IgA肾病肾组织乙型肝炎病毒DNA的检测及意义探讨

目的对血清乙型肝炎病毒(HBV)标志物阴性IgA肾病患者肾组织进行HBV-DNA的检测,为临床诊疗提供理论依据。方法应用原位杂交(ISH)技术检测56例血清HBV抗原阴性和8例血清HBV抗原阳性的肾炎患者肾活检石蜡包埋组织切片中的HBV-DNA。用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对14例血清HBV抗原阴性和8例血清HBV抗原阳性的肾炎患者肾新鲜活检组织中的HBV-DNA。结果ISH在血清HBV抗原阳性的8例标本中HBV-DNA的检出率为88%(7/8),血清HBV抗原阴性56例中检测出HBV-DNA11例(20%)。原位杂交显示两组检出的HBV-DNA均以肾小管上皮细胞胞质分布为主,与组织中HBV抗原阳性颗粒的分布基本一致。荧光PCR在血清HBV抗原阳性的8例标本中HBV-DNA的检出率为100%(8/8),血清HBV抗原阴性14例中检测出HBV-DNA0例(0%)。结论HBV-DNA在IgA肾病肾组织中的检出,表明HBV在IgA肾病的发病机制中可能有着重要作用。     

免疫荧光病理在乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎诊断中的临床意义

目的：探讨免疫荧光病理检验在乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎（HBV‐GN ）诊断中的临床意义。方法回顾性分析70例经肾活检病理明确诊断为 HBV‐GN 患者的临床病理资料。结果 HBV‐GN病理以膜性肾病多见,临床表现为肾病综合征者占44.3％,慢性肾衰竭占10.0％。“满堂亮”阳性率（免疫荧光病理检验 IgG、IgA、IgM、C1q和C3均阳性）占40.0％（其中膜性肾病占25.7％）。肾组织单项HBsAg沉积为最多见,达65.7％;而单项 HBcAg沉积相对少见。结论肾组织HBV抗原沉积现象可以出现在血清HBV标志物阴性或仅HBsAb阳性的患者,提示应重视肾组织HBV抗原免疫荧光病理检测的敏感性及做多种HBV抗原检测,从而降低HBV‐GN的漏诊率,对早期诊断 HBV‐GN具有至关重要的临床意义。     

免疫球蛋白A肾病中免疫球蛋白A与乙型肝炎病毒抗原关系的研究

目的观察免疫球蛋白A肾病(IgAN)肾组织中的IgA与乙型肝炎病毒(HBV)抗原(HBVAg)及血清IgA之间的关系。方法用免疫荧光双套染技术配合激光共聚焦显微镜观察IgA在66例不同类型IgAN肾小球中的沉积量;免疫组织化学二步法检测66例IgAN肾组织HBV表面抗原(HBs Ag)、HBV核心抗原(HBc Ag),对比研究IgA沉积量与HBVAg感染及血清IgA的关系。结果免疫荧光双套染法显示IgA主要在肾小球系膜区、少量在毛细血管袢呈颗粒状沉积;HBVAg阳性的肾组织IgA沉积量明显高于HBVAg阴性组(P<0.05)与对照组(P<0.05),且与肾脏病变程度有关。IgA肾病肾组织中IgA沉积量与血清IgA差异无统计学意义。结论 HBVAg阳性的IgA肾病肾组织IgA沉积量与IgA肾病发展存在一定的关系,血清IgA浓度的高低可能不是IgA肾病发生的决定性因素。     

乙型肝炎病毒相关性肾炎的诊断与治疗

自1971年Combes首次报道乙型肝炎病毒(HBV)持续阳性后出现肾病综合征表现，肾穿刺活检证实病理改变为膜性肾炎，并发现肾小球内有HBsAg沉积以来，HBV感染与肾小球肾炎的关系引起了各国学者的关注与重视。许多学者先后报道在肾组织中检出HBV抗原成分，有的学者直接提出了“乙肝病毒免疫复合物肾炎”的名称。1979年以后，     

