黄芪等中药对大鼠子宫β-防御素-2基因表达的调控

目的 通过黄芪等中药对大鼠子宫β-防御素-2基因表达的影响,探讨中药在局部组织提高机体免疫力的作用.方法 将30只健康的Wistar大鼠随机分成空白组、黄芪组、苦参组、红芪组、黄芩组、双黄连组,分别灌胃,于第7日将大鼠处死并提取子宫组织RNA,用RT-PCR法检测大鼠β-防御素-2基因的表达变化.结果 黄芪组、红芪组、双黄连组大鼠子宫组织β-防御素-2基因表达增强,而苦参组及黄芩组没有发生明显改变.结论 黄芪、红芪、双黄连等中药可以增强大鼠子宫β-防御素-2基因表达,提示可以利用这些中药来增强局部组织的免疫力,以达到杀灭病原微生物的作用.     

板蓝根诱导人肺腺上皮细胞β-防御素-2基因表达的研究

目的 研究板蓝根体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)是否诱导表达具有抗菌活性的人-β-防御素-2(HBD-2)表达,并进一步探讨该表达是否存在浓度和时间依赖性效应,为进一步在动物水平探讨HBD-2的表达与中药之间的量效关系及时效关系提供依据.方法 体外培养SPC-A-1细胞,设置板蓝根5个浓度梯度,另设阳性对照和空白对照各1个,分别刺激贴壁生长的SPC-A-1细胞,应用RT-PCR技术检测SPC-A-1细胞HBD-2mRNA的表达情况,获取最佳表达浓度;再以最佳浓度经不同时间点刺激SPC-A-1细胞,得到表达诱导时间和持续时间.结果 研究显示板蓝根能够上调(SPC-A-1)细胞HBD-2mRNA的表达,且这种表达与板蓝根具有浓度和时间依赖性,当浓度为100μg/ml,刺激8h时,HBD-2mRNA的表达达到最高.结论 板蓝根可诱导HBD-2基因的表达,当浓度为100μg/ml,刺激8h时,其表达达到最高.     

大鼠β—防御素rBD—2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达

从大鼠皮肤提取总ＲＮＡ,以Ｐ１５′→３′ＴＴＣＡＧＴＣＡＴＧＡＧＧＡＴＣＣＡＴＴＡＣ和Ｐ２５′→３′ＧＧＴＴＣＴＴＧＧＴＣＴＴＴＴＴＡＴＣＴＡＣ引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增得到一ｃＤＮＡ片段,经核苷酸序列测定,并根据其推导的氨基酸序列与人β－防御素－２和大鼠β－防御素－１进行同源性比较,结果显示,该ｃＤＮＡ片段编码的氨基酸序列具高度同源性（其成熟肽与ｈＢＤ－２的同一性为５０％,相似性为３２％）,均含６个典型的半胱氨酸,这表明所克隆的ｃＤＮＡ为大鼠β－防御素－２亚类,因此命名为ｒＢＤ－２。大鼠β－防御素－２基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强,与人ｈＢＤ－２的表达相似,能够被诱导表达。以上结果提示,β－防御素－２可能是皮肤组织对感染性损伤的防御反应所产生的重要免疫介质。     

急性肺损伤小鼠肺组织β防御素-4和β防御素-6的基因表达

目的观察小鼠肺组织中β防御素-4（mBD-4）和mBD-6的基因表达水平，以及急性肺损伤（AH）对其表达的影响。方法将60只成年昆明小鼠随机分为Au组和对照组（每组30只），用脂多糖腹腔注射复制Au模型，于不同时间点处死小鼠获取肺组织，实时荧光定量PCR检测肺组织mBD-4、mBD-6的基因表达水平，测序鉴定PCR产物的特异性。结果对照组肺组织中各时间点及Au组6h点均无mBD-4、mBD-6基因表达，而Au组12h，1d和3d时间点表达显著升高（依次为mBD-4：0．0326±0．0104，0．0487±0．0126，0．04684±0．0092；mBD-6：0．03974±0．0083，0．04444±0．0072,0．04254±0．0113）。Au组小鼠mBD-4表达在12h时间点显著低于1d和3d时间点（P均〈0．05），在1d与3d时无显著差异（P〉0．05）；Au组mBD-6表达在12h，1d和3d时间点无显著差异（P〉0．05）。结论mBD-4和mBD-6基因在昆明小鼠肺组织中没有组成型表达，而Au可以诱导其表达。     

肺炎球菌多糖疫苗对老龄大鼠肺组织β-防御素-2表达的影响

目的研究肺炎球菌多糖疫苗(纽莫法)对老龄大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的影响.方法将18～22月的老龄大鼠随机分为实验组与对照组,实验组给予纽莫法0.2 ml/kg腹腔注射,对照组给予等量生理盐水腹腔注射.24 h后处死,取肺组织,提取总RNA,以β-actin为内参照,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织rBD-2基因表达水平.结果实验组老龄大鼠24 h后rBD-2基因表达水平为0.500±0.126,对照组为0.209±0.138,两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论纽莫法可上调老龄鼠肺组织β-防御素-2基因的表达,增强机体局部免疫力.     

