实时荧光RT-PCR法在手足口病患儿病原检测中的应用

目的:了解核酸检测(RT-PCR)法在抚顺市手足口病患儿病原谱调查中的应用价值,为疾病防控提供依据。方法:在全市范围内收集2013年和2014年疑似手足口病患儿咽拭子、肛拭子标本,使用人肠道病毒通用引物、肠道病毒71型(EV71)引物和萨奇病毒A组16型(Cox A16)引物,采用实时荧光RT-PCR方法进行病原核酸检测。结果:2013年检测标本461份,其中EV71阳性16份,Cox A16阳性316份,其他肠道病毒阳性46份。2014年检测标本253份,其中EV71阳性112份,Cox A16阳性57份,其他肠道病毒阳性35份。两年标本肠道阳性率平均为81.51%,其中EV71型和Cox A16型占阳性标本总数的86.08%。结论:实时荧光RT-PCR方法因具有操作简便、快速和特异性高的优点,非常适合于手足口病患儿病毒核酸的快速分型。EV71型和Cox A16型肠道病毒是抚顺市近两年引起手足口病患儿感染的主要病原体。     

梅州市2010-2011年手足口病病原学流行特征分析

目的 了解梅州市手足口病病原学流行情况,为手足口病控制和治疗提供科学依据.方法 对2010-2011年梅州市手足口病哨点病原学监测医院的手足口病病例采集粪便标本,提取标本中的核酸,采用实时荧光定量PCR方法扩增病毒的特异性片段,检测总肠道病毒、EV71和CoxA16核酸.结果 255份手足口病临床诊断病例的粪便标本中,总肠道病毒、EV71和CoxA 16病毒核酸检出率分别为72.55％、40.39％和11.37％,其中EV71和CoxA16核酸检出率差异有统计学意义(x2=55.97,P＜0.01).发病以5-7月高发,占48.65％,有较明显的季节性分布.男性总肠道病毒核酸检出率高于女性(x2=10.24,P＜0.01),但不同性别间的EV71和CoxA16病毒核酸检出率差异均无统计学意义(x2=0.01、0.69,均P＞0.05).结论 EV71是梅州市2010-2011年手足口病的主要病原体.今后应加强手足口病流行特征和病原谱的动态研究,以进一步掌握手足口病流行规律.     

广西746例疑似肠道病毒感染病例病原学监测分析

目的了解广西肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染策略提供依据。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法,对广西746例疑似肠道病毒感染者咽拭子、疱疹液和粪便标本共1062份进行肠道病毒、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxA16）核酸检测。结果共检出485份肠道病毒核酸阳性,阳性率为45.67％,其中EV71核酸阳性187份,阳性率为17.61％,40份为CoxA16核酸阳性标本,阳性率为3.77％。结论1062份标本中EV71核酸的阳性率高于CoxA16;粪便和疱疹液标本的阳性检出率高于咽拭子标本的阳性检出率;CoxA16和EV71是引起儿童手足口病的主要病原体,要加强对CoxA16和EV71的的鉴别诊断。     

2010年河池市手足口病病原体检测分析

目的通过对河池市手足口病病例进行病原体检测,明确河池市手足口病流行的主要病原体,为手足口病的诊治、监测及防控提供依据。方法对2010年4-10月份140例临床诊断为手足口病患者的肛拭子和咽拭子标本203份,采用实时荧光PCR法同时检测EV、EV71和CA16病毒核酸。结果 140例病例中EV核酸阳性107例,阳性率76.43%,其中EV71阳性率47.86%(67/140),CA16阳性率10.00%(14/140),其他肠道病毒阳性率18.57%(26/140)。重症病例72例,为5岁以下儿童,其中EV71病毒50例,其他肠道病毒12例。结论①2010年河池市手足口病流行的主要病原体为EV71病毒;②实时荧光PCR法检测EV、EV71和CA16病毒核酸方法简便,速度快,是一种较好的检验方法。     

