Nrf2/ARE通路调节机制的研究进展

核因子 E2 相关因子 Nrf2 是一个参与多种蛋白表达的核转录因子, 是机体氧化应激反应的调节中枢, 它与抗氧化反应元件 （ARE） 结合后可启动下游多个抗氧化、 抗炎蛋白及解毒酶等的表达, 其介导的这一信号通路参与了炎症、 肿瘤等多种病理过程的发生发展。本综述在阐述其基本结构、 生物学效应以及介导的信号通路的基础上, 针对各种参与该信号通路正负向调控的因素及调控机制的最新研究进展进行了概述, 为抗炎症、 抗氧化以及抗肿瘤等生物化学治疗提供了新的靶点, 在此基础上, 本文也展望了生物信息学技术的应用将会为这一靶点的干预提供更好     

Nrf2/ARE信号通路及其调控的抗氧化蛋白

机体在应对活性氧(reactive oxygen species,ROS)损害时形成了一套复杂的氧化应激应答系统,当暴露于ROS时,机体自身能诱导出一系列保护性蛋白,以缓解细胞所受的损害。这一协调反应是由这些保护性基因上游调节区的抗氧化反应元件(antioxidant responsive element,ARE)来调控的。而近年来的研究发现,核因子NF-E2相关因子(nuclear fac-tor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)是ARE的激活因子。Nrf2是外源性有毒物质和氧化应激的感受器,在参与细胞抗氧化应激和外源性有毒物质诱导的主要防御机制中发挥重要的作用。Nrf2-ARE通路是迄今为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路。     

Nrf2/ARE信号通路与肝脏疾病的研究进展

对近几年关于Nrf2在各种肝脏疾病中作用的文献进行分析、归纳、总结,发现Nrf2/ARE信号通路的激活在防治病毒性肝炎、酒精性和非酒精性肝炎、胆汁淤积型肝损伤、肝纤维化、肝癌等肝脏疾病中起着重要作用。Nrf2/ARE通路在肝脏病理生理学过程中发挥重要作用,可能为防治肝脏疾病提供新的治疗靶点。     

表没食子儿茶素没食子酸酯作为Nrf2/ARE信号通路激活剂的研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶含量最多、活性最强的有效成分,是绿茶生物学功效的主要研究对象。大量研究表明,EGCG具有抗氧化、清除自由基、抗癌等生物学活性,并参与多条信号通路的调控。核转录因子红细胞系-2p45相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路调节Ⅱ相解毒酶、抗氧化酶和抗炎蛋白等物质转录,直接影响细胞氧化应激水平,是调控氧化还原水平的核心通路。研究表明,EGCG对Nrf2/ARE信号通路具有激活作用,在泌尿、呼吸、心脑血管和消化等众多系统中发挥作用。本文总结了EGCG作为Nrf2/ARE信号通路激活剂的研究进展,为EGCG开发利用提供参考。     

Nrf2/Keap1/ARE信号通路与难治性呼吸系统疾病研究进展

Nrf2/Keap1/ARE是重要的抗氧化信号通路,对维持体内抗氧化物与过氧化物平衡有重要作用。氧化应激发生时,Nrf2/Keap1/ARE信号通路被激活,调控下游抗氧化蛋白表达,减轻氧化应激对机体的损伤并减弱氧化应激的程度。近年来的研究发现,Nrf2/Keap1/ARE信号通路与肺纤维化、肺癌、慢性阻塞性肺病等难治性呼吸系统疾病的发生发展有密切联系,该通路可能作为治疗这类疾病的潜在靶点。该文就Nrf2/Keap1/ARE信号通路在难治性呼吸系统疾病中的作用进行综述,进一步了解其在难治性呼吸系统疾病中的作用机制,为这类疾病发病机制和治疗方案的研究提供可靠的参考。     

