HRP标记DNA探针的制备及杂交条件探讨

目的：用辣根过氧化物酶(HRP)直接标记DNA探针,并对其斑点杂交条件进行探讨。方法：以对苯醌(PBQ)氧化HRP使其产生活化位点,并与聚乙烯亚胺PEI缩合形成HRP-PBQ-PEI复合物,再以戊二醛连接DNA,共价结合构建直接酶标探针进行斑点杂交,利用HRP可与底物发生颜色反应的特点观察结果,并对不同杂交条件进行研究。结果：成功构建了HRP标记的DNA探针,并进行了斑点杂交反应,归纳出较好的杂交条件。结论：直接酶标DNA探针有较高的特异性及敏感性,操作简便快速,经济可行。     

不同生物素检测系统在核酸分子杂交检测中的应用——Ⅰ 辣根过氧化物酶标记亲和素检测系统

用化学方法制备生物素化λDNA探针。应用辣根过氧化物酶标记亲和素(A-HRP)检测系统,对斑点杂交结果进行检测。当以DAB为显色剂时,探针检测敏感性为120pg,当以OPD为显色剂时,探针检测敏感性为24pg。     

核酸杂交反应中影响因素分析

以光敏生物素标记的R3 cDNA克隆为模型,采用正交设计的方法,对影响核酸杂交反应的主要因素:杂交反应温度,反应时间,探针浓度及甲酰胺浓度作了综合性分析。当探针浓度为800μg/L,甲酰胺浓度为10mol/L,50℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度(10pg)。     

核酸探针的制备

本实验室用地高辛-dUTP随机引物方法标记人内皮细胞特异性分子(human endothelial specific molecular-1,hESM-1)cDNA探针,并应用于ESM-1基因在肾癌中mRNA转录的检测。现报道如下。     

应用特异性核酸探针杂交分析法进行献血员HLA分型的初步报告

目的 探讨利用特异性核酸探针杂交分析法检测ＨＬＡ等位基因的可行性。方法 １０例西南某地献血员,提取ＤＮＡ后经ＰＣＲ扩增,采用酶联探针免疫杂交分析法检测ＨＬＡⅠ和ＨＬＡⅡ等位基因。结果 １０例标本经检测ＨＬＡ Ⅰ和ＨＬＡ Ⅱ等位基因,表现为Ａ＊０２、Ａ＊２４、Ａ＊１１、Ｂ＊３５、Ｂ＊１５、Ｂ＊５１、Ｂ＊５２、Ｂ＊４０、ＤＲＢ１＊１１０１、ＤＲＢ１＊０９０１、ＤＱＢ１＊０３０３、ＤＱＢ１＊０３０１等类     

应用探针微孔板杂交技术检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

寻找一种检测孕妇血浆中胎儿DNA新方法,采用SPY探针微孔板杂交法,通过PCR产物与SRY探针杂交,然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色,读取光密度值,结果发现：探针微孔板杂交检测法的灵敏性和特异性均高于电泳检测方法,提示：探针微孔板杂交检测技术的灵敏性和特异性较高,更适用于临床应用。     

应用核酸探针检测痢疾杆菌侵袭力的初步报告

采用菌落原位杂交法,用福氏5型痢疾杆菌大质粒上17Kb 基因片段,以32p 标记制备成探针,对80例痢疾志贺氏菌的侵袭力进行检测,结果带菌者菌株中侵袭力的阳性率92.8%,90.9%,病人菌株中袭力的阳性率侵P>0.05,两组菌的侵袭力差异无显著性。通过不同菌群侵袭力的分析,福氏痢疾杆菌侵袭力的阳性率似高于其他菌群,该探针特异、敏感、快速、经济,为硷测痢疾菌侵袭力的理想方法。     

应用探针微孔板杂交技术检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

寻找一种检测孕妇血浆中胎儿DNA新方法.采用SRY探针微孔板杂交法,通过PCR产物与SRY探针杂交,然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色,读取光密度值.结果发现探针微孔板杂交检测法的灵敏性和特异性均高于电泳检测方法.提示探针微孔板杂交检测技术的灵敏性和特异性较高,更适用于临床应用.     

