siRNA阻断NF-κB信号通路联合5-FU对食管鳞癌细胞凋亡的促进作用

目的: 利用RNAi技术特异性的抑制NF-κB亚单位p65的表达,观察其对p65表达的抑制作用及联合5-FU对食管鳞癌细胞Eca109和EC9706的影响.方法:将终浓度为50 nmol/L的p65 siRNA转染到食管鳞癌细胞EC9706和Eca109中,通过RTPCR检测0、24、48和72 h时段p65 mRNA的表达水平.Western blotting法检测p65和Bcl-2蛋白表达,Annexin V/PI复染结合流式细胞仪检测细胞凋亡,显微镜下观察p65 siRNA与5-FU单独或联合应用对食管鳞癌细胞形态学特性的影响.结果:EC9706和Eca109细胞转染p65 siRNA 24、48和72 h后,p65 mRNA的表达水平随时间的延长逐渐下调,在72 h的阻断效率最为明显,与0 h相比,差异有显著性(0.12±0.01 vs 0.28±0.05,0.1±0.01 vs 0.38±0.04,均P<0.05),转染72 h后,p65和Bcl-2蛋白表达水平下调.EC9706和Eca109转染p65siRNA后,细胞凋亡指数明显升高(6.65%±0.27% vs 2.03%±0.08%,8.03%±0.06% vs 2.66%±0.25%,均P<0.05);p65 siRNA转染72 h后,EC9706和Eca109细胞增殖较慢;当p65 siRNA与5-FU联合作用,细胞增殖明显受到抑制.结论:p65 siRNA可阻断NF-κB信号通路,下调NF-κB下游基因中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,表明活化的NF-κB信号通路可成为食管鳞癌基因治疗中一个重要的分子靶点.     

半乳糖凝集素1表达下调对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响及机制

目的观察半乳糖凝集素1(Galectin-1)表达下调对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响及机制。方法利用脂质体2000转染食管鳞癌EC9706细胞。细胞分为3组,即未处理组、对照siRNA组和Galectin-1 siRNA组。采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学检测各组食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;运用流式细胞术分析Galectin-1表达下调对食管鳞癌细胞周期的影响,采用Boyden小室分析Galectin-1表达下调对食管鳞癌细胞迁移能力的影响。采用半定量RT-PCR和Western印迹方法检测Galectin-1表达下调对细胞周期相关因子(cdk2、p27和p21)以及细胞迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)-14 mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果 Galectin-1 siRNA组与未处理组和对照siRNA组相比,Galectin-1 siRNA组中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达均显著下调(P0.05);细胞周期在G0/G1期的细胞数呈显著升高(P0.05);细胞的穿膜数明显下降。Galectin-1 siRNA组中p27和p21 mRNA和蛋白的表达均显著高于未处理组和对照siRNA组(均P0.05),而cdk2和MMP-14 mRNA和蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组(均P0.05)。结论 Galectin-1 siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;Galectin-1表达下调能明显抑制食管癌EC9706细胞周期静止在G0/G1期,这可能与p21和p27表达的升高及cdk2表达的下调密切相关;并能降低食管鳞癌EC9706细胞的迁移,这可能与MMP-14表达的下调有关。     

p21WAF1基因对人食管鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨p21WAF1( p21)基因转染对食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖的影响.方法:根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组.p21转染组:用脂质体Lipofectamine2000介导将pCDNA3.1(+)- p21质粒转染入EC109细胞; 空载体转染组:同样方法将pCDNA3.1(+)-neo质粒转染入EC109细胞; 未转染组:未转染的EC109细胞.应用RTPCR、Western blot分别检测p21基因mRNA、P21蛋白变化; 流式细胞仪分析细胞周期变化,应用MTT、流式细胞仪和透射电镜检测转染外源p21基因对EC109细胞增殖和凋亡的影响.结果:p21转染细胞中p21 mRNA和P21蛋白高表达; p21转染组EC109细胞生长速度低于空载体组和未转染组; 流式细胞仪观察到P21蛋白高表达使EC109细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组(63.120%±2.893% vs 41.380%±6.536%,42.173%±5.301%,均P<0.01),S期比例显著低于空载体组和未转染组(18.923%±3.084%vs 22.573%±5.463%,26.867%±2.922%,均P<0.01),并出现亚G1峰(凋亡峰).透射电镜亦发现p21转染组发生细胞凋亡.结论:p21基因转染可以抑制人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡.     

