兔骨关节炎中基质金属蛋白酶-1、3与白细胞介素-1β表达及关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察骨关节炎(OA)中基质金属蛋白酶(MMP)-1、3与白细胞介素-1β(IL-1β)的表达及关节软骨细胞凋亡,探讨其在OA发病机制中的作用.方法 将20只中国大白兔随机分成正常组(A组)、实验组(B组),每组10只,A组未造模,B组采用Hulth法制成OA模型,4周后取胫骨平台关节软骨进行组织病理学检查,采用免疫组织化学和原位末端标记细胞凋亡检测法分别检测关节软骨和滑膜中的MMP-1、3、IL-1β及软骨细胞凋亡指数(AI)的水平.结果 组织病理学检查可见,B组关节软骨退变程度明显重于A组,符合OA关节软骨退变特征;通过检测MMP-1、3,IL-1β和AI,A组的结果分别是21.005±9.406、18.697±8.225、0.100±0.040和14.900±3.400,B组的结果分别是56.147±22.340、46.182±20.561、0.180±0.060和25.400 ±5.200;B组MMP-1、3和AI的水平均明显高于A组(P＜0.01),B组IL-1β水平高于A组(P＜0.05).结论 MMP-1、MMP-3、IL-1β的表达及关节软骨细胞凋亡在OA发病机制中作用重要,其异常升高与OA关节软骨退变和炎症反应密切相关.     

骨髓间充质干细胞对膝关节炎大鼠软骨损伤及KDM6A/SOX9信号通路的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞对膝关节骨性关节炎大鼠的影响,并探讨其机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常对照组(Control)、膝关节骨性关节炎组(KOA)、骨髓间充质干细胞组(BMSCs),每组10只,剩余10只用于骨髓间充质干细胞的分离。处理4周后进行大鼠关节指数(AI)评分;HE染色观察软骨组织病理学变化;免疫组化检测软骨组织Col II、IL-6、MMP-3、MMP-13表达;ELISA法检测血清IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量;qRT-PCR检测软骨组织Col II、Col I、TNF-α、IL-6、MMP-13、KDM6A、SOX9、Aggrecan mRNA表达;Western blot检测软骨组织KDM6A、SOX9、Aggrecan蛋白表达。结果 与Control组比较,KOA组大鼠AI评分、血清IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量、软骨组织IL-6、MMP-3、MMP-13表达明显升高(P<0.05);Col II、KDM6A、Aggrecan、SOX9 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。与KOA组比较,BMS...     

白芍总苷对骨关节炎软骨细胞增殖及分泌表达的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对人骨关节炎软骨细胞(HOCs)增殖、凋亡、分泌表达的影响及其作用机制,为白芍总苷在骨关节炎治疗方面提供初步的实验依据。方法组织块法培养原代人骨关节炎软骨细胞;TGP处理人骨关节炎软骨细胞并培养12、24和48 h;采用CCK-8检测细胞存活率;ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)以及Caspase-3表达水平;Western blotting检测Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和核转录因子κB(NF-κB)的蛋白表达水平。结果 TGP能促进细胞增殖,并存在时间和浓度依赖性,其中8μmol/L TGP作用24 h时细胞存活率最高,存在显著性差异(P0.05);TGP可以显著抑制凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3表达,并促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P0.05);TGP可以显著降低与软骨退化相关的MMP-13/TIMP-1比值(P0.05);TGP可以抑制炎症因子TNF-α、IL-6和IL-8表达(P0.05);TGP可以抑制NF-κB的表达(P0.05)。结论 TGP促进人骨关节炎软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡、降低MMP-13/TIMP-1比值以及炎症因子的分泌,其机制可能是与抑制NF-κB的表达相关。     

不同浓度IL-1对人的软骨细胞基质金属蛋白酶1mRNA表达的影响

目的观察不同浓度白介素-1β(IL-1β)对体外培养人的关节透明软骨细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)mRNA表达的影响.方法体外培养的人的透明软骨细胞,随机分为4组,A组为空白对照组;B、C、D组分别加入1 ng/ml,10 ng/ml,100 ng/ml IL-1β1作用12 h.采用逆转录PCR(RT-PCR)方法及实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法,观察透明软骨细胞MMP-1 mRNA的表达状况,比较不同剂量IL-1β作用下传代培养的人的透明软骨细胞MMP-1基因表达与正常软骨细胞相应基因表达的关系.结果正常人的软骨细胞均有MMP-1但表达量较低.IL-1β浓度为1 ng/ml,10 ng/ml,100ng/ml作用12 h,对MMP-1 mRNA调节作用存在明显的剂量依赖关系,各组之间存在显著性差异,MMP-1的含量分别为正常组的1.6、2.3、4.2倍.结论研究表明,IL-1β对人的软骨细胞MMP-1表达的调控作用随其浓度的变化而不同.     