乙型肝炎病毒相关性肾炎的临床病理特点及治疗

目的 探讨乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)的临床病理特点及治疗疗效.方法 分析经肾活检确诊的21例HBV-GN患者的病理特征、临床表现,检测乙型肝炎五项(HBsAg、抗-HBs、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe)、24h尿蛋白定量,免组化染色检测肾组织中HBsAg和HBcAg,采用激素联合吗替麦考酚酯或来氟米特或环孢素治疗并评定疗效.结果 21例患者中男性18例,女性3例,男女比例为6:1;8例(38.1％)临床表现为肾病综合征;血清HBV-DNA阳性率为9.5％(2例);肾脏病理类型:膜性肾病8例(38.1％),系膜增生性肾小球肾炎6例(28.6％),IgA肾病4例(19.0％),膜增殖性肾小球肾炎3例(14.3％).肾组织HBsAg阳性、HBcAg阳性检出率分别为71.4％(15例)、85.7％(18例).7例激素联合来氟米特治疗的患者中,2例完全缓解,5例部分缓解.21例患者治疗后总有效率为85.7％( 18/21).结论 HBV-GN以男性多见,临床表现以肾病综合征最常见,病理类型以膜性肾病为主,激素联合来氟米特在HBV-GN治疗中有一定的作用.     

小儿乙型肝炎病毒相关性膜性肾病

目的 探讨乙型肝炎病毒引起小儿肾病的机理。方法 对13例小儿乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(HBV-MN)的临床病理资料进行了分析。结果 肾病综合征9例(单纯型6例、肾炎型3例),肾小球肾炎4例。病理改变:膜性肾病(MN)Ⅰ期1例、Ⅱ期7例、Ⅲ期5例。伴系膜增殖者11例。酶标以IgG、C_3血管袢沉积为主。5例HBsAg染色均阳性、沉积于血管袢。电镜检查发现基底膜弥漫增厚及电子致密物多部位沉积,仅1例系膜区见到病毒样颗粒。全部病例经保肝、抗凝、抗病毒、强的松或/和雷公藤等治疗,病情均获缓解。结论 对乙型肝炎病毒相关性膜性肾病的病理有了进一步认识。     

HCMV、ADV,HBV抗原在IGA肾病患者肾组织中的表达及临床意义

目的 探讨HCMV、ADV、HBV抗原在IGA肾病患者肾组织中的表达及其临床意义.方法 2010年10月至2011年10月期间,我院诊治的40例IGA肾病患者,通过免疫组织化学技术,对IGA肾病患者的肾活检组织,检测HCMV、ADV和HBV抗原.结果 HCMV抗原表达主要在肾小管和肾小球;ADV抗原表达主要在肾小管上皮细胞,较少在肾小球,偶在肾间质.HCMV表达程度与肾小球、肾小管间质的破坏程度呈正相关.HBsAg表达主要在肾小管上皮细胞,少量表达在肾小球和肾间质.HBsAg表达程度与肾小球、肾小管间质破坏程度没有相关性.结论 HCMV、ADV和HBV感染都与IGA肾病的发生、发展有相对较大的相关性.     

肾小球PLA2R检测在膜性肾病诊断中的应用

目的 分析血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体、肾小球PLA2R表达及IgG亚型沉积在膜性肾病中的作用,探讨其在膜性肾病中的诊断价值. 方法 选取经肾活检术诊断的膜性肾病79例,其中特发性膜性肾病(IMN)65例,继发性膜性肾病(SMN)14例(其中11例Ⅴ型狼疮肾炎,2例乙型肝炎病毒相关性膜性肾病,1例梅毒相关性膜性肾病).血清抗PLA2R抗体应用欧蒙间接免疫荧光实验(IIFT)检测,肾小球PLA2R表达及IgG亚型沉积采用免疫荧光法,并比较特发性膜性肾病和继发性膜性肾病2组患者临床资料是否有差异. 结果 65例IMN患者中,肾小球PLA2R表达阳性者57例(87.7%);血清抗PLA2R抗体阳性者47例(72.3%);IgG4亚型沉积阳性者59例(90.8%).14例SMN患者肾小球PLA2R表达均阴性,血清抗PLA2R抗体阳性者2例(14.3%),IgG4亚型沉积阳性者4例(28.6%).肾小球PLA2R表达阳性诊断IMN灵敏度为87.7%,特异度为100%;血清抗PLA2R抗体阳性诊断IMN灵敏度为72.3%,特异度为85.7%.IMN患者中肾小球PLA2R表达、血清抗PLA2R抗体、IgG4亚型沉积阳性比例高于SMN.2组患者临床资料在性别构成比存在统计学差异,年龄、白蛋白、血肌酐、总胆固醇、24小时尿蛋白定量、肾小球滤过率2组差异无统计学意义(P>0.05). 结论 IMN患者中肾小球PLA2R表达阳性率高,在膜性肾病鉴别诊断中具有优势作用.     

