血浆中游离梭曼的电鳐乙酰胆碱酯酶抑制测定法

梭曼是一种对体内乙酰胆碱酯酶 (ＡＣｈＥ)有强烈抑制作用的有机磷化合物。由于梭曼毒性强且在体内降解迅速 ,国外目前主要通过大进样量气相色谱或气 质联用方法来检测[1,2 ] ,其优点是 :(1)灵敏度较高 ,如检测下限可达1 5 ｐｇ/ｍｌ血浆 ;(2 )可以将梭曼的 4个异构体分开 ,以便研究各异构体在体内的动力学过程。不足之处是 :检测设备价格昂贵 ,样本的预处理过程比较繁琐 ,检测时间较长 ,不适合临床上对毒剂浓度的快速检测。基于ＡＣｈＥ活性抑制测定有机磷毒剂浓度的文献也有报道 ,优点是灵敏、简便[3 ] 。然而 ,该法在检测血浆中残留梭曼…     

梭曼4个异构体与乙酰胆碱酯酶相互作用的计算机模拟

采用计算机模拟方法研究了梭曼4个异构体与乙酰胆碱酯酶（AChE）活性中心的作用情况. 结果表明RR构型的梭曼对AChE的作用最强,而在RS, SS和SR构型的梭曼分子中,由于磷原子(P)上的甲基对His440的排斥作用,使其上的咪唑环旋转,削弱了His440促进磷酰化酶的老化作用,同时也得出梭曼上的(CH₃)₃C^＋与Trp84和Phe330残基上的芳香环也有一定的静电相互作用.     

单克隆抗体3F3识别电鳐乙酰胆碱酯酶构象抗原决定簇(英文)

目的:研究天然电鳐乙酰胆碱酯酶(AChE)单克隆抗体3F3针对的抗原决定簇的类型.方法:以酶联免疫吸附试验测定抗原与抗体间的反应.结果:单克隆抗体3F3能与天然AChE反应,而不与还原并烷基化的AChE(RA-AChE)反应;梭曼不影响3F3与AChE的结合;化学合成的含AChE活性中心丝氨酸的24肽不与3F3反应.结论:3F3是识别电鳐AChE活性中心构象抗原决定簇的单克隆抗体,但它不占据AChE活性中心的丝氨酸残基.     

补硒与锌对梭曼中毒大鼠乙酰胆碱酯酶活力和抗氧化力的影响

目的　探讨抗氧化剂硒 (Se)和锌 (Zn)预防梭曼中毒的可能性。方法　雄性大鼠 4 0只 ,按体重随机分为正常对照组、染毒组、硒治疗组、锌治疗组。正常对照组和染毒组每日 5mL·kg- 1的生理盐水(NS)ig ;硒治疗组每日 1mg·kg- 1Na2 Se0 3的NS液ig和锌治疗组每日 4mg·kg- 1Zn(C6 H11O7) 2 的NS液ig ,共ig 9d。d 10除正常对照组外其余各组大鼠均sc 0 .9LD50 梭曼 ,2h后断头处死并取样 ,测定大鼠全血乙酰胆碱酯酶 (AChE)活性及血清、大脑、肝脏的超氧化物歧化酶 (SOD)活性、总抗氧化力 (T AOC)和一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果　梭曼中毒大鼠后 ,染毒组大鼠全血AChE活性被明显抑制 ,血清、大脑、肝脏的SOD活性、T AOC显著下降 ,NOS含量明显升高 ,而硒和锌预防组大鼠对梭曼引起的AChE、SOD、NOS活性和T AOC变化明显减轻。结论　提示硒和锌对梭曼中毒有较好的预防作用     

抗电鳐乙酰胆碱酯酶单克隆抗体2E6的交叉免疫反应性^1

用乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）偶联的ＡＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ免疫亲和层析法提纯了抗丁氏双鳍电鳐ＡＣｈＥ单克隆抗体２Ｅ６（ＩｇＧ１）。用配基亲和层析法纯化了人脑，人红细胞，牛脑，牛红细胞，比目鱼肌肉及石纹电鳐电器官的ＡＣｈＥ。用酶抗原免疫测定法及固相免疫测定法观察了２Ｅ６与这些脊椎动物ＡＣｈＥ的交叉免疫反应性。结果显示２Ｅ６与石纹电鳐，人脑，牛脑及比目鱼肌肉ＡＣｈＥ有明显的交叉免疫反应性，说明２Ｅ６     

48种中药材的乙酰胆碱酯酶抑制活性研究(英文)

乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂是治疗阿尔茨海默病的一个重要策略。本研究对48种中药材的乙醇提取物和水提取物进行了体外AChE抑制活性的筛选,微板测试法结果表明28种中药材的乙醇提取物和11种中药材的水提取物具有AChE抑制活性。其中,香薷、益智仁、生地黄和荷叶乙醇提取物的AChE抑制活性最强,它们在终浓度为0.1mg/mL时的抑制活性分别为(68.63±1.12)%,(44.49±3.66)%,(43.78±4.76)%和(42.63±8.31)%。薄层色谱–生物自显影的方法亦证明了这四种中药材具有抑制AChE的活性成分。本实验结果为治疗阿尔茨海默病中药的传统应用提供了部分支持。     

电鳐乙酰胆碱酯酶单链抗体基因的克隆及表达(英文)

目的　欲用计算机模拟及分子对接技术揭示抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体 3F3抑酶的分子基础 ,但 3F3分子远大于乙酰胆碱酯酶 (AChE) ,难以操作 ,故拟用其单链抗体为工具进行研究。本研究旨在设计、克隆并表达抗AChE单链抗体Sc3F3基因 ,推演重组单链抗体的氨基酸顺序 ,并证明纯化的重组单链抗体有抑制AChE的作用。方法　使用分泌抗电鳐AChE单克隆抗体 3F3(3F3Ab)的杂交瘤细胞提取总RNA。用RT PCR技术扩增重链可变区 (VH)cDNA及轻链可变区 (VL)cDNA基因 ,通过连接肽(Gly4 Ser) 3 基因将VH 基因和VL 基因连接 ,制成单链抗体基因 (ScFv)。将ScFv基因插入载体pCANTAB 5E用于表达。在大肠杆菌中表达的 3F3单链抗体(Sc3F3)用SephadexG75凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换层析纯化。AChE与抗体的免疫反应性用ELISA法测定。AChE活性用微量羟胺比色法测定。结果　测序结果证明所克隆的ScFv基因是功能重排基因 ,长度为 72 3bp。重、轻链基因长度分别为 35 7bp和 32 1bp。ScFv基因 (含连接肽基因 )所编码的纯化的重组Sc3F3的分子量为 31.6ku。Sc3F3与AChE反应良好 ,但对AChE活性的抑制明显弱于 3F3Ab。Sc3F3的抑制效力约为 3F3Ab的 1/10。结论　在计算机模拟及分子对接研究中使用本研究设计的单链抗体Sc3F3应是可靠的     

远志皂苷碱水解产物对乙酰胆碱酯酶抑制活性的研究

目的对远志皂苷碱水解产物及其主要化学成分的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行研究。方法运用薄层色谱(TLC)-生物自显影和微孔高通量筛选技术,测定远志皂苷碱水解产物、细叶远志皂苷、黄花倒水连皂苷A、3,4,5-三甲氧基肉桂酸、对甲氧基肉桂酸和肉桂酸对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。结果远志皂苷碱水解产物表现出明显的乙酰胆碱酯酶抑制作用;细叶远志皂苷和黄花倒水连皂苷A表现出一定的乙酰胆碱酯酶抑制作用,但是活性有限;3,4,5-三甲氧基肉桂酸、对甲氧基肉桂酸和肉桂酸没有表现出对乙酰胆碱酯酶的抑制作用。结论通过乙酰胆碱酯酶抑制实验,明确了远志皂苷碱水解产物的体外活性,为开发抗早老年性痴呆的药物提供了科学依据。     

热应激有机磷毒物中毒对小鼠全血乙酰胆碱酯酶活力的影响

目的 高温环境超过机体调节适应的生理限度时,机体发生失代偿性反应。有机磷毒物抑制胆碱酯酶(ChE)活性,造成体内乙酰胆碱(ACh)的堆积而中毒。本实验试阐述热应激和有机磷毒物中毒两种因素同时作用于小鼠,对小鼠的体重变化及全血的乙酰胆碱酯酶(AChE)活力的影响。方法 将54只小鼠随机分为对照组、热应激组和热应激有机磷毒物中毒组。热应激组小鼠放在相对湿度（60±5）%,温度分别为（38℃±1℃）和（40℃±1℃）的热环境下1 h,密切观察小鼠一般情况,热应激前后小鼠称重记录。有机磷毒物中毒组小鼠ip给予有机磷毒物9和15 mg·kg^-1;染毒30 min后,处死小鼠;取全血测量AChE活性。结果 停留在热环境（38℃/40℃）中的小鼠活动量明显增加,烦躁不安、勤梳毛发,口周及下腹部毛发湿润,阴囊变大,摄水量降低。热环境前后小鼠平均体重差值38℃组是40℃组的0.69倍（P<0.05）;而热环境前后体重百分比是20℃体重变化百分比的96.49%和95.78%,有显著差异（P<0.05）。热应激有机磷毒物中毒组小鼠全血AChE活力明显下降（P<0.05）。在本实验条件下,空白对照组,小鼠全血AChE活力在38℃时最高（91±10)kU·L^-1,40℃时最低（57±3)kU·L^-1,三个温度组之间有显著差异（P<0.05）;在同一温度组,随着染毒剂量的增加,小鼠全血AChE的活力逐渐降低;各温度组,与空白对照组相比,有机磷毒物9和15 mg·kg^-1组均有显著差异（P<0.05）;而有机磷毒物15 mg·kg^-1组与各温度空白对照组都有显著降低（P<0.05）。提示温度改变或有机磷毒物单因素作用时,对小鼠全血AChE活力均有显著影响,且温度和有机磷毒物对小鼠全血AChE活力的影响有交互作用;40℃热应激和有机磷毒物15 mg·kg^-1时小鼠全血AChE活力最低。结论 热应激或有机磷毒物中毒对小鼠AChE有显著的抑制作用,指标的变化幅度远大于单纯有机磷毒物中毒的效应,温度和染毒剂量对小鼠全血AChE的影响有交互作用。     

