HPLC手性流动相添加剂法拆分药典收载三种含N手性药物及其机制探讨

 目的 采用磺丁基醚-β-环糊精（SBE-β-CD）作为手性流动相添加剂,以反相高效液相色谱技术(RP-HPLC),建立了磷酸氯喹、马来酸氯苯那敏、盐酸维拉帕米3个含N碱性药典品种对映体在RP-HPLC系统中的拆分方法并探讨其机制。方法 色谱柱为Alltima C₁₈（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：乙腈-水（含磺丁基醚-β-环糊精、磷酸二氢钠,用磷酸调pH值至2.5）;检测波长：332、264、278 nm;流速：0.8 mL·min^-1;柱温：25 ℃。结果 磷酸氯喹、马来酸氯苯那敏、盐酸维拉帕米可在上述色谱条件下分别与其对映体得到分离,同时考察手性流动相添加剂的种类和浓度、pH、缓冲盐的种类和浓度、有机相的种类和比例、柱温对药物对映体拆分效果的影响,选择了最佳的手性分离条件并对其分离机制作了探讨。结论 SBE-β-CD作为一种手性添加剂,用于手性流动相RP-HPLC,可拆分含N碱性的手性药物,其手性分离效果明显优于天然环糊精（β-CD）及衍生化的中性环糊精（HP-β-CD）。     

高效液相色谱手性流动相添加剂法测定富马酸(R，R)-戊乙奎醚中3个光学异构体杂质的含量

 目的 建立拆分富马酸(R,R)-戊乙奎醚与其3个光学异构体的高效液相色谱分离方法,控制光学纯度。方法 选用C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾（含0.6%三乙胺和0.015 mol·L^-1β-环糊精,pH为2.3）为流动相,柱温25 ℃,检测波长206 nm,流速1.0 mL·min^-1。结果 3个光学异构体的检测灵敏度为9.0 ng,本方法可检出限量为0.09%的光学异构体杂质。结论 本法可有效分离富马酸(R,R)-戊乙奎醚及其3个光学异构体,可用于控制本品光学纯度。     

盐酸西替利嗪在人体内的立体选择性研究

 目的研究盐酸西替利嗪在人体内的立体选择性。方法建立了非手性-手性联用色谱法(achiral-chiralchromatogra-phy),先用Hypersil BDS C_l8色谱柱和乙腈-0.05mol·L^-1 NH₄H₂PO₄溶液(37∶70)为流动相的HPLC色谱系统将西替利嗪与血浆内源性物质分离,然后收集色谱柱后西替利嗪消旋体色谱峰馏分,以手性糖蛋白(α₁-acidglycoprotdn,AGP)固定相柱和乙腈-60mmol·L^-1醋酸钠溶液(5∶95)组成的手性色谱系统将两种对映体完全拆分。测定了12名中国健康男性志愿受试者口服20mg西替利嗪胶囊(被试制剂)后最大血药浓度时血浆中西替利嗪两个对映体的浓度。结果最大血药浓度时两个对映体在人体血浆中的浓度有不同程度的差异。结论西替利嗪在血浆中具有中等程度立体选择性。     

葛根素与血浆蛋白非共价结合的电喷雾离子阱质谱研究

 目的研究葛根素与人血清白蛋白和α₁-酸性糖蛋白之间的非共价结合特性。方法应用电喷雾离子阱质谱分别测定葛根素、人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白及其所形成复合物的相对分子质量,通过结合前后的相对分子质量变化计算复合物化学计量比;通过Scatchard方程拟合计算复合物结合常数(K);根据热力学常数△H、△S推测复合物间的作用力类型。结果葛根素与人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白形成的复合物的结合常数分别为7.59×10⁴和8.01×10⁴mol·L^-1,最大表观化学结合计量比分别为1∶5和1∶8。葛根素与人血清白蛋白、α₁-酸性糖蛋白间的作用力主要为静电引力。结论电喷雾离子阱质谱是一种研究药物与蛋白间非共价结合的灵敏快速和准确的方法。     

