三氧化二砷对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖及新癌基因PPO表达的影响

目的 探讨三氧化二砷对人恶性黑素瘤A375细胞株细胞周期、增殖、凋亡及新癌基因PPO(proliferation and phosphorylation oncogene)表达的影响.方法 培养人恶性黑色素瘤A375细胞株,采用 MTT法检测三氧化二砷在不同浓度和不同时间下对A375细胞增殖的影响,流式细胞术分析三氧化二砷对细胞周期及凋亡的影响,倒置相差显微镜观察药物处理后对人A375细胞的细胞分化及形态的影响,免疫细胞化学(SP)法检测三氧化二砷对PPO蛋白表达的影响.结果 MTT法证实三氧化二砷在1～10 μmol/L浓度范围内对A375细胞有明显的增殖抑制作用,呈现明显的剂量和时间依赖效应关系.流式细胞术检测发现,随着药物浓度的增加,G0/G1的细胞逐渐减少(P＜0.01),S期的比例显著增加,出现S期阻滞.倒置显微镜观察发现细胞出现典型凋亡细胞形态学改变.免疫细胞化学法检测PPO蛋白主要表达于A375细胞胞浆内,染色呈棕黄色.三氧化二砷作用48 h后,随着药物浓度的增加,PPO的染色程度逐渐减弱,差异具有显著性(P＜0.01).结论 三氧化二砷能够显著抑制A375细胞株增殖,并诱导凋亡发生,且与三氧化二砷的浓度和作用时间成正相关,其作用机制可能是通过下调新癌基因PPO的表达发挥作用.     

红景天苷对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响

目的：观察红景天苷对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖及凋亡的影响。方法分别用0、0．01、0．1、1、10、100μg/mL红景天苷处理人恶性黑色素瘤细胞A375后,MTT法检测各组细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测各组细胞周期依赖性激酶CDk4和CDk2 mRNA、细胞周期素CyclinE和CyclinD1 mRNA的影响。结果与阴性对照组比较,各给药组细胞增殖抑制率明显增多（P＜0．05）。给药组细胞以G0/G1期为主,S期细胞增加,G2/M期细胞减少（P＜0．05）。给药组中的CDk2、 CDk4、CyclinD1和CyclinE mRNA表达较阴性对照组明显降低（P＜0．05）。结论红景天苷能够抑制人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和促进其凋亡。     

三氧化二砷对正常肝细胞及肝癌细胞株的影响

目的观察不同浓度Ａｓ２Ｏ３作用不同时间对正常肝细胞及肝癌细胞株的影响。方法０．１２５～２μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３与肝细胞及肝癌细胞株共孵育一定时间后,观察细胞的存活、形态学改变及细胞ＤＮＡ含量的分布。结果１μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３处理的肝癌细胞第５天呈典型的凋亡特征性改变：在形态学上表现为细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;流式细胞仪分析显示,在Ｇ１期细胞前出现亚二倍体峰,琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性Ｌａｄｄｅｒ带;而正常肝细胞则未见明显改变。结论Ａｓ２Ｏ３可诱导肝癌细胞凋亡。     

三氧化二砷抑制人肝癌细胞株增殖和诱导凋亡作用

目的体外培养人肝癌细胞株HepG-2,BEL-7402,观察测定应用不同浓度三氧化二砷后多种指标的变化,从多个角度探讨三氧化二砷的抗肿瘤作用及其机制.方法应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透射电镜、扫描电镜、流式细胞仪、细胞免疫组化法,分别对不同浓度加药组及对照组HepG-2,BEL-7402细胞的存活,形态学改变,细胞DNA含量的分布以及Bc1-2,Bax蛋白的表达进行了观察和测定.结果0.5,1,2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株细胞的生长增殖.流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减小、核变圆、胞质内出现分化良好的细胞器,0.5,1,2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成.细胞免疫组化法测定Bcl-2,Bax蛋白的表达以及两者之间的比率均有变化.结论三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡.诱导肝癌细胞凋亡与Bd-2,Bax蛋白的表达改变有关.     