siRNA沉默TPX2基因对食管癌细胞EC9706的增殖和TPX2基因表达的影响

目的:研究TPX2基因特异性小干扰RNA(small RNA interference,siRNA)对食管鳞癌EC9706细胞基因表达的抑制作用及对食管癌细胞生长的影响.方法:以食管鳞癌EC9706细胞为研究对象,利用Lipofectamine2000介导TPX2 siRNA分组转染EC9706细胞24,48,72,96 h(实验组),并设立阴性对照组和空白对照组.RT-PCR检测siRNA转染前后TPX2 mRNA的表达水平的变化:Western blot检测转染前后EC9706细胞中TPX2蛋白表达水平的变化;MTT法检测瞬时转染TPX2 siRNA对EC9706细胞增殖的影响.结果:导入有效siRNA后,PT-PCR及Western blot结果显示.TPX2 siRNA可使EC9706细胞中TPX2 mRNA水平及蛋白表达水平下降,至72 h时表达量最低,与空白对照组相比分别为0.31±0.08和0.39±0.12,差异有统计学意义(P<0.05);MTT实验显示细胞的生长增殖受到明显抑制,与对照组相比抑制率可达35.4%(P<0.05).结论:siRNA可以有效抑制EC9706细胞中TPX2的表达,并降低EC9706细胞的增殖能力.     

半乳糖凝集素1表达下调对食管鳞癌细胞增殖的影响

目的探索半乳糖凝集素1(Galectin-1)表达下调对食管鳞癌细胞增殖的影响。方法利用细胞转染技术将Galectin-1 siRNA和对照siRNA转染到食管鳞癌EC9706细胞中,细胞分为三组,即未处理组、对照siRNA组和Galectin-1 siRNA组,利用RT-PCR、Western印迹分析Galectin-1基因和蛋白的变化;利用CCK-8试剂盒检测下调Galectin-1的表达对细胞增殖的影响。结果 Galectin-1 siRNA组与未处理组和对照siRNA组相比,Galectin-1 mRNA及蛋白表达明显降低。Galectin-1 siRNA组中的EC9706细胞的增殖明显受到抑制(P<0.05)。结论转染Galectin-1 siRNA后能明显下调食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;Galectin-1表达的下调能明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖。     

孕烷X受体抗食管癌EC9706细胞凋亡的作用机制

目的 研究孕烷X受体(PXR)抗食管癌EC9706细胞凋亡的作用机制.方法 使用利福平活化食管鳞癌EC9706细胞中的PXR,阿霉素(ADM)诱导高表达PXR的EC9706细胞凋亡,采用流式细胞仪观察细胞的增殖周期,MTT法观察细胞凋亡率,Western印迹和免疫组化法检测Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白表达情况.结果 ADM处理可以明显抑制细胞生长;使细胞呈明显凋亡改变;利福平诱导PXR高表达的EC9706细胞凋亡减少,抑制Caspase-3的蛋白水平,上调蛋白Bcl-2的表达,表明PXR在抗食管鳞癌细胞凋亡中发挥重要的作用.结论 PXR可能是通过降低Caspase-3和升高Bcl-2蛋白的表达抑制食管癌细胞EC9706的凋亡.     

