丹参酸乙对大鼠肝细胞增殖及胶原生成的影响

观察丹参酸乙对肝细胞增殖及胶原生成率的影响，探讨其抗肝纤维化作用机制。方法灌流法分离肝细胞进行体外原代培养，［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入检测细胞增殖率，［３Ｈ］－脯氨醉掺入、胶原酶消化法检测胶原生成率，凝胶法测定胶原酶活性。结果丹参酸乙可显著促进肝细胞增殖，提高细胞内总蛋白生成量，降低胶原蛋白生成，抑制胶原生成率；提高细胞分泌的间质型脐原酶活性，抑制细胞外的胶原生成率，均以１０－６ｍｏｌ／Ｌ浓度最好（与对照组比较，Ｐ值＜０．０５）。结论丹参酸乙可促进肝细胞增殖，抑制细胞的胶原生成。在抗肝纤维化治疗中具有特殊的意义。     

肾康注射液对肾小球系膜细胞增殖的影响

为了探讨中药肾康注射液 ( SK )对肾小球系膜细胞增殖的影响 ,笔者采用人的肾小球系膜细胞进行体外培养 ,用氚标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3H-Td R)掺入法观察其增殖情况。结果 :不同肾康注射液剂量组 3 H -Td R掺入率均明显低于对照组 ,提示肾康注射液可明显抑制人肾小球系膜细胞增殖     

比索洛尔对高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:探讨比索洛尔对培养的高血压大鼠（SHR）和W istar大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖及胶原合成的影响。方法:采用胰酶消化法培养CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成功能,四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖,3H-脯氨酸（3H-Proline）掺入法测定胶原合成。结果:①基础状态下,SHR组CFs的3H-Proline掺入量3、H-TdR掺入量及MTT比色法A值均明显高于W istar组。②不同浓度比索洛尔对两组大鼠CFs3H-TdR掺入量及MTT比色法A值均无明显作用。③不同浓度比索洛尔以浓度依赖的方式抑制CFs3H-Proline掺入量,与W istar大鼠组相比,SHR组CFs受抑制的效应更强。结论:SHR的CFs细胞数目、DNA合成及胶原含量均存在异常,比索洛尔呈浓度依赖性抑制CFs的胶原合成,但对CFs增殖及DNA合成无明显作用。     

激素和生长因子对无血清培养成纤维细胞调控作用的实验研究

研究激素和生长因子对体外无血清培养３Ｔ３和Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２成纤维细胞增殖的调控作用，发现加胰岛素，胰高血糖，表皮生长因子（ＥＧＦ）和成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）各组细胞数均明显高于单纯无血清对照组，且加激素各组＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值均高出对照组３～６倍（Ｐ＜０．０５），其中ＥＧＦ＋ＦＧＦ以及上述四种激素混合使用，二细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值超过对照组３０倍以上。     

小鼠接种rHBs疫苗产生的特异性淋巴细胞增殖反应

目的　研究小鼠免疫接种基因重组乙型肝炎表面抗原疫苗(recombinant hepatitis B virus(HBV)surface vaccine,rHBs)产生的特异性淋巴细胞增殖反应。方法　40只BALB／c小鼠随机分为0.65、1.25、2.5、5 μg四组,腹腔分别接种0.65、1.25、2.5、5 μg的rHBs,一半4、鼠2周后加强免疫1次。分别在初次免疫后2周或加强免疫后2周分离小鼠脾T淋巴细胞;分别进行以下实验:实验组用rHBs(10 μg／m1)刺激脾T淋巴细胞,对照组用PBS代替rHBs刺激脾T淋巴细胞;3天后用3H掺入法检测脾T淋巴细胞特异性增殖反应,以3H掺入的同位素cpm值及刺激指数(Stimulation index,SI,实验组cpm值／对照组cpm值)表示。结果 只接受单次免疫的0.65,1.25,2.5,5 μg组小鼠脾T淋巴细胞特异性增殖反应SI分别为1.55、1.93、2.41、2.81;而接受加强免疫的0.65、1.25、2.5、5 μg组小鼠脾T淋巴细胞特异性增殖反应SI分别为1.61、2.05、3.74、3.62。结论 小鼠接种rHBs后产生特异性淋巴细胞增殖反应,加强免疫或增加接种剂量可以增强反应强度。     