大鼠β-防御素rBD-2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达

从大鼠皮肤提取总RNA, 以P1 5′→3′TTCAGTCATGAGGATCCATTAC和P2 5′→3′ GGTTCTTGGTCTTTTTATCTAC引物,采用RT-PCR技术扩增得到一cDNA片段,经核苷酸序列测定,并根据其推导的氨基酸序列与人β-防御素-2和大鼠β-防御素-1进行同源性比较,结果显示,该cDNA片段编码的氨基酸序列具高度同源性(其成熟肽与hBD-2的同一性为50%,相似性为32%),均含6个典型的半胱氨酸,这表明所克隆的cDNA为大鼠β-防御素-2亚类,因此命名为rBD-2.大鼠β-防御素-2基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强,与人hBD-2的表达相似,能够被诱导表达.以上结果提示,β-防御素-2可能是皮肤组织对感染性损伤的防御反应所产生的重要免疫介质.     

黄芪等中药对大鼠子宫β-防御素-2基医表达的调控

目的通过黄芪等中药对大鼠子宫β-防御素-2基因表达的影响，探讨中药在局部组织提高机体免疫力的作用。方法将30只健康的Wistar大鼠随机分成空白组、黄芪组、苦参组、红芪组、黄芩组、双黄连组，分别灌胃，于第7日将大鼠处死并提取子宫组织RNA，用RT-PCR法检测大鼠β-防御素-2基因的表达变化。结果黄芪组、红芪组、双黄连组大鼠子宫组织β-防御素-2基因表达增强，而苦参组及黄芩组没有发生明显改变。结论黄芪、红芪、双黄连等中药可以增强大鼠子宫β-防御素-2基因表达，提示可以利用这些中药来增强局部组织的免疫力，以达到杀灭病原微生物的作用。     

人β-防御素-2在慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰中的表达

目的测定慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者诱导痰中人β-防御素-2（hBD-2）的表达水平，来探讨hBD-2在COPD中的可能作用。方法收集COPD急性加重期、稳定期患者及正常人的诱导痰各10例，处理后分别进行痰细胞的计数和分类，Western blotting analysis法检测诱导痰中hBD-2的表达水平，并以图文分析系统进行灰度的半定量对比，同时用ELISA法测定诱导痰中白细胞介素-1β（IL-1β）的表达水平，并与hBD-2的表达进行相关分析。结果与正常组比较，COPD急性加重期组和稳定期组的中性粒细胞比例明显增多（P〈0．01），而COPD急性加重期组和稳定期组的hBD-2蛋白表达灰度值明显降低，差异有显著性（P〈0．001）；与稳定期组比较，COPD急性加重期组hBD-2蛋白表达灰度值也明显降低，差异有显著性（P〈0．01）。COPD稳定期组的IL-1β表达与正常组比较升高，差异有显著性（P〈0．001）；与COPD稳定期组比较。COPD急性加重期组IL-1β表达明显升高，差异有显著性（P〈0．01）。hBD-2的蛋白印迹的灰度值与IL-1β的浓度呈显著负相关（r=-0．689，P〈0．01）。结论COPD患者诱导痰中hBD-2表达增高，并与IL-1β有相关性，提示hBD-2可能参与了COPD的炎性过程。     

牙龈上皮β-防御素-2诱导表达的中药筛选

目的 筛选出对大鼠牙龈上皮β-防御素-2具有诱导表达作用的中药。方法 2019年2月至2020年4月选取90只大鼠作为研究对象。将90只健康成年Wistar大鼠随机分为固有表达组(10只)、阴性对照组及阳性对照组(各10只);实验组分别给予药物(黄芪组、板蓝根组、丹参组、柴胡组、鱼腥草组、穿心莲内酯组,每组10只,共60只),连续给药7 d后将大鼠处死,切取大鼠牙龈上皮,采用免疫组织化学方法检测大鼠牙龈上皮β-防御素-2蛋白的表达情况。结果 黄芪组和板蓝根组大鼠牙龈上皮β-防御素-2蛋白的表达明显高于固有表达组,差异有统计学意义(P0.05),但与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 中药黄芪和板蓝根能够诱导大鼠牙龈上皮β-防御素-2的表达增高,黄芪和板蓝根具有调节大鼠口腔黏膜天然免疫的作用。     