TGF-β1反义寡核苷酸对食管鳞癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响

目的:探讨转染TGF-β1反义寡核苷酸(TGFβ1-ASODN) 对食管鳞癌细胞EC9706 增殖及凋亡的影响. 方法:将化学合成的TGF-β1-ASODN 转染食管鳞癌细胞EC9706,采用RT-PCR 和流式细胞术检测转染效率;观察TGF-β1-ASODN 转染后细胞形态学的改变;采用MTT 和流式细胞术检测TGF-β1-ASODN 转染后对细胞增殖及凋亡的影响. 结果:转染TGF -β1-ASODN 可有效抑制EC9706 细胞中TGF-β1的活性,其mRNA 及蛋白的表达均明显低于转染前的水平(0.25 ±0.07 vs 0.43±0.09;35.35% vs 41.38%,均P<0.05);TGF-β1-ASODN 可明显促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,转染后细胞生长拥挤失去正常形态,细胞存活率高于转染前(109.4% vs 100.0%,P <0.05),G1期、S期细胞百分比低于转染前,G2期细胞百分比则高于转染前,细胞凋亡率低于转染前(62.9% vs 66.5%;21.3% vs 23.7%;14.8% vs 9.8%;0.69% vs 0.96%,均P<0.05). 结论:TGF -β1-ASODN 可高效特异地将TGF-β1基因沉默,并解除其抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡的作用.     

PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca 109中的功能

目的:探讨PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca109中的作用.方法:用脂质体介导siRNA瞬时转染Ecal09细胞,转染细胞分为3组:空白对照组(正常培养的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列的siRNA)及实验组(转染PIK3CA-siRNA).运用Western blot技术检测PIK3CA基因干扰后蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和细胞划痕实验检测PIK3CA干扰后Eca109细胞增殖和迁移能力的改变;流式细胞仪检测PIK3CA干扰后细胞周期和凋亡率的变化.结果:干扰PIK3CA基因表达后,其蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组显著性降低(P0.05).MTT实验和划痕实验显示干扰PIK3CA的表达后,Eca109细胞增殖受到显著性抑制(P0.05),迁移能力显著性降低(P0.05).流式细胞仪检测下调P I K3C A的表达后细胞周期阻滞在细胞分裂的S期(P0.05),且使细胞凋亡率显著性增加(P0.05).结论:PIK3CA基因能够促进Eca109细胞的增殖和迁移能力,并具有抗凋亡作用.PIK3CA基因有望成为食管鳞癌治疗的潜在靶点.     

p15INK4B和p21WAF1基因联合转染对人食管鳞癌细胞系EC109的协同抑制作用

目的:探讨p15INK4B和p21WAF1基因联合转染对人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖和凋亡的影响.方法:脂质体介导PcDNA3.1(+)-p15和pcDNA3.1(+)-p21转染EC109细胞,稳定筛选后用RT-PCR检测转染细胞p15与p21基因mRNA表达,Western blot检测转染细胞P15和P21蛋白的表达.用MTT法和透射电镜检测p15和p21基因分别及联合转染对EC109细胞增殖与凋亡的影响,流式细胞仪检测EC109细胞周期分布与凋亡率.结果:p15和p21转染组EC109细胞生长速度低于空载体组与未转染组,联合转染组与二者单独转染组相比.亦明显抑制EC109细胞体外生长速度.p15和p21转染组EC109细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组,S期则显著降低(G1期:60.52%±3.75%,63.12%±2.89% vs 42.17%±5.30%.41.38%±6.54%;S期:22.67%±1.25%,17.96%±2.03% vs 30.96%±3.33%,36.05%±1.78%,均P<0.01),并出现凋亡峰,透射电镜亦发现p15和p21转染组发生细胞凋亡,联合转染组发生更为明显的G1/S阻滞,G1期比例显著升高、S期比例明显降低(G1期:72.83%±2.31% vs60.52%±3.75%,63.12%±2.89%:S期:13.59%±2.59% vs 22.67%±1.25%,17.96%±2.03%.均P<0.05),凋亡率明显升高(21.21%±1.78%vs 4.32±1.74%,10.83%±2.40%,均P<0.01).结论:p15和p21基因联合转染在体外可以进一步增强对人食管鳞癌EC109细胞的抑制与诱导凋亡作用.     