MMP-3、MMP-13在骨性关节炎患者滑膜中的表达及意义

目的探讨MMP-3、MMP-13在骨性关节炎患者滑膜中的表达及相关性。方法应用免疫组化和Western blotting法检测MMP-3、MMP-13蛋白在30例骨性关节炎(OA,实验组)与30例非OA(对照组)患者滑膜组织中的表达情况。结果免疫组化结果表明MMP-3、MMP-13蛋白在实验组与对照组患者滑膜中的表达有显著性差异(P0.01),且阳性表达多定位于滑膜细胞的胞浆;Western blotting分析结果显示MMP-3、MMP-13蛋白在实验组患者滑膜中表达明显高于对照组患者,且二者在OA组中表达呈正相关性。结论 MMP-3、MMP-13蛋白与骨性关节炎发生发展密切相关,可能作为诊断及判断骨性关节炎的一项重要指标。     

槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响

目的探讨槲皮素对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响及可能机制。方法选用人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)为研究对象,TNF-α诱导MH7A细胞,用不同浓度的槲皮素干预,RT-PCR法检测对IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-1、MMP-3、MMP-13的变化的影响,Western blot法检测对NF-κB的影响。结果槲皮素浓度依赖性地降低TNF-α诱导的MH7A细胞IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达,对TNF-α诱导的MH7A细胞NF-κB的磷酸化有明显的抑制作用。结论槲皮素可有效地减轻类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子及基质金属蛋白酶的表达,其机制可能和抑制NF-κB的表达相关,槲皮素是治疗类风湿性关节炎的潜在有效药物。     

IκB-α基因转染HCC9204细胞对NF-κB和MMP-9表达的影响

目的观察高转移性人肝癌细胞系HCC9204转染抑制性κB基因(IκB-α)后核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞,应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达;通过基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移能力。结果HCC9204细胞转染pcDNA3-IκB-α后,细胞内NF-κB蛋白表达下降,同时伴随MMP-9mRNA表达水平和细胞侵袭、转移能力的明显下降。结论NF-κB活性被抑制后引起细胞侵袭、转移能力的下降可能是由于MMP-9表达下降所致。     

股骨头坏死关节软骨金属蛋白酶的表达

目的 探讨金属蛋白酶在股骨头坏死过程中导致关节软骨破坏的作用。方法 临床上采集激素性股骨头坏死、原发性髋关节骨性关节炎及新鲜股骨头／颈骨折患者股骨头关节软骨，切片后进行免疫组化检测MMP-1、MMP-13及TIMP-1的表达。结果 股骨头坏死、原发性髋关节骨性关节炎关节软骨均有较强的MMP-1、MMP-13表达及TIMP-1较低水平的表达。结论 金属蛋白酶在股骨头坏死关节软骨的破坏过程中起着重要的作用。     

痹祺胶囊对兔骨性关节炎关节软骨破坏的干预作用

目的：探讨痹祺胶囊对骨性关节炎关节软骨破坏的干预作用。方法：6月龄新西兰大耳白兔25只,随机分为假手术组、模型组、痹祺胶囊低剂量组、痹祺胶囊中剂量组、痹祺胶囊高剂量组,每组各5只。使用ELISA方法测定血清MMP-3、TIMP-1及IL-6含量,HE染色进行关节软骨组织形态学观察。结果：组织形态学观察痹祺胶囊可改善骨性关节炎的软骨病理改变。中、高剂量痹祺胶囊组血清中的MMP-3、IL-6含量明显低于模型组（P〈0.05）,TIMP-1/MMP-3较模型组升高。结论：痹祺胶囊对骨性关节炎模型关节软骨破坏具有一定的保护作用,其机理可能与降低血清中MMP-3、IL-6含量,改善TIMP-1/MMP-3水平有关。     

AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶3、9、13水平的影响

目的探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)特异性拮抗剂AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor 1,SDF-1)/CXCR4信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)3、9、13水平的影响,明确AMD3100的作用机制。方法取12例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者144块软骨组织(OA软骨组)和12例创伤性截肢患者144块正常软骨组织(正常软骨组)(Mankin评分均为0或1),根据添加培养液不同,每组再分为A、B、C 3个亚组。A亚组含1 000 nmol/L AMD3100及100 ng/mL SDF-1的DMEM液,B亚组含1 000 nmol/L MAB310及100 ng/mL SDF-1的DMEM液,C亚组含100 ng/mL SDF-1的DMEM液。体外培养2、4 d后,ELISA法测定培养液内MMP-3、9、13含量,RT-PCR检测软骨组织中MMP-3、9、13 mRNA表达。结果 ELISA法及RT-PCR检测示:同组相同时间点A亚组MMP-3、9、13含量及mRNA表达均显著低于B、C亚组(P<0.05)。同一时间点相同亚组OA软骨组MMP-3、9、13含量及mRNA表达均显著高于正常软骨组(P<0.05)。结论 SDF-1通过SDF-1/CXCR4信号通路可诱导人关节软骨中MMP-3、9、13的表达和释放;AMD3100可阻断SDF-1/CXCR4信号通路,使软骨细胞MMP-3、9、13 mRNA表达水平及分泌量降低,但AMD3100不能使退变的OA软骨分泌MMP-3、9、13恢复至正常软骨水平。     

体外冲击波对早中期膝关节骨性关节炎患者关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-13表达的影响

[目的]观察体外冲击波对膝关节骨性关节炎患者关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-13表达的影响,探讨其治疗膝关节骨性关节炎的机制。[方法]将63例膝关节骨性关节炎患者分为两组,治疗组采用体外冲击波治疗,对照组采用塞来昔布胶囊治疗,均治疗4周,分别在治疗前后及治疗后6个月检测两组患者关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-13的含量。[结果]治疗后,两组患者关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-13的含量均明显低于治疗前(P0.05),其中治疗组与对照组含量相当(P0.05)。治疗后6个月随访,两组患者关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-13的含量均较治疗后上升(P0.05),但仍明显低于治疗前(P0.05),而治疗组的含量明显低于对照组(P0.05)。[结论]体外冲击波能有效地下调膝关节骨性关节炎患者关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-13的表达,从而抑制炎症反应,延缓病程发展,且与塞来昔布相比疗效更佳。     

不同浓度IL-1对人的软骨细胞基质金属蛋白酶1mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度白介素-β(IL-β)对体外培养人的关节透明软骨细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)mRNA表达的影响。方法 体外培养的人的透明软骨细胞，随机分为4组，A组为空白对照组；B、C、D组分别加入1ng／ml，10ng／ml，100ng／ml IL-1β1作用12h。采用逆转录PCR(RT—PCR)方法及实时荧光定量PCR(FQ—PCR)的方法，观察透明软骨细胞MMP-1mRNA的表达状况，比较不同剂量IL-1β作用下传代培养的人的透明软骨细胞MMP-1基因表达与正常软骨细胞相应基因表达的关系。结果 正常人的软骨细胞均有MMP-1但表达量较低。IL-1β浓度为1ng／ml，10ng／ml，100ng／ml作用12h，对MMP-1mRNA调节作用存在明显的剂量依赖关系，各组之间存在显著性差异，MMP-1的含量分别为正常组的1．6、2．3、4．2倍。结论或研究表明，IL-1β对人的软骨细胞MMP-1表达的调控作用随其浓度的变化而不同。     

