实时荧光PCR技术在手足口病原学检查中的应用

目的：采用实时荧光PCR法检测手足口病患儿病原体。方法：收集40例本市确诊手足口病患儿的肛拭子样本,进行肠道病毒筛选和柯萨奇病毒16型与肠道病毒71型鉴别与分析。结果：实时荧光PCR法检测40例患儿肛拭子标本使用通用型试剂盒检出22例阳性,其中9例为CVA-16感染,12例为EV71感染,发病3 d内采集标本检出阳性患儿占75%。结论：CVA-16和EV71肠道病毒是手足口病的主要病原体,手足口病病毒检出率与标本的采集时间相关性,实时荧光PCR技术对手足口病的病原诊断具有重要价值。     

实时荧光PCR法和病毒分离培养法在手足口病病毒检测中的应用分析

目的 筛选快速准确的检测方法,为手足口病监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法 采用病毒分离培养法和实时荧光PCR检测法对2014年牡丹江市手足口病监测哨点医院采集的手足口样病例标本进行检测,比较检测结果。结果 2014年采集的206份标本中,实时荧光PCR法检测肠道病毒EV 71型42例、Cox A16型9例、肠道病毒通用型37例,阴性118例。病毒分离培养法检测肠道病毒EV 71型4例、Cox A16型4例、肠道病毒通用型6例。实时荧光PCR法、病毒分离培养法检测阳性率分别为42.72%和6.80%;与实时荧光PCR法相比,病毒分离培养法灵敏度、特异度分别为15.91%、100.00%。结论 实时荧光PCR法比病毒分离培养法更灵敏快捷、特异性强、敏感度高等,适用于手足口病病原体的检测。     

实时荧光定量PCR技术在手足口病检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR技术在手足口病检测中的应用。方法选择本溪市疾病预防控制中心2018年2月～2019年6月收治的120例手足口病患儿作为研究对象,根据检测方法不同分为对照组和观察组。对照组利用常规PCR技术检测手足口病组,实时荧光定量PCR技术检测手足口病为观察组。比较两组的检出肠道病毒分型EV、EV71、CoxA16阳性率,特异性和灵敏度。结果采用实时荧光定量PCR技术与常规PCR技术检测手足口病肠道病毒分型EV、EV71、CoxA16的阳性率及两组特异性和灵敏度相比,观察组检测阳性率为66.67%,明显高于对照组检测阳性率的21.67%,观察组检出阳性率高于对照组,两组均有特异性,观察组灵敏度优于对照组,对照组最低检测限均为4.11×10~3cfu/mL。而观察组均为4.11×10~2cfu/mL。结论荧光定量PCR技术在检测肠道病毒中不仅具有特异性高,还具有灵敏度高、检测时间快的特点,有助于更快诊断手足口病,更好的服务于临床。     

双重实时荧光PCR检测在宫颈癌筛查中的应用

目的评价实时荧光PCR检测方法在宫颈癌筛查中的应用价值及临床意义。方法利用实时荧光PCR技术对310例妇科疑似人乳头瘤病毒(HPV)感染患者进行高危型HPV检测,同时利用低密度基因芯片对310例样本进行HPV基因分型。结果在310例样本中,使用实时荧光PCR技术和低密度基因芯片方法分别检出HPV高危型145例(46.8%)和132例(42.6%),两种方法检测符合率为94.5%(293/310)。基因分型结果:感染率最高的为16型(25%),其次为52型(16%)、58型(15.2%)、56型(7.5%)和31型(7.5%)等。结论实时荧光PCR技术能有效地检测常见高危型HPV的感染,与细胞学检测方法相结合,对宫颈筛查有很重要的指导意义。     

实时荧光定量PCR在肝炎检测中的应用

目的:探讨实时荧光定量PCR在肝炎尤其是乙型肝炎(乙肝)检测中的应用。方法:对450例急、慢性乙肝患者,采用经酶联免疫吸附试验检测血清,并按血清学标志分为三组,并对所用患者血清实时荧光定量PCR检测。结果:不同血清学标志模式的实时荧光定量PCR检测阳性率分别为95.95%、31.47%、52.20%,三组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:实时荧光栋梁PCR检测可以为乙肝病毒感染诊断、治疗及预后判断提供客观依据。但对于病毒非复制感染不能有效检测,不可在肝炎检测中完全替代血清标志物检测。     

