滑膜间充质干细胞外泌体源性miR-376b-3p靶向MYC抑制骨关节炎进展北大核心CSCD

目的:探讨滑膜间充质干细胞(SMSCs)外泌体(exo)通过携带高水平的miR-376b-3p调控MYC对骨关节炎(OA)的作用。方法:IL-1β处理HC-A细胞建立OA损伤模型,分析miR-376b-3p、MYC水平变化。滑膜组织中分离SMSCs及exo,干预miR-376b-3p与MYC表达,CCK-8、流式细胞术和ELISA检测HC-A细胞增殖、凋亡、炎症因子IL-6、TNF-α分泌。结果:与对照组相比,OA组织与细胞中miR-376b-3p表达均下调(均P<0.05)。SMSCs源性exo能够促进软骨细胞增殖,抑制其凋亡,下调IL-6、TNF-α水平,该作用能被miR-376b-3p抑制剂部分抵消(均P<0.05)。MYC被证实是miR-376b-3p的靶基因且能促进OA软骨细胞损伤,对OA损伤的促进作用能被SMSCs源性exo部分抵消(均P<0.05)。结论:SMSCs源性exo携带的miR-376b-3p通过抑制MYC促进软骨细胞增殖,抑制其凋亡和炎症反应,从而抑制OA进展。     

基质细胞衍生因子1诱导骨关节炎软骨细胞的miRNA表达谱分析

背景:骨关节炎是多因素介导的复杂疾病,发病机制尚待挖掘,随着基因层面的不断深入研究,非编码核糖核酸调控作用显现并得以研究。通过检测软骨细胞退变miRNA表达谱变化有助于更好地理解骨软骨细胞退变的分子机制,并为骨关节炎的诊断和治疗开辟新的途径。目的:探讨基质细胞衍生因子1刺激骨关节炎软骨细胞后miRNA表达谱变化,为基因层面延缓关节软骨退变提供实验基础。方法:对10例膝关节骨关节炎患者于全膝关节置换手术过程中截骨后残留的软骨组织进行软骨细胞培养,随机分为实验组与对照组,两组细胞培养基为含体积分数10%胎牛血清及青链霉素双抗的高糖DMEM培养基。实验组培养基中另外加入100μg/L基质细胞衍生因子1,对照组不做任何处理。两组软骨细胞培养48 h后,进行下一步实验用于miRNA芯片筛选和实时定量PCR验证。软骨组织标本取材前皆告知患者并征得同意,该研究符合《医疗机构管理条例》相关要求,获得昆明医科大学第一附属医院伦理委员会批准。结果与结论:miRNA基因芯片初筛共有84个miRNAs发生变化,其中70个miRNAs上调,14个miRNAs下调。通过基因芯片筛选差异变化的miRNA,对变化显著的7个miRNA(miR-146a-5p、miR-124-3p、miR-130a-3p、miR-185-5p、miR-221-3p、miR-126-3p)进行qRT-PCR实验验证,其中miR-146a-5p、miR-124-3p及miR-126-3p的qRT-PCR结果与基因芯片结果一致。结果表明,基质细胞衍生因子1刺激骨关节炎软骨细胞后循环miRNA表达谱出现明显变化,miR-146a-5p、miR-124-3p及miR-126-3p可能与基质细胞衍生因子1刺激骨关节炎SDF-1/CXCR4信号通路反应有关。     