龙门县2009年手足口病病原基线调查

目的：了解惠州市龙门县2009年引起手足口病的病原体分型,为保护不同人群特别是高危人群的健康提供科学理论依据。方法：采用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）方法,采集临床诊断为手足口病患者的咽拭子、肛拭子、疱疹液及粪便等标本进行肠道总病毒、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型核酸检测;运用描述性流行病学研究方法分析龙门县手足口病流行病学特征。结果：从46例手足口病患者中共采集90份标本,经Real-timePCR检测,84份肠道总病毒阳性,阳性率为93.33%;5份为肠道病毒71型（EV71）阳性,阳性率为5.56%;68份为柯萨奇病毒A16型（CoxA16）阳性,阳性率为75.56%;CoxA16和EV71两者阳性率之比为13.6：1。结论：从该组手足口病患儿检测到的病原体以CoxA16感染为主,其次是EV71,开展手足口病流行病学和病原学研究,为制定更好的预防控制措施提供实验依据。     

2009～2010年秦皇岛市手足口病样本检测结果

目的了解影响实验室手足口病毒检出的因素,分析秦皇岛市2009~2010年手足口病例肠道病毒核酸的检测情况。方法应用实时荧光PCR技术对可疑手足口病例送检的咽拭子、肛试子、疱疹液等样本中肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）、肠道病毒通用型（EV）进行病原学检测。结果 307例可疑病例中肠道病毒检出率为69.38%,样本的不同来源和存在的不同状态都对结果的检出有影响;秦皇岛市手足口发病集中在5~7月份,男女性别比为2.04：1,以5岁以下儿童为主;EV71与其他病毒所致重症手足口之比为12.5：1差异有统计学意义（χ2=18.86,P〈0.05）。结论切实加强实验室肠道病毒核酸检测工作,从多方面提高病毒检出的敏感性和特异性;EV71型是引起手足口重症病例的主要毒株,实时荧光PCR法可以快速检测手足口病样本中的肠道病毒核酸,为临床诊断和流行病防控提供病原学依据。     

2010年桂林市手足口病病原体检测结果分析

目的 分析桂林市临床诊断手足口病病例标本的病原体检测结果,为手足口病的防控工作提供科学依据.方法 对2010年收集的1230份粪便和肛拭子标本,采用实时荧光PCR(RT-PCR)方法进行肠道病毒通用(EV-U)、EV71、COXA16型的特异引物扩增检测.结果1230份标本中检出EV-U阳性734份,阳性率为59.67%,EV71 阳性495份,阳性率为40.24%,COXA16阳性33份,阳性率为2.68%,其他肠道病毒阳性206份,阳性率16.75%.结论 桂林市2010年流行手足口病病原体主要是肠道病毒EV71血清型.     

沧州市2010年手足口病流行病学分析

目的了解沧州市手足口病疫情流行特征,防控手足口疫情发展及蔓延。方法收集2010年疫情报告手足口病例流行病学资料和实验室核酸检测结果进行统计分析。结果 2010年沧州市手足口病病例累计报告11 687例,重症206例,死亡1例,较去年同期(9 771例)上升19.61%。对648例患者的咽试子等标本进行EV71、CoxA16、肠道通用病毒核酸检测,阳性599份,阳性率92.44%。其中EV71型187份、CoxA16型137份、其他肠道病毒感染275份,分别占31.22%、22.87%和45.91%。结论沧州市2010年手足口病感染以EV71型和其他肠道病毒为主。     

玉溪市2010年儿童手足口病的病原学监测分析

目的 对玉溪市2010年1～12月手足口病流行时期该病患儿进行病原学调查,了解导致流行的肠道病毒感染情况.方法 采用逆转录荧光聚合酶链反应(Fluorescence RT-PCR)方法,对238例临床诊断为手足口病患儿的咽拭子标本进行肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型RNA的检测.结果 检测结果73份标本为阳性,阳性检出率为30.67%.其中41例患儿为CoxA16阳性,32例患儿EV71阳性.结论 所检测2010年玉溪市儿童手足口病流行以CoxA16感染和EV71为主,CoxA16和EV71感染患儿的表现相似,临床难以鉴别,重症病例以EV71感染为主;普通病例以CoxA16感染为主.     