实时荧光PCR技术在肠道沙门氏菌快速检测中的应用研究

目的探讨实时荧光PCR技术应用于肠道沙门氏菌快速检测中的可行性。方法随机采集从业人员健康体检肛拭子标本,用实时荧光PCR法进行检测,并以传统分离培养方法作为"金标准"进行对照实验,比较两者间的差异。结果在1 346份标本中,实时荧光PCR法检出沙门氏菌阳性13份,阳性率为9.66‰;培养法检出5份,阳性率为3.71‰。经统计学分析,两者对沙门氏菌检测的阳性数的差异有统计学意义(χ~2=6.125,P0.05);荧光PCR检测法灵敏度为100.00%,特异性为99.40%。结论实时荧光PCR法灵敏度高、操作简便,可降低工作强度,缩短检测时间,可作为快速检测肠道沙门氏菌的方法在从业人员健康检查中广泛推广应用。     

应用实时荧光PCR技术快速检测B群链球菌

目的 建立一种能够快速、准确、特异的检测B群链球菌的实时荧光PCR检测技术。方法 以B群链球菌cfb基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,然后优化反应条件和反应体系,建立检测B群链球菌的实时荧光PCR方法,通过检测实验菌株,对照菌株以及模拟血液,尿液标本对该方法的特异性、敏感性以及灵敏度进行评价。结果 实验结果表明实时荧光PCR方法检测7株B群链球菌均为阳性,其他对照实验菌株均为阴性,且当菌液浓度为 20cfu//ml时,也能获得阳性结果,说明荧光定量PCR法敏感性、特异性以及灵敏度均较高。对模拟尿液标本进行检测时,其敏感性为90%,特异性为100%,检测下限约为2cfu/反应体系。由于标本类型和处理方式的不同,对模拟血液标本进行检测时,其检测灵敏度约为100cfu/mL,低于模拟尿液标本的检测灵敏度。结论 建立的荧光定量PCR技术方法为GBS的快速诊断以及更加准确有效的进行抗生素预防提供了依据,也为在新生儿中进行早发型GBS感染的快速准确诊断提供了新的思路。     

双重实时荧光PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立

目的:建立一种能快速检测金黄色葡萄球菌,同时能快速鉴别是否具有耐甲氧西林基因的双重实时荧光PCR方法.方法:以金黄色葡萄球菌特异NUC基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,同时针对耐甲氧西林特异MecA基因设计另一对引物和探针;2条探针的5′端标记不同荧光报告基团(FAM和HEX),3′端标记荧光淬灭...     

荧光定量RT—PCR快速检测手足口病病原研究

目的建立荧光定量RT—PCR技术用于检测手足口病的肠道病毒。方法利用TaqMan技术，设计一对共引物及探针，建立、优化反应体系后，构建质粒标准品，利用10倍稀释法建立相对定量标准曲线，根据TCID。倍比稀释，建立灵敏度曲线。特异性检验后利用临床标本与传统的RT—PCR法进行比较。结果定量标准曲线的灵敏度为10^5／μl（R^2=0．999），PCR扩增效率为94％。灵敏度曲线显示检测到的最低浓度值为5．0TCID50／ml（R^2=0．99），PCR扩增效率为97．6％。荧光RT—PCR检出率为80．9％，显著高于RT—PCR（检出率为62．92％）。结论研究建立的荧光定量RT—PCR方法检测肠道病毒敏感性高、特异性好、效率高，可以作为肠道病毒的快速检测方法。     

荧光定量PCR检测手足口病患者血浆循环DNA及其临床意义

目的：利用实时荧光定量PCR技术检测手足口病患者血浆循环DNA水平。方法分别收集健康人和手足口病患者的血浆样本,用实时荧光定量PCR方法检测样本中的血浆循环DNA。结果手足口病患者的血浆循环DNA的CT值为（23.58±1.18）,显著低于健康对照组的（35.66±1.32）（P<0.001）。结论实时荧光定量PCR技术检测血浆循环DNA可以作为诊断手足口病的一种方法。     