丹酚酸A对成纤维细胞活力、增殖及胶原合成的影响

目的：探讨庆酚酸Ａ对成纤维细胞增殖及胶原合砀影响。方法：常规培养ＮＩＨ／３Ｔ３成纤维细胞,１０＾－４～１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ丹酚酸Ａ温有亚单２２ｈ。〖＾３Ｈ〗－ＴｄＢ主法测定细胞增殖。〖＾３Ｈ〗－ｐｏｒｌｉｎｅ掺入法测定细胞活力,〖＾３Ｈ〗－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入,胶原酶消化法细胞内外胶原生成率。结果：１０＾－１～１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ彤酚酸Ａ抑制细胞增殖,除１０＾－４〖＾３Ｈ〗ｍｏｌ／Ｌ丹酚酸Ａ组细胞〖     

API0134对血管平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及相关癌基因表达的影响

为探讨API0134防治冠状动脉粥样硬化和腔内成形术后再狭窄的作用机制，采用内皮素诱导建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法、流式细胞术、免疫细胞化学检测及Northernblot方法，观察了API0134对血管平滑肌细胞增殖的作用及对血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及其相关癌基因C－sis和C－mpc表达的影响。结果发现，API0134能逆转内皮素所致的氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量增多（对照组为499±92，内皮素组为617±98，API0134组为506±102），阻止血管平滑肌细胞由静止期（G0／G1期；对照组为72％，内皮素组为50％，API0134组为60％）进入DNA合成期（S期；三组分别为26％、36％和30％）和有丝分裂期（G2／M期，三组分别为2％、14％和4％），并能逆转内皮素引起的血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子抗原、c－sis和c－mpc的mRNA表达增强。提示API0134有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用，这种作用与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

甘草酸对肝纤维化Ito细胞ⅠⅢ型前胶原mRNA表达和胶原沉积的影响

１．材料与方法：雄性ＳＤ大鼠，用吴志勇等［１］方法复制肝纤维化鼠模型。分为正常对照组（Ａ组）、模型对照组（Ｂ组）和甘草酸治疗组（Ｃ组）。每组分为早、中、晚期三组。以胡美玉等［２］方祛，提取肝Ｉｔｏ细胞。用荧光和电子显微镜观察，结合免疫细胞化学方祛做ｄｅｓｍｉｎｅ，ａ—ＳＭＡ染色鉴定Ｉｔｏ细胞，用３Ｈ－ＴＤＲ和３Ｈ－脯氨酸掺入实验，观察甘草酸对Ｉｔｏ细胞增殖动力学影响，用ＤｉｇＨｉｇｈＰｒｉｍｅｒ技术对Ｉｌｌｌ型前胶原及间质胶原酶ｃＤＮＡ片段进行标记。抽提细胞总ＲＮＡ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ进行…     

骨髓间充质干细胞条件培养液对心脏成纤维细胞的影响

目的探讨体外2％氧条件下培养骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）培养液对成年大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成情况的影响。方法分离Wistar大鼠下肢骨获取MSCs进行培养，收集培养3、6、9、24h培养液，用其刺激成年Wistar大鼠的心肌成纤维细胞30h，采用MTT法和^3H-脯氨酸掺入法检测心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成情况。结果经3、6、9h的MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入量与无血清对照组比较显著增加，分别增加23％（P〈0．01）、44％（P〈0．01）和31％（P〈0．01），而24h组与无血清对照组比较差异无显著性：MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞MTT结果与对照组比较差异无显著性。结论MSCs低氧条件培养液可以促进心肌成纤维细胞胶原合成，改善心功能。     