丹皮酚联合5-FU对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)单独及联合5-Fu对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法:采用6种浓度的Pae(7.81、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00 mg/L)、3种浓度的5-FU(12.50、25.00、50.00 mg/L)及Pae(31.25 mg/L)和5-FU(12.50 mg/L)联合分别处理EC9706细胞24、48、72 h.同时设对照组(细胞不做处理),采用MTT法检测各个时间段细胞的增殖情况:采用流式细胞术检测4种浓度的Pae(31-25、62.50、125.00、250.00 mg/L)处理EC9706细胞72 h后细胞周期的变化:倒置显微镜下观察各Pae组细胞各时间段形态学变化,HE染色光镜下观察凋亡细胞:采用免疫细胞化学法检测经Pae(31.25 mg/L)、5-FU(12.50mg/L)单独和联合作用48 h后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果:Pae、5-FU可明显抑制EC9706细胞增殖,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05),Pae与5-FU联合用药比单用Pae或5.FU抑制效果更明显(P<0.05);Pae作用后EC9706细胞中G0/G1期和G2/M期细胞比例下降、S期细胞比例上升(Pae 125.00 mg/L组:G0/G1期21.18%±2.28% vs 62.17%±5.23%、G2/M期0.76%±0.54% vs 9.92%±3.10%、S期78.06%±2.82% vs 27.91%±2.13%,均P<0.05):HE染色光镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变:Pae、5-FU可下调EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达,同时增强EC9706细胞中Bax蛋白的表达,联合用药组较单药组作用更为明显(2.21±0.14 vs 5.67±0.30,4.22±0.34;8.55±0.33 vs 3.90±0.27,6.28±0.26,均P<0.05).结论:Pae可明显抑制人食管癌EC9706细胞的增殖.促进其凋亡,Pae联合5-FU作用更为明显.     

通过沉默GOLPH3抑制PI3K/AKT信号通路调节食管癌氧化应激与细胞凋亡的机制研究

目的 分析GOLPH3对食管癌氧化应激与细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 利用qRT-PCR和Western blotting实验分析食管癌组织和癌旁组织中GOLPH3 mRNA和蛋白表达水平，培养EC9706细胞，将GOLPH3 siRNA与siRNA NC、pcDNA-GOLPH3与pcDNA-3.1(+)分别转染细胞，利用丙二醛试剂盒测定MDA含量，超氧化物歧化酶试剂盒测定SOD活力，谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒测定GSH-Px活力，过氧化氢酶试剂盒测定CAT活力，Western blotting实验分析EC9706细胞内Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达，流式细胞仪分析EC9706细胞凋亡率。PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002作用EC9706细胞后，分析细胞氧化应激、细胞活力与细胞凋亡率。结果 食管癌组织中GOLPH3基因与蛋白表达显著上调(P<0.01)。GOLPH3表达下调后，EC9706细胞活力、SOD、CAT、GSH-Px活力、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值与Bcl-2表达显著下调，细胞凋亡率、MDA...     

参附注射液对大鼠肝缺血再灌注NF-kappaB和PGI2/TXA2的影响

目的: 探讨参附注射液对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其机制. 方法: 24只Wistar大鼠随机分为IR组和SF组. SF组腹腔注射参附注射液, 10 mL/kg. IR组大鼠给予相同剂量的生理盐水. 两组均采用Pringle's法阻断肝门缺血15 min再灌注1 h、3 h, 测定血浆血栓素B2(thromboxane B2, TXB2)、6-酮-前列腺素F1alpha(6-keto-PGF1alpha)、肝组织NF-kappaB p65表达和肝组织匀浆GSH含量, 及观察肝组织形态学改变. 结果: 再灌注3 h SF组血浆TXB2低于IR组(118.7±19.1 vs 386.3±282.7, P>0.05), 6-keto-PGF1alpha高于IR组(1081.7±282.7 vs 960.0±209.9, P>0.05), 二者比值TXB2/6-keto-PGF1alpha低于IR组(0.11±0.03 vs 0.39±0.24, P<0.05); 再灌注1 h SF组NF-kappaB p65表达低于IR组(59.33%±11.06% vs 75.83%±11.46%, P<0.05); 而GSH稍高于IR组(47.59±19.07 vs 37.32±4.71, P>0.05). SF组肝实质细胞和线粒体损伤明显减轻. 结论: 参附注射液对肝缺血再灌注损伤有保护作用, 其机制与降低TXA2/PGI2比值, 抑制NF-kappaB活化有关.     