敲低环状RNA WD重复含蛋白1抑制膝骨关节炎软骨细胞增殖并诱导凋亡

背景：环状RNA(circular RNA,circRNA)在多种疾病或肿瘤中发挥着重要作用,近年研究结果发现,膝骨关节炎中circRNA失常表达,并可通过调控微小RNA(miRNA)/mRNA参与疾病进展。目的：探究circ-BRWD1/miR-488-3p/DNMT3A对膝骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法：实时荧光定量PCR检测膝骨关节炎软骨细胞mi R-488-3p、circ-BRWD1、DNMT3A表达。将细胞分为si-NC组、si-circ-BRWD1组、si-circ-BRWD1+anti-miR-NC组、si-circ-BRWD1+anti-miR-488-3p组、vector组、circ-BRWD1组、miR-NC组、miR-488-3p组、miR-488-3p+vector组、miR-488-3p+DNMT3A组、anti-miR-NC组、anti-miR-488-3p组;实时荧光定量PCR检测circ-BRWD1、miR-488-3p、DNMT3A表达,MTT、流式细胞术检测增殖和凋亡,Western blot检测DNMT3A、增殖、凋亡相关蛋白表达;双荧光素...     

长链非编码RNA亚细胞定位和功能的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)的亚细胞定位和其功能息息相关,定位于细胞核时,lncRNA可以维持染色质结构,调控基因转录,参与mRNA的可变剪接;定位于细胞质时参与信号传导、转录后调控、翻译和翻译后修饰;定位于细胞器时协助完成细胞器的功能。lncRNA的亚细胞定位机制与其自身序列、结合蛋白等密切相关。此外通过构建核滞溜载体Snovector、添加胞质定位元件等强制改变lncRNA的亚细胞定位,以及利用APEX2等技术研究lncRNA亚细胞定位和其功能之间的关系,有利于lncRNA疗法的开发。     

大黄素对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响

背景：既往研究显示,沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating-type information regulator 2 homolog 1,SIRT1)-雷帕霉素机械靶蛋白(mechanistic target of rapamycin,mTOR)信号在骨关节炎进展中起重要作用,大黄素对骨关节炎软骨细胞有一定的保护作用。目的：基于SIRT1-mTOR探究大黄素对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响。方法：体外分离培养大鼠软骨细胞,采用10 ng/mL的白细胞介素1β诱导构建体外骨关节炎细胞模型,以CCK-8法测定经0,20,40,80,120,160μmol/L的大黄素处理后的大鼠软骨细胞活力,选出合适大黄素作用浓度。将软骨细胞随机分为对照组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素高剂量组、SIRT1抑制剂EX527组、大黄素高剂量+EX527组,除对照组外其余各组以10 ng/mL的白细胞介素1β诱导构建体外骨关节炎模型,同时以大黄素和EX527分组处理细胞后,用CCK-8法、Edu染色法及流式细胞术分别检测各组细胞增殖与凋亡情况;用试剂盒检测各组细胞活性氧相对含...     

LncRNA ZFAS1作为ceRNA吸附miR-541-3p调控胃癌侵袭转移北大核心CSCD

目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(ZFAS1)作为ceRNA吸附miR-541-3p对胃癌侵袭转移的影响。方法:qRT-PCR对癌旁组织、胃癌组织以及人胃黏膜上皮细胞株、胃癌细胞株中ZFAS1和miR-541-3p的表达进行检测。验证ZFAS1和miR-541-3p的之间的靶向关系。取ZFAS1表达最高的细胞用于后续试验并转染miR-541-3p inhibitor、ZFAS1-shRNA等。MTT检测细胞增殖,Western blot检测侵袭转移相关因子的表达,Transwell测定细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:癌组织中ZFAS1表达增多而miR-541-3p表达减少,ZFAS1能够靶向抑制miR-541的表达(均P<0.05)。抑制ZFAS1表达能够抑制胃癌细胞增殖、侵袭以及侵袭转移相关因子的表达,诱导细胞凋亡,而敲除miR-541-3p后效果则相反(均P<0.05)。ZFAS1-shRNA对胃癌细胞的作用能够被miR-541-3p inhibitor挽救。结论:ZFAS1能够作为ceRNA吸附miR-541-3p,从而抑制胃癌细胞增殖和侵袭转移,促进细胞凋亡。     

