肿瘤成纤维细胞通过外泌体miR-21促进膀胱癌细胞侵袭转移

目的:探讨外泌体miR-21参与肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)促进膀胱癌细胞侵袭转移的作用及机制.方法:利用组织块贴壁法分别从膀胱癌和癌旁组织分离CAF和正常成纤维细胞(normal fibroblast,NF),利用荧光实时定量PCR检测膀胱癌组织,CAF、NF...     

成纤维细胞来源外泌体在疾病相关细胞外基质重构中的作用

成纤维细胞是介导组织细胞外基质(ECM)重构的重要细胞类型,外泌体是一种新型胞间通讯方式.近年有证据表明,成纤维细胞来源外泌体参与ECM组成和代谢,并存在自分泌作用,与多种疾病发生发展密切相关.深入研究成纤维细胞来源外泌体对ECM重构的调控作用,有望揭示疾病病因机制及精准治疗靶点.     

胃癌外泌体MiR-221靶向PTEN促进肿瘤相关成纤维细胞的形成

目的:探究胃癌外泌体miR-221对肿瘤相关成纤维细胞的影响及机制.方法:提取并鉴定人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌MGC-803、MKN45细胞分泌的外泌体(GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo),qRT-PCR检测miR-221在GES-1、MGC-803、MKN45及其外泌体中的表达,将1...     

乳腺癌细胞外泌体对肿瘤相关成纤维细胞激活的诱导作用及机制

目的 探讨乳腺癌细胞外泌体对肿瘤相关成纤维细胞激活的诱导作用及机制。方法 (1)将乳腺上皮细胞MCF10A、乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231、PBS分别与成纤维细胞MRC-5共培养;另取上述细胞和PBS,在与MRC-5共培养的同时加入外泌体摄取抑制剂GW4869。检测共培养后MRC-5细胞的迁移能力,细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、 IL-8、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β(TGF-β)、CXC基序趋化因子配体12(CXCL12)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)、Ⅳ型胶原蛋白α1链(COL4A1)的mRNA表达水平。(2)提取MCF10A、MCF-7和MDA-MB-231细胞的外泌体并鉴定,然后将上述细胞外泌体、PBS分别与MRC-5细胞共培养。检测MRC-5细胞的迁移能力,细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、 TGF-β、 CXCL12、COL1A1、COL3A1、COL4A1的mRNA表达水平,以及细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达水平。结果 (1)相较于与PBS或MCF10A细胞共培...     

骨肉瘤细胞外泌体调控JAK2/STAT3信号通路影响成纤维细胞向肿瘤相关成纤维细胞转化

目的 探讨骨肉瘤外泌体对肿瘤相关成纤维细胞转化的影响及机制.方法 提取并鉴定骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63,人成骨细胞hFoB1.19外泌体,将PBS、hFoB1.19、U2-OS、MG-63外泌体与人肺成纤维细胞MRC-5共孵育,CCK8法检测MRC-5增殖能力,Transwell小室法检测MRC-5迁移和侵袭能力...     

肿瘤外泌体来源的miR-126-5p通过抑制NLRC3促进口腔鳞癌细胞的增殖和迁移

目的 探索口腔鳞癌外泌体中miR-126-5p对肿瘤细胞生物学功能的影响.方法 qPCR分析口腔鳞癌组织芯片、临床样本及口腔鳞癌外泌体中miR-126-5p的表达情况;荧光素酶报告基因法确定与miR-126-5p相互作用的分子,qPCR检测外泌体与共孵育后的肿瘤细胞中NOD样受体家族蛋白3(NLRC3)的表达情况;通过...     

肝癌细胞来源的外泌体对正常肝细胞的影响研究

目的:探讨肝癌HepG2细胞系外泌体与正常肝细胞LO2共培养对其增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法:采用外泌体提取试剂盒收集肝癌HepG2细胞外泌体;采用透射电镜和纳米颗粒跟踪分析仪鉴定外泌体形态和粒径分布特征;采用CCK-8、流式细胞术、transwell侵袭和迁移等实验方法,检测外泌体对LO2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁...     

紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p诱导乳腺癌细胞产生耐药表型研究

目的研究紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p对乳腺癌细胞迁移、凋亡和耐药性的影响。方法超速离心法获取外泌体,使用qRT-PCR方法分别检测乳腺癌细胞（SKBR-3）和紫杉醇耐药乳腺癌细胞（SKBR-3/PR）细胞株和外泌体中miR-5585-5p的表达量;通过外泌体共培养技术以及在乳腺癌耐药细胞中转染miR-5585-5p的抑制剂,用Transwell检测其迁移能力,流式细胞术检测其凋亡情况;qRT-PCR和Western blotting检测其耐药指标。结果与SKBR-3相比,miR-5585-5p在耐药细胞SKBR-3/PR细胞株和外泌体中表达均上调（P < 0.01和P < 0.05）;在耐药细胞株中转染miR-5585-5p的抑制剂,Transwell、流式分析等结果显示,与对照相比,抑制剂组的耐药性下降,生物学活性降低（P < 0.01）;耐药细胞源性的外泌体与亲本细胞共培养可使SKBR-3细胞产生耐药表型,增强其迁移能力,抑制其凋亡率（P < 0.01）,而转染抑制剂的耐药细胞分泌的外泌体可减弱这一作用。结论紫杉醇耐药乳腺癌细胞通过外泌体递送高表达的miR-5585-5p至亲本细胞并诱导亲本细胞产生耐药表型,外泌体miR-5585-5p可为乳腺癌耐药治疗提供新的分子靶点,为乳腺癌预后评估提供新的生物标志物。     

miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 探讨miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究.方法 采用脂质体LipofectamineTM 3000将miR-455-3p mimics和miR-455-3p NC转入HCT116结肠癌细胞中,Real-time PCR检测细胞中miR-455-3p表达,MTT法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)、MMP9、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白的表达.结果 与miR-455-3p NC组比较,miR-455-3p mimics组miR-455-3p表达量显著提高(P＜0.01),细胞活力、迁移能力、侵袭能力均显著降低(P＜0.01),MMP2、MMP9、PI3K及p-AKT表达量均显著下调(P＜0.01).结论 miR-455-3p mimics可能通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制HCT116细胞的迁移及侵袭.     

血浆外泌体miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病中的表达及诊断价值

目的 研究miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病血浆外泌体中的表达差异性及其诊断价值。方法 通过生物信息学网站筛选结核病外泌体中具有差异性表达的miRNAs(miR-26a-5p和miR-151a-3p)。再以70例结核病患者(结核病组),58例体检健康者(健康对照组)样本进行临床验证：采用差速离心法提取血浆外泌体,透射电子显微镜,粒径分析,Western blot对其鉴定,采用RT-qPCR检测血浆外泌体中miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病组和对照组中的表达水平,并通过ROC曲线评价二者在结核病中诊断价值。结果 透射电镜、粒径分析、Western blot鉴定到典型的外泌体特性,即成功提取到血浆外泌体。在临床验证中,以内参和外参同时校准,结核组患者血浆外泌体中miR-26a-5p表达水平低于对照组(P<0.000 1),结核组患者血浆外泌体中miR-151a-3p表达水平高于对照组(P<0.000 1),与生物信息学结果一致。作为诊断标记,以内参为基准,血浆外泌体miR-26a-5p、miR-151a-3p鉴别结核病的曲线下面积(AUC)分...     

肿瘤相关成纤维细胞来源外泌体ciRS-7经miR-7/IGF1R轴促进胰腺癌细胞糖酵解

目的：探讨肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）来源外泌体ciRS-7对胰腺癌细胞糖酵解代谢的影响。方法：采用超速离心法提取CAFs外泌体,并通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测外泌体中ciRS-7的表达及胰腺癌细胞糖酵解关键酶mRNA的表达;构建含ciRS-7 野生及突变序列的荧光素酶检测报告质粒,在胰腺癌细胞中验证ciRS-7与miR-7的关系;蛋白质印迹（Western blot）法检测IGF1R/AKT蛋白表达。结果：ciRS-7在胰腺癌相关成纤维细胞的外泌体中表达上调（P ＜0.05）;CAFs释放的外泌体促进胰腺癌细胞糖酵解和增殖（P ＜0.05）;敲降胰腺癌相关成纤维细胞ciRS-7的表达,其外泌体可抑制胰腺癌细胞糖酵解相关基因的表达（P ＜0.05）;ciRS-7在胰腺癌细胞中经miR-7/IGF1R/AKT通路促进癌细胞糖酵解（P ＜0.05）。结论：ciRS-7在胰腺癌相关成纤维细胞的外泌体中高表达,下调ciRS-7具有抑制胰腺癌细胞糖酵解的作用。     

脓毒症患者早期外周血外泌体中miR-1-3p的表达分析

目的 本研究通过提取脓毒症患者与健康人的外周血中的外泌体,并对提取的外泌体中含有miR-1-3p进行荧光定量PCR(qRT-PCR)检测,探讨miR-1-3p与脓毒症关系.方法 纳入2019年1月至8月本院重症医学科脓毒症患者17例,另取9例健康志愿者为对照组.按脓毒症诊疗常规处理,检测血常规、C-反应蛋白、降钙素原(...     