扶正化瘀方对大鼠皮肤成纤维细胞增殖和胶原生成的抑制作用

目的：探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。方法：以10％的扶正化瘀方药物血清作用于大鼠皮肤成纤维细胞，通过[^3H]-TdR和[^3H]-Rroline掺入,观察药物血清对大鼠皮肤成纤维细胞增殖和胶原生成的影响。结果：药物血清组[^3H]-TdR掺入量明显少于正常大鼠血清组。药物血清组细胞内胶原的合成率和细胞外胶原的分泌率均低于正常大鼠血清组。结论：扶正化瘀方抑制了大鼠皮肤成纤维细胞的增殖和胶原的生成。     

大剂量HBsAg疫苗对HBV转基因小鼠细胞免疫调节的实验研究

目的 研究大剂量HBsAg疫苗对HBV转基因小鼠(Tg鼠)细胞免疫应答影响。方法 用大剂量HBsAg疫苗免疫Tg鼠后，用流式细胞术、氚-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入法和ELISA，分别检测其树突状细胞(DC)、T淋巴细胞增殖及其诱生细胞因子IL-2、IFNγ的水平。结果 大剂量HBsAg疫苗组DC表面共刺激分子和I-E^k表达，特异T淋巴细胞增殖能力及其诱生细胞因子IL-2、IFNγ的水平显著高于对照组。结论 大剂量HBsAg疫苗增强Tg鼠细胞免疫应答，恢复对乙型肝炎表面抗原的应答。     

血管外膜源一氧化氮对内皮素—1诱导的血管平滑肌增殖的影响

目的 观察血管外膜生成的一氧化氮（NO）对内皮素－1（ET－1）诱导的血管平滑肌（VSM）增殖的影响，以探讨血管外膜源NO对血管结构重塑调节的意义。方法 取大鼠胸主动脉，去除内皮，分以下几组进行组织孵育10h：（1）完整外膜血管组；（2）单纯中膜组；（3）中膜与剥离的外膜共育组；（4）中膜与服L－N－硝基精氨酸（L-NNA)预处理的外膜共育组。每例胸主动脉剪为二段，分两个亚组：ET（10^-7mol/L)组和对照组。^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR)掺入法检测各组VSM的细胞增殖。另取大鼠腹主动脉外膜，用10^-8和10^-7mol/L ET-1刺激4h。Griess法测血管外膜生成的亚硝酸（NO2-)含量，^3H-L－精氨酸（^3H-L-Arg)标记的同位素法测定外膜一氧化氮合酶（NOS）活性。结果 （1）各ET亚组^3H-TdR掺入比相应对照组分别增加48．8％－71．9％。（2）在10^-7mol/L ET-1刺激下，完整外膜组及中膜＋外膜组的^3H-TdR掺入分别比单纯中膜组低21．3％和24．5％。中膜＋L－NNA预处理的外膜组^3H-TdR掺入分别比中膜＋外膜组及完整外膜组高30．8％和25．4％，而与单纯中膜组差异无显著性。（3）与对照组相比，10^-8和10^-7mol/L 的ET－1使外膜NOS活性分别增加124％和177％；使外膜生成的NO2－含量分别增加88％和225％。结论 实验结果表明：血管外膜生成的NO可抑制ET－1刺激的VSM的增殖，其抑制作用为ET－1激活的血管外膜NOS／NO途径所分导。提示血管外膜源NO可能参与心血管疾病过程中血管重塑的调节。     

