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相似文献
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1.
目的 :建立一种快速诊断烟曲霉病的双mAb夹心ELISA法。方法 :应用 4株抗烟曲霉GM单克隆抗体 (mAb) ,分别包被和制备HRP mAb ,用双mAb夹心ELISA法配对试验 ,选择捕获及检测mAb。结果 :经筛选得到捕获及检测mAb的最佳组合 ,并建立了双mAb夹心ELISA法。该法检测GM抗原的灵敏度为 0 .1μg/L ,测出范围在 0 .1~ 10 μg/L之间。连续 6d用ELISA法检测同一份样品 ,所获CV的平均值为 ( 7.2± 3.8) %。结论 :建立了一种可快速、定量检测烟曲霉GM抗原的双mAb夹心ELISA法 ,灵敏度高、重复性好 ,对研制试剂盒应用于烟曲霉病早期诊断和防治 ,具有重要的临床应用价值  相似文献   

2.
目的:制备抗铜绿假单胞菌外膜蛋白F(OprF)的单克隆抗体(mAb),并建立双mAb夹心ELISA检测方法。方法:利用分子生物学方法克隆OprF基因,诱导表达并纯化OprF。用OprF免疫BALB/c小鼠后通过杂交瘤技术制备特异性的mAb,并用ELISA法测定mAb的免疫活性;建立检测铜绿假单胞菌的双mAb夹心ELISA方法,并对其敏感性、特异性进行初步评价。结果:成功地克隆OprF基因,经诱导表达获得铜绿假单胞菌的OprF。通过杂交瘤技术筛选出4株mAb:6D8F7、2H2B6、3C2F5和7B5D9,经鉴定mAb 6D8F7可作为捕获抗体,mAb 7B5D9被HRP标记后可作为检测抗体,以这2株mAb建立的双mAb夹心ELISA方法重复性好、特异性强,敏感性高达到1×103集落形成单位(CFU/mL)。检测的线性范围为1×103~108CFU/mL。与传统的细菌分离方法比较,检测临床标本的符合率高达94.7%。结论:通过杂交瘤技术制备抗铜绿假单胞菌OprF的mAb,并建立了高特异性、高敏感性检测铜绿假单胞菌抗原的双mAb夹心ELISA方法,可用于临床检测铜绿假单胞菌的感染。  相似文献   

3.
目的:建立检测SEB的双单克隆抗体(mAb)夹心ELISA,并检测在多种基质中SEB的敏感性。方法:制备、纯化抗SEBmAbB4和D6。D6mAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为检测抗体,B4mAb作为包被抗体。结果:成功建立了敏感、特异检测SEB的ELISA方法,检测抗体稀释液和小牛血清中SEB,检测灵感度0.2μg/L,定量线性范围0.78~12.5μg/L,r2=0.992,批间变异系数(CV)<10%,回收率80%~110%。检测50g/L脱脂牛奶、尿液和自来水中的SEB,灵敏度0.39μg/L,定量线性范围0.78~25μg/L,r2=0.997。与SEA和SECl无交叉反应。结论:本方法测量准确,灵敏度高,特异性好,在食品工业和临床标本检测中有广阔的应用前景。  相似文献   

4.
目的:建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的双机体夹心ELISA,了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系:方法:以不同浓度的抗人TIMP-1申克隆抗体(mAb)为包被抗体,加入待测抗原以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定,建立双抗体夹心ELISA,并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP—1的水平。结果:方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg/L,血清稀释倍数1:100,HRP标记mAb的最佳工作浓度为1:400、以此条件建立的夹心ELISA法具有良好的可重复性,中和抑制率在85%以上,稳定性良好,与国外检测TIMP-1的ELISA试剂盒进行对比试验,具有良好的相关性(r=0.988)。用于临床快速检测肝硬化的检出阳性率为76.4%,明显高于慢性肝炎(40.2%)和急性肝炎(19.5%,P〈0.005),并随着患者肝纤维化程度的加重而升高(P〈0.001)。结论:血清TIMP-1水平的变化可作为诊断肝纤维化良好指标本法简便、快速,敏感性高、特异性强,用于肝纤维化的人血清学快速诊断。尤其适于医院及基层医疗单位应用.  相似文献   

