临床进展有一定意义。CyclinD1、CDK4与p16共同参与大肠癌的发生与发展。     

可溶性胃癌抗原和抗CD3单抗共同诱导杀瘤细胞的实验

用盐析法提取胃癌可溶性抗原（ＴＳＡ），并用抗ＣＤ３单抗和ＩＬ－２共同刺激正常人的外周血单核细胞，培养１０天后，经流式细胞仪表型分析，表明其免疫效应细胞以ＣＤ８Ｔ细胞为主，其细胞增殖速度、增殖水平与ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ相比明显升高，且对其抗原来源的胃癌细胞具有极强的杀伤活性（９８．５％），高于ＣＤ３ＡＫ（８２．１％）和ＬＡＫ（６２．０％）。     

膀胱癌EJ细胞的CD44异常糖基化及其单抗KMP1的生物学功能研究

研究EJ细胞单抗KMP1的结合抗原CD44的变化和KMP1对EJ细胞生物学功能的影响。方法：采用人膀胱癌EJ细胞株免疫BALB/c小鼠,获得单抗KMP1,免疫荧光检测KMP1的亲和性、结合部位及效价。流式细胞检测KMP1对膀胱癌细胞的特异性。免疫组化检测对膀胱癌组织的特异性。亲和层析分离纯化特异性抗原,检测抗原的氨基酸序列。糖基转化酶抑制剂和过碘酸氧化后分析抗原决定簇的理化性质改变。软琼脂培养克隆形成实验和细胞划痕实验检测KMP1对EJ细胞株的增殖和迁移功能的影响。结果：获得的单抗KMP1是IgG1,能与EJ、BIU-87、T24膀胱癌细胞和膀胱癌组织特异性结合,而与Lovo、HeLa、K562、HepG2、Jurkat、293、HCV29、人的红细胞和白细胞无结合性,也不能结合正常膀胱黏膜。其结合EJ细胞的抗原是异常糖基化的CD44,糖基转化酶抑制剂BG作用EJ细胞7d,KMP1对EJ细胞结合性降低,过碘酸氧化后Western blot显示KMP1对CD44结合性降低,软琼脂培养克隆形成实验和细胞划痕实验结果示KMP1还能减弱EJ细胞的增殖和迁移功能。结论：膀胱癌的高复发性、易转移可能与出现异常糖基化的CD44高表达具有一定的相关性,KMP1可结合异常糖基化的CD44,并抑制EJ细胞的增殖和迁移。     

肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和CDK4蛋白的影响

目的检测肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)蛋白表达的影响。方法肉桂醛(3.13、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10 g/L)作用肝癌HepG2细胞后,MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性和半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。流式细胞术检测肉桂醛对HepG2细胞凋亡影响。免疫荧光法检测HepG2细胞p21和CDK4蛋白的表达。结果肉桂醛能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24小时、48小时和72小时IC_(50)值分别为0.68、0.45、0.35 g/L(P<0.01)。肉桂醛组(0.900、0.450、0.225 g/L)肝癌HepG2细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肉桂醛能增加p21蛋白和降低CDK4蛋白在HepG2细胞中的表达,各浓度肉桂醛组的p21、CDK4蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肉桂醛可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,可能与调节p21和CDK4的蛋白表达有关。     

三七皂苷R1对HL-60细胞凋亡及survivin、p53表达的影响

[目的]探讨三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡作用及其机制。[方法]光镜下观察三七皂苷R1作用下HL-60细胞形态．采用MTT比色法观察三七皂苷R1对HL-60细胞增殖的抑制作用。采用流式细胞术检测细胞凋亡改变．并以RT-PCR检测凋亡调节基因survivin、p53的表达。[结果]三七皂苷R1 75μg／ml～1200μg／ml可抑制HL-60细胞的生长，且呈时间和浓度依赖性。三七皂苷R1作用后细胞呈现凋亡特征．流式细胞术显示凋亡细胞比例升高，凋亡率随作用剂量的增高而升高。RT-PCR检测可见在三七皂苷R1150μg／ml作用下p53mRNA表达显著增加，而survivin mRNA表达减少。[结论]三七皂苷R1能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡，其作用可能与凋亡调节基因p53的上调和survivin的下调有关。     

