牙周组织病

盐酸米诺环素微球凝胶的制备及对大鼠实验性牙龈炎的抑制作用；云南白药对比格犬牙龈炎的治疗作用；细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax在大鼠牙周膜改建中的作用；牙龈卟啉单胞菌膜泡诱导牙龈上皮细胞炎性反应的体外研究；派丽奥软膏辅助治疗慢性牙周炎的疗效观察     

盐酸多西环素微球温敏凝胶剂的表征及对大鼠牙周炎的药效评价

目的：评价盐酸多西环素（ Doxycycline Hydrochloride,DXY）微球温敏凝胶剂（ DXY-MS-GEL）的体外特性和对大鼠实验性牙周炎的治疗效果。方法：通过胶凝化温度和体外释药曲线评价DXY-MS-GEL的体外特性。采用内毒素隔日注射法建立Wistar大鼠牙周炎动物模型。将大鼠随机分为3组,空白对照组不予处理,实验组给以自制的DXY微球温敏性凝胶,阳性对照组给以盐酸米诺环素（派丽奥）软膏,隔日注射1次×5。末次给药后1 d测定牙龈出血指数、牙周指数、牙周探诊深度、菌斑指数、牙槽骨丧失量,观察组织病理学切片。结果：DXY-MS-GEL在室温下为自由流动的液体,37℃的平均凝胶时间为1.1±0.3 min,可持续释药24 h,体外释药曲线符合Higuchi方程,R2＝0.9948。与空白对照组相比,实验组和阳性对照组各观测指标差异均具有统计学意义（ P＜0.05）,而实验组和阳性对照组之间对比差异无统计学意义。结论：DXY微球温敏性凝胶对牙周炎的局部治疗效果显著。     

盐酸米诺环素脂质体控释凝胶改善大鼠实验性牙周炎的作用评价

目的 在动物体内检验盐酸米诺环素脂质体控释凝胶的生物相容性及其对牙周炎动物模型的修复效果。方法 毒性实验：用质量分数2%盐酸米诺环素脂质体控释凝胶溶液给SD大鼠灌胃,观察长期应用该制剂有无全身不良反应及其反应程度。牙周炎动物模型实验：将实验性牙周炎建模成功的SD大鼠分为3 组,A组为派丽奥组,B组为实验药物组,C组为阴性对照组;A、B组每周牙周袋内给药1次,连续56 d,C组给予生理盐水;分别在给药7、14、28、56 d后测量各组动物的牙周探诊深度（PD）和牙龈指数（GI）,并进行组织学观察,计算单核细胞和破骨细胞的数目。结果 盐酸米诺环素脂质体控释凝胶具有良好的生物相容性;给药14 d后,PD、GI,以及单核细胞和破骨细胞数目均较其他两组明显降低,组织学观察可见新骨及部分新纤维形成。结论 牙周袋内使用盐酸米诺环素脂质体控释凝胶可减轻牙周炎症,提示该制剂对改善牙周炎有一定的疗效,具有临床应用前景。     

骨形成蛋白和氯己定双缓释的壳聚糖温敏凝胶用于牙周组织再生的实验研究

目的 观察双重缓释骨形成蛋白和氯己定的壳聚糖温敏载药凝胶修复牙周组织缺损的效果.方法 制备犬前磨牙Ⅱ度根分叉牙周组织缺损模型,分5组于牙周组织缺损处分别注入:①自制的双重缓释骨形态发生蛋白和氯己定的载药凝胶(T1组);②仅加载缓释骨形态发生蛋白的壳聚糖温敏凝胶(T2组);③仅加载缓释氯己定的壳聚糖温敏凝胶(T3组);④未加载任何药物的壳聚糖温敏凝胶(C1组);⑤不注射任何载体及药物(C0组).术后不使用抗生素,常规护理,8周后取材进行大体及组织学观察牙龈炎性反应及牙周组织再生情况.结果 应用壳聚糖温敏凝胶,可以方便地通过注射方式局部安放载体.T1组新生牙槽骨高度平均达到缺损高度的99.2%,T2组新生牙槽骨高度平均达到缺损高度的87.8%,T3组为63.6%,C1组为37.0%,CO组为34.3%;牙龈炎性反应细胞浸润情况显示T1及T3组炎细胞数量明显少于其他组.结论 自制双缓释壳聚糖温敏凝胶有效发挥了骨形态发生蛋白和氯己定各自的作用,并且在牙周组织再生治疗中具有简便性和有效性.     