2009年海南省手足口病样本病原学检测结果分析

目的明确引起海南省2009年手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）暴发流行的主要病毒型别,为手足口病病例诊断和制定防控措施提供病原学依据。方法依据卫生部发布的《手足口病预防控制指南》（2009年版）附件1,提取手足口病临床诊断病例各种样本中的病毒核酸,用肠道病毒通用引物、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxA16）特异性引物进行逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和实时荧光-聚合酶链式反应（real-time PCR）。核酸检测阳性的原始样本接种人横纹肌肉瘤细胞（RD细胞）进行肠道病毒分离培养。结果海南省2009年各市县采集的1 085份手足口病样本中EV71、CoxA16和其它肠道病毒核酸阳性率分别为23.13%、1.57%和9.59%,不同类型病例的肠道病毒核酸阳性率分别为死亡病例55.56%（10/18）,重症病例36.07%（145/402）,普通病例32.63%（217/665）。不同类型样本肠道病毒核酸检测阳性率不同,肛拭子和粪便阳性率达到49.62%,疱疹液检测阳性率为43.84%,鼻咽拭子的检测阳性率为22.89%。结论引起海南省2009年手足口病暴发流行的主要病原是EV71,其次为CoxA16。应继续加强手足口病的病原学监测,掌握病毒型别变化趋势,更好地为手足口病防控工作提供技术支持。     

186例手足口病病原检测及临床分析

目的探讨分析手足口病病原学特点以及临床特征,为诊断和预防提供有力的实验室及临床依据。方法采用荧光定量PCR核酸检测试剂盒对该院2011年2月-2012年3月收治的186例手足口病患者的粪便、咽拭子标本进行总肠道病毒、EV71、CoxA16检测,并对其所引起的临床症状和体征特点进行分析。结果186份标本检测,146例肠道病毒通用核酸阳性（78．49％）,78例肠道EV71病毒核酸阳性（41．94％）,42例CoxA16核酸阳性（22．58％）,26例其他肠道病毒核酸阳性（13．98％）118份咽拭子标本中104份为阳性,检出率为88．14％,68份粪便标本阳性42份,检出率为61．76％,咽拭子标本阳性检出率明显比粪便标本检出率高差异有统计学意义（P〈0．05）;患儿的主要临床症状及体征只要变为口、手、足、臀、膝等部位皮疹和发热,不同病原体导致的临床症状和体征的发生情况差异无统计学意义（P〉0．05）。结论临床上采用荧光定量PCR核酸检测法有助于对手足口病进行早期病原学诊断,对相关流行病学调研具有极大的临床意义,有助于早期发现、治疗、预防手足口病,降低其病死率。     

双重实时荧光RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用

目的 建立检测肠道病毒(EV)和肠道病毒71型(EV71)的双重实时荧光RT-PCR法.方法 设计特异性引物和探针,建立双重实时荧光RT-PCR反应体系,绘制标准曲线,对该方法的灵敏度、精密度等进行评价.收集109例临床手足口病患者粪便和咽拭子标本用该法进行检测,并与EV71商品化试剂盒检测结果进行比较.结果 双重荧光PCR法建立的EV和EV71标准曲线相关系数(r)均为0.998;该法检测EV和EV71的灵敏度分别达到0.5 TCID50/mL和0.05 TCID50/mL;检测EV和EV71的批内精密度均小于3％,总精密度均小于或等于4％;对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测,显示了良好的特异性.109例临床样本用该法检测出84例EV病毒阳性样本,其中EV71阳性56例,EV71总阳性率为51.4％;与单重荧光PCR商品化试剂盒的检测结果完全一致(P=1.000).结论 建立的双重实时荧光RT-PCR法灵敏度高、稳定性好,对手足口病的早期高通量快速诊断具有重要意义.     

