不同来源间充质干细胞外泌体治疗骨关节炎疗效的比较

背景:在过去的数十年中,间充质干细胞作为组织工程种子细胞,在骨关节炎治疗中展现出了强大的疗效,在国内已开展了多项临床注册试验。研究表明,间充质干细胞主要依靠旁分泌效应释放外泌体等载体在体内发挥治疗作用。目的:比较骨髓间充质干细胞来源外泌体和脐带间充质干细胞来源外泌体治疗骨关节炎的效果。方法:采用超速离心法提取骨髓间充质干细胞来源外泌体和脐带间充质干细胞来源外泌体,采用透射电镜、Nanosight和Western blot鉴定两种外泌体;采用白细胞介素1β与软骨细胞共培养体外模拟骨关节炎环境,通过CCK-8、Western blot、qPCR评估两种外泌体对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡和细胞外基质分泌的影响;建立Ⅱ型胶原酶诱导的大鼠骨关节炎模型,通过大体和组织学染色评估体内注射两种外泌体治疗骨关节炎的疗效,ELISA检测关节液中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平。结果与结论:(1)两种外泌体在透射电镜下均为典型的圆形或杯状,粒径在105-120 nm之间,均表达CD63、CD81和TSG1010特征性蛋白;(2)脐带间充质干细胞来源外泌体的产量和纯度均高于骨髓间充质干细胞来源外泌体;(3)...     

低氧预处理脐带间充质干细胞源外泌体抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖

背景：已有研究表明外泌体可以改善低氧性肺动脉高压,而且不同来源、不同环境的外泌体功能存在显著差别。低氧预处理脐带间充质干细胞来源外泌体对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响尚不清楚。目的：探讨低氧预处理人脐带间充质干细胞来源外泌体对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：采用组织贴壁法分离培养原代人脐带间充质干细胞,用超滤法提取人脐带间充质干细胞来源外泌体;采用组织消化法分离大鼠肺动脉平滑肌细胞,用CCK-8法测定不同质量浓度外泌体干预肺动脉平滑肌细胞不同时间后的细胞增殖抑制率,确定外泌体作用的适宜质量浓度和干预时间。将第3代肺动脉平滑肌细胞分为常氧对照组、低氧对照组、低氧+常氧外泌体处理组和低氧+低氧外泌体处理组,EdU法检测各组细胞增殖情况,Western blot检测各组细胞核增殖抗原蛋白表达水平。结果与结论：(1)与常氧对照组相比,低氧对照组肺动脉平滑肌细胞增殖能力明显增加;与低氧对照组相比,低氧+常氧外泌体组细胞增殖能力下降,且低氧+低氧外泌体组增殖能力下降更明显;(2)与常氧对照组相比,低氧对照组细胞的细胞核增殖抗原蛋白表达升高;与低氧对照组相比,低氧+常氧外泌体组细胞核...     

血红素加氧酶1在间充质干细胞上调哮喘患者外周血调节性T细胞中的作用

背景：上调CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞是目前治疗哮喘的新靶点。骨髓间充质干细胞在体外可上调正常人外周血的调节性T细胞,但机制尚未明确。 目的：观察血红素加氧酶1对间充质干细胞上调哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的影响。 方法：分别加入0,15,30,45,60 μmol/L氯化高铁血红素和0,5,10,15,20 μmol/L锌-原卟啉对骨髓间充质干细胞进行预处理,荧光定量PCR检测各组间充质干细胞中血红素加氧酶1 mRNA的表达量。密度梯度离心法分离哮喘急性发作期患者和健康对照者的外周血单个核细胞,分别与经氯化高铁血红素预处理、经锌-原卟啉预处理、不经预处理的间充质干细胞共孵育,加入植物血凝素反应72 h,流式细胞仪检测各组CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞占CD4⁺T细胞的比例。 结果与结论：人骨髓间充质干细胞中有血红素加氧酶1表达,其表达在体外可被诱导和抑制。间充质干细胞中血红素加氧酶1 mRNA的表达量随氯化高铁血红素浓度增加而增加(P < 0.05),随锌-原卟啉浓度增加而减少(P < 0.05),具有剂量依赖性。间充质干细胞在体外可提高哮喘患者和健康对照者CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的水平(P < 0.01),诱导间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞水平提高(P < 0.01),抑制间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的水平降低(P < 0.01),但仍高于对照组(P < 0.01)。提示骨髓间充质干细胞部分通过血红素加氧酶1上调哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞。     