高效液相色谱法测定人血中脂溶性维生素的含量

 目的建立同时测定人血中5种脂溶性维生素的高效液相色谱法。方法取血清0.5mL,甲醇蛋白沉淀后用正己烷、乙醚分2次提取,提取液氮气吹干,用甲醇-氯仿(3:1)液定容进样。色谱柱:Hypersil ODS(4.0 mm×250 mm);流动相:0-4.0min 甲醇-水(90:10),4.5-9 min甲醇-异丙醇(95:5),10-20 min甲醇-异丙醇(60:40);检测波长:维生素A 325 nm,25-羟基维生素 D3和维生素D3 265 nm,维生素E 290 nm,β-胡萝卜素450 nm;流速:1.0 mL·min^-1;柱温:30℃。结果维生素A和β-胡萝卜素在0.1～1.2 mg·L^-1,25-羟基维生素D₃在10.0～120.0 μg·L^-1,维生素D₃在20～240μg·L^-1,维生素E在2.0～24.0 mg·L^-1内线性良好;提取回收率均大于69％,方法回收率均大于92％,日内、日间RSD均小于6％;以本法测定了50例体检儿童血清中5 种脂溶性维生素的浓度。结论本方法快速、灵敏,操作简便易行。     

利培酮及其活性代谢产物的药动学研究

 目的研究利培酮(risperdal)及其活性代谢产物9-羟基利培酮(9-OH-risperdal)在中国女性精神分裂症患者的临床药动学。方法单周期实验,20例女性患者经过17d的利培酮治疗,收集系列标本,高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)测定血浆中的药物浓度。结果利培酮吸收迅速,其t_max和t_1/2分别为1.6和3.3h。9-羟利培酮的t_max和t_1/2分别为2.6和25.1h。利培酮和9-羟基利培酮的ρ_av^ss分别为30.5和136.8μg·L^-1,AUC0^{ss_0-12分别为482.4和1744.3μg·h·L-1。利培酮的CL/F和V/F分别为8.4L·h-1和33.2L。结论利培酮和9-羟基利培酮的血药浓度,尤其是利培酮,存在着巨大的个体差异。结果表明,治疗药物浓度监测对维思通的合理用药有重要意义。}     

贝那普利预防动脉粥样硬化的实验研究

 目的：研究贝那普利对家兔实验性动脉粥样硬化(As)的预防作用及其机制。方法：建立家兔As模型,观察比较高脂对照组和大剂量贝那普利组(po4mg·kg^-1·d^-1)。小剂量那普利组(po2mg·kg^-1·d^-1)血脂、血浆纤维蛋白原(F)、6-酮-前列环素F_1α(6-keto-PGF_1α)、血栓素B₂(TXB₂)的含量及血压、心率、主动脉病变的差异。结果：三组血脂、Fg和TXB₂含量均无差异。大剂量贝那普利组主动脉As斑块面积及厚度均小于高脂组,并明显升高6-keto-PGF_1α含量,降低收缩压和舒张压(P<0.05),小剂量贝那普利无此作用。结论：大剂量贝那普利可预防家兔实验性As病变,对血脂、Fg和TXB₂含量无影响。这种作用与其升高6-keto-PGF_1α含量和降低血压相关。     

α1D受体cDNA转染细胞、大鼠主动脉组织及其培养细胞的细胞膜色谱研究

 目的为了增加细胞膜色谱法的选择性和特异性,用细胞膜色谱法分别研究不同浓度药物BMY7378(α_1D-AR亚型高选择性药物)与大鼠主动脉组织、原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞和α_1D-AR转染细胞膜色谱柱的生物亲和作用。方法根据大鼠主动脉细胞表达以α_1D-AR占优势,分别构建大鼠主动脉组织匀浆细胞膜色谱柱、培养大鼠主动脉平滑肌细胞膜色谱柱和受体质粒转染所得受体高表达HEK293α_1D细胞膜色谱柱。用细胞膜色谱法研究6种浓度的BMY7378与受体的亲和色谱特性,分别测定其容量因子并进行相关性分析。结果在大鼠主动脉组织制备的细胞膜固定相(cell membranestationary phase,CMSP)上,最小检测到的BMY7378浓度为1.00 mmol·L^-1;在大鼠主动脉平滑肌细胞CMSP上,最小检测到的BMY7378浓度为0.03 mmol·L^-1;在α_1D-AR细胞CMSP上,最小检测到的BMY7378浓度为0.10 mmol·L^-1。结论与组织器官制备的CMSP的传统细胞膜色谱法比较,培养的细胞或细胞株色谱系统具有更高的灵敏度。可扩大细胞膜色谱法的应用范围,试用于受体亚型选择性药物的高效筛选。     