三氧化二砷对裸鼠膀胱癌细胞凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)抑制膀胱癌细胞生长的作用。方法体外培养膀胱癌T24细胞,取指数生长期T24细胞裸鼠皮下接种,成瘤后连续7 d尾静脉分别注射As2O3(5、10 mg·kg-1·d-1)、丝裂霉素(MMC)及生理盐水。应用电镜、流式细胞术和免疫组化等方法检测了癌细胞的超微结构变化、细胞的凋亡和Caspase3蛋白的表达。结果电镜下As2O3组可见典型癌细胞凋亡的形态学改变;流式细胞分析,As2O3组可见癌细胞凋亡峰,凋亡率分别为10．67％和23．42％,明显高于对照组(0．83％);免疫组化检测As2O2组Caspase 3蛋白表达(33．54％和56．22％)也明显高于对照组(6．25％)。结论As2O3可以通过诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞生长。     

三氧化二砷对膀胱癌BIU-87细胞凋亡的影响

有文献报道,三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)不仅能用来治疗白血病, 对胃癌、肺癌、恶性黑色素瘤等也有良好的治疗效果。为此,作者以人膀胱癌 BIU-87细胞为实验对象,观察As2O3对癌细胞的生长和抑制作用,旨在为膀胱癌的临床治疗提供实验依据。 1 材料与方法 1．1 细胞培养:BIU-87细胞(哈尔滨医科大学附属第一医院泌尿外科提供)按     

三氧化二砷选择性诱导人肝癌细胞凋亡及 相关基因的实验研究

目的 明确三氧化二砷对人肝癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制。方法 用四甲基偶氮唑蓝法、AO/EB荧光染色法、透射与扫描电镜观察、DNA电泳、流式细胞术、TUNEL法及免疫组织化学等方法,观察了三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株QGY-7701、QGY-7703和正常人肝细胞株L-02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响。结果 三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞QGY-7701和QGY-7703的生长,用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡形态学和生化学改变,并使细胞周期阻滞于S期,且bcl-2基因表达明显下降,bax和Fas基因表达显著增强;三氧化二砷对正常人肝细胞株L-02无明显作用。结论 三氧化二砷对人肝癌细胞有显著的选择性诱导凋亡作用,且受到多种基因调控,这一结论为应用三氧化二砷治疗原发性肝癌提供了可靠的实验依据。     

三氧化二砷诱导人脑SHG-44胶质瘤细胞凋亡

目的观察三氧化二砷(As2O3)对SHG-44胶质瘤细胞增殖抑制的分子机制。方法在加入SHG-44胶质瘤细胞As2O348 h后,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)方法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR及蛋白免疫印迹(WB)方法,检测BAX及Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平。结果As2O3对SHG-44胶质瘤细胞的抑制作用随着药物浓度的升高而增强;BAX mRNA及蛋白表达水平与对照组比无明显变化(P0.05),BAX mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 As2O3通过促进细胞凋亡而抑制SHG-44胶质瘤细胞的增殖。     

缺氧时三氧化二砷对人肝癌细胞株BEL-7402生长及凋亡的影响及机制

目的:探讨不同浓度三氧化二砷(As_2O_3)对人肝癌细胞株BEL-7402生长及凋亡的影响及机制.方法:应用化学缺氧剂二氯化钴(CoCl_2)诱导人肝癌细胞BEL-7402缺氧.不同浓度As_2O_3对BEL-7402进行干预后,应用MTT法测定缺氧条件下的生长抑制作用:应用电镜,激光共聚焦显微镜及流式细胞术观察其对细胞凋亡的影响;应用逆转录聚合酶链式反应检测缺氧诱导因子HIF-1α,耐药基因mdrl的表达水平.结果:As_2O_3具有抑制人肝癌细胞株BEL-7402缺氧条件下生长的作用,并呈剂量-效应依赖性;4.0μmol/L AS_2O_3干预48h后,缺氧条件下的细胞呈现典型的凋亡形态学特征;缺氧时,0.5-4.0μmol/L As_2O_3下调HIF-1α,mdrl基因表达水平,其中4.0μmol/L AS_2O_3组作用最强,基因相对表达量分别为HIF-1α0.60±0.07,mdrl 0.59±0.09.各剂量组As_2O_3作用后与缺氧对照组比较差异有显著性(P<0.01).结论:不同浓度的As_2O_3在由CoCl_2诱导的化学缺氧奈件下能够抑制人肝癌细胞BEL-7402的生长及诱导凋亡,其机制可能与As_2O3下调HIF-1α、mdrl的基因表达水平有关.     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡影响的体外研究