小鼠海马神经元细胞系HT22微环境诱导BMSCs神经分化

目的探讨小鼠海马神经元细胞系HT22的微环境对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的定向诱导作用。方法分别培养HT22细胞和GFP转基因荧光小鼠的BMSCs;直接接触法和间接接触法共培养,荧光显微比较GFP标记的干细胞形态变化;收集间接接触共培养的BMSCs行Western blot检测神经相关的蛋白(GFAP,NSE)的表达和变化;利用免疫荧光法检查GFAP和NSE抗原在细胞内的表达。结果培养的骨髓贴壁细胞为CD11b、CD45阴性,CD90阳性。与HT22细胞直接接触共培养及间接接触共培养的BMSCs细胞长轴增长,轴突样突起明显;经HT22细胞培养液诱导的BMSCs内GFAP、NSE表达水平随时间增加而增强;与HT22细胞直接接触共培养诱导的BMSCs表达GFAP和NSE。结论小鼠海马神经元细胞系HT22的微环境可诱导BMSCs向神经元样细胞分化。     

血红素氧化酶1可提高脐血间充质干细胞移植梗死心肌细胞的存活率*☆

背景：血红素氧化酶1具有较强的内源性抗氧化作用,可减轻炎症反应,发挥细胞保护作用。 目的：观察血红素氧化酶1对犬脐血间充质干细胞梗死心肌移植后细胞存活率的影响。  方法：取第4代体外培养脐血间充质干细胞,用含氯化高铁血红素的培养液培养24 h,免疫组织化学法检测细胞血红素氧化酶1的表达;将细胞经LacZ报告基因标记后经冠状动脉植入犬心肌梗死区域。 结果与结论：经含氯化高铁血红素培养液培养后的脐血间充质干细胞血红素氧化酶1表达明显上调,并持续2周以上;移植犬梗死心肌区后可长期存活,存活能力明显增强。结果表明氯化高铁血红素可诱导上调犬脐血间充质干细胞血红素氧化酶1的表达,血红素氧化酶1可明显提高脐血间质干细胞梗死心肌移植后的细胞存活率。 关键词：血红素氧化酶1;脐血;间充质干细胞;细胞移植;存活率 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.06.017     

差异超速离心法对不同种属间充质干细胞外泌体分离的可靠性研究

目的　分离培养大鼠及小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过差异超速离心法分离纯化外泌体并鉴定其形态及生物学性质,分析此方法对外泌体分离的可靠性。 方法 将培养3-5代的骨髓间充质干细胞进行成骨、成脂、成软骨诱导分化并进行染色,同时鉴定细胞表面标志物;通过透射电镜、纳米颗粒示踪分析及Western Blot鉴定分离纯化的外泌体。 结果 通过对成骨、成脂、成软骨分化后染色,大鼠及小鼠BMSCs具备干细胞特有的多向分化潜能。流式检测结果显示大鼠和小鼠BMSCs表达干细胞标志性表面抗原;透射电镜下,小鼠及大鼠BMSCs外泌体呈典型双层膜的杯托结构;平均粒径大小为107 nm和152 nm;Western Blot结果显示其表达外泌体标志性蛋白。 结论 我们能成功分离培养大鼠及小鼠的骨髓间充质干细胞;同时,差异超速离心法能够可靠地分离纯化出大鼠及小鼠骨髓间充质干细胞来源的外泌体。     