人β防御素-2研究进展

内源性抗生素肽(endogenous antibiotic peptides)是动、植物天然免疫的重要介质,在哺乳动物(包括人)中,由于对革兰氏阳性菌、阴性菌、真菌、螺旋体、分枝杆菌及某些包膜病毒等均有很强杀伤活性,故将其命名为防御素(defensin).迄今为止,在人体中已发现的防御素共有两类(α、β)10种.其中β防御素家族共发现3种,分子量为4～5kD,含38～47个氨基酸残基阳离子,分别为人β防御素-1,2,3(human β-defensin-1,2,3. hBD-1,2,3).德国Harder J等[1]于1997年首先发现hBD-2,他们用大肠杆菌亲和柱结合高压液相层析法在牛皮癣病人皮肤中分离并纯化到约4.3kD的多肽,经氨基酸序列分析表明与牛的TAP(气管抗菌肽)、LAP(舌抗菌肽)及hBD-1同源,属于人β抗菌肽成员之一,命名hBD-2.已证实hBD-2是黏膜和上皮细胞抵抗微生物入侵的重要介质,在持续暴露在病原微生物的器官表面发挥重要的抗菌作用.     

吸烟诱导慢性阻塞性肺疾病患者痰及肺组织β-防御素2表达

目的初步探讨吸烟对诱导痰和肺组织β-防御素2(BD-2)表达水平的影响及其与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的关系。方法将早期周围型肺鳞癌拟行肺叶切除的患者分为COPD吸烟组(COPD组)、非COPD吸烟组(吸烟组)和不吸烟组(对照组)。术前采用高渗盐水雾化吸入诱导收集痰液,术中收集肿瘤远处肺组织标本,对痰液进行细胞分类计数,HE染色观察肺组织病理学形态,ELISA方法测定痰和肺组织匀浆中的BD-2浓度,对BD-2与吸烟指数、气道炎症指标、肺通气功能指标进行直线相关分析。结果研究对象的肺组织病理学形态与试验分组高度吻合。对照组痰细胞总数、痰中性粒细胞比例、肺组织匀浆BD-2浓度分别为(2.32±0.51)×106/g、(35.7±9.8)%、(14.5±5.7)ng/L,吸烟组和COPD组痰细胞总数、痰中性粒细胞比例、肺组织匀浆BD-2浓度则分别为(4.57±0.87)×106/g、(52.5±10.9)%、(78.3±13.1)ng/L和(6.61±1.03)×106/g、(65.5±12.3)%、(127.0±35.0)ng/L,以上3项指标在对照组、吸烟组、COPD组依次增高(P<0.05)。吸烟组和COP...     

大鼠β-防御素-2的重组表达及抗菌活性检测

目的 构建大鼠β-防御素-2(rBD2)基因的真核表达载体pCAGG-rBD2,并转染小鼠纤维母细胞(L929),为解决细菌耐药性问题提供进一步的实验基础.方法 以大鼠肺组织总RNA为模板,采用RT-PCIL的方法获得β-防御素-2基因cDNA,将其克隆到pGEM-T Easy载体并构建含有目的 片段的真核表达载体pCAGG-rBD2,经脂质体介导转染L929细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测目的 基因表达情况.结果 成功克隆并构建了合有目的 基因rBD2的真核表达载体pCAGG-rBD2,转染pCAGG-rBD2的细胞中检测到了rBD2基因在转录水平和蛋白水平的表达,其细胞培养的上清液对金黄色葡萄球菌具有杀灭作用.结论 防御素在真核表达系统的成功表达,为进一步开发高效能杀灭耐药性致病微生物的多肽类新药提供实验基础和理论依据.     

双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2 mRNA的表达

目的 检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞β-防御素-2(hBD-2)基因的激活作用及其活性组分．方法 应用遵转录聚合膏链反应(RT—PCR)法和Northern杂交检测HT-29细胞hBD-2mRNA的表达；采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞璧蛋白质成分．结果 RT—PCR和Northern杂交分析显示，在正常培养条件下HT-29细胞无可见的hBD-2mRNA表达信号，但在双歧杆菌菌体、细胞璧和胞璧蛋白刺激下均检测出显著的hBD-2mRNA表达．结论 双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞hBD-2基因的表达。双歧杆菌胞壁蛋白可能是其诱导作用的活性成分。     

大鼠β-防御素rBD-1cDNA克隆

为开展β－防御素基因表达调控分子机制及其转基因防治粘膜感染的研究,作者克隆了大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。从大鼠肾脏组织提取ＲＮＡ,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ,并重组到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ 载体,经限制性内切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定,证实所克隆的ｃＤＮＡ片段为大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。     

大鼠β-防御素-2的cDNA克隆及其在气管组织的固有表达

目的　研究大鼠β-防御素基因表达调控分子机制。方法　采用RT -PCR技术在Wistar大鼠气管组织的总RNA中扩增其特异cDNA片段 ,然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析和DNA序列测定。结果　在大鼠气管组织扩增出长度为 2 1 7bp的cDNA片段 ,其RT -PCR产物经测序分析证明是大鼠β-防御素 - 2cDNA。结论　大鼠β -防御素 - 2基因在气管组织呈固有表达 ,认为与呼吸系统的抗微生物防御机制密切相关。     