PCR引物法及随机引物法标记cDNA探针杂交效率的研究

目的 :为提高原位杂交所用cDNA探针的杂交效率。方法 :采用正义引物PCR法及正义、反义引物PCR法制备地高辛 (Dig)标记的TGF_βcDNA探针。同时采用常规的随机引物法标记上述探针。用斑点杂交及原位杂交法比较三者的效率。结果 :在斑点杂交中 ,正义引物PCR法所标记的单链探针的杂交效率最高 ,高于随机引物法一个数量级。在探针浓度相同条件下 ,正义引物PCR法标记探针的原位杂交效果优于随机引物法标记的探针。正义和反义引物PCR法标记的双链探针的杂交效率次于正义引物PCR法所标记的单链探针     

生物素-链霉抗生物素蛋白硷性磷酸酶体系标记检测DNA探针

本室采用近年发展的生物素—链霉抗生物素蛋白体系检测特异互补的核酸序列,先经缺口翻译制备生物素DNA探针,分子杂交后,再与链霉抗生物素蛋白—生物素—硷性磷酸酶复合物反应和显色,检测限度约50pg靶DNA,并将其结果与~(35)S标记相同的探针进行了比较。     

生物素化HPV 16 DNA探针与人宫颈癌组织DNA分子杂交的研究

作者运用分子生物学方法,制备了生物素标记人乳头状瘤病毒(HPV)16型DNA探针,用斑点杂交检测宫颈癌组织DNA中HPV 16 DNA相关序列。在28例宫颈癌组织中,有16例呈HPV 16 DNA杂交阳性,阳性率为57％;4例正常宫颈组织呈阴性反应;4例宫颈慢性炎症中有1例呈阳性反应。实验阳性对照HPV 16质粒DNA呈杂交强阳性,以λ-噬菌体DNA及NIH/3T3小鼠成纤维细胞DNA为实验阴性对照,均呈杂交阴性。结果证明,HPV的基因组存在于宫颈癌组织中,提示HPV的感染与宫颈癌的发生有关。本实验采用生物素标记HPV 16 DNA探针,检测特异性强,方法简便,为开展宫颈癌病毒病因的普查及其研究,提供了一个快速敏感的方法。     

Taqman荧光探针技术检测结核分枝杆菌

目的：比较Taqman荧光探针技术与常规PCR电泳技术检测结核分枝杆菌的灵敏度及特异性，评价Taqman荧光探针技术（Taqman技术）检测临床标本中结菌的应用价值。方法：应用细菌培养法，常规PCR电泳技术与Taqman技术检测300份临床结核病患者痰标本及50份非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果：细菌培养法检测结核阳性率为112/300；常规PCR电泳技术检测结核菌阳性率为169/300，特异性96%；Taqman荧光探针技术检测结核菌阳性率为141/300，特异性100％。结论：Taqman荧光探针技术是一种全新的PCR分子杂交模式，集PCR扩增、荧光探针杂交、荧光检测一体化，在单一管内完成，简便、快速、防污染、敏感性高、特异性强，是结核病辅助诊断的有效方法。     

同时进行原位杂交及染色体分带的基因定位新方法

作者报道一种同时进行染色休原位杂交及染色休分带的基因定位新方法。它具有简单、快速、准确以及结果稳定、易重复等优点。细胞经常规培养制成染色体玻片后，进行染色体原位杂交。杂交信号经抗体检测放大后，染色体依次用色霉素Ａ３以及甲绿处理进行荧光反带分带（Ｒ带）。玻片在荧光显微镜下观察，只要调换滤片即可分别观察杂交点及染色体Ｒ带。两者互不干扰，结果清晰、直观，杂交点及Ｒ带持久而稳定。此方法尤其适用于做基因定位，及检测有关病毒基因在受感染细胞染色体上的插入部位。     

