中国保安族线粒体DNA D-环区遗传多态性的研究

目的：以遗传群体为对象，观察线粒体DNA的群体遗传特点，为研究西北少数民族的起源提供科学依据，并为法医学鉴定提供线粒体DNA序列多态性的基础数据。方法：应用PCR扩增产物直接测序法，对98例保安族无关个体线粒体DNA D-环区HVSⅠ进行测序分析。结果：在mtDNA高变区Ⅰ(HVSⅠ)16091～16418之间与Anderson序列比较共发现有66处碱基突变，62个单倍型，碱基突变的主要形式为碱基替代，其中转换87％，颠换11％，碱基插入1％，碱基缺失0．5％．保安族线粒体DNA HVS Ⅰ区基因差异度为0．9862，偶合概率为0.0237。结论：保安族与其他群体比较有其独特的线粒体DNA序列遗传特点，与亚洲其他人种及高加索人种有明显差异。保安族线粒体DNA序列多态性不仅有别于西方人种，也与其他东亚人种不同，线粒体DNA控制区HVS Ⅰ序列多态性可用于法医学个体识别及亲权鉴定。     

中国阿昌族5个X-STR位点多态性研究

目的:调查X染色体上5个STR位点(DXS7130、DXS7132、DXS7133、DXS6804和DXS8378)在中国阿昌族群体的遗传多态性及其法医学方面的应用价值。方法:用PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染显带技术,检测100名阿昌族无关个体上述5个位点的等位基因频率及基因型分布,计算法医学常用参数,并对女性进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果:5个位点在中国阿昌族群体中均具有遗传多态性,女性的基因型频率分布经χ2检验均符合Hardy-Weinberg平衡定律。结论:研究结果丰富了中华民族基因数据库,可以应用于法医学个体识别和亲权鉴定及群体遗传学研究。     

中国甘肃青海5个民族群体STR基因座遗传多态性及其应用研究

目的：研究中国甘肃青海地区5个少数民族群体（土族、撒拉族、东乡族、保安族、裕固族）STR基因座的遗传多态性及其应用。方法：选择9个STR基因座（D3S1358,VIVA,FGA,TH01,TPOX,CSF1PO,D5S818,D13S317,D7S820）,采用STR复合扩增及荧光标记STR基因扫描技术,用ABI377全自动测序仪进行基因分型,同时检测5个少数民族群体的606个健康无关个体血液样本,计算5个少数民族群体的多态信息量、杂合度、个体识别力以及非父排除率等遗传多态性指标。结果：9个STR位点的基因型在5个少数民族群体中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。5个少数民族群体9个STR位点的多态信息量范围在0．6054～0．8735之间;杂合度在0．6158～0．8736之间;个体识别力在0．7964～0．9691之间;非父排除率在0．4610～0．8838之间。采用基于基因频率的聚类分析发现,甘肃青海地区的土族、撒拉族、保安族及东乡族在起源上较为接近,而裕固族则相对较远;5个民族群体与中国南北方民族各群体之间有明显的基因交流现象。结论：在5个少数民族群体中,9个STR位点均为高度多态性遗传性标记,可用于群体遗传学、法医学等领域的研究,具有较高的应用价值。     

三个封闭群实验兔线粒体DNA D-loop区多态性分析

目的 通过对三个封闭群实验兔线粒体DNA控制区序列进行分析,从分子水平探讨其群体的多样性和均一性.方法 利用特异引物对新西兰白兔、日本大耳白兔、青紫蓝兔三个封闭群共71份血液样品线粒体D-loop区部分序列进行扩增,纯化,测序,用Mega4.0和DNA SP软件对变异位点数、简约信息位点数、单倍型、单倍型多样度、核苷酸多样度等遗传信息进行分析.结果 在71份样品中,共检测出了6个多态性位点,多为C→G突变,定义了9种单倍型,且三个种群分别有各自单倍型,互不重叠.三个种群D-loop区多态性及种群多样性均偏低.结论 本研究为兔线粒体D-Loop区序列特征和国内常用三个封闭群实验兔种群结构提供了更多数据,并为遗传育种提供指导.     

