采用顺序特异引物聚合酶链反应技术行快速HLA—DR53基因配型

采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＲ）对６５例肾移植供受ＨＬＡ－ＤＲ５３组（ＤＲ４、ＤＲ７、ＤＲ９）进行基因水平分型。结果本组有位点均分型成功，无一例假阳性和假阴性；每位点重复１０次，重复１００％；总耗时５小时。分型结果经标准细胞株、限制性内切酶分析和寡核苷酸探针杂交予以确证，特异性１００％。显示本方法用于ＨＬＡ－ＤＲ５３组基因分型具有高分辨率、高特异性和简捷快速物特点，适合于临床应用     

采用顺序特异引物聚合酶链反应技术行快速HLA－DR53组基因配型

采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）对６５例肾移植供受者的ＨＬＡ－ＤＲ５３组（ＤＲ４、ＤＲ７、ＤＲ９）进行基因水平分型。结果本组所有位点均分型成功，无一例假阳性和假阴性；每位点重复１０次，重复性１００％；总耗时５小时。分型结果经标准细胞株、限制性内切酶分析和寡核苷酸探针杂交予以确证，特异性１００％。显示本方法用于ＨＬＡ－ＤＲ５３组基因分型具有高分辨率、高特异性和简捷快速的特点，适合于临床应用。     

肾移植供受者HLA—DR基因配型结果分析（附276例报告）

为了进一步提高肾移植水平，采用顺序特异引物聚合物反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法用于２７６例肾移植供受者ＨＬＡ－ＤＲ基因配型，以探讨其临床可行性和实用性，结果显示：２７６例供受者３０８份样本，ＰＣＲ－ＳＳＰ分型均获成功，检测时间５小时内，供受者ＤＲ等基在频分布分布大致相同，无显著性差异，已行移植的１３５例受者分为配型选择组５１例和随机选择组８４例，配型组０～１个位上错配率５４．９％，明显高于随机组的２８     

多聚酶链反应寡聚核苷酸探针反向杂交在HLAⅠ类抗原分型中的应用

目的比较多聚酶链反应寡聚核苷酸探针（PCR—SSOP）技术与血清学方法对HLAⅠ类抗原A、B分型的准确性及分型精度。方法选取25例曾行血清学HLA-A、B分型的肾移植受者血标本行PCR—SSOP反向杂交法HLA—A、B分型。结果25例PCR—SSOP法HLA—A抗原分型均成功，检出A位点等位基因总数46个，单一位点4例，杂合子21例；检出B位点等位基因总数47个，单一位点3例，杂合子22例。血清学方法检出A抗原单一位点7例，其中2例经PCR—SSOP证实存在第2个位点，血清学A位点总误差率为12％；B抗原单一位点6例，1例PCR-SSOP证实存在第2个位点血清学B位点总误差率为8％。结论PCR—SSOP反向杂交法能对HLA—Ⅰ类抗原行中等分辨度进行等位基因分型，操作简单，分辨度及灵敏度高，结果解读客观。     

基因芯片技术在肾移植组织配型中的应用

目的比较基因芯片和特异性聚合酶链反应(PCRSSP)两种HLADR分型方法,探讨适用于肾移植供、受者分型的新方法。方法对60份肾移植供、受者的DNA样本同时采用基因芯片和PCRSSP进行HLADR分型,并进行分析比较。结果60例样本的两种分型方法结果完全一致56份,相同率达93%。结果不相同的样本共4份,经第三方验证,其中基因芯片分型漏1个位点2例、1个位点误判1例,PCRSSP分型漏1个位点1例。其中20份样本作了重复实验,其重复率达到96%。结论基因芯片用于HLA分型具有灵敏度高、效率高、标准化程度高的优点,是其它分型方法所无可比拟的,具有广阔的应用前景。     

臆断引物-聚合酶链反应分析配对胃腺癌组织与非癌胃组织基因组的差异基因

目的 研究同一胃腺癌患者的配对胃腺癌组织与非癌胃组织基因差异,并对差异基因片段进行克隆,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。方法 应用随意扩增多态性ＤＮＡ指纹图分析技术（ａｒｂｉｔｒａｒｉｌｙ ｐｒｉｍｅｒ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＡＰ－ＰＣＲ）,即臆断引物的无细胞分子克隆技术,亦称臆引物的聚合酶链反应,对５例配对标本作基因组差异分析。结果 与各自配对的非癌胃组织相比,所有胃腺癌     