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞的凋亡异常,以及三氧化二砷(As_2O_3)对体外培养RA的滑膜细胞凋亡的诱导作用.方法 用光镜、电镜、流式细胞仪检测As_2O_3对体外培养的RA滑膜细胞凋亡的诱导作用,As_2O_3,作用于RA滑膜后酶联免疫吸附试验(ELISA)检测凋亡过程中细胞色素C的变化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Caspase-3.Bel-2 mRNA表达,采用单因素方差分析和LSD-t检验、Dunnet-t检验进行统计学处理.结果 流式细胞仪检测发现不同浓度的As_2O_3作用后,滑膜细胞的凋亡较空白对照组(NC)增加[NC(0.95±0.87)%,RA(0.21±0.12)%,P<0.05],呈一定的剂量依赖性,尤其以80 μmol/L药物浓度最为明显.凋亡早期(6 h)细胞色素C水平升高80 μmol/L组升高明显[NC(0.34±0.27),80 μmol/L组(32.04±1.62),P<0.05];不同浓度的As_2O_3作用后细胞中Caspase-3 mRNA表达显著增强[NC(0.144±0.022),RA(0.323±0.047),(0.824±0.109),(1.213±0.196),P<0.05],Bcl-2的mRNA表达显著减弱[NC(1.08±0.23),RA(0.94±0.15),(0.46±0.08),(0.22±0.06),P<0.05].结论 RA患者滑膜细胞凋亡较健康埘照减少,As_2O_3通过升高细胞色素c及Caspase-3,抑制Bcl-2诱导RA滑膜细胞凋亡.     

砷剂对NB4细胞凋亡过程的影响

目的 :探讨砷制剂诱导NB4 细胞凋亡的途径及调控因子。方法 :将NB4 细胞与不同浓度的As2 O3 共同孵育 ,在不同时间 ,用比色法检测NB4 细胞胞浆内Caspase 3、 6、 8的活性 ,并用流式细胞仪检测细胞内转录因子NF κB的表达 ,同时作细胞周期分析及DNA梯度鉴定As2 O3 的致凋亡作用。结果 :NB4 细胞在 1.0、2 .0 μmol/LAs2 O3 的诱导下 ,于 16～ 2 4h的时段内均有明显的凋亡现象 ;期间 ,Caspase 3, 6 , 8被活化 ,较对照组差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;不同的时间点Caspase家族成员激活顺序不同 ,这种时间上的差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;NF κB在 6～ 16h期间的对照组和加药组 (1.0 μmol/LAs2 O3 )均有表达 ,加药组较对照组明显减低 (P <0 .0 5 ) ,但无时间依从性。结论 :As2 O3 可抑制NF κB的表达 ,诱发凋亡 ;NB4 细胞通过Caspase途径凋亡 ,顺序可能为Caspase 8→Caspase 6→Caspase 3,其中 ,Caspase 6是活性较高的成员之一 ;As2 O3 作为NF κB的有效抑制剂 ,可能对多种肿瘤有潜在的治疗意义。     

氧化砷诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究三氧二化砷（氧化砷）对胃癌细胞的诱导凋亡作用。方法 应用ＴＵＮＥＬ染色、流式细胞仪技术研究氧化砷对胃癌细胞ＭＫＮ－４５、ＭＫＮ－２８的诱导凋亡作用。结果 氧化砷作用于不同分化程度的胃癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化：细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片断化,凋 亡小体形成等。流式细胞仪ＤＮＡ直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”。ＴＵＮＥＬ染色法     