降钙素在体内体外实验中对兔关节炎关节软骨退变及软骨下骨骨代谢的影响

[目的]研究降钙素(calcitonin, CT)对骨性关节炎关节软骨退变和软骨下骨骨代谢的影响.[方法]30只3个月龄雌性日本大耳白兔随机分为三组,其中两组行右膝关节前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transaction,ACLT),分为ACLT+CT组和ACLT+NS组,第3组为Sham组.ACLT+CT给予每日1次皮下注射降钙素5 IU/(kg·d),持续8周,ACLT+NS组给予同样剂量生理盐水.术后8周后处死所有动物.取股骨髁制成切片行MMP-13和Ⅱ型胶原免疫组化染色.取胫骨近端制成硬组织切片行骨形态计量学检测.体外实验中,取兔膝关节软骨,经消化、培养,将第3代软骨细胞分三组:向IL-1β组加入人重组IL-1β(10 ng/ml). IL-1β+CT组加入人重组IL-1β (10 ng/ml)2 d后,再向培养液中加入CT(50 ng/ml).正常组不加任何诱导剂和干扰剂培养.然后行MMP-13、Ⅱ型胶原免疫组化检测和Realtime RT-PCR法检测.[结果]Sham组和ACLT+CT组软骨下骨骨小梁相对体积和厚度等均显著高于ACLT+NS组.Sham组和ACLT+CT组的Ⅱ型胶原的光密度值均显著高于ACLT+NS组,而MMP-13的光密度值显著低于ACLT+NS组(P<0.05).正常组和IL-1β+CT组的Ⅱ型胶原光密度值均显著高于IL-1β组而MMP-13的光密度值都显著低于IL-1β组(P<0.05).在正常组和IL-1β+CT组中Ⅱ型胶原的mRNA含量均显著高于IL-1β组而MMP-13的mRNA含量均显著低于IL-1β组(P<0.05).[结论]降钙素5 IU/(kg·d)皮下注射能够增加ACLT兔膝关节软骨Ⅱ型胶原的分泌和抑制MMP-13的表达,并可能通过调节软骨下骨的骨代谢和微结构来保护关节软骨; CT(50 ng/ml)能增加体外培养的含有IL-1β(10 ng/ml)的软骨细胞中Ⅱ型胶原的含量和抑制MMP-13分泌.     

NF-κB信号通路在骨性关节炎发生发展中作用机制的研究

NF-κB( Nuclear Factor-κB)是广泛存在于真核细胞内的一个信号通路,它通过MAPKKK (Mitogen Activated Protein Kinase Kinase Kinase)或细胞膜受体级联激活,导致NIK( NF-κB inducing kinase-1)激活,进而活化IKK( IκB Kinase),磷酸化IκB(Inhibitory κB proteins),最终导致NF-κB向细胞核内转位指导目的基因表达.NF-κB在OA( Osteoarthritis)炎症反应及疾病发生发展过程中起到了至关重要的作用,最终导致软骨降解和关节损伤.NF-κB信号参与并调控软骨细胞的增殖、分化、凋亡,而NF-κB信号的失调在骨关节炎的发生、发展中扮演着十分重要的角色,这提示深入研究NF-κB信号在骨性关节炎发病机制中的确切作用将有助于骨性关节炎的靶向治疗,从而为骨性关节炎的治疗开辟更加广阔的前景.     

SH关节腔内注射治疗兔膝关节炎的实验研究

[目的]探讨透明质酸钠（sodium hyaluronate，SH）关节腔内注射治疗膝骨性关节炎（OA）的效果。[方法]24只兔子建立骨关节炎动物模型，随机分OA组、SH组、对照组，观察3组软骨、滑膜细胞病理切片及软骨MMP-1免疫组化，进行软骨Mankin＇s评分，以及检测血液和关节液的IL-1含量的效果。[结果]SH组可见软骨破坏减轻，滑膜纤维增生减少，Mankin＇s评分有明显改善（P〈0．05）；血、膝关节滑液IL-1浓度降低（P〈0．05），但关节软骨中MMP表达仍然活跃。[结论]SH能减少滑液中炎性介质IL-1的分泌，从而减轻滑膜炎症，缓解对软骨细胞的破坏，延缓OA进展，但仍阻止不了OA进展。     

基质金属蛋白酶及其组织特异性抑制物与环氧合酶-2在骨性关节炎中的表达及临床生物学意义

目的观察环氧酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和组织特异性抑制物-1(TIMP-1)在骨性关节炎(OA)中的表达,探讨其与OA的发生、发展的关系。方法采用苏木精-伊红染色及SABC法,检测OA及正常对照关节软骨组织切片中COX-2、MMP-3和TIMP-1蛋白的表达情况,应用统计学方法对其在OA的发生、发展中与OA病理分级、临床影像学分级的相关性进行非参数分析。并运用Spearman相关分析检验对OA组中MMP-3蛋白与COX-2蛋白的表达进行相关性分析。结果OA中MMP-3、TIMP-1、COX-2蛋白的阳性表达率分别为78.0,68.7和86.7,与它们在正常软骨组织中的比较有显着性差异(P<0.05),MMP-3、COX-2与关节损伤程度成正相关(P<0.05),TIMP-1与关节损伤程度成负相关(<0.05)。结论OA中MMP-3/TIMP-1的变化与COX-2变化无相关性。     