新型盐酸米诺环素缓释凝胶对牙周致病菌的缓释抑菌作用

目的:评价新型盐酸米诺环素缓释凝胶对牙周主要致病菌的体外缓释抑菌效果。方法:采用超声乳化法制备20 g/L盐酸米诺环素缓释凝胶及非缓释凝胶,以琼脂纸片扩散法检测二者在1、3、5 h和1、3、5、7 d七个时间点的释放液对Pg、Fn、Av、Pi.的抑菌活性,测量抑菌环直径。结果:缓释凝胶组对于Pg、Fn、Av、Pi抑菌作用均可持续到7 d;而非缓释凝胶组对Pg、Fn、Av的抑菌作用仅能维持到3 d,对Pi的抑菌作用可持续到5 d。结论:新型盐酸米诺环素纳米缓释凝胶对Pg、Fn、Av、Pi抑菌作用均可持续到7 d以上,具有较好的缓释抑菌效果。     

盐酸米诺环素缓释膜与碘复治疗冠周炎的疗效比较

目的:对比评价盐酸米诺环素缓释膜、碘复对智齿冠周炎的临床治疗效果。方法:选择有智齿冠周炎疾病患者76例。治疗组采用盐酸米诺环素缓释膜,以碘复为对照组。对其临床疗效、细菌清除率等进行比较。结果:盐酸米诺环素缓释膜组有效率90.2%,厌氧菌清除率91.9%;碘复组有效率88.6%,厌氧菌清除率86.5%。二组间无显著性差异(P>0.05)。结论:盐酸米诺环素缓释膜治疗冠周炎与碘复等效;且使用方便,用药次数少,是一种更为理想的冠周炎用药。     

黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备及释药性能检测

目的:将黄芩苷和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)载入壳聚糖温敏凝胶,构建双缓释体系,检测凝胶对药物的体外释放情况。方法:采用乳化缩聚法制备黄芩苷-明胶微球(gelatin microspheres,GMS);用不同配比的壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠(β-glycerophosphate,β-GP)溶液制备壳聚糖温敏凝胶,观察在37℃的成胶情况,选择最佳配比;在此基础上,将不同浓度的黄芩苷-GMS与BSA共混于壳聚糖凝胶溶液,测定载药后的成胶情况及黄芩苷和BSA的体外释放情况。结果:成功制备了黄芩苷-GMS,载药率5.62%,包封率72.05%;1.8%壳聚糖溶液与9%的β-GP混合10min后可获得状态良好的凝胶;加载两种药物后的凝胶溶液相转变时间未发生改变;30d时低浓度组累积释放了63.79%,两个较高浓度组分别释放了74.86%、77.63%。结论:壳聚糖温敏凝胶可以同时负载黄芩苷-GMS和BSA两种药物,在室温下呈溶液状态,37℃下经过10min可转变成半固体凝胶,在体外释药可达30d。黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备和释药性能检测为牙周组织修复再生药物的研制提供了基础。     

缓释骨形态发生蛋白-2的壳聚糖温敏凝胶促进牙周组织再生的实验研究

目的观察自制的加载重组人骨形态发生蛋白- 2（rhBMP- 2）的壳聚糖温敏凝胶修复牙周组织缺损的效果。方法选取3只健康雄性杂种犬制备前磨牙区人工Ⅱ度根分叉区组织缺损模型,随机分为空白对照组、空白凝胶组及载药凝胶组,术中先严密缝合组织瓣,然后对空白凝胶组及载药凝胶组区域分别注射先期配制并消毒好的空白凝胶和载药凝胶,术后8周取材行大体及组织学观察。结果载药凝胶组出现明显的牙周组织再生,而空白对照组和空白凝胶组仅有少量的牙周组织再生。载药凝胶组与空白对照组及空白凝胶组均有统计学差异（P<0.05）,空白对照组和空白凝胶组相比,没有统计学差异。结论载rhBMP- 2的壳聚糖温敏凝胶可有效促进牙周组织再生,同时简化手术操作,是一项有潜力的牙周组织再生手段。     