三氧化二砷对体外培养的人子宫内膜腺癌细胞凋亡的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对体外培养的人子宫内膜腺癌JEC细胞株细胞凋亡的影响。方法采用体外细胞培养的方法,以透射电子显微镜观察人子宫内膜腺癌JEC细胞株形态变化,流式细胞仪分析细胞DNA水平及细胞周期,并测定细胞凋亡情况。结果(1)4.0μmol/LAs2O3作用72h,在电子显微镜下可见细胞核固缩、核碎裂、染色质边集等改变;8.0、16.0μmol/LAs2O3作用48h后,部分细胞出现染色质边集及核碎裂;(2)As2O3<2.0μmol/L时,G0/G1期和S期细胞明显减少,G2/M期细胞增多;As2O3为2.0、4.0μmol/L时,在细胞周期G1期前可见典型的细胞凋亡峰;As2O3为8.0～16.0μmol/L时,则主要表现为细胞坏死。结论As2O3可诱导人子宫内膜腺癌JEC细胞株发生细胞凋亡。     

沙立度胺和三氧化二砷对人类骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞株的影响

目的:探讨沙立度胺和三氧化二砷对人类骨髓增生异常综合征细胞株的影响及作用机制。方法:采用CCK-8法检测沙立度胺、三氧化二砷、以及二者联合用药对人MUTZ-1细胞株增殖是否有抑制作用。采用ELISA法、半定量RT-PCR方法分别检测沙立度胺、三氧化二砷、以及2者联合对人类骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1血管内皮生长因子(VEGF)是否有抑制作用,并用流式细胞术对细胞株在3组药物作用后行凋亡检测。结果:CCK-8法提示沙立度胺体外对MUTZ-1细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05)。三氧化二砷对MUTZ-1细胞有明显生长抑制作用(P<0.05)。联合用药组的抑制作用明显高于三氧化二砷、沙立度胺单独用药组,两药存在协同作用。ELISA法、半定量RT-PCR方法检测显示沙立度胺组药物浓度分别为10、25mg/L的2组对MUTZ-1细胞分泌的VEGF无明显抑制作用(P>0.05)、50、100、200mg/L的3组对MUTZ-1细胞分泌的VEGF有明显抑制作用(P<0.05),其中以50mg/L为最明显,三氧化二砷组从0.05、0.25、0.5、2.5、5至10μmol/L随着浓度逐渐增高细胞株分泌VEGF逐渐下降,呈剂量依赖性分泌抑制(P<0.05)。沙立度胺凋亡率随着药物浓度增加无明显升高(r=0.313,P>0.05),三氧化二砷组的凋亡率随着药物浓度增加升高,呈剂量依赖(r=0.627,P<0.05),联合用药组随着药物浓度增加表达亦下降,呈剂量依赖(P<0.001)。结论:沙立度胺体外对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用。三氧化二砷对MUTZ-1细胞有明显生长抑制作用。联合用药组的抑制作用明显高于三氧化二砷、沙立度胺单独用药组。低浓度沙立度胺对VEGF表达无明显的抑制作用。高浓度沙立度胺对VEGF表达有明显的抑制作用。三氧化二砷在一定浓度范围内能抑制VEGF表达,呈浓度依赖。联合用药组的抑制作用明显高于三氧化二砷、沙立度胺单独用药组。沙立度胺凋亡率随着药物浓度增加无明显升高,三氧化二砷组的凋亡率随着药物浓度增加升高,呈剂量依赖,联合用药组随着药物浓度增加表达亦下降,呈剂量依赖。     

氧化砷诱发胃癌细胞株凋亡的初步研究

目的在三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗ＡＰＬ的基础上，进一步探讨Ａｓ２Ｏ３能否诱发胃癌细胞株凋亡。方法采用荧光标记法，经流式细胞仪和荧光显微镜观察Ａｓ２Ｏ３对ＭＫＮ４５和ＳＧＣ７９０１胃癌细胞株的凋亡诱发率和形态学改变。结果发现Ａｓ２Ｏ３诱发胃癌细胞凋亡率高于５－Ｆｕ的作用；形态学见凋亡细胞呈荧光标记阳性，细胞内出现斑块状荧光，体积缩小。结论Ａｓ２Ｏ３可诱发胃癌细胞凋亡，有必要进一步探索其对胃癌治疗的价值。     