大鼠免疫复合物性肾损伤模型的建立与验证CSCD

目的通过建立与验证大鼠免疫复合物(immune complex,IC)性肾小球肾炎模型,为生物技术药物非临床安全性评价毒性试验中IC性肾损伤提供快速、简便和准确的检测方法。方法SD大鼠通过C-BSA诱导免疫2周后加强免疫给药4周建立IC性肾损伤模型,并通过尿液分析、血液学检查、血清生化检查、肾组织病理学检查、免疫组化分析和透射电子显微镜检查进行验证。结果模型组动物给药后出现蛋白尿,肾绝对重量增加,组织病理学检查及PAS染色发现肾可见肾小球系膜基质增加以及肾小球基底膜增厚,免疫组化分析发现C3补体和IgG沉积于肾小球毛细血管,电子显微镜结果显示基底膜增厚、足细胞足突部分融合及电子致密物沉积。结论成功建立并验证了大鼠IC性肾损伤模型,能够用于进一步探讨生物技术药物导致IC性肾损伤的发病机制,并为今后生物技术药物非临床安全性评价毒性试验IC性肾损伤的检测提供一定参考。     

乙肝病毒抗原在肝组织的表达及意义

目的 :了解乙肝病毒感染者肝组织中乙肝病毒(HBV)抗原表达与病理分型及HBV复制的关系。方法 :采用免疫组织化学二步法检测肝组织HBsAg和HBcAg ,用ELISA法检测血清中HBV标志物。结果 :(1)HBV感染者肝组织中HBsAg和HBcAg检出率分别为79.75%和73.01 %。(2)乙肝病毒携带者 (AsC)HBsAg表达以浆型为主 ,膜型检出率较低。 (3)HBcAg浆型表达在重度肝病变高于轻度肝病变 ,而核型表达则相反。除中、重度外 ,各组间比较均有显著性差异 (P<0.01)。 (4)肝组织HBsAg、HBcAg 表达在血清HBeAg阳性组与HBeAb阳性组和HBeAg 和HBeAb均阴性组间有显著性差异 (P<0.01)。结论 :浆型HBsAg和核型HBcAg 多见于病变相对静止的病例 ,而膜型HBsAg 和浆型HBcAg 与病变活动程度明显相关。在血清HBeAg与HBeAb均阴性时 ,HBV仍有可能进行复制。HBcAg 作为主要的靶抗原 ,在肝脏免疫损伤中起重要作用     

慢性乙型肝炎患者肝组织内HBcAg表达的临床研究

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者肝组织内HBcAg的表达与肝组织的炎症、纤维化程度、血清中的HBV DNA、HBsAg以及HBeAg定量之间的关系。方法 选择安徽医科大学第一附属医院2013年3月至2014年3月收治的103例CHB患者,按病理学结果分为S1组（36例）和S2~3组（67例）。利用免疫组化技术检测肝细胞内HBcAg的表达,同时利用FirbScan仪器测定患者的肝纤维化程度。结果 在S2~3组中,肝组织HBcAg的表达与血清HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平及肝纤维化指标均呈现显著的相关性（P<0.05）,在S1组中均无显著相关（P>0.05）。结论 HBcAg在肝细胞中的表达与机体血清中DNA、HBsAg、HBeAg水平及无创肝纤维化程度存在一定的相关性。     

HBeAg阴性与阳性慢性乙肝患者血清学和组织学比较

目的探讨HBeAg阳性和阴性两种病原学状态对慢性乙型肝炎患者机体的影响。方法对270例行肝活检的慢性乙型肝炎患者按炎症和纤维化程度进行分级分期诊断,做免疫组化检测肝组织HBsAg、HBcAg；采用双抗体夹心酶联免疫法检测血清前S_1蛋白、HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc。结果HBeAg阳性组例数是阴性组的2．13倍：肝功损伤较重,直接胆红素、谷丙转氨酶两项指标两组间比较有显著性差异(P＜0．05)；HBeAg阳性组其HBV DNA(病毒复制指标)在血清学和肝脏免疫组化的阳性率较高,两组比较有非常显著性差异(P＜0．005)。结论HBeAg阳性组较阴性组患者肝损重,病毒复制活跃；HBeAg阴性组的病毒复制率虽然相对较低,但仍有36．05%的患者血清HBVDNA+,10．47%的患者组化HBcAg阳性。     