复合重组人骨形态发生蛋白-2缓释微球的引导组织再生膜的制备

目的设计制备包含活性生长因子的引导组织再生生物膜(以下称功能性复合膜)。方法利用天然材料右旋糖酐(dextran,dex)合成甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dextran-glycidylmethacrylate,dex-GMA)作为重组人骨形态发生蛋白-2(recombinedhumanbonemorphogeneticprotein-2,rhBMP2)新型缓释载体,采用乳化交联技术制备dex-GMA凝胶微球,考察其形态、溶胀系数、载药、释药及降解性能;以壳聚糖为材料,复合载rhBMP2的dex-GMA凝胶微球制备生物膜并对其进行生物学评价。结果dex-GMA在一定条件下可以成球;该凝胶微球溶胀、载药和降解性能良好,体外释药可达20d以上,利用简单的工艺就可以制备复合rhBMP2缓释载体的功能性复合膜,其理化性能与没有复合该缓释载体的生物膜没有变化。结论利用生长因子缓释载体可以制备功能性复合膜,其生物学性能有待进一步研究。     

载碱性成纤维细胞生长因子温敏水凝胶对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化的作用研究

目的:实验合成载碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,研究其对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)成骨分化的作用.方法:制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶水凝胶,冻干后电子显微镜下观察其表征;检测水凝胶毒性;CCK-8法筛选出载bFGF温敏水凝胶促BMMSCs增殖最适浓度并用于后续研究;碱性磷酸酶染色、茜素红染色及钙结节半定量分析观察其对BMMSCs成骨向分化能力的作用;实时荧光定量PCR检测其对BMMSCs成骨相关基因表达的影响.结果:(1)成功制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,扫描电镜下冻干后的水凝胶孔径为20～80μm.(2)活/死细胞染色结果显示壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶具有良好的生物相容性.(3)载bFGF温敏水凝胶能显著促进BMMSCs增殖,并呈剂量依赖性,最适浓度为100 ng/mL(P<0.01).(4)载bFGF温敏水凝胶组碱性磷酸酶表达增多,钙结节形成增多(P<0.05).(5)载bFGF温敏水凝胶组成骨相关基因(ALP、BMP-2、Runx2)表达增高.结论:载bFGF温敏水凝胶能促进大鼠BMMSCs成骨分化.     

碱性成纤维细胞生长因子/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶促大鼠牙周组织再生的研究

目的 探讨不同种壳聚糖衍生物温敏型复合水凝胶作为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法制备磺化壳聚糖（SCS）、磷酸化壳聚糖（PCS）及磷酸化磺化壳聚糖（PSCS） 3种具有不同生物学特性的壳聚糖衍生物,构建3种碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶。选取20只雄性wistar大鼠,大鼠双侧上颌第一磨牙近中建立三壁骨袋,随机分为空白对照组、空白凝胶组、bFGF/SCS/胶原温敏型复合水凝胶组、bFGF/PCS/胶原温敏型复合水凝胶组、bFGF/PSCS/胶原温敏型复合水凝胶组,术后6周处死大鼠,采集标本,进行大体、苏木精-伊红染色、Masson染色观察。结果 术后6周,3种bFGF/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶组与空白对照组在相对牙槽骨高度比值、相对上皮根向下移比及牙周组织再生分级计数等方面的差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 bFGF/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶在牙周组织工程邻域具有良好的应用前景。     