脂肪间充质干细胞外泌体可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡

背景：间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用，而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分，其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的：研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型的保护作用，并探讨相关机制。方法：(1)首先采用胶原酶消化法提取大鼠脂肪间充质干细胞，通过miR-29b-3p模拟物及抑制物转染脂肪间充质干细胞，采用超速离心法从培养上清中提取外泌体并进行鉴定，从而构建高表达和敲低miR-29b-3p的脂肪间充质干细胞外泌体；(2)通过过氧化氢诱导PC12细胞模拟神经细胞损伤模型，研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对神经元细胞损伤模型发挥保护作用的相关机制。结果与结论：(1)脂肪间充质干细胞外泌体具有典型的杯状形态，直径分布在50-140 nm范围内，表达外泌体表面特异性标志膜蛋白Alix、CD63及TSG101，并可被PC12细胞成功摄取；(2)脂肪间充质干细胞外泌体预处理可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡，并且这种保护作用随着外泌体中miR-29b-3p表达的增加而增强，...     

PGRN在小鼠海马神经元HT22细胞中的表达

目的检测PGRN在小鼠海马神经元HT22细胞中的表达水平,为进一步探讨颗粒蛋白前体(PGRN)在神经退行性疾病发病机制提供线索。方法以小鼠海马神经元来源的HT22细胞系为研究对象,采用细胞免疫荧光法和Western blot法检测PGRN在HT22细胞中的表达情况。结果 PGRN在HT22细胞胞浆和突起中表达,在细胞核周围表达尤为明显,并且PGRN可与神经元标记物βIII-tubulin和Dcx在HT22细胞中共表达。结论 HT22细胞高度表达PGRN,为PGRN在学习记忆中的作用研究提供了基础。     

M2型巨噬细胞外泌体诱导骨髓间充质干细胞的成骨分化北大核心

背景:目前研究表明,M2型巨噬细胞能够促进成骨分化并呈网络状调控,外泌体可携带大量信息参与细胞间的信号传导,M2型巨噬细胞来源外泌体是否能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,有待研究。目的:探究M2型巨噬细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:培养鼠源性巨噬细胞系RAW264.7与鼠骨髓间充质细胞系CP-M131,培养至第3代,应用白细胞介素4诱导巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞,从M2型巨噬细胞培养上清中提取外泌体,然后用终质量浓度为0,30,60,90 mg/L的外泌体与骨髓间充质干细胞共培养72 h后收集样本,以及60 mg/L M2型巨噬细胞来源外泌体与骨髓间充质干细胞共培养24,48,72 h后收集样本,Western blot检测骨髓间充质干细胞中成骨相关因子RUNX2和碱性磷酸酶蛋白表达,茜素红染色检测矿物质沉积情况。结果与结论:①成骨相关因子RUNX2及碱性磷酸酶的表达水平与巨噬细胞外泌体质量浓度密切相关,与空白对照组比较,60 mg/L外泌体组RUNX2、碱性磷酸酶表达明显升高(P<0.05),干预72 h RUNX2、碱性磷酸酶表达明显升高(P<0.05);②茜素红实验结果表明,与空白对照组比较,60 mg/L外泌体组钙结节含量较高(P<0.05),干预72 h钙结节含量较高(P<0.05);③结果表明,M2型巨噬细胞分泌的外泌体能够诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。     