5.
目的:制备恶性疟原虫子孢子囊表面膜蛋白Pfs25的单克隆抗体( mAb),建立检测Pfs25蛋白的双抗体夹心ELISA方法.方法:纯化毕赤酵母表达的重组Pfs25蛋白,并免疫BALB/c小鼠,采用骨髓瘤细胞Sp2/0与免疫BALB/c鼠脾细胞杂交的细胞融合技术,通过间接ELISA检测获得分泌抗Pfs25抗体的阳性杂交瘤细胞株,通过免疫F1鼠诱生腹水,纯化腹水,并进行mAb的各项生物学鉴定.辣根过氧化物酶(HRP)标记纯化后的抗体,以4B7为包被抗体,1B4为酶标抗体,建立了双抗体夹心ELISA法.结果:获得3株抗Pfs25的杂交瘤细胞株,其中2株有良好的稳定性和特异性.并建立了双抗体夹心ELISA检测法,检测有效范围在0.07~1 mg/mL,其检测灵敏度为41.6 ng/mL.结论:成功制备抗Pfs25蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于Pfs25蛋白检测的双抗体夹心ELISA法,为Pfs25蛋白制备传播阻断型疟疾疫苗奠定了基础.  相似文献   

6.
目的:以已经制备的抗肌糖蛋白C(TN-C)的单克隆抗体(mAb)为基础,建立能定量检测肌糖蛋白C浓度的夹心ELISA方法,并初步于临床血清标本检测.方法:将3株mAb(克隆号分别为:1A8、3H7和4D6)制备腹水后纯化,分别与辣根过氧化物酶交联后,两两配对,以重组肌糖蛋白C 蛋白为检测抗原,分析抗体之间最佳组合;利用建立的夹心ELISA方法检测收集的临床骨肉瘤患者和正常人血清标本.结果:包被1A8 mAb,HRP-4D6配对敏感性最高;骨肉瘤患者血清中肌糖蛋白C浓度明显高于正常人.结论:成功建立检测肌糖蛋白C的夹心ELISA方法,并利用其检测到肌糖蛋白C在骨肉瘤患者中的浓度异于正常人.  相似文献   

7.
目的:制备抗脑钠肽(BNP32)单克隆抗体(mAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立BNP抗原检测技术,应用于临床心脏患者脑钠肽水平的检测。方法:以基因工程原核重组表达BNP抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术制备mAb,mAb经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA法筛选检测BNP32蛋白的最佳配对mAb,以其建立BNP32抗原检测技术,并与临床BNP检测的标准实验做平行比较。结果:成功筛选到16株稳定分泌抗BNP32mAb的杂交瘤细胞株,16株mAb的亚型分别为IgG1、IgG2a和IgM,并从中筛选出最佳mAb配对组合,该组合对BNP32蛋白的检测灵敏度为20ng/L。建立的双抗体夹心BNP检测ELISA法与临床BNP检测的标准实验平行比较具有很好的一致性(kappa值=0.828),两者没有统计学意义(P0.05)。结论:成功地建立了BNP32抗原的双抗体夹心ELISA法检测技术,并能够很好地运用于临床心衰患者BNP指标的检测。  相似文献   

8.
目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18(rEm18)作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵滴定法对包被抗原、酶标抗原等条件进行优化,并对该系统的灵敏性、特异性、重复性进行初步分析评价.结果 rEm18最佳包被浓度为2.5μg/mL,HRP标rEm18稀释度为1∶800.灵敏度为92%(46/50),特异性为94%(47/50),假阴性率为8% (4/50),假阳性率为6% (3/50),批内变异≤9.55%,批间变异≤14.79%,与Em2-ELISA试剂盒检测结果有良好的一致性.结论 本研究成功建立了快速检测泡球蚴特异性抗体的ELISA法,其可以用于人泡球蚴病的早期诊断.  相似文献   