高效液相色谱法检测米雅利桑爱儿A颗粒中B族维生素

 目的:测定米稚利桑爱儿A颗粒中维生素B₆、泛酸钙、维生素B_{2的含量。方法:米用高效液相色谱法，用Waters CLC-ODS柱，以乙睛-0. 25 mol· L^-1磷酸二氢钾(pH 3.2±0.4)为流动相梯度洗脱，对乙酰氨基酚为内标，泛酸钙检测波长为210 nm，维生素B6、内标和维生素B2的检测波长为280 nm。结果:维生素B6}、泛酸钙、维生素B₂ 分别在20～130μg·ml^-1( r = 0.999 3,n=6),20～130μg·ml^-1(r =0.998 6,n=6), 5～30μg · ml^-1(r = 0.999 3, n=6)浓度范围内呈线性关系。维生素B6、泛酸钙、维生素B₂平均回收率分别为99.7%,RSD=0.86%;100.0%,RSD=0.95% ;98.2%, RSD=1.02%。结论:方法简便、快速、准确、重现性好。     

HPLC同时测定赤芝中4种三萜酸的含量

目的：建立HPLC同时测定赤芝药材中灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D含量的方法。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液采用梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长252 nm,柱温35 ℃。结果：灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D的线性范围分别为：5.0～50.0 mg·L^-1(r=0.999 9),7.2～72 mg·L^-1(r=0.999 9),11.67～116.7 mg·L^-1(r=0.999 9)和5.32～53.2 mg·L^-1(r=0.999 8);平均回收率(n=3)分别为98.8%(RSD1.5%),99.1%(RSD1.9%),99.5%(RSD1.4%)和98.5%(RSD1.9%)。结论：该方法简便、准确,重复性好,为赤芝药材的质量控制提供了实验依据。     

柱前衍生化RP-HPLC测定人血清白蛋白中美西律对映体

 目的建立美西律对映体在人血清白蛋白中的测定方法。方法采用手性衍生化试剂2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)对美西律进行柱前手性衍生化。衍生产物以乙腈-0.01mol·L^-1磷酸二氢钾(pH4.5)缓冲液(1∶1)为流动相,用C₁₈色谱柱分离,以R-艾司洛尔为内标,流速为1.0mL·min^-1,检测波长为250nm。结果实验表明,R-美西律与S-美西律的分离度良好。日内、日间RSD均小于15%。美西律对映体在0.1～40.0mg·L^-1内呈线性关系,r=0.9995。结论该方法结果准确,重现性好,灵敏度高,可用于美西律对映体的蛋白结合研究。     

柱前手性衍生化反相高效液色谱分离酮洛芬对映体

 目的：建立柱前手性衍生化反相高效液相色谱法分离酮洛芬对映体的方法。方法：分别以二氯亚砜和1,l′-羰基二咪唑为酰化剂,R-(+)-a-甲基苄胺作为柱前手性衍生化试剂,甲醇-0.025 mol·L〈sup〉-1〈/sup〉,磷酸二氢钾溶液(70：30)作流动相,在Shim-Pack LC-ODS柱上反相色谱分离酮洛芬对映体衍生物,柱温,室温。结果：在选定的条件下,酮洛芬的对映体衍生物得到分离,并确认了R-(一)-和S-(+)-两个衍生物的色谱峰。结论：通过统化,再以R-(+)-a-甲基苄胺为柱前手性衍生化试剂,用反相色谱法,实现了对酮洛芬对映体的分离。     

高效液相色谱手性固定相法分离四氢原小檗碱类对映体

 目的在α-酸性糖蛋白手性柱和纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)手性柱上,对两种四氢原小檗碱同类物(延胡索乙素和四氢小檗碱)进行了对映体分离研究。方法在α-酸性糖蛋白手性柱上考察了流动相的有机改性剂、pH值以及离子强度对分离的影响,在纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)手性柱上主要考察了流动相体系、流速和柱温对分离的影响,并初步探讨了手性识别机制。结果延胡索乙素在两种手性柱上均达到基线分离,四氢小檗碱只在纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)柱上分离成两个成分。结论延胡索乙素和四氢小檗碱均可分离成两个成分,推断为其对映体的拆分,可为进一步探讨其在体内的动态变化提供方法学基础。     

反相高效液相色谱法测定血清中来氟米特活性代谢物A771726的浓度

 目的：建立反相高效液相测定人血清中来氟米特（leflunomide,Lef）活性代谢物A₇₇₁₇₂₆浓度的方法。方法：采用VP-ODS C₁₈柱,0.01 mmol·L^-1醋酸盐缓冲液(pH4.6)-乙腈(67∶33)为流动相,紫外检测波长为288 nm,流速1.0 mL·min^-1,血清样品用乙酸乙酯提取。结果：A₇₇₁₇₂₆在血清中得到很好的分离,没有明显的干扰峰,出峰时间为6.4 min。线性范围0.39～50 mg·L^-1（r=0.9996）,最低检测限为0.098 mg·L^-1,血清中日内和日间RSD均小于7%,回收率为89.4%～95.3%。结论：本法简便灵敏,符合生物制品分析要求。     