人脐带间充质干细胞来源外泌体的提取、鉴定和蛋白组学分析

背景:现有的外泌体蛋白组学研究中,只有不同来源外泌体或者不同条件下分泌的外泌体之间的蛋白组学对比,没有外泌体和其母体细胞之间的对比分析。目的:对人脐带间充质干细胞来源外泌体进行提取鉴定和蛋白组学分析。方法:培养人脐带间充质干细胞并采用超滤序贯超离法提取外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、蛋白质定量、蛋白质印迹法及蛋白组学分析等技术鉴定。结果与结论:(1)提取的外泌体分散度较好且均一,多为杯状圆形或类圆形的膜性小囊泡,可见囊泡的双膜性结构,中央为低电子密度成分,分布较集中且边界清晰;(2)外泌体粒径分布峰值为(129.5±8.7) nm,膜表面带负电荷,浓度为8.375×1010粒子/mL,平均zeta电位为(-28.1±3.6) mV;(3)外泌体有特征性膜蛋白CD9、CD63的表达;(4)蛋白组学分析外泌体中高表达的蛋白质大多参与RNA剪接、mRNA加工、蛋白折叠等生物过程,参与RNA/DNA等遗传物质及蛋白质的合成、加工、降解过程,参与组成多种细胞器及亚细胞膜结构,参与多条信号通路、细胞黏附、细胞外基质受体相互作用,与多种疾病和病毒致癌也密切相关;(5)通过分析认为外泌体与其母...     

间充质干细胞外泌体在神经系统疾病修复过程中的作用与应用

文题释义：外泌体：是直径在30-120 nm的封闭脂质囊泡,属于多泡体分泌的细胞外囊泡。多种细胞在生理或病理情况下都能分泌外泌体。外泌体作为细胞间重要信息交流工具,在新型组织修复、疾病治疗与诊断领域有重要的前景。 间充质干细胞：是中胚层的一种多能干细胞,具有自我更新、向多种间充质系列细胞(如成骨、成软骨及成脂肪细胞等)或非间充质系列细胞分化、分泌细胞因子和细胞外囊泡、免疫调节、来源广泛等特点,被广泛用于组织修复研究。 背景：由于血脑屏障的存在,大分子药物无法通过血脑屏障进入脑部组织发挥药效,导致很多神经系统疾病、神经退行性疾病无法得到有效的治疗。近年来研究发现间充质干细胞外泌体以其体积微小、可装载脂质、蛋白、核酸等信号物质的特点,对脑血管病、阿尔茨海默症、癫痫、脊髓损伤等疾病具有组织修复的功效,逐渐成为治疗神经系统疾病的重要工具。 目的：从宏观与微观角度对间充质干细胞外泌体在神经系统疾病修复过程中的作用进行分析总结,并提出在外泌体基础研究和临床试验中存在的问题和注意事项。 方法：以“exosomes,extracellular vesicles,MSCs,mesenchymal stem cells,neurodegenerative diseases”为英文检索词,通过计算机检索PubMed数据库,纳入描述间充质干细胞来源外泌体的特性及修复作用的文章,排除重复与不相关文章,最终整理出35篇文献进行综述。 结果与结论：间充质干细胞外泌体具有易穿过血脑屏障、携带丰富的信号物质等生物学特点,在动物疾病模型中发挥重要作用,如抗炎、促进神经元生长、维持神经元数量、促进神经突重塑等;经过修饰后的外泌体可发挥比天然外泌体更有效的组织修复功能,可作为分子药物载体应用于特定的神经系统疾病治疗中。 ORCID: 0000-0002-1791-666X(高振橙) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人脐血间充质干细胞来源的外泌体:分离鉴定及生物学特性

背景:外泌体是间充质干细胞分泌的膜性小囊泡,越来越多的研究表明,间充质干细胞可能通过旁分泌外泌体而发挥对组织损伤的修复作用,目前人脐血间充质干细胞来源的外泌体分离鉴定尚未见报道。目的:分离纯化人脐血间充质干细胞来源的外泌体,并鉴定其生物学特性。方法:收集人脐血间充质干细胞培养上清,采用超滤及梯度离心法分离并纯化外泌体,通过透射电镜观察其形态,流式细胞术检测其表面标志CD63、CD81、CD90、CD73、CD105、CD29、CD166。结果与结论:人脐血来源的间充质干细胞能够分泌外泌体,电镜下呈椭圆或碟状的囊泡结构,直径40-100 nm。外泌体表达其共性表达标志CD63、CD81及间充质干细胞表面黏附分子CD90、CD73、CD105、CD29、CD166。结果表明采用超滤及梯度离心法可以成功从间充质干细胞培养上清中分离纯化外泌体,间充质干细胞分泌的外泌体具有外泌体的胞膜蛋白组分。     

