多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究

目的 开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法 选择小鼠精子／睾丸特异性抗原SP17、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架，按一定连接方式设计、合成新抗原35肽，并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB／C小鼠。结果 在430A固相自动肽合成仪上成功地合成35肽，并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达95％以上；免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度最高达1：6000，阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达1：300；小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达50％左右，淋巴细胞分泌的INF－γ和IL－4分别为60、108μg/ml；实验组BALB／c雌鼠妊娠率平均降至60％，每胎产仔数平均降低58％－71％。结论 含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫，并使小鼠受孕率下降，为研制适宜于两性的多价抗生育疫苗提供了实验基础。     

多价精子抗原表位多肽-免疫刺激复合物的抗生育作用研究

目的 提高多价小鼠精子抗原表位多肽的免疫性避孕效应。方法 应用固相化学合成法合成具有两种精子抗原蛋白关键表位的35肽，纯化后的多肽与皂甙Quil A及磷脂、胆固醇混合，透析制备多肽－免疫刺激复合物（ISCOMs)，并用于免疫雌性C57小鼠。结果 合成后的35肽经纯化后纯度大于95％，经质谱仪鉴定质荷比与理论值一致；透析法制备的多肽－ISCOMs在电镜下呈规则的蜂巢样、由多个亚单位构成的开放型结构；免疫后小鼠的血清及阴道冲洗液中特异性IgG和IgA最高分别为1：18000和1：1600；同时受孕率降为20.0%，显著低于对照组（P≤0.01)。结论 多肽－ISCOMs复合物具有独特的蜂巢样结构，其应用可显著提升多肽的免疫效应，尤其是粘膜免疫，获得较好的免疫性避孕效果，具有广阔的应用前景。     

与不孕不育相关的ASA的同源抗原研究进展

当今社会越来越多的已婚育龄夫妇被不孕不育问题所困扰,据统计大约有10%～15%育龄夫妇因各种原因不能生育,并且比例似乎还有上升趋势[1].     

筛选精子抗原的研究进展

抗精子抗体的产生可能是引起不孕症的原因之一。近年来,对诱导抗精子抗体产生的精子抗原的研究逐渐深入,发现利用精子抗原的免疫原性可以达到免疫法避孕的目的。最近新发现了一些精子自身抗原和同种抗原,但是有些抗原在不孕症中的作用还没有得到证实。对精子抗原免疫反应本质的详细了解有助于发展避孕疫苗。     

HIV多抗原表位疫苗的构建

以CD8^＋的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和CD4’的辅助性T淋巴细胞（HTL）为介导的细胞免疫应答是有效地控制和清除包括HIV在内的多种病毒病原体的必备条件。因而，人们对于能够诱导CTL和HTL免疫应答的HIV-1疫苗的研究兴趣浓厚，使HIV疫苗很快由学术研究向商品开发和工业生产等领域过渡和延伸。     

黑素瘤抗原-3表位及基因治疗研究进展

黑素瘤抗原-1（Melanoma antigen-1。MAGE-1）是Vander Bruggen等于1991年在研究恶性黑素瘤时发现的人类第一个肿瘤特异性抗原．现已形成拥行24个结构上相似的MAGE基因成员的家族。MAGE蛋白及其细胞毒性T淋岜细胞（Cytolytic T lymphocyte，CTL）表位不仅能在体外有效诱导特异性CTLs的产生．而且也能在细胞内诱导特异性CTLs的产生，从而使部分肿瘤缩小或消退。     

抗精子抗体与不孕的研究现状

近年来对免疫性不孕的研究,发现与不孕有关的自身抗体分两类:非器官特意性自身抗体和器官特异自身抗体.所谓非器官特异性自身抗体是指针对存在于不同组织的共同抗原的抗体.如抗磷脂抗体(APA)、抗核抗体(ANA)、抗DNA抗体等.所谓器官特异性自身抗体是指针对某个特异性器官组织自身抗原的抗体,如抗精子抗体(AsAb)、抗子宫内膜抗体(AEA)、抗卵巢抗体(AOA)和抗甲状腺抗体、抗平滑肌抗体等[1].     

小鼠2种和人4种精子抗原免疫对小鼠妊娠的影响

目的:观察用小鼠和人不同的精子抗原免疫雌小鼠对妊娠影响.方法:用小鼠2种和人4种精子抗原免疫雌小鼠,采用酶标法检测血清抗精子抗体(AsAb),观察各组小鼠妊娠率及胎仔数.结果:随着主动免疫的进行,小鼠血清AsAb显著升高( P <0.01).精子抗原免疫小鼠8周后,小鼠精子混合抗原免疫小鼠效果最好,妊娠率为零,DTT提取的人精子膜抗原和人全精子抗原免疫小鼠效果较好,妊娠率为16.7%,显著低于正常对照组的63.6%( P <0.01或 P <0.05).结论:在人精子抗原中,DTT提取的人精子膜抗原和人全精子抗原免疫雌小鼠效果最好.在小鼠精子抗原中,DTT、NP-40、Triton-100提取的小鼠精子膜混合抗原免疫雌小鼠效果最好.     

