组蛋白去甲基化酶JMJD3在小鼠牙发育中的表达

目的 研究组蛋白去甲基化酶JMJD3在牙发育过程中的表达.方法 采用免疫组织化学方法观察小鼠胚胎E14~18天及出生后P1~P3磨牙牙胚中组蛋白去甲基化酶JMJD3的表达.结果 JMJD3表达于细胞核内,包括上皮性细胞和间充质细胞.在小鼠磨牙牙胚发育的蕾状期(E14)和帽状期(E16),JMJD3在牙蕾上皮,成釉器内釉细胞、外釉细胞、星网状细胞中弱表达.在小鼠磨牙牙胚发育的钟状期(E18),JMJD3在成釉器的外釉细胞层,内釉细胞层,中间层、星网状层及邻近间充质细胞内呈强阳性表达.在小鼠磨牙牙胚发育钟状晚期(P3), JMJD3在成釉细胞、成牙本质细胞及邻近间充质细胞呈强阳性表达.结论 JMJD3在小鼠牙发育过程中呈时空特异性表达,提示JMJD3参与小鼠磨牙的发育.     

大鼠切牙发育中釉蛋白的免疫荧光定位

目的:观察釉蛋白在大鼠切牙发育不同时期的表达和分布情况.方法:采用免疫荧光法观察釉蛋白在大鼠切牙发育不同时期的表达与分布.结果:在成釉器增殖期、分化早期,未见釉蛋白表达;在分化晚期,前成釉细胞有弱阳性表达;在成熟早期,成釉细胞和成牙本质细胞均阳性表达;在成熟中期,成釉细胞及其基质呈强阳性表达,而成牙本质细胞阳性表达;在成熟晚期,成釉细胞和成牙本质细胞弱阳性表达.在成釉器各期,釉蛋白在外釉细胞、星网状细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达.结论:釉蛋白参与釉基质和牙本质基质的形成,可能与牙发育中基质形成的信息传递有关.     

P75NGFR在小鼠牙胚发育中的定位分布研究

目的：研究神经生长因子受体P75NGFR在小鼠牙胚发育过程中的定位分布。方法：采用免疫组化方法和图像分析技术观察P75NGFR在小鼠牙胚发育各期的表达与分布。结果：P75NGFR在小鼠牙胚发育各期均有不同程度的表达。胚胎E13d牙胚位于蕾状期：口腔上皮、成釉器上皮细胞阳性表达（＋）；在帽状期及钟状期口腔上皮、成釉器的星网层表达阳性（＋）；在P2～10d牙冠发育成熟期：成釉细胞、成牙本质细胞、前期牙本质、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性（＋）；P10—30d牙根发育期：除上述细胞成分外，上皮根鞘、牙槽骨表达强阳性（＋＋）。结论：P75NGFR参与牙胚及牙体硬组织的发育过程。     

成釉蛋白在小鼠牙胚发育不同时期的免疫组化定位

目的：观察成釉蛋白（ameloblastin,AMBN)在小鼠牙胚发育不同时期的表达和分布情况。方法：采用免疫组化的方法观察AMBN在小鼠牙胚不同时期的表达和定位。结果：蕾状期、帽状期和钟状早期牙胚中未见AMBN的表达；出生后1d钟状期，在成釉细胞和釉基质中呈强阳性表达，成牙本质细胞和牙本质基质中呈弱阳性表达；出生后3d，在成釉细胞胞浆中呈弱阳性表达，在成牙本质细胞中表达阳性，着色较成釉细胞深；出生后7d，AMBN在成釉细胞托姆氏突呈弱阳性表达，其余部位呈阴性表达。在牙胚发育的各个时期，AMBN在外釉细胞、星网层细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达。结论：AMBN参与釉基质的形成，可能与牙胚发育中基质形成的信息传递有关。     

Runx2/cbfa1在人牙胚发育过程中的表达

观察核心因子Runx2/cbfa1在人牙胚发育过程中的表达,探讨cbfa1在牙齿发育过程中的作用。方法:制备人牙胚发育各期标本,免疫荧光法观察cbfa1在人牙胚发育过程中的表达情况。结果:在牙胚发育的不同时期均可见不同的时空表达模式。蕾状期表达比较广泛;帽状期内外釉上皮细胞和牙囊中呈强阳性表达,中间层也为强阳性,牙乳头为弱阳性;钟状早期,前成牙本质细胞处有强阳性表达;钟状中后期,成釉细胞为强阳性,成牙本质细胞为阴性,而牙囊部位仍为强阳性。结论:Runx2/cbfa1转录因子在人牙胚整个发育过程中的表达状况,提示该因子可能在牙胚各期的发育起一定作用,参与了各种成牙相关细胞的分化和硬组织的形成。     

ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:研究ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空分布。方法:采用免疫组织化学方法和图像分析技术观察ADAM28在小鼠牙胚发育各期的表达分布及差异。结果:ADAM28在牙胚发育各时期均有不同程度的表达。帽状期开始即在口腔上皮及成釉器星网层细胞、基底膜、牙乳头细胞和牙囊细胞表达强阳性,到钟状晚期,成釉细胞、釉基质、上皮根鞘和牙乳头细胞阳性表达;至冠根硬组织发育期,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、成牙骨质细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞阳性表达。结论:ADAM28作为上皮和间充质间重要的信号分子,参与了从蕾状期到钟状晚期、从基质分泌到硬组织形成的牙冠、牙根形态发生过程,它可能在牙源性间充质细胞的早期形成、增殖与分化启动中发挥重要作用。     

小鼠牙胚发育过程中collagenⅠ/Ⅲ的表达分布

目的:探讨collagenⅠ、Ⅲ在Balb/c小鼠牙胚发育各期的时间和空间分布特点,及两者在牙齿发育矿化中的作用。方法:用免疫组化方法检测小鼠牙胚发育各期collagenⅠ、Ⅲ的表达、分布。结果:collagenⅢ:出生前E13d小鼠牙胚蕾状期:口腔上皮细胞阳性表达( );E14~17d帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达弱阳性;E18~19d和出生后P1d钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性( );出生后P2~10d牙冠发育成熟期:成釉细胞、釉基质、成牙本质细胞、前期牙本质、牙乳头细胞、牙囊细胞、牙髓组织等均表达阳性( );P10~30d牙根发育成熟期:除上述细胞成分外,上皮根鞘、根周及根尖牙槽骨、牙骨质和牙周膜表达强阳性( )。collagenⅠ:在蕾状期无表达;帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达阳性;钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性;牙冠和牙根发育期:其分布和表达类似于collagenⅢ。结论:鉴于collagenⅠ、Ⅲ的表达和分布,表明它们均参与了牙胚和牙体硬组织的发育形成,但似乎cllagenⅢ的作用比collagenⅠ更为广泛。     

核心结合因子a1在小鼠牙齿发育过程中的表达

目的：观察Cbfal蛋白在小鼠牙胚发育过程中的表达情况。方法：用自制的Cbfal多克隆抗体，采用免疫组化染色观察其时空表达特性。结果：Cbfal蛋白在帽状期牙胚中表达较广泛，在钟状早、中期牙胚表达于内釉细胞、成釉细胞以及紧靠成牙本质细胞层的牙乳头细胞，而在钟状晚期，Cbfal在牙乳头表达为阴性，成牙本质细胞层弱阳性，成釉细胞为阳性或强阳性。结论：Cbfal可能在小鼠牙胚发育，尤其是在成牙本质细胞和成釉细胞分化过程中具有重要作用。     

跨膜蛋白Syndecan-1在不同发育时期小鼠磨牙组织中的表达

目的以小鼠磨牙为发育模型,研究其不同发育时期跨膜蛋白Syndecan- 1的表达特点,进而分析Syndecan-1在牙齿发育中的作用。方法取不同胎龄的胎鼠,制作其下颌第一磨牙的切片,进行免疫荧光染色,并在荧光显微镜下观察Syndecan- 1的表达情况。结果Syndecan- 1的表达随牙胚发育的时期不同而变化：蕾状期时在牙源性上皮和间充质中有弱的阳性分布,帽状期时成釉器上皮阳性表达减弱,而牙乳头及周围的间充质的阳性反应明显增强,钟状期时成釉器上皮又呈阳性表达,并以在中间细胞层的反应更为强烈,而牙乳头间充质的染色则很弱,同时前成釉细胞以及下方的成牙本质细胞的顶端也呈Syndecan- 1的阳性表达。结论Syndecan- 1参与了成釉器和牙乳头的发育和分化过程的调节,并与牙胚细胞的增殖以及成釉细胞和成牙本质细胞的分化相关。     