血管内皮钙黏附素下调对食管鳞癌细胞血管生成拟态、增殖和凋亡的影响

背景：血管内皮钙黏附素（VE-cad）作为血管生成拟态的重要调控分子在多种高侵袭性肿瘤中均存在表达,参与肿瘤的发生、发展过程。前期研究发现食管鳞癌细胞中亦存在VE—cad表达。目的：探讨微小RNA（miRNA）干扰技术下调VE-cad对食管鳞癌细胞血管生成拟态形成、细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法：将已成功构建的VE—cadmiRNA干扰质粒稳定转染Eca109、TE13细胞,同时设置阴性对照组（转染空质粒）和空白对照组（未转染）。荧光显微镜观察单克隆转染效率,三维培养观察细胞管腔样结构形成的能力,RT—PCR和蛋白质印迹法分别检测VE-cad、EphA2、LN5γ2 mRNA和蛋白表达,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡。结果：荧光显微镜显示Eca109、TE13细胞稳定转染效率均达90％以上。与阴性对照组和空白对照组相比,干扰组细胞管腔样结构数目明显减少（P〈0．01）,VE—cad、EphA2、LN5γ2mRNA和蛋白表达明显受抑（P〈0．01）,细胞增殖能力明显下降（P〈0．05）,凋亡率明显增高（P〈0．05）。结论：miRNA干扰技术能有效抑制食管鳞癌细胞Eca109、TE13的VE-cad表达。VE—cad通过下调EphA2和LN5γ2表达抑制血管生成拟态的体外形成,并影响细胞增殖和凋亡。VE—cad可能成为食管鳞癌分子靶向治疗的新靶点。     

氧化苦参碱对实验性结肠炎大鼠肠黏膜细胞因子和核因子-κB p65表达的影响

目的: 观察氧化苦参碱注射液对大鼠实验性结肠炎的治疗效果, 探讨其作用机制. 方法: 将40只SD大鼠随机分为4组: 正常对照组、模型组、美沙拉嗪组和氧化苦参碱(OMT)组, 每组10只. 正常对照组未行造模, 其余3组大鼠均采用TNBS造模. 模型组给予生理盐水肌注, 美沙拉嗪组给予美沙拉嗪混悬液灌胃, 氧化苦参碱组给予氧化苦参碱注射液肌注. 治疗15 d后观察大鼠的腹泻、便血症状和结肠病理组织学改变, 用ELISA法检测结肠黏膜组织IL-2、IL-10的变化, 并用免疫组化技术检测大鼠结肠黏膜核因子(NF)-kappaB p65的 表达. 结果: OMT组大鼠腹泻、黏液脓血便症状得到较快控制, 大鼠黏膜组织损伤显著改善. 与模型组比较, OMT组IL-2减少(102.93±21.10 ng/L vs 231.48±40.78 ng/L, P<0.05), IL-10增多(50.13±1.40 ng/L vs 18.64±0.65 ng/L, P<0.05), NF-kappaB p65显著降低(16.02%±7.27% vs 43.05%±13.80%, P<0.01). 与正常组相比, 模型组结肠黏膜IL-2升高, IL-10减少, NF-kappaB p65表达增多, 差异均有显著性意义(102.93±21.10 ng/L vs 30.44±12.03 ng/L, 50.13±1.40 ng/L vs 58.92±3.70 ng/L, 16.02%±7.27% vs 9.57%±4.31%, 均P<0.01). OMT组与美沙拉嗪组比较, IL-2、IL-10和NF-kappaB p65的表达无显著性差异. 结论: 氧化苦参碱注射液治疗大鼠实验性结肠炎有明显效果, 其作用机制可能是通过减少IL-2的生成、促进IL-10分泌和抑制NF-kappaB p65的激活发挥治疗作用.     