9.
目的制备H4亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体(mAb),基于mAb建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法。方法用灭活H4亚型AIV免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、血凝抑制(HI)试验筛选和亚克隆,得到了一株抗H4亚型AIV mAb(6G4)。免疫荧光细胞化学染色和Western blot法验证6G4与H4亚型AIV的反应性, HI试验鉴定6G4特异性、广谱性和稳定性,试剂盒鉴定6G4亚类。以鸡抗H4亚型AIV多克隆抗体作为包被抗体, 6G4作为捕获抗体, HRP标记的山羊抗小鼠IgG作为酶标抗体,通过条件优化和一系列验证,建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法。结果 6G4亚类为IgG1,轻链为κ链,能稳定分泌抗体,具有良好的反应性、特异性、广谱性和稳定性;基于6G4建立的ELISA特异性强、敏感性高、重复性好,适合大批量检测。结论成功制备了抗H4亚型AIV的mAb,建立了检测H4亚型AIV的夹心ELISA。  相似文献   

10.
抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及其初步应用   总被引:2,自引:1,他引:2  
目的:制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体(mAb),并建立一种可用于检测gp120的ELISA法。方法:采用基因工程抗原HIV-1gp120免疫BALB/c小鼠,通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1gp120的mAb。用ELISA法答定mAb的Ig亚类、效价及特异性。用饱和硫酸铵(SAS)纯化mAb,并用HRP标记后建立双mAb夹心ELISA法。结果:筛选出10株稳定分泌抗HIV-1gp120 mAb的杂交瘤细胞株,9株为IgG,其中4株的腹水效价为32X10~256X10所得mAb与HIV-1gp41、HIV-1p24及HIV一2gp36Ag均无交义反应,仅与HIV-1gp120产生特异性反应。用mAb 6H9和9H12,建立了双夹心ELISA法,检测gp120抗原的灵敏度是10μg/L。结论:获得10株特异性强、效价高的机HIV-1gp120的mAb,并建立了灵敏度良好的双mAb夹心ELISA法.  相似文献   

11.
目的 :制备鼠抗人白细胞介素 15(hIL 15)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。方法 :自重组人白细胞介素 15(rhIL 15)基因工程菌中 ,提取融合蛋白GST IL 15,以 12 0g/LSDS PAGE分离鉴定 ,切取含有目的条带的凝胶 ,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 / 0骨髓瘤细胞常规融合 ,依次进行HAT选择培养 ,间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及克隆化。对杂交瘤细胞株的稳定性及其分泌的mAb的特性进行鉴定。另外 ,以rhIL 15包涵体蛋白 (rhIL 15IBP)免疫新西兰白兔 ,制备抗hIL 15的多克隆抗体 (多抗 )。用抗hIL 15的mAb与多抗建立双抗体夹心间接ELISA。结果 :获得 1株可稳定分泌特异性抗hIL 15mAb的杂交瘤细胞。建立了双抗体夹心间接ELISA ,检测rhIL 15蛋白的敏感性达 10 μg/L。结论 :成功地制备抗hIL 15mAb ,并建立了一种可用于hIL 15检测的双抗体夹心间接ELISA。  相似文献   