HBV-DNA含量与HBV-M的关系探讨

目的：探讨乙型肝炎病毒DNA含量与乙型肝炎病毒血清标志物（HBV-M）之间的关系，为临床诊断及治疗提供有价值的依据。方法：用ELISA检HBV-M，荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检HBV-DNA的含量。结果：HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性组；HBsAg、HBeAg阳性组；HBsAg，抗HBC阳性组；HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性组；抗HBs、抗HBe、抗HBc阳性组及抗HBc阳性组中，HBV-DNA阳性率分别为：96．4％、98．0％、73．8％、51．2％、16．4％及7．4％。结论：PCR检测HBV-DNA含量与HBV—M同时测定，更有利于乙型肝炎的正确诊断，疗效判断及预后观察。     

乙肝病毒携带产妇血清、乳汁HBV-DNA检测及母乳喂养安全性临床研究

目的 研究乙肝病毒携带产妇母乳喂养的安全性.方法 收集192例乙肝病毒携带产妇静脉血、乳汁,检测血清和乳汁的HBV-DNA载量,并对已进行规范免疫的婴儿的乙肝病毒携带情况进行追踪检测.结果 血清、乳汁HBV-DNA阳性率均是“大三阳”产妇最高, “小三阳”产妇次之, “单阳”产妇最低.三类产妇乳汁HBV-DNA阳性率差异有统计学意义(x2=5.99,P＜0.05),母乳喂养组与人工喂养组婴儿血清HBsAg阳性率差异有统计学意义(x2=6.33,P＜0.05).结论 在规范完成乙肝母婴传播性阻断措施的前提下,同时检测产妇的血清和乳汁,HBV-DNA载量在一定范围内,乙肝病毒携带产妇母乳喂养是安全的.     

Strong and multi-antigen specific immunity by hepatitis B core antigen (HBcAg)-based vaccines in a murine model of chronic hepatitis B: HBcAg is a candidate for a therapeutic vaccine against hepatitis B virus

Experimental evidence suggests that hepatitis B core antigen (HBcAg)-specific cytotoxic T lymphocytes (CTL) are essential for the control of hepatitis B virus (HBV) replication and prevention of liver damage in patients with chronic hepatitis B (CHB). However, most immune therapeutic approaches in CHB patients have been accomplished with hepatitis B surface antigen (HBsAg)-based prophylactic vaccines with unsatisfactory clinical outcomes. In this study, we prepared HBsAg-pulsed dendritic cells (DC) and HBcAg-pulsed DC by culturing spleen DC from HBV transgenic mice (HBV TM) and evaluated the immunomodulatory capabilities of these antigens, which may serve as a better therapy for CHB. The kinetics of HBsAg, antibody levels against HBsAg (anti-HBs), proliferation of HBsAg- and HBcAg-specific lymphocytes, production of antigen-specific CTL, and activation of endogenous DC were compared between HBV TM vaccinated with either HBsAg- or HBcAg-pulsed DC. Vaccination with HBsAg-pulsed DC induced HBsAg-specific immunity, but failed to induce HBcAg-specific immunity in HBV TM. However, immunization of HBV TM with HBcAg-pulsed DC resulted in: (1) HBsAg negativity, (2) production of anti-HBs, and (3) development of HBsAg- and HBcAg-specific T cells and CTL in the spleen and the liver. Additionally, significantly higher levels of activated endogenous DC were detected in HBV TM immunized with HBcAg-pulsed DC compared to HBsAg-pulsed DC (p<0.05). The capacity of HBcAg to modulate both HBsAg- and HBcAg-specific immunity in HBV TM, and activation of endogenous DC in HBV TM without inducing liver damage suggests that HBcAg should be an integral component of the therapeutic vaccine against CHB.     