人脐带间充质干细胞在壳聚糖温敏凝胶中增殖和成骨分化的实验研究

目的:研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)在壳聚糖温敏凝胶中的增殖和成骨分化。方法:体外分离培养hUCMSCs。制备壳聚糖温敏凝胶并使用扫描电镜观察其超微结构。用壳聚糖温敏凝胶浸提液培养细胞,MTT法检测细胞增殖情况。使用成骨诱导培养液诱导壳聚糖温敏凝胶中生长的hUCMSCs向成骨方向分化,在诱导过程中进行茜素红法染色钙结节(21 d)。结果:hUCMSCs在壳聚糖温敏凝胶浸提液中的增殖情况与常规培养液中相近,无显著性差异。壳聚糖温敏凝胶中生长的hUCMSCs成骨诱导21d时可见到橘红色的钙结节。结论:hUCMSCs在壳聚糖温敏凝胶中可以正常增殖,经过诱导后可以向成骨方向分化。[关键词] 脐带间充质干细胞 壳聚糖温敏凝胶 增殖 成骨分化     

可注射壳聚糖温敏水凝胶对犬骨髓基质细胞生物学行为的影响

目的:探讨可注射壳聚糖(chitosan,CS)基温敏水凝胶对犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)生物学活性的影响。方法:利用密度梯度离心法获得犬BMSCs,含10%胎牛血清的L-DMEM培养液进行原代培养并进行初步鉴定。合成壳聚糖温敏水凝胶,光镜下观察BMSCs在凝胶中的存活情况。制备凝胶浸提液,检测其对细胞增殖分化的影响。采用SPSS13.0软件包对实验数据进行单因素方差分析。结果:犬BMSCs可在壳聚糖温敏凝胶中存活。壳聚糖浸提液组对BMSCs的增殖与正常培养液组相比,无显著性差异;但在培养第1、4、7天时,矿化培养液组和矿化浸提液组的细胞增殖率明显低于未矿化的完全培养液组和壳聚糖浸提液组,第10天时,4组间无显著性差异。壳聚糖矿化浸提液组碱性磷酸酶和骨钙素活性明显提高。结论:制备的壳聚糖温敏水凝胶具有良好的生物相容性,可进行水凝胶复合BMSCs的体内外实验研究。     

温敏型壳聚糖/甘油磷酸钠缓释胰岛素凝胶系统的制备

目的:初步探讨制备温敏性壳聚糖/甘油磷酸钠载胰岛素凝胶系统.方法:应用壳聚糖与甘油磷酸钠制备具有温敏性的载有胰岛素的凝胶体系,从凝胶体系的pH值、粘度测定、胶凝时间研究不同配比、不同pH值对壳聚糖/甘油磷酸钠(CS/β-GP) 体系凝胶化性能的影响.结果:壳聚糖凝胶在室温(25℃)下呈液态,56% 甘油磷酸钠(β-GP)与3%壳聚糖(CS)在pH值6.8-7.2,37℃下凝胶化时间(GT) 从1h缩短到8-12min,凝胶形态良好,并且在负载胰岛素溶液后C/GP凝胶形态未受影响.结论:一定配比CS/GPS 体系在37℃具有快速凝胶化性能,在加入胰岛素后并未改变其温敏特性,为后续的温敏性壳聚糖/甘油磷酸钠载胰岛素凝胶系统的体外释药实验打下了基础.     

pH‐Responsive Hydrogel With an Anti‐Glycation Agent for Modulating Experimental Periodontitis

Background: Stimulus‐responsive devices have emerged as a novel approach for local drug delivery. This study investigates the feasibility of a novel chitosan‐based, pH‐responsive hydrogel loaded with N‐phenacylthiazolium bromide (PTB), which cleaves the crosslinks of advanced glycation end products on the extracellular matrix. Methods: A chitosan‐based hydrogel loaded with PTB was fabricated, and the in vitro release profile was evaluated within pH 5.5 to 7.4. BALB/cJ mice and Sprague‐Dawley rats were used to evaluate the effects during the induction and recovery phases of periodontitis, respectively, and animals in each phase were divided into four groups: 1) no periodontitis induction; 2) ligature‐induced experimental periodontitis (group PR); 3) experimental periodontitis plus hydrogel without PTB (group PH); and 4) experimental periodontitis plus hydrogel with PTB (group PP). The therapeutic effects were evaluated by microcomputed tomographic imaging of periodontal bone level (PBL) loss and histomorphometry for inflammatory cell infiltration and collagen density. Results: PTB was released faster at pH 5.5 to 6.5 and consistently slower at pH 7.4. In the induction phase, PBL and inflammatory cell infiltration were significantly reduced in group PP relative to group PR, and the loss of collagen matrix was significantly reduced relative to that observed in group PH. In the recovery phase, PBL and inflammatory cell infiltration were significantly reduced, and significantly greater collagen deposition was noted in group PP relative to groups PR and PH at 4 and 14 days after silk removal. Conclusion: Chitosan‐based, pH‐responsive hydrogels loaded with PTB can retard the initiation of and facilitate the recovery from experimental periodontitis.     