三氧化二砷诱导胰腺癌细胞系PC-3凋亡及其抑制转移的作用

目的:探讨三氧化二砷(亚砷酸,As2O3)注射液诱导人类胰腺癌细胞凋亡及其抑制转移的作用机制.方法:用AS2O3处理人胰腺癌细胞株PC-3,通过流式细胞仪观察细胞的凋亡率及生长周期的变化;用免疫组织化学的方法,检测凋亡相关基因蛋白Fas,Fas-L,Bc1-2和Bax及转移相关基因蛋白CD44和nm23表达的变化.结果:流式细胞仪检测显示明显的凋亡峰出现,并使细胞周期主要被阻滞在S期(14.9%-63.7%);免疫组化结果显示,Bc1-2( ～ ),CD44( ～ )基因的表达下调,Fas( ～ )、Fas-L(-～ )及nm23( ～ )基因的表达上调.结论:As2O3注射液可诱导人类胰腺癌细胞株PC-3凋亡并具有抑制转移作用,这可能与调节Bc1-2,Fas,Fas-L及CD44,nm23蛋白的表达有关.     

氧化砷诱导胃癌细胞凋亡的信号传导途径研究

目的 检测氧化砷(As2O3)诱导胃癌细胞株(SGC-7901和MKN-45)凋亡过程中cAMP、蛋白激酶C(PKC)和酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性变化，以探讨其诱导胃癌细胞凋亡过程中可能存在的信号传导途径。方法 应用钙离子拮抗剂、PKC和PTK抑制剂研究其对AS2O3诱导胃癌细胞凋亡过程的影响，以TUNEL法检测细胞凋亡率。以放射免疫法测定As2O3作用前后细胞内cAMP水平的变化。抽提PKC和PTK蛋白，以Lowry法测定As2O3作用前后各自蛋白表达水平的变化。结果 钙离子拮抗剂对As2O3诱导胃癌细胞凋亡过程没有影响，PKC和PTK抑制剂不仅本身能诱导胃癌细胞凋亡，且对As2O3诱导胃癌细胞凋亡具有协同作用。在As2O3诱导胃癌细胞凋亡过程中存在cAMP浓度增高和PKC、PTK活性显著降低，提示cAMP、PKC和PTK可能参与As2O3诱导胃癌细胞凋亡的作用。结论 PKC和PTK抑制剂可以通过影响信号传导系统诱导胃癌细胞凋亡，并能促进As2O3诱导胃癌细胞凋亡。     

三氧化二砷对肺腺癌细胞凋亡及肺耐药蛋白基因多药耐药蛋白基因表达的影响

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人肺腺癌的抑制和诱导凋亡作用及对LRP、MRP基因表达的影响及可能机制。方法　哈尔滨医科大学第一临床医院呼吸内科于 2 0 0 2 - 0 5～ 2 0 0 4 - 0 6选用人肺腺癌A5 4 9细胞株 ,运用体外细胞培养法 ,MTT法 ,流式细胞术检测As2 O3 对人肺腺癌的抑制和诱导凋亡作用 ;用逆转录 -聚合酶链反应(RT -PCR)方法检测LRP、MRPmRNA的表达。结果　As2 O3 对人肺腺癌A5 94细胞具有抑制作用 ,其抑制率呈时间 -剂量依赖关系。不同浓度的As2 O3 均可诱导凋亡。 1 0 μmol/L、2 0 μmol/L的As2 O3 可下调LRP、MRPmRNA的表达。结论　As2 O3 具有抗肿瘤作用 ,主要是通过诱导细胞凋亡实现的 ,其机制与下调LRP、MRPmRNA表达有密切关系。