槲皮素对胃癌相关p53/AMPK/mTOR信号通路的影响

目的　探讨槲皮素（QE）对胃癌相关p53/AMPK/mTOR信号通路的影响。方法　将胃癌细胞分为QE组和溶剂组,QE组以DMSO为溶剂按配制QE浓度分别为0.02、0.04、0.06及0.08 mmol/L,对细胞进行干预,分别为QEA、QEB、QEC、QED组,溶剂组加入等量不含QE的溶剂。MTT实验检测槲皮素对胃癌细胞增殖的影响;MDC染色法检测槲皮素对胃癌细胞自噬的影响;双染法检测槲皮素对胃癌细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内p53、AMPK及mTOR的mRNA相对表达水平;Western blot检测细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P53、AMPK、mTOR蛋白表达差异。结果　与溶剂组相比,QE各剂量组胃癌细胞的自噬程度和凋亡率均显著增加,细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量上调,p53、AMPK mRNA和蛋白水平均上调,mTOR的mRNA和蛋白表达量均下调（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论　QE可以抑制胃癌细胞增殖,诱导其发生自噬、促进其凋亡,其作用机制可能与p53/AMPK/mTOR信号通路有关。     

虎杖苷调节Akt/MDM2/p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的 探讨虎杖苷(PD)调节蛋白激酶B/原癌基因MDM2/抑癌基因p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法 以人胆囊癌细胞株(GBC-SD)为研究对象,体外培养人胆囊癌细胞株(GBC-SD),使用浓度为10～160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,确定最佳实验浓度。将GBC-SD细胞分为对照组(Control组)、虎杖苷低、中、高浓度组(PD-L组、PD-M组、PD-H组)、虎杖苷+Akt激活剂组(PD+SC79组),Transwell小室法评价细胞的迁移能力,Hoechst染色观察细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,Western blot检测Akt、MDM2、p53磷酸化水平,建立荷瘤小鼠模型评价虎杖苷对胆囊癌肿瘤生长的影响。结果 浓度为10～160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24 h,可显著抑制GBC-SD细胞的增殖活性,选择10、20、40 mmol/L的虎杖苷进行后续实验;与Control组比较,PD-L组、PD-M组、PD-H组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细...     

艳山姜挥发油调控p62/Keap1/Nrf2信号改善糖尿病小鼠胰腺损伤

目的探讨艳山姜挥发油(essential oils from Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对2型糖尿病小鼠胰腺损伤的保护作用及作用机制。方法高糖高脂(HFS)饲料饲养C57 BL/6小鼠形成胰岛素抵抗,腹腔注射链脲佐菌素(STZ,120 mg·kg^-1)建立2型糖尿病小鼠模型,将糖尿病小鼠随机分成糖尿病组(DM)、DM+EOFAZ低剂量组(90 mg·kg^-1)、DM+EOFA高剂量组(180 mg·kg^-1)、DM+二甲双胍组(250 mg·kg^-1),另取健康小鼠随机分为正常对照组、EOFAZ毒性组(180 mg·kg^-1)。EOFAZ组、二甲双胍组分别灌胃EOFAZ和二甲双胍的同时,正常组和DM组以等体积生理盐水灌胃,每日一次,连续灌胃8周后,血糖仪检测血糖。采用HE染色对胰腺进行病理形态学观察;蛋白免疫印迹法分析胰腺组织中p62、Keap1、Nrf2、HO-1、Bcl-2及Bax的表达。免疫组织化学分析胰腺组织中Nrf2的表达水平。结果与模型组相比较,给予EOFAZ后,可明显改善胰岛的病理形态;明显下调Keap1、Bax蛋白表达,并上调p62、Nrf2、Ho-1及Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论EOFAZ对糖尿病诱导的胰腺损伤具有明显的改善作用,其作用可能与激活p62/Keap1/Nrf2信号通路,抑制凋亡信号相关。     

Nrf2-ARE信号通路在左乙拉西坦抗癫痫中的作用

目的探讨Nrf2-ARE信号通路在左乙拉西坦抗癫痫中的作用,以及应用左乙拉西坦对认知功能的影响。方法成年♂SD大鼠36只,250~300 g,随机分为生理盐水对照(control)组、戊四唑(1,5-pentamethylene-1H-tetrazole,PTZ)癫痫模型组、左乙拉西坦(levetiracetam,LEV)对照组以及左乙拉西坦治疗组,每组9只。以Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力;用免疫印迹法测定海马组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达量。结果与癫痫模型组相比,给予左乙拉西坦治疗的癫痫大鼠在Morris水迷宫测试中潜伏期明显缩短(P<0.05),海马Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达均明显增高(P<0.01)。结论左乙拉西坦能够改善癫痫大鼠的认知功能,其机制可能通过Nrf2-ARE通路,使HO-1、NQO1蛋白表达增多,起到抗癫痫的作用。     