高表达软骨调素1骨髓间充质干细胞来源外泌体促进骨关节炎软骨细胞的增殖

背景：软骨调素1(chondromodulin-1,Chm-1)在正常软骨中大量表达,具有抑制血管生成、阻止软骨细胞肥大、缓解骨关节炎发展的功能,在骨关节炎发生和发展中发挥着重要作用。目的：探讨高表达Chm-1骨髓间充质干细胞来源外泌体对骨关节炎环境中软骨细胞增殖的影响。方法：分离大鼠骨髓间充质干细胞并进行培养及鉴定;Chm-1慢病毒和空载慢病毒转染骨髓间充质干细胞,超高速离心法提取细胞培养上清液中外泌体(Chm-1-Exos和NC-Exos)。白细胞介素1β作用软骨细胞24 h构建体外骨关节炎模型,随后分别用2种外泌体处理7 d,将PBS处理的骨关节炎软骨细胞作为对照组。共聚焦显微镜观察骨关节炎软骨细胞对外泌体的摄取情况;CCK-8评估各组骨关节炎软骨细胞增殖能力;Western blot检测2种外泌体中Chm-1的表达;Western blot和RT-qPCR方法分别检测各组骨关节炎软骨细胞中Ⅱ型胶原、SOX9、AGG蛋白和mRNA的表达。结果与结论：(1)骨髓间充质干细胞呈典型纺锤状形态且具备三系分化能力;(2)带有绿色荧光的慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞;(3)外泌体直径在40...     

铁抑素-1抑制血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡

目的:研究铁抑素-1(Fer-1)对血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡的影响。方法:小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为对照组(control)、血红素处理组(hemin)以及血红素和铁抑素-1联合处理组(hemin+Fer-1)。利用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,利用活性氧荧光探针(DCFH-DA)法检测各组细胞中反应性活性氧(ROS)的含量,利用商品化试剂盒检测谷胱甘肽(GSH)的含量,利用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位(MMP)变化,利用Western Blot和real time RT-PCR检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。结果:血红素处理可降低HT22细胞活性,诱发氧化应激,破坏线粒体膜电位(MMP),并下调GPX4表达而诱导铁死亡。相反,Fer-1可以使细胞活性恢复,降低氧化应激反应,从而抑制HT22细胞铁死亡。结论:血红素中诱发了HT22细胞内脂质过氧化反应,引起线粒体损伤及铁死亡;铁死亡抑制剂Fer-1可以阻断血红素这种细胞毒性。     

抑制外泌体释放对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的:探讨抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放对其生物学特性的影响及其机制。方法:利用TALEN技术靶向性敲除Rab27a基因构建外泌体释放缺失小鼠模型,随后分离、培养并鉴定骨髓间充质干细胞,用外泌体提取试剂盒提取培养基中的外泌体,并用纳米颗粒跟踪分析(NTA)计数外泌体的数量,透射电镜观察外泌体的大小及形态。利用Ed U实验及检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达来评价间充质干细胞的增殖能力。通过TUNEL染色及MTS实验检测间充质干细胞对缺氧的耐受能力。结果:敲除Rab27a的间充质干细胞释放外泌体的数量明显减少,抑制间充质干细胞外泌体的释放能显著降低其增殖及对缺氧的耐受能力。结论:抑制间充质干细胞外泌体的释放可导致其增殖能力及对缺氧的耐受能力明显降低。     