HBx-DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲⅠ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情况。结果显示，７５％（３３／４４）的肝癌ＤＮＡ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在，其中，以纯整合型方式存在的为６３．６％（２１／３３），混合型为３６．４％（１２／３３），无游离型。纯整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ片段中，ＨＢｘ－ＤＮＡ阳性率为９０．５％（１９／２１）。提示ＨＢＶ在肝细胞性肝癌的发生中起着重要的作用，ＨＢＶ－ＤＮＡ可能以片段性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上，其中以ＨＢｘ基因的整合为主。     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌

目的评价聚合酶链反应 (PCR) -微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌的价值。方法 :应用结核病细菌学涂片、培养常规检测方法及PCR -微孔板杂交技术检测 138例结核病患者痰标本 ,4 2例非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果 :用常规细菌学方法检测临床标本中结核杆菌敏感度为 37% (5 1/ 138) ,用PCR-微孔板杂交技术检测敏感度为 5 6 % (77/ 138) ,高于常规检测法 19%。用PCR -微孔板杂交技术检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 :PCR -微孔板杂交技术将PCR扩增、核酸杂交的技术及酶免技术相结合 ,简便、快速、敏感度高、特异性强 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

射频多极针消融仪治疗肺癌的近期临床研究

目的 :研究射频多极针对肺癌的治疗作用。方法 :采用WE75 6 8射频多极针肿瘤消融仪 ,对 4 2例肺癌的病人 ,经胸腔镜或开放手术直视下或CT定位下行肺癌肿块消融术 ,2 5例消融术后即行病灶肺叶切除术 ,病灶送病理 ,观察消融对肺癌细胞作用后的病理变化和该术式的不良反应。结果 :消融后大部分肿瘤可见较多片状 ,小灶性坏死 ,在坏死中间及边缘可见部分癌细胞核固缩 ,核分裂 ,部分空泡变性 ,嗜酸性变。部分癌细胞巢的中央见细胞松懈、脱落 ,或见纤维素样坏死或癌细胞广泛变形。从坏死边缘残留的癌细胞巢到正常肺组织距离为 0 .0 1～ 0 .2cm左右 ,坏死灶中间及边缘有大量中性白细胞渗出 ,低分化与中分化癌细胞对温度耐受无明显差别。结论 :带有射频多极针的WE75 6 8肿瘤消融仪 ,对肺癌治疗具有较好的近期疗效 ,能够使肿瘤病灶大部分坏死 ,明显地减缓肿瘤的发展 ,减少疼痛 ,有效地改善患者的生活质量 ,但目前仍未证实其具有根治作用     

一种随机探针人DNA指纹分析法的建立

根据随机探针(Anonymous Probe)检测DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)分析原理和人与鼠的髓鞘碱性蛋白(MBP)基因cDNA有90％以上同源序列的事实,选用rMBP-cDNA 3′-端非表达区高度重复序列的0.81千碱基对(kb)片段作探针,检测用HaeⅢ重酶解的人DNA限制性片段,结果可以分辨出22条谱带,受检的30例无血缘关系的个体之间,没有两个人的谱带是完全相同的,显示出此方法的高度特异性。本文还比较了若干DNA片段作探针和几种限制性内切酶水解人DNA后检测DNA指纹的初步结果。     

紫外分光光度法测定利胆素片中羟甲基烟酰胺含量

紫外分光光度法测定利胆素片中羟甲基烟酰胺含量山东医科大学实验药厂武桂兰山东医科大学实验中心刘传华山东医科大学校医院赵光华用紫外分光光度法测定利胆素片中羟甲基烟酰胺含量，所用的仪器为上海分析仪器厂产的７５１Ｇ分光光度计，７５３Ｗ分光光度计，岛津ＵＶ－２...     

酶标蛋白A检测组织内血型物质的应用

采用酶标蛋白A(HRP-SPA)间接法对组织内的血型物质进行检测,并佐以非标记抗体-酶法(PAP)法对照。结果表明,酶标蛋白A间接法与PAP法相比较,具有效果相同,方法简单易,于掌握等特点。