12.
目的:探讨人内皮细胞中一种新的可溶型黏附分子sCD226的表达调变规律。方法:用ELISA方法,检测不同浓度的LPS刺激人脐静脉内皮细胞后不同时间点培养上清中sCD226含量的变化;用Greiss法检测上述细胞培养上清中N0含量的变化,并分析两者的线性相关性。加入抗TNF-α中和抗体和iNOS抑制剂后,观察其对LPS诱导sCD226生成的影响。结果:①随着LPS刺激剂量的增加和刺激时间的延长,HUVEC培养上清中sCD226的含量明显增加,100mg/L LPSS刺激3d后sCD226的含量为188.5μg/L。②LPS刺激剂量为100mg/L时,HUVEC培养上清中sCD226和N0的含量呈显著的正相关。③抗TNF—α中和抗体和iNOS抑制剂可显著抑制LPS活化的HUVEC产生sCD226。结论:LPS可诱导HUVEC产生sCD226分子,且sCD226的生成与N0和TNF-α的产生密切相关。  相似文献   

13.
检测可溶性TREM-1的ELISA法的建立及初步应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:建立定量检测可溶性TREM-1的抗体夹心ELISA法。方法:采用抗人TREM-1单克隆抗体(mAb)包被酶标板,以兔抗鼠TREM-1多克隆抗体为夹心抗体、HRP标记羊抗兔IgG为检测抗体、重组小鼠可溶性TREM-1为标准品,建立检测可溶性TREM-1的ELISA法,并对30例正常人和30例急性肺部感染患者血清样本进行了检测。结果:建立的夹心ELISA法检测TREM-1的线性范围为0.78~200μg/L,批内、批间变异系数分别为6.52%和9.46%。30例正常人和30例血清急性肺部感染患者TREM-1的含量分别为(0.69±0.18)μg/L和(1.16±0.42)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论:成功建立了一种灵敏度高、稳定性好的检测可溶性TREM-1的抗体夹心ELISA法。  相似文献   

14.
目的:建立定量检测人的可溶性B7-H3(sB7-H3)酶联检测试剂盒,并分析肝病患者外周血中sB7-H3水平及其临床意义。方法:在已获得2株识别位点不同的小鼠抗人B7-H3单克隆抗体(4H7和2E6)基础上,采用单抗4H7为包被抗体,以经生物素标记的抗体2E6为检测抗体,以重组人可溶性B7-H3为标准品,建立可溶性B7-H3分子的酶标检测方法。在此基础上对健康献血者和不同肝病患者的血清样本进行了检测并分析其临床意义。结果:研制了sB7-H3酶联检测试剂盒,检测的线性范围是8.192~2 000 ng/L,批内、批间变异系数分别为3.35%和6.97%。酶标检测板在4℃放置1个月,变异系数(CV%)<±8.6,回收率为94%~117%,特异性试验显示无交叉反应,提示该检测试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和特异性。用该试剂盒分析不同肝病患者外周血sB7-H3水平后发现,(1)乙肝患者以及乙肝合并肝硬化或肝癌患者与健康对照组之间并不存在差异(P>0.05);(2)重症肝炎患者血清B7-H3水平低于健康对照组(P=0.0183);(3)血吸虫性肝硬化患者血清B7-H3水平显著高于健康对照组(P<0.01)。结论:建立了灵敏、特异的人sB7-H3酶联检测试剂盒,对肝病患者检测的结果表明,不同的肝病患者外周血sB7-H3表达水平不同,显示该试剂盒具有潜在的应用价值。  相似文献   

15.
抗Ig融合蛋白Fc段单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究   总被引:7,自引:9,他引:7  
目的:制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体(mAb),建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法:以hBCMA—Ig融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合制备抗Fc段mAb,用ELISA等方法鉴定mAb的Ig亚类、表位以及种属特异性,建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法;Western blot检测mAb对变性Ig融合蛋白的反应性。将mAb与Sepharose4B交联,制备亲和层析柱,对LAIR1-Ig融合蛋白进行纯化。结果:获得7株稳定分泌抗Fc段mAb的杂交瘤(FMUFcl-FMUFc7)。利用FMUFc4作为包被mAb,FMUFc5作为酶标记mAb,成功地建立了检测Ig融合蛋白的ELISA法,敏感度达到2μg/L;在7株mAb中,FMUFc6可用于Ig融合蛋白的western blot检测。用FMUFc 6mAb制备的亲和层析柱,可有效地纯化LAIRl—Ig融合蛋白。结论:成功地制备了抗Ig融合蛋白Fc段的mAb,建立了可用于Ig融合蛋白检测和纯化的方法,为Ig融合蛋白的应用提供了有力手段。  相似文献   