表位肽疫苗的研究进展

目前应用的疫苗主要是以减毒、灭活的病原体及其抗原成分（亚单位疫苗）为基础,存在生物危害性和遗传变异致使原疫苗效力丧失等问题。而且传统的疫苗无法对大多数肿瘤及HIV、HCV、结核杆菌等几种难以克服的传染性疾病实施有效的治疗和预防。随着生物化学、分子免疫学技术及基因工程技术的发展,表位疫苗的出现弥补了传统疫苗的一些不足,尤其在诱导细胞免疫方面,减少了疫苗毒副作用,提高了安全性,增强了免疫针对性。目前,表位疫苗在避孕、传染性疾病、恶性肿瘤疫苗等方面已成为研究的热点。     

基于抗原表位分析的P-糖蛋白表达研究

目的:对P-糖蛋白抗原表位进行分析和表达研究.方法:联合运用多种方法对P-糖蛋白的二级结构和表面特性进行分析,运用化学和酶法相结合的技术合成P-糖蛋白基因,再克隆入表达载体pGEX-2T进行表达、鉴定及纯化.结果:位于P-糖蛋白胞外段的抗原表位位点仅见于氨基酸残基82as～115as(Ⅰ)、741aa～760aa(Ⅳ)及800aa～816aa(Ⅴ). SDS-PAGE分析,表达出约29 kD大小的蛋白.结论:该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体或筛选其特异性结合肽,进行靶向治疗等工作奠定了基础.     

An analysis of antigenic polypeptides of dengue viruses and their specificity with western blotting

Summary Dengue virus(DV) samples which harvested after having been either propagated in C₆/36 cells or passaged by murine intracerebral inoculation were investigated by Western bloting. Two different denaturing methods with the same solution were selected before electrophoresis, one at 60 °C for 20 min; the other at 100°C for 5 min. After the samples were heated at 60°C for 20 min, 3 bands of sizes 46 ku, 70 ku and 98 ku were positively recognized by rabbit immunized sera. The peptide of 98 ku was DV group specific; While that of 46 ku could also react with the sera against both heterologous DV serotype and Japanese B encephalitis virus (JEV), After the samples were heated at 100 °C for 5 min, 3 peptides in size of 20 ku, 46 ku and 57 ku were recognized by the rabbit sera against both homologous and heterologous DV serotypes, while the peptide of 57 ku could also be recognized by anti-JEV serum. There was no significant difference in the results of Western blot between the DV antigens harvested from cellular culture and those from intra-cerebral inoculation.     

不育症的精液检验与血清中AsAb的关系

目的 对194例男性不育症患者进行精液常规检验和血清中抗精子抗体（AsAb）检测，并进行相关比较。方法 对194例男性不育症患者进行精子密度、精子活动力、精子活动百分率、精子中的白细胞、精子的液化时间、精液量、pH值等常规检验，同时用放免法对血清中的AsAb进行检测。结果精子的密度（20—100）×10^9／L，AsAb的阳性率77．8％～10．0％；精子活动力良好到无精，AsAb的阳性率15．9％-77．8％；精子活动的百分率80％以上到10％以下，AsAb阳性率11．5％-80．0％。精子中白细胞数量越多，AsAb阳性率越高。而精液量、液化时间、精液酸碱度与AsAb的阳性率无关。结论 不育症患者其精液中AsAb阳性率的高低对精子密度、精子活动力、精子活动百分率产生很大的影响，测定AsAb对查找男性不育症患者的病因有很重要的临床价值。     

男性不育症患者解脲脲原体感染情况与精液检查结果分析

目的探讨解脲脲原体感染与男性不育症的关系以及其对不育症患者精液检查结果的影响。方法对2017年5~10月于大理大学第一附属医院就诊的362例男性不育症患者和同期于我院进行健康体检的100例已生育男性精液的解脲脲原体感染情况、精液常规情况、血清抗精子抗体情况以及精子DNA碎片化指数进行检测和分析。结果不育组解脲脲原体阳性率为39.0%,显著高于对照组(P0.05);对照组解脲脲原体阴性者的精液常规检查结果明显优于不育组解脲脲原体阳性者(P0.05);不育组UU阳性者血清抗精子抗体检出率(38.3%)和DNA碎片化指数(14.9%)显著高于对照组UU阴性者(P0.05)。结论解脲脲原体感染可通过降低男性精液质量、诱导抗精子抗体产生和损伤精子DNA完整性而影响男性的生育功能。     

Preparation and antigenic characterization of rat monoclonal antibodies againts Hantavirus

ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｇｅｎｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｒａｔｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｔｓＨａｎｔａｖｉｒｕｓ￥ＸｕＨａｉｆｅｎｇ（徐海峰）；ＬｉｕＹｕａｎ（刘原）；ＬｉａｎｇＺｈｅ（梁喆）；ＭｉＬ...     