实时荧光RT-PCR法在手足口病患儿病原检测中的应用

目的:了解核酸检测(RT-PCR)法在抚顺市手足口病患儿病原谱调查中的应用价值,为疾病防控提供依据。方法:在全市范围内收集2013年和2014年疑似手足口病患儿咽拭子、肛拭子标本,使用人肠道病毒通用引物、肠道病毒71型(EV71)引物和萨奇病毒A组16型(Cox A16)引物,采用实时荧光RT-PCR方法进行病原核酸检测。结果:2013年检测标本461份,其中EV71阳性16份,Cox A16阳性316份,其他肠道病毒阳性46份。2014年检测标本253份,其中EV71阳性112份,Cox A16阳性57份,其他肠道病毒阳性35份。两年标本肠道阳性率平均为81.51%,其中EV71型和Cox A16型占阳性标本总数的86.08%。结论:实时荧光RT-PCR方法因具有操作简便、快速和特异性高的优点,非常适合于手足口病患儿病毒核酸的快速分型。EV71型和Cox A16型肠道病毒是抚顺市近两年引起手足口病患儿感染的主要病原体。     

实时荧光PCR法快速检测急性上呼吸道感染病原体

【目的】利用实时荧光定量PCR技术,建立一套快速可靠的急性上呼吸道感染病毒/细菌检测方法,对杭州市某学校暴发的一起群体性急性上呼吸道感染进行病原学分析。【方法】用甲、乙型流感病毒核酸联合测定试剂盒、呼吸道合胞病毒核酸测定试剂盒、腺病毒核酸测定试剂盒、B型流感嗜血杆菌核酸测定试剂盒对20例上呼吸道感染疑似患者样品进行实时荧光定量PCR检测。【结果】20例样本中有7例为腺病毒病毒阳性,无其它病毒或细菌阳性。【结论】实时荧光定量PCR法能快速准确地检测急性上呼吸道感染的病原体;本次暴发的急性上呼吸道感染是由腺病毒病毒引起的。     

双重实时荧光RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用

目的 建立检测肠道病毒(EV)和肠道病毒71型(EV71)的双重实时荧光RT-PCR法.方法 设计特异性引物和探针,建立双重实时荧光RT-PCR反应体系,绘制标准曲线,对该方法的灵敏度、精密度等进行评价.收集109例临床手足口病患者粪便和咽拭子标本用该法进行检测,并与EV71商品化试剂盒检测结果进行比较.结果 双重荧光PCR法建立的EV和EV71标准曲线相关系数(r)均为0.998;该法检测EV和EV71的灵敏度分别达到0.5 TCID50/mL和0.05 TCID50/mL;检测EV和EV71的批内精密度均小于3％,总精密度均小于或等于4％;对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测,显示了良好的特异性.109例临床样本用该法检测出84例EV病毒阳性样本,其中EV71阳性56例,EV71总阳性率为51.4％;与单重荧光PCR商品化试剂盒的检测结果完全一致(P=1.000).结论 建立的双重实时荧光RT-PCR法灵敏度高、稳定性好,对手足口病的早期高通量快速诊断具有重要意义.     

实时荧光定量PCR技术在食源性细菌检测中的应用效果评价

【目的】探讨应用实时荧光定量PCR技术在食源性细菌检测中应用效果。【方法】分别应用细菌培养法,PCR检测法,实时荧光定量PCR方法对987例群体食源性食物中毒腹泻患者和疑似患者的粪便或呕吐物2084份样品进行食源性病原体检测。【结果】检测2084个感染性腹泻标本,细菌培养法阳性检出率45.2%,普通PCR检测法阳性检出率63.4%;采用实时荧光PCR技术阳性检出率90.1%。实时荧光定量PCR检测法阳性检出率显著高于细菌培养检测法和普通PCR检测法,相比较均有显著性差异（P〈0.05）。【结论】实时定量荧光定量PCR技术准确、快速、简便、特异性强,在食源性细菌检测中,能为突发食源性食物中毒事件提供更早的控制措施并争取时间。     

荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的应用价值分析

目的 探究荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的应用价值.方法 选取2017年8月至2019年12月本院收治的202例疑似手足口病患儿,所有患儿样本均采用荧光PCR技术、逆转录聚合酶链反应检测,比较两种检测方法下EV、EV-71、CA-16病毒阳性检出率及对手足口病的诊断情况.结果 荧光PCR技术对EV、EV-71、CA-16病毒阳性检出率分别为55.45％、18.32％、33.66％,均高于逆转录聚合酶链反应的34.65％、5.94％、23.27％,EV+EV-71、EV+CA-16双阳性检出率为17.33％、32.67％,高于逆转录聚合酶链反应的9.90％、21.29％,差异有统计学意义(P<0.05);荧光PCR技术在手足口病中检出率为94.26％,高于逆转录聚合酶链反应的59.84％,差异有统计学意义(P<0.05).结论 采用荧光PCR技术诊断手足口病EV、EV-71、CA-16病毒阳性检出率较高,可为疾病诊断提供参考依据,以降低漏诊及误诊率.     

