降低端粒酶表达对人喉癌细胞系Hep-2生长的影晌

目的：用表达端粒酶反义RNA的方法研究端粒酶在喉癌细胞生长中的作用。方法：将端粒酶反义RNA真核表达载体，pBBS212-hTR转染入人喉癌Hep-2细胞系中，采用端粒重复扩增法测定端粒酶活性，用MTT法及流式细胞仪检测细胞周期，并用电镜观察细胞生长状况。结果：端粒酶反义RNA表达后能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性，抑制细胞增殖并促进其凋亡.结论：以端粒酶反义RNA降低端粒酶的方法对人喉癌细胞系Hep-2的生长有明显抑制作用。     

急性白血病端粒酶、染色体及p170糖蛋白表达的相关性研究

目的：研究急性白血病（AL）细胞内端粒酶活性与染色体及P170糖蛋白表达的相关性以及与临床疗效的关系。方法：分别用端粒重复放大程序－酶标法（TRAP－ELISA）和热变性姬姆萨R显带法及流式细胞仪分别对37例AL细胞内端粒酶活性，染色体分析和P170糖蛋白的表达进行检测。结果：37例AL患者的白血病细胞端粒酶阳性率为70．27％，P170糖蛋白阳性率为43．205，染色体的异常率达54．00％，端粒酶表达与P170糖蛋白显示出一致性，端粒酶与P170糖蛋白均阳性者完全缓解（CR）率仅为14．30％，端粒酶阳性者其染色体的异常率达65．40％，而阴性者仅为27．30％（P＜0．01），端粒酶阳性者CR率为38．46％，阴性者CR率为72．73％（P＜0．01）。结论：端粒酶活性阳性的AL患者预后较差，端粒酶活性与P170糖蛋白呈正相关并且染色体的异常比较高，提示三者的高表达是影响AL临床预后的不良因素之一。     

反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制

目的：观察反义端粒酶RNA对SMMC－7721肝癌细胞系的作用,探讨抗端粒端治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法：采用脂质体介导的方式将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTP转入SMMC7721细胞中,经潮霉素筛选,克隆细胞株扩增鉴定后,采用TRAP－PCR－ELISA,FCM及电镜检测反义端粒酶RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察。结果：TRAP－PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性的结果为：实验组吸光度值为0．980,对照组吸光度值为2．861;FCM检测细胞凋亡结果为：实验组13．8％,对照组未见有凋亡峰形成,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态。裸鼠移植瘤生长实验发现,转染细胞生长明显受到抑制作用,说明反义端粒酶RNA显抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性,并且对其有显的促凋亡作用。结论：反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性,同时显促进癌细胞凋亡。     

反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用，研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒，感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性，光镜观察细胞形态，DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制，并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用，使肺癌细胞A549生长抑制，促进细胞凋亡。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对人肺癌细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的 观察脂质体介导的端粒酶RNA反义寡核苷(ASODN)对人肺癌细胞系端粒酶活性的作用及其对癌细胞增殖的影响。方法 合成与人类端粒酶RNA模板区碱基序列互补的ASOND，并用阳离子脂质体转染剂DO-SPER介导，作用于人肺癌细胞系，空白组和正义寡脱氧核苷酸(SODN)作为对照。用以PCR为基础的端粒重复序列扩增法(TRAP)结合ELISA方法检测肺癌细胞的端粒酶活性。台盼蓝拒染法细胞计数、噻唑蓝(MTT)试验观察癌细胞增殖情况。结果 脂质体介导的抗端粒酶ASODN对肺癌细胞的端粒酶活性具有抑制作用；细胞计数和MTT试验显示肺癌细胞增殖速度明显减慢。结论 针对端粒酶模板区的ASODN可显抑制端粒酶活性和肺癌细胞的增殖，可运用于抗肿瘤实验性治疗和相关研究。     

核酶对肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的:观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine介导,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS212Rz及空载质粒pBBS212转染肝癌SMMC-7721细胞,采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果:重组质粒pBBS212Rz转染的肝癌SMMC-7721细胞的端粒酶活性明显下降,细胞生长速度明显变慢,凋亡加速。结论:端粒酶核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用,可望成为肝癌基因治疗的方法。     

胃癌及癌前组织中端粒酶RNA与端粒酶活性检测及其临床意义

目的：研究胃癌及癌前病变胃粘膜端粒酶RNA与端粒酶活性检测及其意义。方法：选取经病理组织学证实的有粘膜活检标本共150例，包括慢性浅表性胃炎（CSG）32例、肠上皮化生（IM）36例、不典型增生（AH）34例、胃癌（GC）48例，分别采用原位逆转录聚合酶链反应（PCR）、端粒酶重复序列扩增法（TRAP）检测上述胃粘膜端粒酶RNA与端粒酶活性。结果：原位逆转录PCR检测胃粘膜活检标本的端粒酶RNA阳性率为55．3％（83／150），显高于TRAP法检测端粒酶活性检出率（40．0％、60／150，P＜0．05）。在不同胃粘膜病变中，IM、AH及GC的端粒酶RNA阳性率分别为47．2％、52．9％、100％，而CSG胃粘膜中未检出端粒酶RNA；IM、AH组端粒酶RNA阳性率亦明显低于GC组（P＜0．05）。端粒酶RNA主要分布于胃粘膜癌细胞及癌前病变上皮细胞的胞核内。结论：端粒酶RNA与胃癌的发生密切相关。原位逆转录PCR检测胃粘膜端凿酶RNA对胃粘膜癌变的早期诊断和预测有重要价值，而且可能是较端粒酶活性更灵敏的生物学指标。     