阿仑膦酸钠对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞影响的实验研究

目的二膦酸盐类药物可抑制骨重塑,通过观察阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞的影响,探讨ALN治疗骨性关节炎(osteoarthritis,OA)的可行性。方法取15只1月龄SPF级SD大鼠(雌雄不限,体重100～150g)膝关节软骨,体外培养软骨细胞并传至第3代。倒置相差显微镜下观察细胞形态并进行鉴定。将第3代软骨细胞分为3组:空白对照组(A组)软骨细胞用常规DMEM完全培养液培养5d;IL-1β诱导组(B组)软骨细胞以10ng/mL重组人IL-1β培养2d后更换为常规DMEM完全培养液培养3d;IL-1β诱导后加ALN培养组(C组)软骨细胞以10ng/mL重组人IL-1β培养2d后更换为浓度为1×10-6mol/L的ALN培养3d。培养后取各组细胞进行免疫细胞化学染色及实时PCR检测,观察细胞中Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,ColⅡ)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase13,MMP-13)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。结果甲苯胺蓝染色示培养的细胞呈异染性,证实为软骨细胞。免疫细胞化学染色显示:A、B、C组ColⅡ表达积分吸光度(IA)值分别为15.3770±0.5718、5.4632±0.4504、10.2907±0.4992,C组高于B组,但低于A组,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-13表达IA值分别为2.7775±0.1996、6.9981±0.3297、3.0686±0.2056,C组明显低于B组(P<0.05),但与A组比较差异无统计学意义(P>0.05);β-catenin表达IA值分别为4.3903±0.5519、11.7999±0.3487、6.6117±0.3818,C组低于B组,但高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时PCR检测示,C组ColⅡmRNA表达高于B组,MMP-13及β-catenin的mRNA表达低于B组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);ColⅡ和β-catenin mRNA表达高于A组,MMP-13mRNA表达低于A组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ALN可能通过抑制IL-1β诱导的大鼠膝关节软骨细胞中ColⅡ的降解并下调MMP-13及β-catenin因子的表达,对软骨细胞具有一定的保护作用。     

lncRNA HOXA11-AS抑制骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡与基质降解的作用研究

目的研究长链非编码RNA(long-nocoding RNA,lncRNA)HOXA11-AS在骨关节炎(osteoarthritis,OA)的大鼠软骨细胞中的表达情况,及其对软骨细胞凋亡、基质降解以及核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路的影响。方法采用弗氏完全佐剂注射大鼠构建OA大鼠模型,造模后分离培养软骨细胞;小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术抑制软骨细胞中HOXA11-AS表达;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测转染siRNA不同时间后软骨细胞的活力;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测软骨细胞中HOXA11-AS及基质金属蛋白酶13(matrix metallo protein-13,MMP-13)、血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶5(a disintesrin and metalloprotease with thrombospondin type 5 motifs,ADAMTS-5)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)mRNA的表达情况;流式细胞术检测软骨细胞的凋亡情况;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测软骨细胞上清液中Bcl-2相关X蛋白(Bcl 2-associated X protein,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达情况;蛋白质印迹法(western blot)检测MMP-13、ADAMTS-5、CollagenⅡ、aggrecan和抗核因子κB抑制蛋白(anti-nuclear factor kappa B inhibitory protein,IκBα)、抗磷酸化核因子κB抑制蛋白(anti-phosphorylated nuclear factor kappa B inhibitory protein,p-IκBα)、抗核因子κB 65(nuclear factor kappa B,NF-κB 65)的表达,免疫荧光染色检测NF-κB在软骨细胞细胞核中的表达情况。结果与正常组大鼠软骨细胞相比,HOXA11-AS在OA大鼠软骨细胞中高表达;与NC siRNA组比较,HOXA11-AS siRNA组细胞活力显著下降,细胞凋亡率及促凋亡因子Bax、Caspase-3的表达水平显著升高,而抑凋亡因子Bcl-2的表达水平显著下降;同时,与NC siRNA组比较,HOXA11-AS siRNA组细胞collagenⅡ和aggrecan的基因和蛋白表达水平明显降低,MMP-13和ADAMTS-5基因及蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平显著下降而p-IκBα和NF-κB p65的表达水平显著增高,此外,NF-κB在HOXA11-AS siRNA组细胞核中明显表达。结论 lncRNA HOXA11-AS可以抑制骨关节炎大鼠软骨细胞的凋亡以及基质降解,并阻止NF-κB信号通路的激活。     