线粒体基因组的五个新的多态性

目的：通过分析线粒体基因组序列,进一步了解中国人线粒体基因多态性特点。方法：在4个中国汉族个体的线粒体基因组全长16569bp进行分段PCR和荧光测序的基础上,针对发现的7个未报道的新单碱基变异,以识别变异的限制性内切酶和通过引物变动人工增;加识别位点的方法,对这些变异进行100个正常人对照绵PCR－限制酶切分析。结果：发现5个未经MITOMAP收录或发表的线粒体基因序列变化C298T,C638G,C3206T,A5323T,均属多态性位点,基因频率分别为：17．65％,32．04％,62．77％,33．33％和32．26％。结论：5个新发现的多态性位点,1个位于线粒体基因组调控区（C298T）,2个位于编码蛋白MTCO1区（A6323G,C6326T）,另外两个分别位于编码12S和16S的rRNA区（C638G和C3206T）,为在中国人中首先报道的多态性。     

Leber遗传性视神经病遗传早发现象观察

目的:了解Leber遗传性视神经病(LHON)家系遗传早发现象及其与突变位点的关系.方法:调查5个LHON家系,采用DNA测序方法对其中3个家系的31位母系成员和40例健康人的原发突变位点11778和继发突变位点13730、13708、15257进行检测.结果:5个被调查的家系中4个存在遗传早发现象,31位母系成员均存在11778位点,无继发位点突变;40例正常人4个位点均无突变.所有受试者中新发现11719和15326位点的突变.结论:LHON存在遗传早发现象,但与各突变位点均无明显关系.     

甘肃裕固族和东乡族高血压病患者血管紧张素转换酶基因变异与卡托普利疗效的关系

目的 探讨甘肃省东乡族和裕固族两个少数民族的血管紧张素转换酶（ACE）基因I／D变异是否为高血压病的遗传易感因素及与卡托普利疗效的关系。方法 用聚合酶链方法分别检测了东乡族150例和裕固族45例高血压病患者,同时检测了东乡族172例和裕固族58例正常人的血管紧张素转换酶基因16内含子I／D变异,对ACE基因变异进行分析比较。所有高血压病患者应用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）卡托普利治疗两周后,分析ACE基因变异与卡托普利疗效的关系。结果东乡族高血压病患者II、ID、DD基因型的分布频率分别是48．0％、34．0％和18．0％,正常对照组的3种基因分布频率分别是47．1％、35．5％和17．4％;裕固族高血压病患者II、ID、DD基因型的分布频率分别是40．0％、35．6％和24．4％,正常对照组的3种基因分布频率分别是43．1％、39．7％和17．2％。ACE基因的基因型及等位基因分布在高血压病组与正常对照组的差异无显著性。两个民族高血压病患者应用卡托普利治疗两周后,ACE基因的3种基因型患者血压均下降（P〈0．05）,DD基因型患者应用卡托普利疗效最佳。结论 血管紧张素转换酶基因I／D变异可能不是东乡族和裕固族这两个少数民族高血压病病的易感因素。血管紧张素转换酶基因I／D变异与卡托普利疗效有关。     

肝细胞性肝癌线粒体DNA D-100p区基因突变的研究

目的研究肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D—loop区基因的突变情况。方法选择40例肝细胞性肝癌组织和其相应癌旁组织,取对应患者外周静脉血,提取线粒体DNA后进行PCR扩增和测序。结果40例肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D-loop区中,发生突变16例（40．0％）,共发现突变住点34个,其中16个位点为点突变,5个位点发生插入,13个位点发生缺失;另外新发现2个多态性位点。结论线粒体DNA D-loop区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在肝细胞性肝癌组织中突变率较高。     

Mitochondrial D-loop variation in leber hereditary neuropathy patients harboring primary G11778A, G3460A, T14484C mutations: J and W haplogroups as high-risk factors