16.
双抗原夹心法检测抗HIV-1/2总抗体方法的建立和评价   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的 进一步提高HIv感染诊断试剂的敏感性。方法 以人工合成的HIv—1 gp41.1(sP1)、gp41.2(sP2)、gp120(sP3)、P24(sP4)和HIV—2gp36(sP5)5条多肽,采用双抗原夹心酶链免疫吸附试验(ELISA)原理,以sP1、sP3、sP4和sP5混合包被酶标板作为因相抗原,辣根过氧化物酶标记sp1、sp2、sP4和sP5多肽为标记物,建立了检测抗HIV—1/2总抗体的双抗原夹心ELISA法。结果 检测卫生部药品生物制品检定所第2代40份质控参比血清,其特异性和灵敏度均为100%,高于间接ELISA法(特异性为90%,灵敏度为65%)。检测210份其他病种患者血清均为阴性,与雅培HIVAB试剂比较检测如份健康献血员血清和88份HIv感染者血清,符合率为100%。结论 本方法特异性强、敏感性高,操作简便,适用于献血员的筛选和临床HIv感染的检测。  相似文献   

17.
分泌型ICOS-mIg重组融合蛋白定量检测方法的建立和应用   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的:建立双抗体夹心ELISA法,定量检测重组可诱导共刺激分子(ICOS)-mIg融合蛋白的分泌型表达,并对其灵敏度、特异性及线性检测范围进行评价。方法:用分子生物学技术制备重组ICOS-mIg融合蛋白。以羊抗小鼠IgG为包被抗体,HRP标记的马抗小鼠IgG为检测抗体,通过配对试验、方阵滴定试验及绘制mIgG浓度与A450值的标准曲线,建立定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白的双抗体夹心ELISA法。结果:建立了双抗体夹心ELISA法,检测的线性范围为7.8~500μg/L,标准曲线的回归方程为:y=-0.7864 1.1635log(x),R2=0.9911,P<0.0001。应用该方法可快速检测哺乳动物细胞表达的重组ICOS-mIg融合蛋白的分泌量。结论:建立了一种可快速定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白分泌表达的双抗体夹心ELISA法。该法灵敏、准确、快速、实用性好,对优化ICOS-mIg融合蛋白表达细胞的筛选和大规模制备具有重要价值。  相似文献   

18.
多种单抗联合检测HIV抗原   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 建立多种单抗联合早期检测HIV抗原的夹心ELISA方法.方法 以SAS盐析沉淀法和亲和层析法纯化抗HIV-1 p24、gp41、gp120及抗HIV-2 gp36的腹水型单克隆抗体(McAb),用高碘酸钠法将纯化的McAb以HRP进行标记.建立针对单个抗原的双抗体夹心ELISA法,对其灵敏度及特异性进行检测.将筛选得到的4株捕获McAb按比例混合作为捕获抗体,4株酶标McAb按比例混合作为检测抗体,建立多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA方法,检测混合HIV抗原.结果 按确定的最优反应条件建立的多种McAb联合夹心ELISA方法,检测到的最高稀释度的HIV混合抗原中各抗原的终浓度分别为:重组HIV-1 p24:0.625 pg/ml,gp41:6.25 ng/ml,gp120:6.25 ng/ml;HIV-2 gp36:9.25 ng/ml.结论 建立了具有高度敏感性的鸡尾酒式多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA法,为早期榆测HIV抗原提供了新的思路,为后续的研究奠定了一定基础.  相似文献   

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