脑膜瘤端粒酶的活性在判断复发和恶变中的价值

目的：探讨端粒酶作为脑膜瘤标志物，在肿瘤良恶性鉴别，恶性程度评估以及预后预测等方面的意义。方法：利用TRAP－ELISA定量检测61例（份）肿瘤标本端粒酶的活性（以ΔA＝A450－A690表示），结合肿瘤的分类和患的临床资料。分析端粒酶活性作为肿瘤良恶性及判断预后的标记物的可行性。另取正常脑组织标本20例作为对照。结果：30例脑膜瘤中，29例脑膜瘤均未测到端粒酶活性，1例端粒酶阳性（阳性率3．3％），ΔA＝0．237；全组ΔA平均值＝0．049，15例恶性脑膜瘤中14例呈端粒酶阳性（93％），ΔA＝1．237－2．516；1例端粒酶阴性，ΔA＝0．076，全组ΔA平均值＝1．630。16例复发性脑膜瘤端粒酶均阳性（100％），ΔA＝1．034－1．478，平均1．255，脑膜瘤和复发性脑膜瘤，脑膜瘤和恶性脑膜瘤的端粒酶的阳性率和酶活性表达强度方面差异明显（P分别为＜0．001，＜0．01和＜0．0005，＜0．01），20例正常脑组织中未检测到端粒酶活性。结论：端粒酶活性的激活在恶性脑膜瘤和复发性脑膜瘤中是较常见的现象。端粒酶作为肿瘤标志物，在脑膜瘤的良恶性鉴别，恶性程度评估，预后预测等方面具有重要的意义。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞生长的影响

目的检测针对端粒酶RNA的反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞株生长的影响。方法用PCR—ELISA法检测细胞内端粒酶活性。采用MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。采用电镜观察细胞超微结构的改变。结果端粒酶RNA反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶。结论端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌HNE-1细胞的生长。     

Expression of telomerase activity， telomerase RNA component and telomerase catalytic subunit gene in lung cancer

目的：探讨hTR、hTERT与端粒酶活性的表达是否与肺癌的发生发展有关,深入了解端粒酶基因对端粒酶活性的调控是在基因水平还是在转录水平。方法：采用TRAP-PCR和RT-PCR方法分别检测68例肺癌组织、68例癌旁组织端粒酶活性、端粒酶基因hTR和hTERT的表达。结果：68例肺癌组织中端粒酶阳性率79%,HTR阳性率为98.5％,HTERT阳性率为91.2%。68例癌旁组织中,无一例表达端粒酶阳性,且大多数癌旁组织均表达HTR(91.2%),而HTERT在68例癌旁组织中仅7例为阳性。结论：肺癌组织中表达高频率的端粒酶活性而癌旁组织无一例表达端粒酶阳性说明了端粒酶的活性是肺癌发生发展所必须的。与HTR相比,HTERT同端粒酶具有更市制一致性,其一致率为88.9％。HTR与HTERT可能是在转录后或翻译水平对端粒酶进行调控的。     

胃癌组织端粒酶活性与催化亚基hTERT表达的关系

研究胃癌、胃黏膜肠化生及正常黏膜组织端粒酶活性与人端粒酶催化亚基(hTERT)表达的相关性及端粒酶激活在胃癌发生中的作用.方法:通过端粒重复序列扩增(TRAP)和逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)方法测定3种胃癌细胞株、26例胃癌、10例胃黏膜肠化生和36例正常胃黏膜组织标本端粒酶活性和hTERT表达.结果:3种胃癌细胞株、24例胃癌组织有端粒酶活性;4例肠化生端粒酶活性较弱;36例正常胃黏膜标本未测到端粒酶活性.hTERT在26例胃癌组织、5例肠化胃黏膜中表达;正常胃黏膜无表达.端粒酶活性、hTERT表达与肿瘤的分期和病理分级无关.结论:hTERT在肿瘤形成的早期阶段表达,端粒酶的激活是胃癌形成的关键步骤.     