165例手足口病重症患者病原学检测分析

目的分析2010年百色市手足口病重症病例的病原学特点,为制定防控措施提供依据。方法取患者咽拭子和肛拭子标本,用荧光PCR法检测肠道病毒通用型(EV)、柯萨奇病毒A16型(CoxA16)、肠道病毒71型(EV71)。结果在165例临床诊断为手足口病重症的患者中,肠道病毒核酸阳性137例,阳性率83.03%。其中EV71感染91例,占55.15%;CoxA16感染7例,占4.24%;其他型肠道病毒感染39例,占23.64%。结论 2010年引起百色市重症手足病的病原体主要为EV71病毒。应做好该病的防控工作,向大众普及健康卫生常识。     

惠州市重症手足口病病原谱及EV71型VP1区基因特征分析

目的分析惠州市手足口病重症病例的病原谱构成,了解惠州市肠道病毒71型分离株的VP1区基因特征,为科学防治手足口病提供科学依据。方法采集300例重症手足口病(HFMD)患者标本,采用实时荧光RT-PCR检测肠道病毒核酸,并对肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)进行分型检测;选择8株EV71分离株进行VP1区基因全长序列测定,测序结果利用DNASTAR软件进行核苷酸、氨基酸序列分析和同源性比较,并用Mega5.0软件构建亲缘性进化树。结果通过实时荧光RT-PCR特异性检测,EV71阳性结果 154份,阳性率为51.33%;CoxA16阳性结果 38份,阳性率为12.67%。测序结果表明,8株EV71之间的VP1基因核苷酸同源性为96.9%~99.2%,氨基酸同源性为99.3%~100%。VP1区基因遗传进化分析表明,8株EV71分离株与C4基因亚型的代表株处于同一分支,均属于C4基因亚型的C4a进化分支。结论惠州市手足口病疫情主要病原EV71病毒均属于C4a基因亚型,与2004年以来的中国大陆EV71病毒流行的基因型一致,未产生明显的抗原漂移及变异。     

湖北省2015年手足口病实验室确诊情况分析

目的分析湖北省2015年手足口病病原学特征,为手足口病科学防控提供依据。方法对手足口病临床诊断病例标本用实时荧光定量PCR法进行肠道病毒检测及EV 71、Cox A16特异性核酸检测。结果全年共检测粪便标本1 308份、咽拭子标本5 131份、疱疹液137份,粪便标本检测阳性率最高。2015年实验室确诊手足口病病例2 880例,其中EV 71、Cox A16和其他肠道病毒感染的构成比分别为21.0%、20.7%和58.3%。EV 71、Cox A16和其他肠道病毒均为男性病例多于女性.三者病例均以1~3岁组为主。4~6月为发病顶峰,Cox A16比EV 71和其他肠道病毒发病峰提前一个月。结论 2015年湖北省手足口病病原主要由其他肠道病毒引起,发病具有明显季节、人群特征。应做好重点人群、重点时段监测,同时进一步加强其他肠道病毒病原深入研究.     

手足口病样本类别间检测结果的差异比较

目的 探索手足口病病毒核酸检测多类型样本间的阳性率差异,为手足口病病毒核酸检测样本类型选择提供依据.方法 选取2017年1月至2019年12月本院收治的385例手足口患儿为研究对象.采用荧光定量RT-PCR实时荧光探针技术同步进行病毒核酸检测肠道病毒EV通用型、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackie virus A16,CV-A16)及其他肠道病毒型,并统计分析结果.结果 第一组279例患儿肛拭EV通用型、EV71、CV-A16和肠道病毒其他型阳性率为81.00％、43.72％、30.47％、6.81％,高于咽拭子的67.38％、34.40％、26.52％、6.45％.肛拭标本肠道病毒检测的EV通用型和EV71的阳性检出率均明显高于同步检测的咽拭标本,差异有统计学意义(P<0.05).第二组106例患儿肛拭EV通用型、EV71、CV-A16和肠道病毒其他型阳性率为79.24％、42.45％、30.18％、6.60％,低于疱疹液的92.45％、56.60％、29.24％、6.60％,肛拭标本肠道病毒EV通用型,EV71阳性检出率均明显低于同步检测的疱疹液标本,差异有统计学意义(P<0.05).结论 3种类型标本间检出率存在明显差异,建议今后手足口病病毒核酸检测在患者实际条件允许的情况下,尽量同步送检两个类型的标本,首选疱疹液标本送检,肛拭标本次之,咽拭子为末选.     