BACKGROUND: Leber hereditary optic neuropathy (LHON) is a maternally inherited form of retinal ganglion cell degeneration leading to optic atrophy in young adults. It is caused by three primary point mutations including G11778A, G3460A, and T14484C in the mitochondrial genome. These three mutations account for the majority of LHON cases and affect genes that encode for different subunits of mitochondrial complex I. Mitochondrial DNA (mtDNA) has a non-coding region at the displacement loop (D-loop) that contains two hypervariable segments (HVS-I and HVS-II) with high polymorphism. METHODS: To investigate any possible association between LHON primary mutations and mtDNA haplogroups (hg), the nucleotide sequence of the HVS-I region of mtDNA was determined in 30 unrelated Iranian patients with LHON harboring one of the primary mutations and 100 normal controls with the same ethnicity. DNA was extracted from the peripheral blood after having obtained informed consent. The nucleotide sequence of HVS-I (np 16,024-16,383) was directly determined. RESULTS: Our analysis revealed a relatively high proportion of haplogroup J in LHON patients (53.3%) compared to normal controls (20%). In addition, a slightly significant increase of normal controls of haplogroup L has been confirmed (14% in normal controls vs. 0% in LHON patients at p = 0.03), whereas other haplogroups did not show contribution to LHON contingency. CONCLUSIONS: The analysis presented here provides evidence that there is an association between G11778A and G3460A with haplogroup J (including J1 and J2) and W, respectively. Therefore, we hypothesize that mtDNA haplogroups J (J1 and J2) and W might act as predisposing haplotypes, increasing penetrance of LHON disease.     

银染PCR-SSCP方法检测大肠癌组织线粒体DNA的突变

目的: 研究大肠癌组织线粒体DNA的突变情况. 方法: 用银染PCR-SSCP技术结合测序的方法检测40例大肠癌组织及其癌旁正常组织的线粒体DNA D-环区的点突变情况. 结果: 40例大肠癌组织中检测到7例点突变改变,突变率为18%(7/40),在检测的9个突变位点,3个突变位点存在于Dukes D期的1例大肠癌中,其他6个突变位点分别存在于Dukes C期的6例大肠癌组织中,其中498位C→ T, 16298位C→T两个突变位点在检测到点突变的7例大肠癌组织中均检测到. 结论:大肠癌组织线粒体DNA D-环区存在一定程度的点突变,突变的发生可能与大肠癌的易感性和恶性程度有一定相关性, 但是否是大肠癌的发病机制尚有待进一步研究.     

Mitochondrial gene mutations and type 2 diabetes in Chinese families

Background Numerous mitochondrial DNA mutations are significantly correlated with development of diabetes. This study investigated mitochondrial gene, point mutations in patients with type 2 diabetes and their families.
Methods Unrelated patients with type 2 diabetes （n=826） were randomly recruited; unrelated and nondiabetic subjects （n=637） served as controls. The clinical and biochemical data of the participants were collected. Total genome was extracted from peripheral leucocytes. Polymerase chain reaction, restriction fragment length poiymorphism （PCR-RFLP） and cloning techniques were used to screen mitochondrial genes including np3316, np3394 and np3426 in the ND1 region and np3243 in the tRNA^Leu（UUR）.
Results In 39 diabetics with one or more mitochondrial gene point mutations, the prevalence （4.7%, 39/826） of mtDNA mutations was higher than that （0.7%, 5/637） in the controls. The identical mutation was found in 23 of 43 tested members from three pedigrees. Affected family members presented with variable clinical features ranging from normal glucose tolerance to impaired glucose tolerance （IGT） （n=2）, impaired fasting glucose （IFG） （n=1） to type 2 diabetes （n=13） with 3 family members suffering from hearing loss.
Conclusions Type 2 diabetes in China is associated with several mitochondrial gene mutations. Aged patients with diabetic family history had a higher prevalence of mutation and various clinical pictures. Mitochondrial gene mutation might be one of the genetic factors contributing to diabetic familial clustering.     