消肿止痛合剂对大鼠膝骨性关节炎软骨中AMPK/mTOR信号通路影响的实验研究

目的观察消肿止痛合剂对大鼠膝骨性关节炎软骨中LC3、Beclin1、caspase-9、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响,探讨消肿止痛合剂干预膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)形成的作用机制。方法将80只Wistar大鼠随机分为4组:观察组(消肿止痛合剂组)、对照组(硫酸氨基葡萄糖片组)、模型组、假手术组,每组20只,除假手术外,其余3组通过改良Hulth法行膝骨关节炎造模。药物连续干预8周后,取各组大鼠膝关节软骨,采用ELISA方法检测血清中白细胞介素-6 (IL-6)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、环氧化酶-2(COX-2)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组软骨中LC3、Beclin1、caspase-9 mRNA的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组软骨细胞中pAMPK、mTOR蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组IL-6、MMP-3、COX-2水平明显升高,下调LC3、Beclin1、p-AMPK的表达量,上调caspase-9、mTOR的表达量,差异有统计学意义(P0. 05);与模型组比较,观察组、对照组降低IL-6、MMP-3、COX-2水平,显著上调LC3、Beclin1、p-AMPK的表达量,下调caspase-9、mTOR的表达量,差异有统计学意义(P0. 05);其中观察组优于对照组,差异有统计学意义(P0. 05)。结论消肿止痛合剂对KOA关节软骨损伤的保护可能与AMPK/mTOR信号通路相关。     

褪黑素对骨性关节炎大鼠关节软骨中TGF-β1和IL-1β表达的影响

[目的]探讨褪黑素对骨性关节炎(osteoarthritis,OA)雄性大鼠关节软骨的影响.[方法]雄性SD大鼠40只,通过在大鼠膝关节腔注射4%papain(木瓜蛋白酶)溶液0.2 ml制作骨性关节炎模型和采用持续光照的方法建立大鼠去松果体模型.实验随机分为4组:Ⅰ组:正常对照组(n=10);Ⅱ组:骨性关节炎组(n=10);Ⅲ组:Ⅱ组+持续24 h光照组n=10);Ⅳ组:Ⅲ组+给予褪黑素治疗(n=10).成功建立模型1周后,Ⅳ组左膝关节腔注射浓度为20 mg/ml褪黑素溶液0.2 ml,每周4次,共4周.注射最后1次后,应用ELISA测取大鼠2 Am和2 Pm的血清褪黑素含量,并处死全部老鼠,同时切取股骨髁进行大体观察,之后脱钙制片,行HE染色观察和IL-1β、TGF-β1免疫组化观察(均采用Mankin法进行评分).[结果](1)大体观察:Ⅰ组软骨表面光滑,有弹性且边缘规整;Ⅱ组软骨表面凹凸不平,失去原有的光泽,存在软骨软化现象及软骨下骨外露;Ⅲ组较Ⅱ组严重;Ⅳ组软骨软化现象消失及软骨剥脱,软骨下骨外露减少.(2)组织学观察:Ⅰ组软骨细胞大小一致,排列规整;Ⅱ组软骨细胞排列紊乱,局部可见簇聚现象;Ⅲ组较Ⅱ组严重;Ⅳ组软骨细胞排列较规则,炎性细胞侵润明显较少.(3)免疫组化观察:Ⅳ组关节软骨IL-1β表达显著低于Ⅲ组和Ⅱ组.Ⅳ组关节软骨TGF-β1表达显著高于Ⅲ组和Ⅱ组.同时,4组组织学和免疫组化的Mankin评分比较差异均有统计学意义.[结论]雄性OA模型大鼠在持续光照下可以加快骨性关节炎关节软骨的的退变进程.浓度为20 mg/ml的褪黑素溶液0.2 ml关节腔注射4周后能够抑制骨性关节炎的进一步发展,其可能作用机制与上调软骨生长因子TGF-β1及下调炎性因子IL-1β表达有关.