用PCR—SSO检测IgA肾炎HLA—DRB1,DQA1,DQB1等位基因及其临床意义

我们用聚合酶链式反应(PCR)和序列特异性寡核苷酸(SSO)探针技术检测了IgAN患者HLA-DRB1、DQA1、DQB1等位基因频率,并探讨HLA与IgAN之间的关联及其临床意义。 一、材料与方法 1.病例来源:随机选择经肾穿刺免疫荧光证实的IgAN患者47例,其中男性24人,女性23人,平均年龄32岁。临床排除SLE,过敏性紫癜,慢性肝脏病等继发性IgAN。对照组:数据由上海第二医科大学免疫研究所分子遗传组提供,共包括92例健康者。 2.方法:提取外周血白细胞基因组DNA,利用PCR技术扩增HLA-Ⅱ类基因的第二外显子,末端标记SSO探针进行斑点杂交,按Tm值调整洗膜后-70℃     

套式聚合酶链反应扩增胆固醇结石中细菌DNA及其临床意 …

为探讨细菌在胆固醇结石病机理中的作用，从３０例胆汁细菌培养阴性的胆囊胆固醇结石中提取ＤＮＡ，应用套式聚合酶链反应扩增细菌１６ＳｒＲＮＡ基因片段作为有细菌存在的分子证据。结果显示，２６例胆固醇结石中有细菌ＥＮＡ存在。     

由胆固醇结石提取DNA进行套式聚合酶链反应的研究

为探讨微生物在胆固醇结石形成中的作用，作者从３０例胆汁细菌培养阴性的胆囊胆固醇结石中提取ＤＮＡ，应用套式聚合酶链反应（ＮＰ－ＰＣＲ）技术从中特异性地扩增细菌ＤＮＡ片段。结果显示２６例（８６．６７％）胆固醇结石中有细菌ＤＮＡ存在。此外，用１６ＳｒＲＮＡ基因序列对照分析鉴定细菌种类，８例（２６．６７％）为与大肠杆菌相似的ＤＮＡ片段；７例（２３．３３％）为痤疮丙酸杆菌型ＤＮＡ序列；２例（６．６７％）ＤＮＡ片段与化脓性链球菌相关；７例（２３．３３％）ＤＮＡ片段具有多样性，可能有多种细菌混合感染；另外２例（６．６７％）ＤＮＡ分子量较低，归类于其它未鉴定细菌。作者认为多数胆固醇结石内有细菌ＤＮＡ存在，但这些微生物的确切作用，有待于进一步深入研究。     

聚合酶链反应指纹图HLA-DPB1分型法的建立与验证

为适应从大批无关人群中筛选骨髓供者，依据聚合酶链反应杂合双链原理建立了ＨＬＡ－ＤＰＢＡＰＣＲ指纹图分型法。该不像单链构象记性聚合酶链反应那样要求严格的严格的实验条件，只需将ＰＣＲ产物９４℃变性２分钟，３７℃复性８分钟再用８％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离５小时，经溴乙锭或银染后照相即可完成。     

HLA配型在肾移植中的临床应用

目的：探讨ＨＬＡ配型在肾移植中的临床应用价值。方法：采用单克隆抗体一步法和顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）,对７８例肾移植受者进行随机性ＨＬＡ－Ａ、Ｂ、ＤＲ位点配型。结果：能配上２个以上位点者有５９例,占７５．６％。供受者之间２￣３个位点错配与４￣５个位点错配,在移植肾功能延迟恢复及肌酐恢复正常所需时间上,均有显著的统计学差异。结论：ＨＬＡ配型具有快速、准确的特点,能为肾移植受者选择     