Visfatin转基因对胰岛β细胞功能和活性的影响

目的 探讨Visfatin基因过表达对胰岛β细胞增殖、凋亡、细胞周期和胰岛素释放的影响.方法 将MIN6细胞分为对照组、绿色荧光蛋白转染组和Visfafin转染组,对照组以空质粒、绿色荧光蛋白转染组以荧光蛋白质粒、Visfatin转染组分别以2、5、10 mg/L Visfatin质粒转染细胞,40、60 h后收集细胞,采用实时聚合酶链反应和Western blot法检测Visfatin mRNA和蛋白表达,应用噻唑蓝法及流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和周期,运用酶联免疫法检测葡萄糖刺激的胰岛素释放.采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 与对照组相比,2、5、10 ms/L Visfatin质粒转染40 h及5 mg/L Visfatin质粒转染60 h后细胞增殖率分别升高1.60、1.87、1.75、1.51倍(t值分别为4.98、13.52、11.02、6.14,均P<0.05).棕榈酸诱导的细胞凋亡率降低,与对照组和绿色荧光蛋白转染组相比,质粒转染组细胞凋亡率分别降低42%、48%(F值分别为4.58、6.12,均P<0.05).与对照组相比,Visfatin质粒转染40 h后G_0/G_1期细胞减少12.3%,S期细胞增加13.2%(F值分别为5.25、6.23,均P<0.05).与对照组相比,质粒转染组细胞基础胰岛素分泌无改变,葡萄糖刺激后胰岛素释放有所增加,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Visfatin可促进胰岛β细胞增殖,抑制胰岛β细胞凋亡,对细胞周期有调节作用.     

蛋白激酶GIa基因在血性脑脊液致大鼠脑动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的 观察血性脑脊液对大鼠脑动脉平滑肌细胞蛋白激酶Gia mRNA及其蛋白表达水平变化与增殖的关系,探讨蛋白激酶Gla基因在蛛网膜下腔出血后继发慢性脑血管痉挛分子机制中的调控作用.方法 组织块法原代培养脑动脉平滑肌细胞.采用半定量逆转录多聚酶链反应技术检测对照组、血性脑脊液处理24 h组、血性脑脊液处理48 h组蛋白激酶Gia基因mRNA的表达水平;采用蛋白质印迹技术检测相应的蛋白的表达水平.采用甲基噻唑基四唑法、氚标记胸腺嘧啶核苷掺入法检测脑动脉平滑肌细胞增殖改变.结果 血性脑脊液诱导脑动脉平滑肌细胞不断增殖.各组均检测出蛋白激酶Gia基因的mRNA以及蛋白表达的变化,图像定量分析光密度值显示各组表达的mRNA以及蛋白表达与细胞增殖改变密切相关.结论 蛋白激酶Gia基因可能在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中调节脑动脉平滑肌细胞增殖.     

尿酸辅助树突细胞免疫对小鼠淋巴细胞增殖及CTL效应的影响

目的：观察尿酸辅助HBsAg蛋白负载的树突细胞免疫接种对小鼠免疫功能的影响。方法：将负载HB-sAg的小鼠骨髓来源树突细胞经尾静脉注射接种小鼠，1次／w，共2次。分DC（树突状细胞）对照组、联合尿酸组、尿酸对照组。MTT法检测体外经HBsAg或PBS重刺激的脾T淋巴细胞增殖反应；流式细胞仪法检测CTL（细胞毒性T淋巴细胞）活性。结果：免疫2周时，小鼠脾T细胞增殖反应及体内HBsAg特异性CTL的杀伤活性，联合尿酸组明显强于各对照组。结论：尿酸可促进负载HBsAg树突细胞免疫后小鼠脾T淋巴细胞的增殖及HBsAg特异性CTL效应。尿酸具有增强DC疫苗免疫效应的活性，可用作研制抗HBV的治疗性疫苗的免疫佐剂。     