实时荧光定量PCR在念珠菌研究中的应用

念珠菌作为院内感染的常见机会性致病菌,实时荧光定量PCR技术已应用于念珠菌临床快速诊断、基因分型、耐药等研究。实时荧光定量PCR技术以灵敏、快速、安全、准确、高通量等特性,不仅在分子生物学领域作为常规的分析检测方法,而且在医院临床标本病原体的检测、遗传性疾病的诊断、检疫、法医学标本的鉴定等领域也逐步得到了广泛运用。     

实时荧光定量PCR在检测人ANP基因表达的应用

目的 建立心房钠尿肽(ANP)基因mRNA表达水平的实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行初步评价.方法 以基因表达产物为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,对样本中的心房钠尿肽含量进行相对定量,比较不同样本组的基因表达水平.结果 所建立的实时荧光定量PCR方法熔解曲线中熔解峰单一.肺癌患者胸腔样本的ANP含量为对照样本的4.68倍,血清样本为对照样本的16.03倍.结论 所建立的ANP实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性.肺癌患者胸腔液和血清中ANP的含量明显增高.     

实时荧光PCR技术在丙型肝炎病毒基因型检测中的应用

目的 探讨实时荧光PCR技术在丙型肝炎病毒(HCV)基因型检测中的应用价值.方法 采用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结合TaqMan技术,对HCV基因型进行实时荧光PCR检测;巢式RT-PCR扩增HCV的NS5B基因区域,测序后进行HCV基因亚型分析并与实时荧光PCR分型结果进行比较.结果 实时荧光PCR共分型119例,1型71例(59.7%),非1型48例(40.3%)其中110例成功进行测序分型;测序分型的110例中,1型73例(均为1b型),占66.4%,非1型37例(其中2a型7例、3a型6例、3b型3例、4a型1例、4k型1例、5a型1例、6a型17例、6n型1例),占33.6%.与110例测序分型的结果比较,实时荧光PCR分型总的符合率为71.8%(79/110),其中1型的符合率为80.9%(55/68),非1型的符合率为57.1%(24/42).结论 实时荧光PCR进行HCV基因型检测操作简便、快速,但分型结果特异性不高.     

实时荧光定量PCR在生殖泌尿道疾病诊断中的应用

目的:探讨荧光定量PCR在生殖泌尿道疾病诊断中的应用。方法:采用FQ-PCR法对4160例泌尿生殖道感染疑似患者同时进行UU、CT、HSVⅡ型、NG和HPV检测。结果:5种性病病原体的感染率比较差异有统计学意义(P<0.01);另外男女的UU感染率比较差异有统计学意义(P<0.05),而CT感染率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:荧光定量PCR技术检测常见性病病原体,具有简便、快捷、准确、特异性高等优点,对临床诊断治疗及流行病学调查有重要意义。     

实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的对实时荧光定量PCR测定的472例HBV-DNA结果进行分析,以探讨其临床价值。方法对472份临床血清标本用ELISA法进行定性检测,并依据乙肝两对半定性结果进行归类分组,再用实时荧光PCR定量检测。结果92份HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中有89份HBV-DNA为阳性,阳性率为96.7%,其PCR定量拷贝数为(3.23±1.45)×107/ml;168份HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有118份HBV-DNA阳性,阳性率达到70.2%,PCR定量拷贝数为(4.65±2.10)×105/ml;32份HBsAg(+)、HBcAb(+)标本中有11份HBV-DNA为阳性,阳性率为34.4%,PCR定量拷贝数为(1.92±1.54)×104/ml;62份HBsAb(+)的标本HBV-DNA阳性2例,阳性率为3.2%,PCR定量拷贝数为(5.45±1.14)×103;60份全阴性的标本HBV-DNA阳性1例,阳性率为1.7%,PCR定量拷贝数为(2.36±1.12)×104/ml。结论PCR定量测定HBV-DNA可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况,更有利于临床治疗和疗效观察。