骨髓间充质干细胞改善APP/PS1模型小鼠认知功能的机制

背景:研究表明,骨髓间充质干细胞治疗可以有效填补阿尔茨海默病患者丢失的神经元,但具体的作用机制有待进一步明确。目的:探讨骨髓间充质干细胞对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的治疗作用及其机制。方法:选取APP/PS1双转基因小鼠作为研究对象,随机分为模型组和骨髓间充质干细胞组,每组10只,选取10只同月龄同性别野生型C57BL/6小鼠作为正常对照组。经鼻腔给予骨髓间充质干细胞(1×10⁶/次)或生理盐水,每周重复给药1次,持续给药2个月。使用水迷宫检测小鼠的认知功能,Western blot检测小鼠脑组织中病理标志相关因子、炎症信号因子、氧化应激蛋白的表达。结果与结论:骨髓间充质干细胞能有效改善阿尔茨海默病小鼠的认知功能障碍,增加APP蛋白表达,减少磷酸化Tau蛋白表达,降低Toll样受体2、一氧化氮合酶、核转录因子κB的表达,增加核因子E2相关因子2和血红素加氧酶1的表达。结果表明,骨髓间充质干细胞具有治疗阿尔茨海默病的潜在作用,其机制可能通过核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1信号通路发挥抗炎、抗氧化作用。     

间充质干细胞源性外泌体的检测方法

文题释义： 外泌体：早期由多泡体通过膜内陷包裹内容物形成并在多泡体与细胞膜融合过程中被释放到胞外，是一类粒径为30-120 nm，内含来源细胞中部分蛋白质、核酸、脂质等成分的蝶形膜性囊泡。外泌体能分泌及转运多种生物活性成分并参与一系列生理病理过程。 间充质干细胞源性外泌体：由间充质干细胞旁分泌所得，具有来源细胞的特性。间充质干细胞源性外泌体能促进受损区域细胞自我修复与组织再生，恢复组织内稳态，加速创面修复。不仅如此，间充质干细胞源性外泌体在血管损伤修复、急性肺损伤、缺血性脑卒中、骨关节炎、心肌梗死等各个系统疾病中都具有重要作用。 背景：间充质干细胞源性外泌体因其众多优点被应用于多种疾病的诊断与治疗，因此精确有效以及低成本检测出间充质干细胞源性外泌体对将来疾病的诊断和治疗至关重要。 目的：对间充质干细胞源性外泌体检测方法以及最新进展做一介绍。 方法：检索万方、百度学术、维普、CNKI、PubMed、Web of Science、Sinomed、Embase、Cochrane、Web of Knowledge等数据库1997年6月至2019年6月期间关于间充质干细胞源性外泌体检测方法的文献，检索词分别为“间充质干细胞”“外泌体”“检测方法”和“mesenchymal stem cells”“exosomes”“detection methods”。排除重复与相关性弱的文献，将检索到的文献进行整理，共纳入60篇文献来进行分析。 结果与结论：①总结了间充质干细胞的定义、生物学特性及其旁分泌作用；②总结了间充质干细胞源性外泌体的定义、生物学特性及其在临床治疗中较好的应用前景，例如调节机体免疫功能、促进受损组织再生等；③总结了目前对间充质干细胞源性外泌体常用的检测方法以及最新研究进展；④上述研究为临床应用间充质干细胞源性外泌体治疗疾病及在组织损伤修复中发挥作用提供实验基础。 ORCID:0000-0003-3297-2587(杨沁馨) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程     