转导C型钠尿肽基因对血管成形术后血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察局部转导C型钠尿肽基因对损伤后血管平滑肌细胞增殖的影响。方法将84只雄性新西兰大白兔随机均分为正常、对照和实验3组。后2组高脂饮食喂养,并以球囊损伤兔髂动脉建立再狭窄模型。对照组局部转导逆转录病毒载体携带的碱性磷酸酶基因;实验组局部转导逆转录病毒载体携带的C型钠尿肽基因。于术后第3天、第1周末、第2周末和第4周末取损伤段动脉进行氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验和增殖细胞核抗原免疫组织化学检测,采用计算机图像分析仪测量血管腔面积、内膜厚度、内膜面积、内膜与中膜面积比。结果对照组和实验组在后3天血管内膜面积、内膜厚度、内膜/中膜比值开始逐渐增加,术后2周上述各值显著增加,但实验组上述指标明显低于对照组(后第3天、第1周时P<0.05,后第2周、第4周时P<0.01)。氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验发现,术后第3天,对照组和实验组氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量开始增加,但两组无显著差异(P>0.05);术后第1周,实验组氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量明显低于对照组(P<0.05),术后4周时,实验组氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量已降至接近正常水平(P>0.05),而对照组氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量增加值仍高于正常组(P<0.01)。增殖细胞核抗原免疫组织化学显示对照组髂动脉损伤后2周在内膜层可见大量增殖细胞核抗原阳性细胞,而实验组增殖细胞核抗原阳性细胞表达不显著。结论局部转染C型钠尿肽基因可有效抑制血管成形术后血管平滑肌细胞增殖及内膜增生。     

大豆皂甙对人肺腺癌细胞增殖抑制作用研究

目的　探讨大豆皂甙 (total soysaponin,TS)对体外培养人肺腺癌细胞系 SPC- A- 1的直接抑制作用及可能机制。方法　通过克隆形成法、3H- Td R掺入法与四氮唑蓝比色法观察不同浓度 TS的抑瘤效应。结果　给药后 SPC- A- 1细胞增殖受抑制 ,0 .5 mg/ ml剂量组抑制作用最佳 ,并出现细胞脱落、胞浆内颗粒状物堆积等形态学改变 ;动态观察发现给药后 2 4 h已有明显抑制作用 ,72 h达高峰。给药组克隆形成数、cpm和 A值明显少于对照组 (P<0 .0 5) ,3H- Td R掺入抑制率增加 ,细胞生存率下降。结论　 TS通过抑制细胞 ;DNA合成、干扰细胞代谢及改变细胞外衣的性质 ,抑制贴附型细胞贴壁生长 ,对 SPC- A- 1细胞具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。     

扶正化瘀方药物血清对原代培养纤维肝细胞胶原生成及分泌白蛋…

目的：研究扶正化瘀方对原代培养ＣＣｌ４纤维肝细胞胶原生成率及白蛋白（Ａ１ｂ）分泌功能的影响。方法：制备ＣＣｌ４肝纤维化模型，胶原酶原位灌流法分离纤维肝细胞，以＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入，＾３Ｈ－Ｐｒｏｌｉｎｅ掺入胶原酶消化，ＥＬＩＳＡ等方法研究扶正化瘀方的血清药理学作用，结果：纤维肝细胞其增殖功能，Ａ１ｂ分泌功能的均较正常肝细胞低下，而胶原生成率则显著上升，扶正化瘀方药物血清能明显抑制纤维肝细胞增殖及其胶     

胰岛素对SHR大鼠血管平滑肌细胞体外增殖相关基因表达的影响

目的　探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖相关基因表达的影响。方法　用贴块法分离培养VSMC ,应用含 4 4 8个与细胞增殖相关基因靶基因芯片分析大鼠血管平滑肌细胞在胰岛素干预后基因表达的差异 ,RT PCR检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGFβ、PDGF、MatrixGla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平 ,采用免疫组织化学检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白 (α SMactin)。结果　胰岛素组VSMC的3 H TdR掺入值 (cpm)比对照组高 5 4 .6 % (P <0 0 1) ;基因芯片分析发现与细胞增殖相关等 36个基因的mRNA胰岛素干预前后培养的细胞表达差异 (8 0 4 % ) ;RT PCR检测MatrixGla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量 ,胰岛素组明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,同时bFGF、TGFβ、PDGF的表达也是胰岛素组明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ;α SMactin免疫组化结果显示对照组的α SMactin比胰岛素组染色深。结论　提示胰岛素介导大鼠血管平滑肌细胞增殖是多基因效应 ,胰岛素促进了VSMC的增殖与VSMC表型转换有关。