细胞周期蛋白Cyclin D1 和CDK 4在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨Cyclin D1和CDK 4在新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生、发展中的作用及相互关系.方法:采用免疫组化方法,检测100例宫颈癌组织和50例正常宫颈组织中Cyclin D1和CDK 4蛋白的表达情况.结果:宫颈癌组织中Cyclin D1 蛋白阳性表达率为75%,高于正常对照组的30%(P<0.01);CDK 4蛋白阳性表达率(87%),高于正常对照组(44%)(P<0.01).结论:Cyclin D1和CDK 4在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中高表达,且与新疆维吾尔族妇女宫颈癌的发生、发展有关.     

胰腺癌中和的p21WAF1、cyclinD1CDK4表达意义及其相互关系

目的:探讨胰腺癌中p21W A F1、cyclinD1和CD K4的表达意义及其相互关系。方法:应用免疫组织化学二步法检测p21W A F1、cyclinD1和CD K4在48例胰腺癌和14例慢性胰腺炎中的表达。结果:胰腺癌组织中p21W A F1、cyclinD1、CD K4的阳性表达率分别是52.08%(25/48)、70.85%(34/48)、62.50%(30/48),同慢性胰腺炎组比较p21W A F1的表达明显降低(P<0.01),而cyclinD1和CD K4的表达明显升高(P<0.01)。高分化、无淋巴结转移、临床分期Ⅰ、Ⅱ期的胰腺癌组织中p21W A F1的阳性表达率明显高于低分化、有淋巴结转移、临床分期Ⅲ、Ⅳ期的胰腺癌(P<0.05);而cyclinD1和CD K4则相反(P<0.05)。p21W AF1的表达和cyclinD1、CDK4的表达呈明显的负相关(相关系数分别为r=-0.340,P<0.05和r=-0.571,P<0.01);cyclinD1和CDK4的表达则呈明显的正相关(r=0.450,P<0.01)。结论:p21W A F1的缺失表达和cyclinD1、CD K4的过表达在胰腺癌的发生、发展过程中起重要的协同作用。三种蛋白质主要以p21W AF1/cyclinD1/CDK4通路的方式作用于细胞的转化,参与肿瘤的形成。     

Dishevelled-1、Cyclin D1和CD44v6在儿童骨肉瘤中的表达及临床意义

目的 探讨Dishevelled-1（Dvl1）、Cyclin D1和CD44v6蛋白在儿童骨肉瘤组织中的表达及其与骨肉瘤临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化法检测Dvl1、Cyclin D1和CD44v6在47例儿童骨肉瘤组织中的表达情况。分析3者表达的关系及其与临床病理特征的关系。结果 Dvl1 、Cyclin D1和CD44v6在儿童骨肉瘤组织中的高表达率为76.60％（36／47）、72.34％（34／47）和68.09％（32／47）。Dvl1表达与肿瘤直径（P=0.020）和Ennecking分期（P=0.032）有关; Cyclin D1和CD44v6的表达也分别与肿瘤直径（P=0.007,P=0.036）和Ennecking分期（P=0.024,P=0.020）有关。Dvl1表达与Cyclin D1（r=0.332,P=0.023）和CD44v6表达（r=0.376,P=0.009）呈正相关。结论 Dvl1、Cyclin D1和CD44v6在儿童骨肉瘤中呈高表达,其高表达能够促进儿童骨肉瘤的恶性进展。     

颌骨骨肉瘤中cyclinD1和CDK4的表达及其意义

分析细胞周期素Ｄ１（ｃｙｃｌｉｎＤ１）和细胞周期素依赖激酶４（ＣＤＫ４）在颌骨骨肉瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化ＡＢＣ法检测ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ４在２０例颌骨骨肉瘤和８例骨软骨瘤中的表达。结果骨肉瘤中ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ４的阳性率表达率分别为６５．００％（１３／２０）和６０．００％（１２／２０），两者的阳性表达存在正相关（γＳ＝０．４８，Ｐ〈０．０５）；而它们在骨软骨瘤中的阳性率均为１     