胎盘间充质干细胞来源人工外泌体的一种制备方法

目的探讨一种利用小鼠胎盘间充质干细胞(mPMSCs)制备人工外泌体的方法。方法采用胶原酶消化法从小鼠胎盘组织中分离培养mPMSCs,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原,鉴定其多向分化潜能;利用机械挤压法使mPMSCs依次通过孔径为10、5、1μm的径迹蚀刻膜,经离心纯化后得到人工外泌体;采用超速离心法分离mPMSCs来源的外泌体,并采用透射电镜对比观察形态结构、纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测粒径和浓度、蛋白免疫印迹法检测表面标志物。结果通过胶原酶消化法分离培养的小鼠mPMSCs,形态呈长梭型,较为均一,细胞表面高表达CD29、CD44、CD105,不表达CD45、CD34,具有成骨、成脂细胞诱导分化潜能;通过机械挤压法制备得到的人工外泌体在电镜下形态呈圆球形囊泡状,与mPMSCs来源外泌体形态类似;人工外泌体平均粒径为(130.7±5.7)nm,浓度为(5.01±1.08)×10~(11) particles/mL,mPMSCs来源外泌体粒径为(146.7±4.9)nm,浓度为(4.34±0.97)×10~9 particles/mL;蛋白免疫印迹法检测得到人工外泌体和mPMSCs来源外泌体表面均表达抗原CD63、CD81和Tsg101。结论通过机械挤压法可较高效获得人工外泌体,该人工外泌体与通过超速离心法提取得到的mPMSCs来源外泌体具有相似的生物学特性,这为后期将其作为药物载体奠定了一定的研究基础。     

犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤

文题释义：犬脂肪间充质干细胞：由犬皮下脂肪组织分离得到,是一类具有自我更新潜能、多向分化能力的成体多能干细胞,它能分泌多种细胞因子、趋化因子以及外泌体等活性物质,具有强大的组织修复作用,在宠物临床上有很大发展前景。外泌体：是活细胞分泌产生的胞外囊泡,大小为40-100  nm,含有多种蛋白质、mRNA和miRNAs,它通过这些生物分子的传递改变受体细胞的生化特征,是参与细胞间通讯的重要成分,而且在疾病诊断和治疗中也发挥着重要作用。  摘要背景：犬肾脏损伤的特点是肾小管上皮细胞凋亡坏死。最近研究表明间充质干细胞及其外泌体在人、大鼠、小鼠肾损伤治疗中显示出良好的效果,但对犬的研究甚少。目的：探讨犬脂肪间充质干细胞及其外泌体对庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤的影响。方法：采用5 mmol/L硫酸庆大霉素处理犬肾小管上皮细胞,随后分别将犬脂肪间充质干细胞及其条件培养基和外泌体与受损犬肾小管上皮细胞共培养。在24 h及48 h后采用CCK-8法测定各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,最后通过Q-PCR法检测PCNA、Bcl-2和Bax基因的表达。结果与结论：犬脂肪间充质干细胞及其条件培养基和外泌体均可显著促进受损犬肾小管上皮细胞增殖以及减少细胞凋亡(P < 0.05),其中犬脂肪间充质干细胞外泌体的效果最好,可显著提高受损犬肾小管上皮细胞PCNA、Bcl-2基因的表达(P < 0.05),对庆大霉素诱导的犬肾小管上皮细胞损伤发挥修复作用。 ORCID: 0000-0003-3613-2980(林嘉颖) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人脐带间充质干细胞与乳鼠许旺细胞共培养向类神经元样细胞的分化

背景:间充质干细胞可以通过化学诱导或者共培养的方法分化为类神经细胞,但是对于间充质干细胞是与许旺细胞共培养分化为类神经元还是类许旺细胞,还存在争议。目的:探索大鼠许旺细胞对人脐带间充质干细胞诱导分化作用。方法:将1×109L-1人脐带间充质干细胞通过Transwell隔离小室与1×109L-1SD乳鼠许旺细胞共培养2周,观察脐带间充质干细胞的形态变化,并用免疫荧光法检测其表型变化。结果与结论:共培养2周后,部分间充质干细胞出现类似神经元的形态,且表达nestin,NF-200,β-Ⅲ-tubulin等神经元特异性标记物,不表达许旺细胞特异性表记物S100和胶质细胞特异性标记物MAB1580。提示人脐带间充质干细胞可以与大鼠许旺细胞非接触共培养分化为类神经元。