Enhanced osteogenic healing process of rat tooth sockets using a novel simvastatin-loaded injectable microsphere-hydrogel system

PurposeTo evaluate the effects of simvastatin in a new injectable microsphere hydrogel system on bone healing process of tooth sockets.Materials and methodsSimvastatin was loaded in poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microspheres using an emulsion process, and the drug-loaded PLGA microspheres were further entrapped in a gelatin hydrogel to form an injectable microsphere-hydrogel system. Simvastatin-free hydrogel and blank microspheres hydrogel were used as controls. A rat tooth extraction socket model was generated, and the simvastatin-loaded microsphere-hydrogel composite was injected in the defect area of a tooth socket. At 1, 2, 5, and 8 weeks after the surgery, all the animals were sacrificed and the mandibles were harvested. The samples were examined using X-ray, hematoxylin and eosin staining, and histological evaluations.ResultsFive weeks after the surgery, significantly more bone tissue was formed in the simvastatin-loaded hydrogel group than in the simvastatin-free hydrogel group and the blank microspheres hydrogel group as control (p < 0.05).ConclusionThe injectable simvastatin-loaded microsphere hydrogel promoted new bone formation in the tooth extraction socket after 5 weeks, and has a promising potential for bone repair and regeneration.     

两种消毒方法对壳聚糖温敏凝胶物理性能及生物学特性影响的研究

目的:比较不同消毒方法对壳聚糖温敏凝胶物理性能及生物学特性的影响。方法:采用常规消毒法(壳聚糖-盐酸液高温高压消毒)和改进消毒法(壳聚糖粉单独高温高压消毒)制备壳聚糖温敏凝胶,分别检测其凝胶化时间、粘度;通过扫描电镜观察2组壳聚糖温敏凝胶的超微结构;在2组壳聚糖温敏凝胶表面培养第三代人牙周膜细胞,倒置荧光显微镜观察凝胶表面细胞活性;用2组壳聚糖温敏凝胶浸提液培养第三代人牙周膜细胞,MTT法检测细胞增殖情况。结果:改进组壳聚糖温敏凝胶凝胶化时间5～6 min稳定,常规组壳聚糖温敏凝胶凝胶时间为10～30 min不等;改进组的壳聚糖温敏凝胶初始粘度为(9.94±0.38)Pa.s,在37℃环境下其粘度随时间延长而增加,10 min后达(50.25±0.96)Pa.s,此后趋于平稳。常规组初始粘度为(0.90±0.45)Pa.s,其粘度随时间延长增加不明显,15 min时仅为(4.05±0.72)Pa.s,2组各时间点间均有显著差异(P<0.05);扫描电镜观察2组壳聚糖温敏凝胶均呈三维立体网状多孔结构,常规组孔径为10～48.33μm,改进组孔径为0.385～2μm。人牙周膜细胞不仅在2组壳聚糖温敏凝胶表面生长良好,而且在其浸提液中也均增殖正常。结论:改进消毒方法制备的壳聚糖温敏凝胶凝胶化时间更短,粘度更大,与常规消毒方法一样具有良好的生物相容性。     

含镁微球-凝胶复合体对MC3T3-E1细胞黏附和增殖的影响

目的:将载有镁的PLGA微球添加到藻酸盐凝胶中,形成新型微球-凝胶复合体,检测其理化性质并观察MC3T3-E1细胞在其表面的黏附、增殖情况.方法:将MgCO3和MgO按1∶1载入PLGA微球,制备平均密度分别为1×10-3 kg/m3、3×10-3 kg/m3、5×10-3 kg/m3、7×10-3 kg/m3的B、C...