内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与东乡族冠心病的相关性研究

目的：探讨东乡族人群内皮型一氧化氮合酶基（eNOS）G894T多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）的发生及其严重程度间的关系。方法：根据冠状动脉造影结果选取甘肃临夏东乡族冠心病患者203例（CHD组）和正常对照组194例（CG组）,以冠状动脉病变支数判定严重程度。以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析法（PCR-RFLP）检测eNOS基因G894T多态性,分析G894T多态性与冠心病的关系。结果：冠心病组GT＋TT基因型分布与T等位基因频率均明显高于对照组（P均﹤0.05）;冠心病组eNOS基因型分布在单支与多支病变组之间差异无统计学意义（P﹤0.05）。结论：eNOS894位点G→T突变与东乡族人群冠心病的发生相关联,但与其严重程度间无关联。     

ALLELE DISTRIBUTION OF FIVE X-CHROMOSOME SHORT TANDEM REPEAT LOCI IN EWENKE POPULATION OF NORTH CHINA

Objective To study the allele genetic polymorphism of five short tandem repeat （STR） loci on X-chromosome in Ewenke population of north China and to provide basic data for forensic identification. Methods Genomic DNA was extracted from EDTA-whole blood of Ewenke population by Chelex-100. The DNA samples were amplified by PCR and were analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis and silver staining. The sequence length variations of DXS6799, DXS8378, DXS101, HPRTB, and DXS6789 loci on X-chromosome in 98 unrelated Ewenke individuals were investigated. Results All five loci analyzed showed high polymorphism and genetic stability. The data of the five X-chromosome STR loci in Ewenke ethnic group of China was in accordance with Hardy-Weinberg equilibrium by Chi-square test. Conchusion Allele polymorphism of five X-chromosome STR loci can be used as a genetic marker for forensic identification and population genetic research.     

Altofrequency SNPs of mitochondrial DNA in 26 Han Chinese

Objective, To explore the possible mitochondrial DNA （mtDNA） polymorphism in Han Chinese. Methods： The complete mitochondrial genome of 26 unrelated healthy Han Chinese were extracted and sequenced. Results： The mtDNA nucleotide sites （2 706, 7 028, 8 860, 11 719, and 15 326） were found totally different from the Revised Cambridge Reference Sequence （rCRS）. These single nucleotide polymorphisms （SNPs） were 2 706 A→G, 7 028 C→T, 8 860 A→G, 11 719 G→A, 15 326 A→G. Conclusion, These findings provide new insights into the characteristics of Han Chinese mitochondrial genetic diversity.     

广西壮族人群线粒体DNA单个碱基突变的分析

目的：探讨广西壮族人群的线粒体DNA（mtDNA）单个碱基的突变，了解突变的频率，为进一步研究壮族人群的遗传基础和相关的线粒体遗传病提供基础资料，方法：从83例广西壮族人血液标本中提取DNA，通过PCR扩增，分离和回收，用377全自动序列分析仪进行序列测定，分析了mtDNA第一高变区单个碱基的突变。结果：来自南宁第四个地区的76个样本共有66个单倍型，71个多态位点，共发生了298次转换，39次，颠换和1个缺失，88％的碱基替换为转换，12％为颠换，南宁、百色、柳州和河池地区的转换，颠换和缺失的频率分别为6．31％，6．40％，6．79％和5．90％，对上述频率进行多样本率比较的卡方检验，均无显著性差异（P＞0．05）。结论：壮族人九mtDNA的单个碱基突变比较丰富，各位点发生突变的频率不同。     

ACE基因与糖尿病合并冠心病的关联研究

目的：探讨内蒙古地区汉族糖尿病合并冠心病病人的ACE基因I／N的多态性，并同汉族健康人群比较，分析其遗传特点。方法：34例NIDDM合并冠心病病人的DNA应用ACE基因内含子16多态部位侧翼的前体进行PCR扩增。等位基因在琼脂胶上电泳，溴乙啶染色，紫外灯下观察。结果：病人的DD，DI和Ⅱ基因型的频率是0．58，0．15和0．26，汉族健康人群的DD，DI和Ⅱ基因型的频率是0．33，0．31和0．35。糖尿病合并冠心病病人DD基因型及DD等位基因频率显著增高。结论：在北方汉族人群的研究中发现ACE基因I／N的多态性与糖尿病舍并冠心病相关。     