宫颈病变与端粒酶及端粒酶基因

宫颈癌是妇产科常见的恶性肿瘤之一,在宫颈癌的发生过程中,人乳头瘤病毒（HPV）感染是重要的环境致瘤因素,但由于HPV并不能单独致瘤,细胞内遗传性因素的改变可能具有更重要的意义。端粒酶基因是近年提出的遗传易感因素之一,本文就端粒酶基因相关研究进展进行综述。     

鼻咽癌端粒酶各组分基因表达与端粒酶活性的关系

目的明确鼻咽癌组织端粒酶各组分(hTR、TP1、hTERT)基因表达及其与端粒酶活性关系.方法采用RT-PCR和PCR-ELISA方法分别检测同一标本,包括鼻咽癌(NPC)组织、慢性鼻咽炎(CINE)组织端粒酶各组分基因表达和端粒酶活性.结果(1)43例NPC组织中,38例(88%)可检测到hTERTmRNA表达;16例CINE组织中均未能检测到hTERTmRNA表达,hTETRmRNA在NPC组织中表达显著高于CINE组织中hTERTmRNA的表达(P<0.05).(2)43例NPC组织中,39例(90.7%)表达hTR,38例(88%)表达TP1mRNA;16例CINE组织中,14例(87.5%)分别表达hTR和TP1mRNA.hTR或TP1mRNA在NPC和CINE组织中表达比较差异无显著意义(P>0.05).(3)NPC组织端粒酶活性(86%)显著高于CINE组织端粒酶的活性(0%)(P<0.05).(4)hTERTmRNA表达与端粒酶活性显著相关(P<0.05);而hTR或TP1mRNA的表达与端粒酶活性无关(P>0.05).(5)端粒酶各组分基因表达均与NPC临床分期和有无颈淋巴结转移无关(P>0.05).结论hTR和TP1mRNA在NPC和CINE组织中均高阳性率表达,并与端粒酶活性无关,hTERTmRNA仅在NPC组织中表达,与端粒酶活性呈高度一致性,提示hTERT在端粒酶活性调节中可能起决定性作用,对hTERTmRNA检测可以作为NPC临床诊断指标之一.     

端粒酶的义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒粒酶反义寡核苷酸对肺癌细胞端粒酶活性的抑制作用.方法脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸转染A549肺腺癌细胞株,采用TRAP-PCR-ELIsA法半定量检测转染后肺腺癌细胞端粒酶活性,观察它们的变化结果端粒酶反义寡核苷酸转染A549细胞72h后,A549细胞端粒酶活性明显下调.结论端粒酶反义寡核苷酸可以有效抑制肺腺癌细胞端粒酶活性.     

端粒酶反义寡核苷酸体外抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)对宫颈癌Hela细胞端粒酶活性的影响.方法针对端粒酶RNA的ASON作用于Hela细胞,同时以加有转染剂FuGENE6者为对照组,计数连续作用1,3,5 d后的细胞数.TRAP方法测定端粒酶的活性.结果ASON组与随机引物及空白对照组比较,端粒酶活性降低,细胞的增殖速度延缓;有转染剂FuGENE6的ASON组的细胞增殖数目和端粒酶活性显著低于无FuGENE6的ASON组;细胞对有FuGENE6的ASON的摄取显著多于单纯的ASON.在FuGENE6的介导下,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关.结论针对端粒酶RNA的ASON能抑制Hela细胞的端粒酶活性,转染剂FuGENE6可以增强端粒酶ASON对宫颈癌细胞端粒酶活性的抑制作用.     

影响端粒酶活性的相关因素

端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖蛋白酶，已发现其活性与端粒和端粒酶的结构成分。细胞分化、细胞周期，细胞内外因子等因素相关，本文总结近年来端粒酶活性相关因素方面的进展。     

益气解毒颗粒对大鼠鼻咽癌变中端粒酶和端粒酶RNA表达的影响

目的 :探讨中药复方益气解毒颗粒防治鼻咽癌的作用机制。方法 :用二亚硝基哌嗪 (DNP)诱导大鼠鼻咽癌动物模型 ,观察益气解毒颗粒对大鼠鼻咽癌变中病理形态改变以及端粒酶和端粒酶RNA表达的影响。定期分批处死大鼠 ,取鼻咽组织作病理学检测 ,用PCR -ELISA和NestedRT -PCR法检测大鼠鼻咽组织端粒酶的活性和端粒酶RNA的表达。结果 :灌服益气解毒颗粒大鼠鼻咽癌发癌率 0 (0 /5 ) ,明显低于盐水对照组 80 % (4/5 ) (包括原位癌和浸润癌 ) ;其端粒酶活性为 0 2 4± 0 11,也明显低于对照组 0 93± 0 2 3(P <0 .0 5 ) ;维甲酸组发病率为 0 (0 /5 ) ,端粒酶活性为 0 2 7± 0 13;各组端粒酶RNA均为阳性。维甲酸组大鼠于 2 15～ 30 8d间逐步死亡。结论 :益气解毒颗粒能阻断DNP诱导大鼠鼻咽癌变 ,且抑制鼻咽上皮癌变细胞端粒酶的激活