菏泽市牡丹区238例手足口病病例核酸检测分析

目的掌握菏泽市牡丹区手足口病病原学流行特征,为疫情研判和防控提供科学依据。方法应用实时荧光定量PCR对2013年1月~2016年12月采集的238例手足口病标本进行检测,并对结果进行分析。结果 238例手足口病病例标本中,肠道病毒核酸阳性184例(77.31%)。其中EV71阳性95例,占阳性标本总数的51.63%(95/184);CoxA16阳性32例,占17.39%(32/184);其他肠道病毒57例,占30.98%(57/184)。EV71型病毒在2013年和2015年呈高发流行,2014年和2016年呈低发流行。CoxA16型病毒在2013年和2015年未检测到,2014年和2016年均有一定程度的流行。184例实验室确诊病例中1~3岁年龄散居儿童占67.39%。男女性别的比例为2.02。结论 EV71型病毒是牡丹区HFMD的主要病原体。     

珠海市手足口病流行病学分析

目的探讨珠海市手足口病的流行病学特点。方法利用荧光PCR检测手足口病临床诊断标本和健康人群标本柯萨奇病毒A组16型（coxsackievims A16,CoxA16）、肠道埃可病毒71型（enterovims 71,EV71）以及非EV71和CoxA16其他肠道病毒阳性率。采用描述性流行病学研究方法进行流行病学特征分析。结果319份临床样本EV71、CoxA16以及非EV71和CoxA16其他肠道病毒阳性率分别为26．02％,6．90％和30．09％;180份健康人群样本Ev71和CoxA16均阴性,非EV71和CoxA16其他肠道病毒阳性率2．78％。在105份手足口病实验室诊断病例中,男性68例,女性37例。1～5岁感染病例数最多,占实验室诊断病例的86．67％。病例主要集中在3～7月,占诊断总数的85．71％,高峰在6月。病例以散居婴幼儿为主。结论珠海市手足口病临床诊断病例中EV71、CoxA16以及非EV71和CoxA16其他肠道病毒阳性率显著高于健康人群。实验室诊断病例以1～5岁托幼儿童为主,男性多于女性,病例发生有明显的季节性。     

深圳市坪山新区2010年手足口病疫情的病原学检测分析

目的 了解深圳市坪山新区手足口病(hand-food-mouth disease,HFMD)疫情的病原学情况,为疫情的控制和病例的治疗提供科学依据.方法 对手足口病病例采集粪便或咽拭子标本,提取标本中的核酸,采用实时荧光定量PCR方法扩增病毒的特异性片断,检测EV71和CA16核酸.结果 在19起手足口病疫情56例病例中,共采集31例病人标本.其中18起由EV71引起,另1起由CoxA16引起,构成比分别为94.74%和5.26%;3例重症病例(其中1例死亡)EV71阳性;EV71和CoxA16采样阳性率分别为38.71%(12/31)和6.45%(2/31),两者间差异有显著性;EV71和CoxA16核酸均阴性者占54.84%(17/31);不同性别间EV71和CoxA16感染率无显著性差异;疫情主要集中在4、5、6月份;3-6岁幼托儿童为主.结论 EV71是2010年深圳市坪山新区手足口病疫情以及重症病例的主要病原体.     

湘潭市手足口病原学流行特征分析

目的：针对湘潭市20102013年手足口病监测实验室检测结果分析该病病原学流行特征,为本市手足口病防控提供参考依据。方法：收集湘潭市20102013年国家疾病监测报告管理系统手足口病疫情基本资料及实验室检测结果进行统计分析;实验室检测采用 RT-PCR 实时荧光法检测肠道病毒、肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒 A 组16型（CoxA16）.结果：20102013年,检样1079份,肠道病毒阳性569例,阳性率52.73％;EV71型阳性211份,占37.08％,;CoxA16阳性110份,占19.33％;其他型阳性248份,占43.59％;997份轻症病例中 EV71阳性率30.12％、CoxA16阳性率22.09％、其他型阳性率47.79％;重症病例67份,EV71阳性率84.48％、其他型率15.52％;死亡病例15份,EV71阳性率92.31％、其他型率7.69％。结论：2010-2013年,湘潭市手足口病以 EV71型和其他型为优势流行株;重症、死亡病例主要由 EV71引起;EV71型引起的手足口病比其他肠道病毒更容易引起流行,导致重症的比例也较高。