D7S817、D10S1432、D10S1213及D18S865分型标准物的制备及其遗传多态性研究

目的 利用重组质粒制备四个新的STR基因座(D7S817、DIOS1432、D10S1213及D18S865)的分型标准物，并进行群体遗传学研究。方法 从聚丙烯酰胺凝胶中分离出经PCR扩增后的等位基因片段，二次扩增后纯化的等位基因片段被分别插入到PUC质粒载体中。利用DNA测序证实插入片段大小及结构的正确性后，用国际标准将插入的等位基因片段进行命名。再转染到适当的E．coli DH5α^TM细胞内选择培养，以纯化质粒为模板，扩增出各基因座的等位基因片段后混合。结果 得到四个STR基因座(D7S817、DIOS1432、DIOS1213及D18S865)分型标准物，应用所制备的分型标准物研究汉族和东乡族群体中的基因型分布频率．结论 制备出的四个STR基因座的分型标准物在法科学领域中有很高的应用价值，非常适合于群体遗传学的分析。     

广西人群IL-6基因启动子区rsl800796C／G遗传多态性研究

摘要：目的研究白细胞介素-6（Interleukin6,IL-6）基因启动子区rsl800796C／G的等位基因及其基因型在中国广西地区人群中的分布频率,比较其与其他种族的分布差异。方法采用单碱基延伸的PCR技术和DNA测序法检测199名中国广西人群的IL-6基因启动子区rsl800796C／G单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism,SNP）,并与人类基因组计划（Hapmap）公布的四个人群（非洲人、欧洲人、日本人和北京人）的SNP分型数据做比较,分析其基因型及等位基因的分布频率在这五个人群中的分布差异。结果广西地区人群中IL-6基因启动子区rsl800796C／G基因型及等位基因频率在男女组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。与日本人和北京人比较,IL-6基因启动子区rsl800796C／G基因多态性的分布频率差异无统计学意义（P均〉0．05）,但与欧洲和非洲人群比较差异有统计学意义（P均d0．05）。结论在中国广西人群中IL-6基因启动子区rsl800796C／G存在基因多态性,其基因型分布及等位基因分布频率与性别无相关性,但与其他种族人群相比存在明显差异。     

中国海南岛黎族3个支系小卫星MSY2多态位点的遗传学研究

目的:研究中国不同民族Y染色体DNA多态性,追溯人类进化史上的父系祖先,为人类基因组和法医学鉴定积累数据。方法:应用特异引物PCR法扩增Y染色体小卫星DNA片段,再经琼脂糖凝胶电泳检测方法,对海南岛本地黎、杞黎和黎3个支系的293例男性个体的MSY2位点的遗传多样性进行了多态性分析。结果:MSY2各等位基因在黎族3个支系中显示了不同的频率,其中本地黎与杞黎之间无显著性差异,但在本地黎与黎(P﹤0.01)、杞黎与黎(P﹤0.05)之间都存在显著性差异。结论:MSY2位点可以作为一个有用的遗传标记为中国不同群体的遗传多样性研究提供可靠的数据。黎群体可能有复杂的父系起源。     

胰岛素受体底物—1基因3′非翻译区的突变与中国人2型糖尿病的关系

目的：研究胰岛素受体底物－1（IRS－1）基因3′非翻译区的突变与中国2型糖尿病的关系。方法：采用PCR－SSCP技术扫描120例中国2型糖尿病患者和120例正常对照的IRS－1基因3′非翻译区序列，所有SSCP变异的样品进行DNA测序分析。结果：SSCP分析存在假阳性结果。测序未发现有基因突变。结论：IRS－1基因3′非翻译区的突变不是引起中国人2型糖尿病的重要遗传因素。