circFADS2靶向miR-488-3p对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响

目的：探讨circFADS2对骨关节炎（OA）软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响及分子机制。方法：收集45例OA患者和33例健康体检者静脉血,RT-qPCR检测circFADS2和miR-488-3p表达水平;将软骨细胞分为control组、OA组（10μg/L IL-1β）、OA+si-circFADS2组、OA+si-NC组、OA+miR-488-3p mimic组、OA+miR-NC组、OA+si-circFADS2+miR-488-3p inhibitor组。MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测IL-6、IL-8水平;双荧光素酶报告实验检测circFADS2和miR-488-3p的靶向关系。结果：与健康体检者相比,OA患者血浆中circFADS2表达水平升高,miR-488-3p表达水平降低,且circFADS2和miR-488-3p的表达水平与患者年龄及OA分期显著相关（P<0.05）。抑制circFADS2表达或过表达miR-488-3p,OA细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6、IL-8水平降低（P<0.05）。circFADS2...     

下调lncRNA HEIH负调控miR-214-3p逆转乳腺癌细胞的顺铂耐药性

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HEIH对顺铂(cisplatin,DDP)耐药乳腺癌细胞耐药性的影响及作用机制。方法收集30例乳腺癌患者癌组织和对应的癌旁组织,实时定量聚合酶链反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测组织中lncRNA HEIH和miR-214-3p表达量。体外培养乳腺癌细胞MCF-7及对DDP耐药乳腺癌细胞MCF-7/DDP,qRT-PCR检测细胞中lncRNA HEIH表达量。将MCF-7/DDP细胞分为si-NC组、si-HEIH组、si-HEIH+anti-miR-NC组和si-HEIH+anti-miR-214-3p组,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(B lymphocyte tumor-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(B lymphocyte tumor...     

恶性肿瘤中MNX1反义RNA 1的作用及机制研究进展

<正>长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)是一类广泛存在于细胞核和细胞质内、长度在200 nt以上、缺少开放阅读框、不参与或很少参与蛋白质编码、主要从蛋白编码基因的反义链及间隔区转录出来的RNA^[1-6]。已有大量研究证实,lnc RNA涉及调控多种生物学功能,比如细胞增殖、凋亡及血管生成^[7-9]。表达异常的lnc RNA与诸多肿瘤的发生发展密切相关^[10-11]。     

miR-106a-5p过表达对ACLT诱导的骨关节炎大鼠软骨退变和细胞外基质降解的修复及血清炎症因子的影响

目的:本文旨在探究miR-106a-5p过表达对ACLT诱导的骨关节炎大鼠软骨退变和细胞外基质降解的修复及血清炎症因子的影响.方法:将大鼠按随机数字表法分为4组:Control组、ACLT组、ACLT+Scramble组和ACLT+miR-106a agomir组进行后续实验.HE染色检测病理组织损伤程度;RT-PCR...     

长链非编码RNA-PURPL对肝细胞癌增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨长链非编码RNA-PURPL对肝癌细胞的调控.方法 采用siRNA干扰肝癌细胞系中lnc RNA-PURPL的表达,分别用细胞计数法检测siRNA干扰后的细胞增殖情况、用流式细胞术检测siRNA干扰后的细胞凋亡率、Western blot法检测与凋亡相关的一些蛋白探究作用机制、ELISA法检测干扰后细胞分泌的...     

长链非编码RNA在骨关节炎中作用机制的研究进展

骨性关节炎(OA)是危害老年人健康的常见肌肉骨骼系统疾病,主要特征为软骨退化和骨赘形成.OA发病机制复杂,机械负荷重及细胞外基质分解代谢和合成代谢之间不平衡为其主要机制.长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸由RNA聚合酶Ⅱ合成的非编码RNA调控分子,在表观遗传水平、转录水平和转录后水平多层次调控...     