肺炎球菌多糖疫苗对老龄大鼠肺组织-防御素-2表达的影响

目的研究肺炎球菌多糖疫苗(纽莫法)对老龄大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的影响。方法将18~22月的老龄大鼠随机分为实验组与对照组,实验组给予纽莫法0.2 m l/kg腹腔注射,对照组给予等量生理盐水腹腔注射。24 h后处死,取肺组织,提取总RNA,以-βactin为内参照,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织rBD-2基因表达水平。结果实验组老龄大鼠24 h后rBD-2基因表达水平为0.500±0.126,对照组为0.209±0.138,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论纽莫法可上调老龄鼠肺组织β-防御素-2基因的表达,增强机体局部免疫力。     

β-防御素2研究进展

防御素是一类分子量约为4．0～5．0kMr、含有6个半胱氨酸残基、三对二硫键的阳离子多肽。防御素不仅通过直接杀菌作用抵御入侵机体的病原微生物，还在介导获得性免疫反应、调节机体的免疫炎症反应和创伤修复过程中起着重要作用。β-防御素2是人体中第一个被发现的可诱导性防御素，因此，β-防御素2的基因表达调控、生物学活性、与皮肤／肺部疾病发生发展相关性等方面的研究较为深入。采用重组DNA技术从原核表达体系、真核表达体系中获取具有生物学活性的β-防御素2多肽，并研究其在呼吸道细菌感染、脓毒症所致肺损伤／肺功能障碍发生发展中的保护作用，将有助于阐明β-防御素2在免疫相关疾病中的作用，有助于阐述肺损伤／呼吸功能障碍发生发展的机制与防治。     

β-防御素-2在机械通气相关性肺炎发病机制中的作用

目的观察铜绿假单胞菌（PA）机械通气相关性肺炎（VAP）前后肺组织β-防御素-2（BD-2）基因和蛋白质表达的变化，探讨肺组织的BD-2在机械通气相关性肺炎发病机制中的作用。方法90只健康清洁级雄性成年SD大鼠随机分成对照组、机械通气组（MV）和高盐抑制组（HS）。MV组中大鼠机械通气24h后气管内注入PA复制肺部感染模型。分别于接种细菌后8个时间点取3只大鼠处死，取肺组织进行病理学检测和测定大鼠肺组织中BD-2基因和蛋白质表达的变化。结果MV组中BD-2基因和蛋白质的表达水平的上调在3h后各时段均显著低于对照组（均P〈0．05）。MV组支气管肺泡灌洗液（BALF）、血细菌培养阳性率和重度肺部感染率均高于对照组（均P〈0．05）。HS组PA血细菌培养阳性率为76．2％，明显高于对照组和MV组（均P〈0．05）。对照组5d存活率为100％．MV组为50％．HS组为0。结论BD-2在机体呼吸系统中发挥重要抗感染作用．机械通气引起BD-2基因表达上调水平的下降可能与VAP的发生和发展有关。     

β-防御素研究进展

防御素(defensins)是一族具有广谱抗微生物和细胞毒活性的多肽，是天然免疫的重要介质，属内源性抗生素肽(endogenous antibiotic peptides)家族。防御素在自然界广泛分布，包括哺乳动物、鸟类、两栖类、昆虫和植物。它可在特殊的细胞中预先合成并储存于细胞质的颗粒中，或被病原微生     

分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室β-防御素的表达

目的 检测大鼠β防御素(rat β-defensin,rBD)在分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室的表达,探讨β防御素在分泌性中耳炎发病机制中的作用.方法 排除中耳感染的清洁级SD大鼠48只,随机分为4组,前3组36只行颈部切口经右侧听泡注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)溶液(1 mg/mL)30 μL制作分泌性中耳炎动物模型,造模后分别于第1、3、7天断头取咽鼓管鼓室黏膜;对照组12只右侧听泡注入生理盐水30μL,左侧听泡作为正常组,3 d后断头取咽鼓管鼓室黏膜.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测咽鼓管鼓室rBD-1 mRNA和rBD-2 mRNA的表达.结果 正常大鼠咽鼓管鼓室存在rBD-1和rBD-2的表达,且rBD-1的表达较rBD-2强,差异有统计学意义;造模后第1、3、7天,rBD-1表达变化不明显;rBD-2则在造模后第1、3天明显增加,差异有统计学意义,第7天渐回复到正常水平.结论 在大鼠,rBD-1可能参与正常咽鼓管鼓室的防御功能,造模后rBD-2的表达增加可能与病原体入侵后的清除相关.