Nrf2/ARE信号通路及其相关药物研究进展

Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶在细胞防御保护中发挥重要作用。现有研究显示Nrf2/ARE通路在抗炎、抗肿瘤、神经保护、抗凋亡等多方面具有重要作用,以Nrf2为靶点的药物有望用于多发性硬化、糖尿病、神经退行性疾病、肿瘤等多种疾病的治疗,其中已有富马酸二甲酯、巴多克沙龙等多个新药进入临床研究阶段。就Nrf2/ARE通路与疾病的关系及以其为靶点的新药研发进展做一综述。     

Nrf2-ARE信号通路功能与临床疾病及相关药物的研究新进展

Nrf2（NF-E2-related factor 2）核因子E2相关因子是一种机体抵抗内界和外界氧化或化学等刺激的中枢调节者。Nrf2-ARE则是近年来新发现的细胞氧化应激反应的关键传导通路,当其在体内被有毒有害物质激活后转位进入细胞核能与抗氧化反应元件（antioxidant response element,ARE）结合形成Nrf2-ARE信号通路,从而调控下游抗氧化蛋白、氧化酶和Ⅱ相解毒酶等。研究发现该通路在抗衰老、抗肿瘤、抗炎症、神经损伤、眼科等多方面均有重要作用。以Nrf2为靶点的药物有望用于肿瘤、糖尿病、神经退行性疾病等。本文综述了Nrf2-ARE信号通路功能及以其为靶点的药物研究的进展。     

基于Nrf2/HO-1信号通路的中药有效成分缓解肝损伤研究进展

近年研究已证实,氧化应激是造成肝损伤的重要因素,研究发现核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）可以通过调控氧化应激以缓解肝损伤。中药单体或中药复方可以通过调控该信号通路减少氧化应激、铁死亡、炎症和细胞焦亡的发生以缓解肝损伤。对中药中的黄酮类、多糖、酚酸、甾体类等有效成分通过 Nrf2/HO-1信号通路在氧化应激与肝损伤之间的相互作用进行综述,对于寻求靶向 Nrf2/HO-1信号通路发挥缓解肝损伤作用的中药提供依据,同时为中药治疗肝损伤作用机制的深入研究提供参考。     

基于Nrf2/HO-1信号通路研究橄榄苦苷的体外抗炎作用

目的 探讨橄榄苦苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞（RAW264.7）炎症的保护作用及机制。方法 MTT法检测橄榄苦苷（0、10、20、40 μmol/L）对RAW264.7细胞活性的影响;用橄榄苦苷（10、20、40 μmol/L）预处理细胞1 h后,LPS诱导炎症模型,Griess试剂检测细胞内Nitrite释放;Western blotting方法检测细胞iNOS、COX-2、Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO1蛋白表达水平;流式细胞仪检测细胞内NO、ROS、Ca²⁺的水平;荧光显微镜检测线粒体膜电位（MMP）水平;ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的释放。结果 与模型组比较,橄榄苦苷组Nitrite释放水平显著降低（P<0.05、0.01、0.001）,iNOS、COX-2蛋白的表达显著降低（P<0.001）,NO的产生显著减少（P<0.05、0.01）;TNF-α、IL-6的释放受到显著抑制（P<0.001）;Ca²⁺释放受到显著抑制（P<0.01）;ROS生成受到显著抑制（P<0.01）;JC-1单体降低,恢复聚合物状态（红色荧光变多）,MMP稳定性增强;Keap1蛋白表达显著降低, Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表达均显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 橄榄苦苷对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症具有抑制作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路相关。     

紫杉醇对鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用及对PI3K/AKT/p53信号通路的影响北大核心CSCD