miR-182-5p靶向TRIM52逆转卵巢癌SKOV3细胞对顺铂耐药的机制

目的 研究miR-182-5p靶向三结构域蛋白52(TRIM52)对卵巢癌SKOV3细胞顺铂(CDDP)耐药的影响。方法 采用qRT-PCR法测定卵巢癌SKOV3细胞中miR-182-5p水平。以卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,在细胞中转染miR-182-5p mimics,给予CDDP处理(记为SKOV3/CDDP细胞),采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭,Western blot测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)、C-Caspase-3蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-182-5p和TRIM52 3’UTR端互补结合,使用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将TRIM52过表达载体和miR-182-5p mimics共转染到卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况。结果 卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中miR-182-5p水平低于卵巢癌SKOV3细胞(P<0.001)。miR-182-5p mimics、CDDP和二者联合处理后的卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,细胞凋亡增多...     

海马外泌体中miR-219a-1-3p对神经干细胞向神经元分化的影响

目的：探讨海马外泌体中miR-219a-1-3p对神经干细胞(neural stem cells, NSCs)向神经元分化的影响。方法：切割穹窿海马伞,构建去神经支配海马大鼠模型,分离提取切割组和正常组海马外泌体,与SD大鼠海马NSCs共培养,利用实时定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction, Real-time PCR)、Western Blot和免疫荧光技术检测外泌体在NSCs向神经元分化中的作用;通过RNA-seq方法检测外泌体中表达变化的miRNA,利用Real-time PCR对差异表达的miR-219a-1-3p进行验证,并检测其在成年SD大鼠各组织以及NSCs、星形胶质细胞和神经元中的表达水平。利用miR-219a-1-3p mimic转染NSCs,Real-time PCR、Western Blot和细胞免疫荧光检测miR-219a-1-3p对NSCs向神经元分化的影响。结果：切割组海马组织外泌体可促进NSCs向神经元分化;海马组织外泌体中差异表达的miR-219a-1-3p与RNA-seq结果一致;miR-219a-1-3p在端脑和海马中呈现优势表达;miR-219a-1-3p在NSCs中表达较高,而在星形胶质细胞中表达较低;过表达miR-219a-1-3p可抑制NSCs向神经元分化。结论：海马外泌体促进NSCs向神经元分化可能与miR-219a-1-3p下调有关。     

MEBO对高糖培养的成纤维细胞外泌体分泌的影响

目的 分析美宝湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment, MEBO)对高糖培养的成纤维细胞外泌体分泌的影响,探究MEBO促进糖尿病慢性创面愈合的机制。方法 首先将Wistar大鼠表皮于无菌环境中分离。培养分离后的成纤维细胞,等到第四代,根据课题组前期研究将细胞分成四组,分别为对照组(高糖培养基)、MEBO低浓度组(20 g/L)、MEBO中浓度组(40 g/L)、MEBO高浓度组(80 g/L)。药物干预3天后,收集细胞上清用超滤管浓缩后,用SBI试剂盒提取外泌体,采用Western blotting检测外泌体标记蛋白CD81、TSG101。结果 外泌体标记蛋白CD81、TSG101在MEBO组和对照组中均有表达。MEBO各浓度组外泌体分泌量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),MEBO中浓度组(40 g/L)分泌外泌体最多,与MEBO低浓度组(20 g/L)、MEBO高浓度组(80 g/L)相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 MEBO可以促进高糖培养的成纤维细胞分泌外泌体。     

骨髓间充质干细胞外泌体源性miR-214-3p调控IKBKB基因促进宫颈癌细胞焦亡

目的 探究骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSC）外泌体源性miR-214-3p调控B细胞κ轻肽基因增强子抑制因子激酶β（inhibitor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cell kinase beta,IKBKB）对宫颈癌细胞的影响。方法 采用生物信息学方法分析宫颈癌组织中异常表达的微RNA,最终选择miR-214-3p作为目的基因,并确定其下游靶基因IKBKB;检测宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织中miR-214-3p、IKBKB的表达情况;提取并鉴定BMMSC外泌体,干预外泌体中miR-214-3p的表达水平,构建IKBKB过表达质粒,将改造后的外泌体及质粒分别转染至宫颈癌HeLa细胞,测定转染后不同组别宫颈癌细胞焦亡相关指标。结果 生物信息学和实验检测均发现miR-214-3p在宫颈癌组织和细胞中低表达,而在BMMSC外泌体中高表达,且BMMSC源性外泌体可显著提高宫颈癌细胞中miR-214-3p的表达水平;IKBKB基因是miR-214-3p的下游靶点,在宫颈癌组织和细胞中高表达;高表达miR-214-3p可促进宫颈癌细胞焦亡,过表达IKBKB基因后宫颈癌细胞的焦亡水平显著降低。结论 BMMSC分泌的外泌体通过携带miR-214-3p调控IKBKB促进宫颈癌细胞焦亡。     