Trop-2表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖和细胞迁移的影响

目的:研究肿瘤相关钙信号传导蛋白2(tumorassociated calcium signal transducer-2,Trop-2)表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖和细胞迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法:将Trop-2 siRNA和对照siRNA转染食管鳞癌EC9706细胞,利用实时荧光定量PCR和...     

siRNA干扰PDCD4表达对人食管鳞状细胞癌细胞株Eca109的影响

背景:研究发现PDCD4是一种新的肿瘤抑制基因,其表达与多种肿瘤的恶性转化相关。然而,PDCD4在食管鳞状细胞癌中的作用尚未完全明确。目的:探讨沉默PDCD4表达对食管鳞状细胞癌细胞株Eca109体外增殖、迁移、凋亡能力的影响。方法:选择未转染的Eca109细胞(空白对照组)、转染无义序列的Eca109细胞(阴性对照组)和转染PDCD4 siRNA的Eca109细胞(si-PDCD4组),采用蛋白质印迹法检测PDCD4蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,平板单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,si-PDCD4组细胞中PDCD4蛋白表达降低(P0.05),细胞增殖能力增强(P0.05),细胞克隆形成数目增多(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05),细胞迁移能力增强(P0.05)。结论:PDCD4 siRNA可在体外促进食管鳞状细胞癌Eca109细胞的增殖、迁移,并抑制细胞凋亡,为食管鳞状细胞癌的诊治提供了新的实验依据。     

RNA干扰沉默HDAC1基因对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 研究下调HDAC1的表达对大肠癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响. 方法: 设计合成HDAC1的特异性shRNA, 将其插入至pSilencer载体中, 并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染SW480细胞株. 用RT-PCR和Western blot检测shRNA对细胞内HDAC1基因表达的影响, 同时采用Western blot对细胞周期相关基因进行检测. 采用MTT法检测生长抑制作用. 运用流式细胞术检测细胞的凋亡情况和细胞周期分布. 结果: 成功构建和筛选出HDAC1特异性的shRNA质粒载体, 与空白对照组相比, 转染HDAC1-shRNA的大肠癌细胞HDAC1 mRNA蛋白质表达水平明显下降(30.4%±4.5% vs 64.6%±4.4%, P<0.01; 27.4%±4.5% vs 58.1%±3.3%, P<0.01), p21(/WAF-1/CIP-1)表达增加(97.4%±2.6% vs 62.6%±3.4%, P<0.01), CdK2和Cyclin E蛋白下降(CdK2: 27.7%±6.0% vs 42.6%±4.1%, P<0.01; Cyclin E: 42.0%±8.5% vs 82.8%±3.7%, P<0.01), 细胞生长抑制率增加(24 h: 35.9%±4.9% vs 1.2%±0.6%, P<0.01; 48 h: 47.5%±7.0% vs 1.3%±0.6%, P<0.01; 72 h: 45.7%±6.2% vs 1.0%±0.5%, P<0.01; 96 h: 48.2%±4.7% vs 1.2%±0.7%, P<0.01), 凋亡率明显增加(31.3%±2.8% vs 3.9%±0.7%, P<0.01), G0/G1期和G2/M期细胞比例增加(G0/G1: 64.5%±0.9% vs 57.8%±1.8%, P<0.01; G2/M: 17.4%±1.3% vs 14.5%±0.6%, P<0.05), S期细胞比例相应下降(17.5%±1.0% vs 27.7%±1.5%, P<0.01). 结论: HDAC1特异的shRNA能够有效下调HDAC1基因, 诱导大肠癌细胞发生凋亡和细胞周期阻滞, 从而抑制细胞的增殖.     