目的研究紫杉醇对鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用及对PI3K/AKT/p53信号通路的干预。方法将CNE2细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组细胞以等量生理盐水处理,低、中、高剂量实验组CNE2细胞以5,10,20 mol·L^(-1)紫杉醇处理。以溴化四唑蓝比色(MTT)法检测CNE2细胞增殖,以免疫荧光法检测CNE2细胞中FoxO3a蛋白表达,以蛋白免疫印迹法检测CNE2细胞中PI3K/AKT/p53信号通路相关蛋白表达情况。结果干预24 h,低、中、高剂量实验组CNE2细胞增殖抑制率(PIR)分别为(22.93±0.08)%,(43.76±0.09)%,(47.51±0.09)%;48 h增殖抑制率分别为(45.33±0.09)%,(52.02±0.10)%,(65.66±0.12)%;72 h增殖抑制率分别为(46.59±0.10)%,(64.16±0.12)%,(69.85±0.14)%。实验组CNE2细胞增殖抑制率随紫杉醇浓度的增加及作用时间的延长呈逐渐升高趋势。免疫荧光检测可见,高剂量实验组细胞核中FoxO3a蛋白表达量为29.61±1.23,明显高于对照组的20.13±0.59(P<0.01)。蛋白免疫印迹法检测可见,与对照组比较,低、中、高剂量实验组FoxO3a蛋白表达量升高(P<0.05或P<0.01),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、p53、p21蛋白表达量降低(P<0.01)。结论紫杉醇可有效抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,与显著调节PI3K/AKT/p53信号通路中蛋白表达相关。     

Nrf2/ARE信号通路在异丙酚减轻老龄大鼠肺缺血再灌注损伤中的应用意义

目的 分析核因子E2相关因子/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路在异丙酚减轻老龄大鼠肺缺血再灌注损伤中的应用意义.方法选择清洁级健康成年雄性大鼠28只,按数字随机表法分为4组,其中假手术7只(假手术组),缺血再灌注7只(缺血再灌注组),缺血再灌注结合异丙酚7只(I/R+P组),缺血再灌注结合异丙酚与全反式维甲酸...     

圣草次苷激活Nrf2信号通路保护H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤作用研究

目的 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤模型,考察圣草次苷改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法 利用无糖无血清培养基结合厌氧（94%N₂、5%CO₂、1%O₂）处理H9c2心肌细胞4h后,更换新鲜完全培养基再放入正常孵箱复氧24h,制备H/R损伤模型。在造模前12h给予圣草次苷（5、10、20μg·mL^-1）,细胞活力及乳酸脱氢酶（LDH）检测实验中选择灯盏乙素（20μg·mL^-1）作为阳性药,对照组及模型组给予等体积DMSO。MTT法测定细胞存活率;试剂盒检测细胞培养上清液中LDH水平;试剂盒检测细胞内丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力;TUNEL染色检测细胞凋亡;DCFH-DA和JC-1探针分别检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位改变;Western blotting检测核蛋白中转录因子（NF）-E2相关因子2（Nrf2）和总蛋白中血红素氧合酶1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）水平。结果 与对照组比较,H/R损伤诱导的模型组细胞存活率明显下降,凋亡明显增加,LDH水平明显升高,细胞内MDA水平明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低,ROS释放明显增多,线粒体膜电位明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较,圣草次苷可剂量相关性地改善上述变化,其中10、20μg·mL^-1组均差异显著（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞Nrf2核转位以及HO-1、GCL表达水平无显著变化;与模型组比较,圣草次苷10、20μg·mL^-1显著增加Nrf2核转位及HO-1、GCL表达水平（P＜0.01）。结论 圣草次苷能够保护H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,其可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,增加细胞内源性抗氧化能力,抑制氧化应激损伤,保护线粒体功能以阻止细胞凋亡的发生。     

田蓟苷调控p53/NOX4信号通路抗缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的机制

目的:探究田蓟苷(tilianin, Til)预处理对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞的保护作用。方法:体外培养H9c2心肌细胞,将其分为正常(Normal)组、模型(H/R)组、田蓟苷(Til)组、p53激动剂(Nutlin-3a)组、田蓟苷+p53激动剂(Til+Nutlin-3a)组,缺氧12 h再复氧6 h,建立H/R模型。CCK-8法测H9c2细胞活力,化学荧光法测ROS水平,试剂盒测LDH、MDA、SOD水平,JC-1法测线粒体膜电位(ΔΨ_m),Annexin-FITC/PI和Fluo-3 AM分别结合流式细胞仪检测细胞凋亡率和Ca²⁺荧光强度,RT-PCR测定p53、NOX4、Bax、Bcl-2 mRNA表达,免疫蛋白印迹法检测p53、NOX4、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白表达,免疫荧光法测定p53、NOX4蛋白表达。结果:相较于H/R组,Til组H9c2细胞活力增强(P<0.01),ROS、LDH、MDA水平下降(P<0.01),SOD水平上升(P<0.01),ΔΨ_m     