中成药无敌丹对骨关节炎软骨细胞活力和软骨细胞凋亡的影响

背景：研究发现,无敌丹能够抑制病变关节局部的炎症反应,保护关节软骨。 目的：验证无敌丹对家兔软骨细胞活力和软骨细胞凋亡的影响及对家兔骨关节炎病变的治疗效果。 方法：用含无敌丹的血清培养基培养大鼠软骨细胞,通过与溶剂对照组对比,观察无敌丹对软骨细胞活力及凋亡的影响;采用改良Hulth法构建兔膝骨关节炎模型,无敌丹给药组给予无敌丹;溶剂对照组给予生理盐水,2次/d,连续给药4周。观察无敌丹对兔膝骨关节炎的治疗作用;镜下观察关节局部的软骨细胞情况;用免疫组织化学的方法检测软骨中白细胞介素1、基质金属蛋白酶3的水平。 结果与结论：无敌丹血清培养的软骨细胞凋亡率显著低于对照组;兔膝关节病理检查显示溶剂对照组软骨破坏程度较高,无敌丹组软骨破坏程度低;免疫组织化学染色显示无敌丹给药组胞质和胞外基质着色浅,阳性细胞数量少,白细胞介素1表达低;无敌丹给药组阳性表达的细胞数量少,着色浅,基质金属蛋白酶3表达被抑制。结果表明,无敌丹能够有效保护家兔骨关节炎病变部位关节软骨,减少炎症反应,对于骨关节炎有很好的治疗作用,其机制可能与抑制软骨细胞凋亡、减少细胞因子的生成及抑制基质金属蛋白酶的蛋白表达有关。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

介导软骨细胞相关机制调控骨性关节炎的长链非编码RNA

背景：作为在软骨中发现的唯一一种细胞,软骨细胞在骨性关节炎中的作用受到了广泛的关注。越来越多的研究发现长链非编码RNA能够通过影响软骨细胞的各种基本细胞特征从而参与骨性关节炎的发病机制。目的：综述长链非编码RNA在骨性关节炎软骨细胞中的研究进展,为骨性关节炎寻找更多的诊断和治疗靶标。方法：通过中国知网及PubMed数据库,以“骨性关节炎,长链非编码RNA,软骨细胞,自噬”为中文关键词;以“osteoarthritis;non-coding RNAs;long non-coding RNAs;chondrocytes;chondrocytes proliferation;chondrocytes autophagy;chondrocytes inflammation;chondrocytes extracellular matrix”为英文关键词,搜索2007-2022年在骨性关节炎中与长链非编码RNA有关的文献,排除重复研究、可信度低及无参考意义文献,共纳入62篇文献进行分析、归纳、总结。结果与结论：(1)长链非编码RNA能够通过调节软骨细胞增殖、自噬、炎症反应和细胞外基质合成等机制进...     

非编码RNA在软骨细胞衰老中作用机制的研究进展

<正>细胞衰老较为广泛,主要是指细胞永久性生长阻滞、凋亡抵抗和衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype,SASP）的产生,导致不再进入细胞周期[1]。研究表明,膝骨关节炎（knee osteoarthritis,KOA）的发生率与年龄密切相关,年龄增长造成的软骨细胞衰老也是KOA发病主要机制之一[2]。此外,一些损伤或应激造成的炎症环境和氧化应激状态都可以加速软骨细胞衰老,最终导致软骨磨损、退化等,发展成为KOA[3]。     

LncRNA PVT1调控巨噬细胞极化抑制胰腺癌细胞侵袭

目的 探讨lncRNA PVT1调控巨噬细胞向M1型极化对胰腺癌细胞侵袭的影响及机制。方法 培养单核细胞株THP-1,通过感染NC shRNA慢病毒、PVT1 shRNA慢病毒、miR-NC慢病毒、miR-409-5p慢病毒、miR-409-5p抑制物慢病毒及嘌呤霉素筛选的方法得到稳定转染的THP-1细胞,检测lncRNA PVT1、miR-409-5p、音猬因子（SHH）的表达水平;进行M1型极化诱导后检测TNF-α、IL-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达水平。稳定转染的THP-1细胞进行M1型极化诱导后与胰腺癌细胞株PANC-1细胞共培养,检测PANC-1细胞的侵袭数目。结果 稳定转染PVT1 shRNA后,THP-1细胞中lncRNA PVT1、SHH表达明显降低（NC shRNA组、PVT1 shRNA组lncRNA PVT1分别为1.00±0.12、0.43±0.05;SHH分别为1.00±0.13、0.47±0.05）（均P<0.05）,miR-409-5p、TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS表达明显增加（NC shRNA组、PVT1shR...     