拓扑替康对食管癌EC9706细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨拓扑替康(TPT)对食管鳞癌细胞株(EC9706)自噬和凋亡的影响。方法使用20 mg/L TPT和(或)5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理人食管鳞癌细胞EC9706,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TPT对食管癌EC9706细胞生长的抑制作用,单丹磺酰尸胺(MDC)法检测TPT对EC9706细胞自噬水平的影响,采用流式细胞仪技术检测TPT对EC9706细胞凋亡的影响,Western印迹测定TPT对EC9706细胞自噬相关蛋白Beclin1和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。结果流式细胞仪检测结果显示,TPT作用于EC9706细胞48 h后,TPT组、3-MA组及TPT+3-MA组细胞凋亡结率分别为(32.45±2.79)%、(7.58±1.12)%及(48.69±3.51)%。MDC染色结果显示TPT能够诱导细胞内自噬囊泡的出现,而3-MA能显著抑制这一现象。Western印迹结果显示对照组、TPT组、3-MA组及TPT+3-MA组Beclin1和Caspase-3蛋白的相对灰度值分别为0.62±0.06、0.91±0.12、0.47±0.04、1.04±0.08和0.54±0.05、0.84±0.11、0.42±0.03、0.71±0.07。结论 TPT康可以诱导食管鳞癌细胞自噬和凋亡的发生,而3-MA能够通过抑制自噬上调Caspase-3的表达增强对食管癌细胞的杀伤作用。     

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-kappaB p65的影响

目的: 比较乌梅丸与西药柳氮磺胺吡啶SASP组对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-kappaB p65疗效的大小, 并分析其作用机制. 方法: 应用2, 4-二硝基氯苯(DNCB)免疫加醋酸局部灌肠法建立UC大鼠模型, 将56只健康SD大鼠(雌雄各半), 按雌雄随机分4组, 分别为乌梅丸组、SASP组、模型组和正常组, 分别观察治疗后大鼠结肠黏膜组织匀浆NF-kappaB p65的变化. 结果: 在正常结肠组织中NF-kappaB p65无或仅有弱阳性表达, 模型组结肠黏膜组织NF-kappaB p65阳性细胞表达率明显高于正常组(45.67%±4.25% vs 10.45%±5.20%, P<0.05), 乌梅丸(26.32%±9.65%)和SASP(31.23%±5.18%)组阳性细胞率则明显低于模型组, 乌梅丸组阳性细胞率较SASP组更低. 结论: NF-kappaB与UC发病关系密切, 乌梅丸可能通过抑制NF-kappaB p65活性调节免疫功能达到治疗的目的.     

食管鳞癌组织中MMP-2和E-cadherin的表达及其意义

目的探讨食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706中MMP-2和E—cadherin的表达及其与食管鳞癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化S-P法检测100例食管鳞癌组织及食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706中MMP-2和E—cadherin蛋白的表达,应用RT—PCR技术检测两株细胞系中MMP-2mRNA和E—cadherinmR—NA的表达。结果食管鳞癌组织中MMP-2蛋白阳性率明显高于正常黏膜组织（P〈0．01）,且与癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关（P〈0．05）;E—cadhefin蛋白在食管鳞癌组织中阳性率明显低于正常黏膜组织（P〈0．01）,与癌组织分化程度、有无淋巴结转移呈负相关（P〈0．05）,与浸润深度无明显相关性（P〉0．05）;MMP-2和E—cadherin在食管鳞癌中的表达呈负相关（P〈0．01）;细胞系中MMP-2mRNA和E—cadherinmRNA的表达有显著性差异（P〈0．01）。结论食管鳞癌组织中MMP-2呈高表达;E—cadherin呈低表达,二者对食管癌的发生、浸润转移具有相反的调节作用;联合检测其变化可更准确预测食管癌的恶性生物学行为。