Nrf2抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展

核因子E2相关因子2 (Nrf2)是一种多功能的转录因子,在细胞保护机制中起着至关重要的作用。随着Nrf2调控新模式和新功能研究的不断深入, Nrf2在恶性肿瘤中的促癌作用日益凸显。越来越多的证据表明Nrf2参与了肿瘤的发生、发展、转移和预后的整个过程,抑制Nrf2是一种较有前景的肿瘤治疗策略。目前, Nrf2抑制剂的研究尚处在早期阶段。本文简要介绍Nrf2的生物学功能,以及其在肿瘤发生中的双重作用,并根据结构类型对代表性的Nrf2抑制剂进行综述,为围绕Nrf2调控开发抗肿瘤药物提供借鉴及思路。     

藏药三果汤调节Nrf2/HO-1信号通路干预高脂血症大鼠的作用机制研究

目的：基于Nrf2/HO-1信号通路探讨藏药三果汤对高脂血症大鼠保护作用及相关作用机制。方法：雄性SD大鼠48只,随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组（3.5 mg/kg）,藏药三果汤低、中、高剂量组（0.43 g/kg、0.86 g/kg、1.72 g/kg）,每组8只。正常组给予基础饲料喂养,其余各组给予H00016高脂饲料喂养,制备高脂血症大鼠模型,造模的同时,各给药组每天一次给予相应药物灌胃,正常对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水（1次/d）,连续灌胃6周。实验期间每周固定时间称取各组大鼠体重一次,6周后试剂盒检测血清中血脂（TC、TG、LDL与HDL）及氧化指标（MAD、SOD与GSH）的水平。Western Blot法测定肝组织中Nrf2、HO-1、Keap1、NQO1蛋白表达,采用person相关性分析分析血脂与氧化指标之间的相关性。结果：与正常对照组比较,模型对照组的体重明显增加,血清中的TC、TG、LDL、MDA含量明显升高,而血清中HDL含量明显减低,SOD、GSH活力明显减低（P<0.05或P<0.01）;与模型对照组比较,各给药组的体重减轻,血清中的TC、TG、LDL、MDA含量明显减低,血清中的HDL含量明显升高,SOD、GSH活力明显升高（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,模型对照组Keap1蛋白水平表达明显上调,Nrf2、HO-1与NQO1蛋白水平表达明显下调（P<0.05或P<0.01）,与模型对照组比较,三果汤低、高剂量肝组织中的Keap1蛋白水平表达明显下调,Nrf2、HO-1与NQO1蛋白水平表达明显上调（P<0.05或P<0.01）。相关性分析可见TG与SOD、HO-1及NQO1呈负相关,与Keap1呈正相关,TC与SOD、HO-1、GSH及Nrf2呈负相关,与Keap1及MDA呈正相关。结论：藏药三果汤可改善高脂血症大鼠体重及血脂水平,其机制可能与调节Nrf2/HO-1信号通路,改善氧化应激有关。     

基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路研究当归醇提物对多囊卵巢综合征大鼠的保护作用

目的 使用来曲唑联合高脂饮食建立多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome, PCOS)大鼠模型,探讨当归醇提物(ethanol extract of Angelicae Sinensis Radix, EEA)对PCOS大鼠的保护作用及其作用机制。方法 来曲唑联合高脂饮食诱导雌性SD大鼠建立PCOS模型,并用EEA干预。阴道涂片染色、HE染色、酶联免疫吸附法(ELISA)和生化指标检测评价EEA对PCOS大鼠的治疗作用,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测EEA对Keap1/Nrf2/HO-1信号通路的影响。结果 阴道涂片和HE染色结果表明,EEA改善了PCOS大鼠动情周期紊乱和卵巢组织病变,ELISA和生化指标检测结果表明EEA可以调节激素紊乱,改善血脂异常;且在模型组中Keap1蛋白和mRNA表达明显上调,Nrf2和HO-1蛋白和mRNA表达明显下调而经过EEA治疗后Keap1蛋白和mRNA表达明显下调,Nrf2和HO-1蛋白和mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论 EEA可以减轻大鼠PCO...