MALAT1对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA MALAT1对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制.方法 以子宫内膜癌RL95-2细胞为研究对象,采用慢病毒载体敲低和过表达MALAT1,利用实时荧光定量PCR检测敲低及过表达效率,通过CCK-8、流式细胞术检测敲低及过表达MALAT1后对RL95-2细胞增殖和凋亡的影响.采用免疫印迹法...     

肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的机制研究

目的 探讨缺氧环境下肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的潜在机制。方法 缺氧环境下,正常肝细胞LO2外泌体或肝癌细胞HepG2外泌体处理,检测单核细胞代谢关键指标葡萄糖摄取和乳酸产生水平。miRNA-seq检测miRNA表达水平并筛选以鉴定诱导单核细胞代谢重编程的关键miRNA。通过HumanTargetScan在线分析预测以及遗传学筛选鉴定miRNA的靶标。结果 缺氧环境下,肝癌细胞外泌体单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为34856±2944、174±16）高于正常肝细胞外泌体（分别为23454±2194、135±12）(P<0.05)。过表达miR-34b-3p、OMA1及敲低PHB2能够促进单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为22287±2207与36399±3123;121±10与158±17;22972±2330与32099±2017;121±11与161±16;24020±2156与37901±3084;110±10与151±16,均P<0.05）;敲低miR-34b-3p、OMA1及过表达PHB2能够抑制单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为22287±22...     

lncRNA MALAT1通过上调miR-30a-5p促进乳腺癌细胞增殖

目的 探讨lncRNA MALAT1靶向miR-30a-5p对乳腺癌细胞增殖的影响。方法 CCK-8实验检测lncRNA MALAT1对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。建立MCF7荷瘤小鼠模型检测lncRNA MALAT1对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。通过生物信息学网站预测miR-30a-5p是否与lncRNA MALAT1结合,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。Real time-qPCR检测lncRNA MALAT1过表达对miR-30a-5p表达的影响。CCK-8实验检测lncRNA MALAT1过表达载体和miR-30a-5pmimics共转染到MCF7细胞对细胞增殖的影响。结果过表达lncRNA MALAT1促进MCF7细胞的体外增殖及MCF7细胞荷瘤小鼠肿瘤生长。lncRNA MALAT1与miR-30a-5p结合,且过表达lncRNA MALAT1下调miR-30a-5p的表达。结论 lncRNA MALAT1通过下调miR-30a-5p表达促进乳腺癌细胞增殖。     

脂肪间充质干细胞外泌体可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡

背景：间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用,而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分,其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的：研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型的保护作用,并探讨相关机制。方法：(1)首先采用胶原酶消化法提取大鼠脂肪间充质干细胞,通过miR-29b-3p模拟物及抑制物转染脂肪间充质干细胞,采用超速离心法从培养上清中提取外泌体并进行鉴定,从而构建高表达和敲低miR-29b-3p的脂肪间充质干细胞外泌体;(2)通过过氧化氢诱导PC12细胞模拟神经细胞损伤模型,研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对神经元细胞损伤模型发挥保护作用的相关机制。结果与结论：(1)脂肪间充质干细胞外泌体具有典型的杯状形态,直径分布在50-140 nm范围内,表达外泌体表面特异性标志膜蛋白Alix、CD63及TSG101,并可被PC12细胞成功摄取;(2)脂肪间充质干细胞外泌体预处理可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡,并且这种保护作用随着外泌体中miR-29b-3p表达的增加而增强,...