乙型肝炎患者血清中前S1蛋白、HBcAg及HBV DNA相关性临床研究

目的探讨乙型肝炎患者血清前Si(Pre-S1)蛋白、HBcAg、HBV DNA及HBV其他标志物的关系及临床意义,为评判HBV复制和病情发展提供新的思路与证据.方法对136例乙型肝炎患者血清中HBVDNA应用微板核酸杂交法;HBcAg采用ELISA间接法,两种抗体包被,反应孔内裂解Dane颗粒的酶标技术直接检测Pre-S1及HBV其他标志物同时进行ELISA检测. 结果血清中Pre-S1、HBcAg、HBV DNA检出率在HBsAg、HBeAAg抗-HBc组合中最高,分别为33.3%、74.6%、85.7%,与HBV-M其它组合比较P＜0.01;HBeAg和HBcAg阳性组的HBVDNA、Pre-S1检出率最高(91.7%、39.6%),其次为HBeAb和HBcAg阳性组;HBV DNA阳性组的Pre-S1、HBcAg检出率(27.5%、62.6%)明显高于阴性组(2.2%、8.9%),P＜0.001;Pre-S1阳性血清中HBcAg与HBV DNA检出率为96.4%、89.3%,与阴性组比较P＜0.001及P＜0.05;Pre-S1、HBcAg与HBV DNA检出率在各临床类型患者中,除慢性肝炎HBV DNA检出率高,且统计学意义(P＜.001)外,其它无特异性. 结论血清Pre-S1、HBcAg、HBV DNA和HBeAg均是反映乙肝病毒复制的敏感指标,具有较好的相关性.抗HBe的出现并不表示病毒复制停止,应参考其他病毒复制指标情况.乙型肝炎各临床类型HBV复制指标检出率仅HBVDNA具有特异性.     

乙型肝炎病毒相关性肾炎α-干扰素治疗后的病理变化

目的探讨乙型肝炎病毒相关性肾炎经α-干扰素治疗的临床病理变化。方法32例HBV相关性肾炎给予α-干扰素100～300万U,肌肉注射,6个月为一疗程,比较治疗前后血清白蛋白浓度,24h尿蛋白定量及肾组织乙肝抗原、HBV-DNA、IgG、IgM、IgA阳性率。结果α-干扰素治疗后血清白蛋白浓度升高、尿蛋白定量下降;肾组织乙肝抗原、HBV-DNA、IgA、IgM、IgG阳性率均显著下降(P<0.01)。结论乙型肝炎病毒相关性肾炎经α-干扰素治疗后临床病理有较显著改善。     

Transbody against hepatitis B virus core protein inhibits hepatitis B virus replication in vitro

Hepatitis B virus (HBV) infection is one of the major causes of chronic liver diseases. The current therapeutics show limited efficacy. In the HBV life cycle, virus core antigen (HBcAg) plays important multiple roles. Blocking the pleiotropic functions of HBcAg may thus represent a promising strategy for anti-HBV replication. In this study, monoclonal antibody (MAb) against core antigen of human HBV was coupled with TAT protein transduction domain (TAT PTD) to form transbody, and the effect on virus replication was evaluated in vitro. The HBV transbody, HBcMAb–TAT PTD conjugate, recognized HBcAg and retained cell-penetrating activity in living cells. In HBV-transfected liver cell line HepG2.2.15, HBV transbody suppressed not only the extracellular HBsAg, HBeAg and HBV DNA, but also the intracellular HBsAg, HBeAg, HBcAg and HBV DNA in a dose-dependent manner. These results indicate that the transbody prepared possesses readily cell-penetrating ability and potent antiviral activity, providing a novel approach, a cell-permeable antibody against HBcAg, for the treatment of HBV infection.     

乙型肝炎患者治疗前后检测HBV抗原蛋白特异性T细胞的反应

目的探讨HBV抗原蛋白特异性T细胞在乙型肝炎患者治疗前后变化的临床意义。方法收集本院2008年1月至2011年9月的58例慢性乙型肝炎患者进行抗病毒等内科治疗3个月后,检测其治疗前后的外周血单个核细胞,并以HBv特异性抗原蛋白HBsAg、HbcAg和HBeAg为刺激物,酶联免疫斑点检测其分泌1FN-γ产生斑点的情况。同时对血清HBV DNA和HBsAg、HBeAg等病毒学指标及丙氨酸转氨酶(ALT)等生化学指标进行检测。以10例接种过乙型肝炎疫苗的健康人为对照组,均为HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc阴性,抗-HBs阳性。结果治疗前所有患者的HBV-DNA>104拷贝/mL,经过3个月治疗后,45例患者的HBV-DNA的水平降到正常值范围内。结论 HBV抗原蛋白特异性T细胞的反应可能做为乙型肝炎病毒复制和抗乙型肝炎病毒疗效评定实验室敏感指标。