免疫性不孕不育的研究进展

在我国已婚夫妇中约有10%～15%的人因各种原因导致不孕不育,其中30%～40%与免疫性抗体有关。本文拟就在：1.抗精子抗体（AsAb）,男女体内都可能存在抗精子抗体;2.抗子宫内膜抗体（EMAb）,抗子宫内膜抗体是子宫内膜异位症的标志抗体;3.抗卵巢抗体（AOAb）,在六、七十年代已发现卵巢存在特殊抗原,近年来报道抗卵巢自身免疫可影响卵巢的正常发育和功能;4.抗透明带抗体：透明带（ZP）,是被覆在卵细胞周围的一层嗜酸性的明胶样基质,由卵细胞及其外围的卵泡细胞卵子的生长发育过程中共同分泌而成;5.抗心磷脂抗体（ACA）,被认为是预测高危妇女是否流产的较为敏感的指标;6.抗丈夫淋巴细胞抗体（APLA）APLA的产生不足,使得免疫系统容易对胚胎产生免疫攻击,母体对胎儿产生强烈的排斥现象,怀孕早期可出现RSA,怀孕晚期则可出现妊娠高血压疾病,胎儿宫内生长受限,甚至出现胎死宫内,最终导致流产。现对这些自身免疫抗体的近期研究做一综述。     

精浆抗精子抗体与精液主要参数相关性分析

目的:了解男性不育症患者精浆抗精子抗体(AsAb)对精子主要参数的影响。方法:对126例男性不育症患者的精液标本进行精子质量分析,同时用金标免疫斑点法进行精浆抗精子检测,然后对检测抗精子抗体阳性和抗精子抗体阴性患者分组进行精子质量参数的统计学分析。结果:126例男性不育患者中,精浆抗精子抗体阳性44例,阳性率为34.9%;阴性82例,阴性率为65.1%。抗精子抗体阴性组精子密度、活动率、活动力等主要参数明显高于阳性组,两组比较,差异具统计学意义(P<0.01)。结论:抗精子抗体对精子有凝集和制动作用,对精子密度、活动率等主要参数有明显的影响,是导致男性免疫性不育的重要因素之一。     

人抑制素不同亚基抗原表位表达及抗体制备

目的:根据人抑制素α?βA?βB 3个亚基特点,选择各亚基特定的抗原表位进行融合表达,并制备相应的多克隆抗体?方法:根据各亚基抗原表位氨基酸序列,合成其基因序列,并选用大肠杆菌偏爱密码子,插入pGEX-4T-2中作融合表达,纯化表达产物,免疫绵羊,制备抗体,测定了抗体水平?结果:经酶切鉴定,分别获得抑制素α?βA?βB与pGEX-4T-2连接的阳性重组子pGEX-INHA?pGEX-INHBA?pGEX-INHBB?其表达产物GST-INHA?GST-INHBA?GST-INHBB及纯化后融合蛋白,经考马斯亮蓝染色鉴定,大小正确?用常规免疫法免疫绵羊抗体,经ELISA检测抗体效价,结果显示,直接提取融合蛋白GST-INHA?GST-INHBA?GST-INHBB免疫绵羊抗体效价分别为:1∶64?1∶128?1∶32,纯化后的融合蛋白GST-INHA?GST-INHBA?GST-INHBB免疫绵羊抗体效价分别为:1∶32?1∶32?1∶64?结论:可在本研究所制备的抗体的基础上建立测定血清抑制素水平的免疫诊断方法?     

精液液化程度与精子活力、活动率、精子密度及pH值的研究分析

目的研究精液液化程度与精子活力、精子活动率、精子密度和pH值的相互关系。方法对228例不育症患者的精液进行检查分析,了解精液是否液化对各指标的影响。结果精液完全液化组与不液化组比较精子活力、精子活动率有显著差异（P〈0.05）,而与精子密度、pH值无差异,不具统计学意义（P〉0.05）。结论精液不液化可减弱精子活力和精子活动率,在诊疗活动中应加强重视及对精液不液化患者的治疗。     

弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究

目的:利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位，并探讨其免疫保护效果。方法：用纯化的弓形虫免疫兔血清IgC对噬菌体12肽库进行三轮筛选，对获得的日的噬菌体用间接ELISA和Dot—ELISA检测其特异性，并对其中的某些克隆进行Western—blot分析和序列测定；用混和噬菌体克隆及强阳性表位克隆免疫BABL／c小鼠．间接ELISA法测定其特异性抗体滴度，攻击感染后观察小鼠存活情况。结果：经三轮筛选，特异性噬菌体得到富集，随机挑取18个克隆经间接ELISA和Dot—ELISA鉴定，有16个克隆能与弓形虫免疫兔血清IgG呈特异性反应。Western—blot分析显示P2克隆能被免抗弓形虫血清所识别，具有类似于弓形虫抗原的免疫原性，其序列为5’-CTTCAGTTGGATCGGGCTCGGTTTTGGAAT CAGGGT-3’，与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性；与原肽库对照组相比，P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体，抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组。结论：利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟睥位，这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用。