LINC00598靶向调控miR-381-3p影响宫颈癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00598通过调控微小RNA-381-3p(miR-381-3p)表达影响宫颈癌细胞生物学行为的分子机制。方法 采用qRT-PCR检测宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa、HCC94和人正常宫颈上皮细胞H8中LINC00598的表达。选取LINC00598表达最高的细胞系,分别转染无意义阴性对照序列(对照组)和LINC00598小分子干扰RNA(siRNA组)。qRT-PCR检测宫颈癌细胞中LINC00598表达。MTT法和Transwell侵袭实验分别检测宫颈癌细胞增殖情况和侵袭情况。DIANA数据库预测LINC00598的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证LINC00598与靶基因的调控关系。qRT-PCR和Western blot法检测LINC00598对靶基因表达的影响。结果 宫颈癌细胞系中LINC00598表达显著高于人正常宫颈上皮细胞H8(P<0.05),LINC00598表达最高的细胞系是HeLa(P<0.01)。对照组和siRNA组LINC00598表达分别为1.05±0.19和0.27±0.04,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,沉默LINC00598表达可显著抑制HeLa细胞增殖(P<0.05)和侵袭(P<0.01)。LINC00598可靶向结合miR-381-3p(P<0.01)。与对照组比较,沉默LINC00598表达可显著促进miR-381-3p的表达(P<0.01),抑制成纤维细胞生长因子7(fibroblast growth factor 7,FGF7)基因的表达(P<0.01)。结论 LINC00598在宫颈癌细胞系中高表达,沉默LINC00598表达能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能是靶向上调miR-381-3p表达实现的。     

外泌体转运miR-324-5p对胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨外泌体转运微小RNA(miR)-324-5p对胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响。方法培养人胃癌细胞系MGC-803并提取外泌体,制备外泌体转运miR-324-5p模拟物(mimic)。细胞分为对照组(细胞不进行处理)、外泌体组(外泌体混悬液)和miR-324-5p mimic组(加入外泌体转运miR-324-5p mimic混悬液),制备移植瘤模型。检测各组摄取外泌体效率。MTT法和流式细胞术检测细胞增殖率和凋亡率,qRT-PCR和Western blotting法检测各组瘤体中miR-324-5p、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA及蛋白的表达。结果外泌体组和miR-324-5p mimic组MGC-803细胞摄取外泌体效率分别为60%和57%。与对照组和外泌体组比较,miR-324-5p mimic组MGC-803细胞增殖率降低,凋亡率增加(P＜0.05);裸鼠移植瘤质量和CyclinD1 mRNA及蛋白降低,抑瘤率、miR-324-5p、p21、LC3 mRNA及蛋白增加(P＜0.05)。结论外泌体转运miR-324-5p能抑制MGC-803细胞增殖和促进MGC-803细胞凋亡,其机制可能是增加移植瘤中p21和LC3水平,降低CyclinD1水平,从而提高抑瘤率,降低移植瘤质量。     

miR-124-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制

观察微小RNA-124-3p（miR-124-3p）对口腔鳞癌（OSCC）HSC2和KON细胞增殖及侵袭的影响,并探讨其可能作用机制。     

巨噬细胞外泌体lncRNA HULC对肝癌细胞迁移、侵袭和转移的影响及其机制

目的：探讨巨噬细胞外泌体长链非编码RNA (lncRNA)肝癌高表达转录本（HULC）在肝细胞癌（HCC）转移中的作用,并阐明其作用机制。方法：分离小鼠骨髓单核细胞,采用佛波酯诱导分化为骨髓源巨噬细胞（BMDM）,并用白细胞介素4 (IL-4)将BMDM诱导分化为M2巨噬细胞,即肿瘤相关巨噬细胞（TAM）。差速离心法收集M2巨噬细胞外泌体（TAM-exos）。在TAM中分别转染lncRNA HULC-siRNA或NC质粒后提取各组TAM分泌的外泌体（lncRNA HULC-siRNA-exos或NC-exos）。将HepG2细胞按照实验目的分为对照组和TAM-exos组;NC-exos组和lncRNA HULCsiRNA-exos组;lncRNA HULC-siRNA-exos组和lncRNA HULC-siRNA-exos+SKL2001组。给予相应处理后,Transwell小室实验检测HepG2细胞的迁移和侵袭细胞数,实时荧光定量PCR (RTqPCR)法检测HepG2细胞中lncRNAHULC表达水平,Westernblotting法检测HepG2细胞中Wnt3A、β-连环蛋白（...