HLA-I类PCR-SSP基因分型在异基因造血干细胞移植中的应用

目的：提高异基因造血干细胞移植供、受者HLA－I类配型的精确度,有效防止移植物抗宿主病（GVHD）的发生。方法 采用准确、简便的DNA、RNA提取方法和HLA－I类PCR－SSP基因分型方法。建立HLA－A33、A68、B40、B13 PCR－SSP分型方法以及HLA基因序列测序分析。结果：对300例中清学难以判断结果的30例临床标本进行基因水平的研究发现,DNA及RNA提取方法可以满足此项研究对样本的要求。HLA－I类PCR－SSP分型方法具有良好的稳定性、可靠性和特异性;重复率达100％。同时,HLA－A33、A68、B40、B13结果与HLA－I类PCR－SSP分型结果一致。HLA基因测序分析进一步肯定了HLA－I类PCR－SSP分型的特异性。HLA－I类PCR－SSP不受某些血清学影响因素的干扰。整个实验过程仅耗时2．5h。结论：HLA－I类PCR－SSP基因分型方法准确、特异、重复性好,可作为临床骨髓移植配型和正常人群无关供者筛选的常规方法,对GVHD的发生必将起到重要的预防作用。     

PCR-SSP及PCR-SSCP在骨髓移植配型中的联合应用

目的 研究ＨＬＡ抗原分型的方法。方法 对２０例已进行ＨＬＡ抗原血清学分型的骨髓移植供、受者采用序列特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）及单链构象多态性聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）进行ＨＬＡ抗原的基因分型。ＤＮＡ的提取采用快速盐析法。结果 基因分型结果与血清学分型一致者有１８对,基因分型能明确判定而血清学分型无法判断者有２对;ＰＣＲ－ＳＳＰ与ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结果完全一致者有１９对;１对ＰＣＲ－     

ELISA法和LABScreen法检测HLA抗体结果的差异

目的 比较ELISA法和LABScreen法检测HLA抗体结果的差异性,并分析两者对移植肾排斥的影响.方法 选取2008年11月至2009年12月期间在本科做肾移植和随访发现肌酐异常并且有肾穿记录怀疑移植肾排斥或者临界改变的患者,用莱姆德抗原板(LAT)和混合抗原板(LAT-MIX)通过ELISA方法检测HLA抗体,并与LABScreen技术检测的HLA抗体结果比较,研究两种方法对肾移植排斥检测结果的差异.结果 共277例患者被纳入研究,其中新移植230例,随访47例,术前HLA抗体阳性病例ELISA法为27例(9.7％),LABScreen法为145例(52.3％).其中ELISA法阴性而LABScreen法阳性的病例为118例(42.6％),ELISA法阳性的病例LABScreen法均阳性.未出现LABScreen法阴性而ELISA法阳性的病例,LABScreen法阳性而ELISA阴性的118个病例中,术后出现移植肾排斥的病例为41例(34.7％).两者均阴性的132个病例中,出现术后移植肾排斥的病例为24例(18.2％)(P=0.003).排斥组术后两周HLA抗体荧光强度不低于术前的占31％,而在非排斥组,术后两周HLA抗体荧光强度不低于术前的比例仅占12.8％ (P＜ 0.01).结论 LABScreen法在对HLA抗体检出率及敏感性上远高于ELISA法,并与移植肾排斥密切相关.     

肾移植长期存活受者致敏状态的检测及其临床意义

目的 检测肾移植长期存活受者的致敏状态,并分析其与移植肾功能的关系。方法 在定期随访的肾移植受者中,选取存活３年以上的受者６６例,其中肾功能正常者４６例,慢性肾功能减退者２０例,用Ｌａｍｂｄａ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｔｒａｙ（ＬＡＴ）酶联免疫试剂盒检测血清中的可溶性抗ＨＬＡ抗体,分析抗体的类型和特异性、致敏与肾功能及移植后时间的关系。结果 肾功能正常组轻度、中度、高度致敏分别为９例、０例、２例,肾功能减     

Comparison of serological and DNA HLA-DR typing results for transplantation in Western Europe, Eastern Europe, North America and South America

Abstract In a previous study, DNA typing revealed that 25% of serological HLA-DR typings of kidney transplants were incorrect. In the current study, we analyzed whether this error rate had improved in recent years, and whether there were differences according to geographical region. From 1988 to 1991 the error rate of serological typing improved slightly in Western Europe from 19% to 16%, and in North America, from 21% to 16%. In Eastern Europe, the error rate decreased from 49% to 33% in 1991, whereas the rate remained high in South America at 60% in 1988 and 72% in 1991. The high error rates in South America and Eastern Europe reflected a lack of good quality serological typing reagents. The 16% typing errors in Western Europe and North America demonstrated the current limit of serological techniques for cadaver donor typing and underlined the need for prospective DNA typing.     