蛋白质及纤维素衍生物手性固定相分离盐酸坦洛新对映体

 目的研究盐酸坦洛新对映体在纤维素衍生物及蛋白质固定相上的保留行为,优化色谱条件。方法采用Chiralcel OJ,Chiral- cel OD-RH和Chiral AGP为固定相,流动相分别为正己烷-乙醇-二乙胺(70：30：0.1)、50 mmol·L^-1六氟磷酸钾溶液(pH 5.8)-乙腈(65：35)和10 mmol·L^-1磷酸盐缓冲液(pH 5.8)-乙腈(93：7)；检测波长均为225 nm,并考察了影响分离的因素。结果盐酸坦洛新对映体在上述3种手性固定相均达到基线分离(R_s＞1.5)。结论采用上述3种固定相均可方便地分离盐酸坦洛新对映体。     

反相高效液相色谱法测定维生素D3微生物转化液中骨化二醇含量

 目的 快速准确地测定维生素D₃微生物转化液中骨化二醇的含量。方法 采用依利特Hypersil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(85∶15),流速2.0 mL·min^-1,柱温50 ℃,检测波长265 nm,外标法定量。结果 骨化二醇在10.1~2 020 μg·mL^-1内呈良好线性关系,r=0.999 9,定量限0.6 ng,检出限0.3 ng,平均加样回收率为101.06%(RSD 1.44%,n=9)。结论 该方法简便,准确,灵敏度高,分离度好,可用于VD₃微生物转化生产中定量骨化二醇的要求。     

梯度洗脱HPLC测定克拉霉素缓释片的有关物质

 目的建立梯度洗脱HPLC测定克拉霉素缓释片的有关物质。方法采用kromasil C₁₈(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,0.476%磷酸二氢钾溶液(用1 mol·L^-1磷酸调pH至4.4)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速1.1mL·min^-1,检测波长205 nm,柱温40℃。结果克拉霉素在1.73～17.31 mg·L^-1内,浓度与峰面积呈良好线性,r=0.999 9。结论本法简便,准确,可定量测定克拉霉素缓释片的有关物质。     

毛细管区带电泳同时分离维拉帕米和去甲维拉帕米对映体

 目的：建立同时分离维拉帕米(VPM)和去甲维拉帕米(NVPM)对映体的高效毛细管电泳方法。方法：采用目前应用最广泛的毛细管区带电泳模式，以三甲基-β-环糊精(TM-β-CD)为手性选择剂，考察了毛细管柱、进样方式、运行电压、缓冲液pH值、溶剂等因素对峰迁移、分辨率、灵敏度的影响，选择优化的电泳条件用于标准溶液的分离和测定。结果：用pH为2.5，含60mmol·L^-1TM-β-CD的60mmol·L^-1磷酸盐缓冲液为手性拆分剂，在75μm(ID)×30cm的聚内酰胺涂渍柱（柱温20℃）上，采用12kV(7s)电迁移进样，运行电压为154kV，紫外检测波长200nm，能在11min内将内标(Gallopamil)、R-VPM、S-VPM、R-NVPM和S-NVPM完全分离，并用各对映体与内标的峰面积比为定量指标进行水标溶液的浓度测定，定量检测限为25ng·ml^-1，日间变异小于10%，线性关系良好。结论：毛细管区带电泳方法能快速、高效地分离VPM和NVPM对映体，为VPM和NVPM对映体的测定及质量控制提供新的方法，为生物体液中VPM及其代谢物NVPM对映体的测定，为开展VPM对映体特异性的药动学和药效学研究打下基。     

高效液相色谱法测定L-肌肽原料药的含量及其有关物质

 目的建立HPLC测定L-肌肽原料药的含量并进行有关物质检查。方法采用Kromasil NH₂色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为乙腈-40mmol·L^-1磷酸氢二钾溶液(44∶56,磷酸调pH6.3),流速1.0mL·min^-1,检测波长为210nm,柱温35℃。结果L-肌肽在9.93～99.3mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为100.5%(RSD=1.0%),检测限为1ng(S/N=3)。L-肌肽与有关物质分离良好。结论该方法操作简便、重复性好、专属性强,可用作L-肌肽原料药的含量测定和有关物质检查。