柴胡皂甙和黄酮对血浆乙酰胆碱酯酶抑制作用的动力学研究

柴胡皂甙和黄酮对血浆乙酰胆碱酯酶50%抑制率时的药物浓度分别为44.2±3.7μg/ml和30.3±2.4μg/ml,两者混用时为26.0±1.8μg/ml。这两种药用成分对乙酰胆碱酯酶均呈现竞争—非竞争型混合抑制作用。     

神经性毒剂对人脑乙酰胆碱酯酶的抑制及肟类药物的…

本文观察了神经性毒剂沙林，梭曼，塔崩和ＶＸ对纯化人脑乙酰胆碱酯酶的抑制作用及肟类药物对这些毒剂抑制的酶的体外重活化作用。结果表明，毒剂抑制人脑乙酰胆碱酯ＰＩ５０为７．９－９．１，毒剂的抑制能力为：梭曼＞沙林＝ＶＸ＞塔崩，肟类药物氯磷定，双解磷，双复磷和ＨＩ－６对沙林和ＶＸ抑制的人脑乙酰胆碱酯 酶的重化作用非常显著，但对梭曼和塔崩抑制的酶则母，且不药物对这两种毒剂抑制的乙酰胆碱酯酶的重活化作用也明显     

抗伸展的乙酰胆碱酯酶的单克隆抗体

用还原并烷基化的伸展的电鳐电器官乙酰胆碱酯酶(RA·AChE)为抗原,免疫BALB/c小鼠,经2次基础免疫及3次加强免疫注射后,取脾脏细胞与SP2/0 Ag 14小鼠骨髓瘤细胞,在PEG 1000作用下融合,经克隆筛选,获5个分泌抗RA-AChE单克隆抗体的杂交癌细胞系,细胞培养上清液滴度可达1:10~3,细胞注射同系小鼠制备的腹水抗体,滴度达1:10~5～10~6,表位分析提示5个单克隆抗体分别作用于AChE上的3个抗原决定簇,ELISA测定表明它们与RA-AChE及天然AChE均有较强的抗原抗体反应,但对天然AChE的催化活性无明显抑制作用。     

系统进化指数富集法筛选抑制人乙酰胆碱酯酶的RNA分子

目的：获得针对人红细胞乙酰胆碱酯酶(AChE)的特异性核酸配基．方法：利用微孔板法筛选人红细胞膜AChE的核酸配基．利用凝胶阻滞实验检测核酸配基与AChE特异性的结合．微量碱羟胺比色法测定AChE的活性．结果：经过9轮筛选得到针对人红细胞AChE的核酸配基．在相同浓度(2．25μmol/L)下,它们不与人重组丁酰胆碱酯酶(rhBChE)作用,而与人RBCAChE特异结合并抑制AChE的活性．结论：用SELEX技术可以高效地从大容量寡核苷酸组合文库中得到AChE特异性抑制剂．     

独活抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性研究

目的研究独活乙醇提取物及不同萃取部位抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的活性。方法应用薄层色谱(TLC)-生物自显影技术和微孔高通量筛选的方法。结果在TLC-生物自显影抑酶实验中独活乙醇提取物,石油醚和氯仿萃取部位呈现阳性结果;微孔高通量筛选实验中独活乙醇提取物、石油醚及氯仿萃取部位对乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)均具有抑制作用,浓度为1mg.mL-1时,3个萃取部位对AChE的抑制率分别为(16.88±0.42)%、(11.82±0.55)%、(44.33±3.21)%,对BuChE的抑制率分别为(13.97±1.17)%、(14.64±1.10)%、(18.63±1.24)%。结论独活乙醇提取物、石油醚萃取部位及氯仿萃取部位对2种胆碱酯酶均具有抑制作用,其中氯仿萃取部位对胆碱酯酶抑制率最高,为主要的抑酶活性部位。