等候肾移植者群体反应性抗体的变化及HLA致敏途径对其的影响

目的 探讨等候肾移植者群体反应性抗体(PRA)阳性率的变化及HLA致敏途径对其的影响.方法 对1991年1月至2010年12月间来自51个肾移植中心的8926例等候肾移植者10 555例次血液样本PRA检测的结果进行分析.1991～1998年组采用补体依赖的细胞毒性试验技术检测PRA; 1999～2010年组采用酶联免疫吸附试验技术检测PRA.搜集患者的临床资料,分析输血、妊娠和移植对PRA阳性率的影响.结果 8926例中PRA阳性者为1324例(14.83％),其中1991-1998年的PRA平均阳性率为18.17％ (513/2823),1999 2010年的结果为13.29％(811/6103),差异有统计学意义(P＜0.01).1324例PRA阳性者中,PRA为1％～30％者占71.83％;PRA≥30％者占28.17％.既往有血液成分输血史者的PRA阳性率为31.77％,无输血史者的PRA阳性率为1.21％,差异有统计学意义(P＜0.01).女性患者中,有妊娠史者的PRA阳性率为24.64％;无妊娠史者的PRA阳性率为7.19％,差异有统计学意义(P＜0.01).初次移植者的PRA阳性率为13.35％,既往有肾移植经历的受者的PRA阳性率为40.62％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 近20年大多数PRA阳性者其PRA＜30％.输血和肾移植史是导致PRA阳性的重要影响因素;妊娠史是PRA阳性的关联因素.     

Significance of qualitative and quantitative evaluations of anti‐HLA antibodies in kidney transplantation

In this study, we retrospectively investigated the relationship between the presence/titers of donor‐specific (DSA)/nondonor‐specific antibody (NDSA) and the rate of graft rejection after transplantation. The subjects comprised 34 recipients who tested positive by FlowPRA^® Screening. The recipients were divided into two groups; 22 recipients with DSA and 12 recipients with NDSA, as detected using FlowPRA^® Single Antigen I and II beads. The antibodies were also quantitatively examined using the molecules of equivalent soluble fluorochrome (MESF) method. Nine of the 22 recipients with DSA (9/22, 40%) developed antibody‐mediated rejection (AMR), while none of the 12 recipients with NDSA (0/12, 0%) developed AMR (P < 0.01). In a quantitative analysis of the MESF data, patients with DSA with MESF values of over 3000 frequently showed AMR (8/11, 73%). In contrast, one of the patients with DSA with MESF values of <3000 showed AMR (1/11, 9%). One of the 12 patients (1/12, 8%) with NDSA showed cellular rejection (T‐cell‐mediated rejection), regardless of the MESF values. In patients with DSA, an MESF value of 3000 may be a useful cutoff value for identifying patients at a high risk for AMR.     

Prevalence,Course and Impact of HLA Donor‐Specific Antibodies in Liver Transplantation in the First Year

The presence of preformed donor‐specific HLA antibodies (DSA) in liver transplant recipients is increasingly recognized; however, the prevalence of DSA and their impact on early allograft function remains unknown. We prospectively followed serum DSA levels of 90 consecutive liver transplant recipients from baseline to 4 months. Twenty recipients (22.2%) had preformed DSA. No antibody‐targeting treatments were undertaken. Seven days after transplantation, DSA levels decreased markedly in all but three patients. Day 7 protocol biopsies showed diffuse C4d deposition along the portal stroma, central vein, subendothelial and stromal space in the patients with persistent high DSA levels. The rate of acute cellular rejection was not significantly different in patients with DSA. The transaminase and bilirubin levels remained comparable during the first year despite the presence of DSA. The three patients with persistently high DSA levels continue to have normal allograft function. We conclude that in most cases, DSA disappear after liver transplant, however in rare instances where they persist, there is evidence of complement activation in the liver allograft, without significant clinical impact in the first year.