细胞周期蛋白CyelinD1和CDK4在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中的表达及意义

目的：探讨CyclinD1和CDK4在新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生、发展中的作用及相互关系。方法：采用免疫组化方法，检测100例宫颈癌组织和50例正常宫颈组织中CyclinD1和CDK4蛋白的表达情况。结果：宫颈癌组织中CyclinD1蛋白阳性表达率为75％，高于正常对照组的30％（P〈0．01）；CDK4蛋白阳性表达率（87％），高于正常对照组（44％）（P〈0．01）。结论：CyelinD1和CDK4在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中高表达，且与新疆维吾尔族妇女宫颈癌的发生、发展有关。     

The Positive Nuclear Staining Observed with Monoclonal Antibody against PRAD1/Cyclin D1 Correlates with mRNA Expression in Mantle Cell Lymphoma

Recently, we produced a monoclonal antibody, 5D4, against the PRAD1/cyclin D1 product and suggested positive nuclear staining to be associated with mantle cell lymphoma (MCL). Now we have further characterized the specificity of this antibody and studied the relation of immunohistochemical detection to PRAD1/cyclin D1 mRNA expression and DNA rearrangement. Immunofluorescence and immunoblotting studies demonstrated the 5D4 antibody to be crossreactive with cyclin D2, but not cyclin D3. On immunostaining, 15 of 19 MCL cases (79%) presented the nuclear staining pattern and PRAD1/cyclin D1 mRNA expression was detected by Northern blot analysis in 12 of 15 MCL cases studied (80%); all cases with the mRNA expression showed the nuclear staining pattern. Southern blot analysis with 11q13 BCL-1 probes detected DNA rearrangements in 8 of 19 MCL cases (42%), all 8 exhibiting PRAD1/cyclin D1 mRNA expression. In 21 lymphoma cases of types other than MCL, neither the mRNA expression nor the nuclear staining were observed, although cytoplasmic staining was often apparent. These results indicated that positive nuclear staining of lymphoma cells by 5D4 antibody reflects PRAD1/cyclin D1 mRNA expression, and showed that this monoclonal antibody has diagnostic value for differentiating MCL from other types of lymphomas.     

抗CD44抗体HI44a诱导THP-1细胞凋亡作用的研究

背景与目的：研究抗CD44抗体HI44a体外诱导白血病细胞THP-1凋亡的作用及其机制。材料与方法：应用Annexin-Ⅴ/PI染色法、原位凋亡检测试剂盒及透射电镜分别检测形态学变化及其凋亡情况,RT-PCR及western-blot方法检测原癌基因c-myc mRNA及蛋白水平的表达,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的变化,流式细胞仪检测抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果：采用多种方法均可证实,HI44a对THP-1细胞有明显的诱导凋亡作用。HI44a明显抑制THP-1细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P﹤0.05）;同时c-myc在mRNA及蛋白水平的表达水平均明显降低;并可诱导细胞线粒体膜电位的改变。结论：HI44a能够有效诱导THP-1细胞凋亡。其作用机制可能是与调节相关癌基因及抗凋亡蛋白的表达,降低线粒体膜电位有关。     

CD44V9、CyLinD1及nm23H1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨癌基因CD44V9、CyLinD1和抑癌基因nm23H1在胃癌组织中的表达,相关性及其临床意义。方法:采用免疫组化SABC法对52例胃癌中CD44V9、CyLinD1和nm23H1表达进行检测,并对其结果与患者的临床病理资料进行分析。结果:在胃癌组织中三者的阳性表达率分别为:CD44V971.65%、CyLinD151.3%、nm23H156.61%;在CD44V9阳性胃癌中nm23H1阳性表达率(41.03%)明显低于CD44V9阴性胃癌(92.30%)(P<0.01);在CyLinD1阳性胃癌中nm23H1阳性表达率(38.23%)也明显低于CyLinD1阴性胃癌(88.89%)(P<0.01);CD44V9和CyLinD1的阳性表达与胃癌的分化程度淋巴结转移及TNM分型有关(P<0.01);nm23H1的阳性表达与分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05),与TNM分期无关(P>0.05)。结论:nm23H1与CyLinD1、CD44V9在胃癌组织中的表达呈负相关系,并与胃癌的部分生物学行为有关,三者联合检测可作为临床上预测胃癌的转移与进展程度。