MCPR1在小鼠胚胎发育中的表达

目的:初步探讨新基因m cpr1在小鼠胚胎多组织发育中的表达模式。方法:取妊娠(gestationday,GD)12、14、18 d的C57BL/6N孕鼠,拉颈处死,取出胎鼠,利用已制备的MCPR1多克隆抗体,进行免疫组织化学染色,分析MCPR1的表达情况。结果:免疫组化结果显示:MCPR1在小鼠胚胎多组织的发育中呈现不同的表达模式,在小鼠胚胎14 d(E14)时,M eckel软骨内有少数MCPR1阳性表达细胞,软骨周围阳性细胞较多;在E18时,M eckel软骨内MCPR1阳性表达细胞增多,且前部较后部多。在胚眼发育不同的时期也有不同的表达分布。结论:推测m cpr1基因在颅神经嵴细胞成骨过程中,可能以促PCD基因的身份在软骨细胞的移行中发挥作用;胚眼发育过程中m cpr1基因可能在视泡及晶状体等眼部结构的发生发展中起着一定的作用。     

腭裂相关基因mcpr1在小鼠腭突发育及腭裂发生中的表达研究

目的检测mcpr1基因的蛋白在正常腭突及小鼠腭裂模型腭突发育中的时空表达模式。方法实验组管饲含全反式维甲酸的植物油诱导建立小鼠腭裂模型,对照组小鼠管饲植物油。2组取胎龄12、13、14、16 d的胎鼠各3只,包埋切片,HE染色观察2组胎鼠腭部发育的形态学变化,免疫组织化学方法观察MCPR1蛋白在2组胎鼠腭突中的表达差异。结果成功建立小鼠腭裂模型。切片HE染色观察发现实验组双侧腭突体积较对照组小,两侧腭突未接触;而对照组腭突融合,腭骨形成。免疫组织化学检查结果表明对照组小鼠胎龄12 d时MCPR1蛋白在腭突上皮细胞呈强阳性表达;而实验组小鼠胎龄12 d时腭突间充质细胞内MCPR1蛋白的表达较强,实验组胎龄16 d小鼠仅在上皮细胞附近的间充质细胞中有阳性表达。同一时间点比较,MCPR1蛋白的表达在实验组均强于对照组（P〈0.05）。结论 MCPR1蛋白的表达变化随腭部发育存在时空表达差异。     

细胞内信号转导分子——Smad7在人牙胚发育中的表达和意义

目的　探讨Smad7在TGF-β调节牙胚发育过程中的作用。方法　采用免疫组化ABC法观察Smad7在人牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果　人牙胚发育各个时期均表达Smad7,但各期分布模式有所不同。Smad7在不同发育时期牙胚中的分布与TGF-β及其特异的信号转导分子Smad2、3有相似之处。结论　Smad7 可能在TGF-β调节成釉细胞和成牙本质细胞分化的信号转导通路中起一定的作用。     

mcpr1基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 :构建mcpr1基因原核表达载体 ,表达MCPR1蛋白。 方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出mcpr1基因的蛋白编码序列 ,克隆到中间载体中 ,再经双酶切 ,亚克隆到表达载体中 ,构建该基因的融合表达载体pGEX 4T mcpr1,在大肠杆菌中用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE电泳。 结果 :酶切和测序鉴定 ,表明融合表达载体内插入片段正确 ,在大肠杆菌中诱导后 ,出现一条 3 60 0 0的新蛋白带 ,主要存在于细菌沉淀中 ,占总蛋白的3 9 %。结论 :研究表明mcpr1基因编码的蛋白质能够在原核细胞中表达 ,为进一步深入研究该蛋白质的结构与功能打下基础     

氯离子通道CIC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究氯离子通道ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达情况，探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法从不同发育阶段的大鼠牙胚中提取总RNA和蛋白，应用RT—PCR和Westem blot检测ClC-5在大鼠牙胚发育过程中mRNA和蛋白的表达情况。结果ClC-5在牙胚发育的过程中存在时空特异性表达，其mRNA和蛋白都主要在牙胚发育的钟状晚期表达。结论ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的这种时空特异性表达，提示其可能在牙齿发育的过程中发挥一定的作用。     

氯离子通道ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究氯离子通道ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中的表达情况,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法从不同发育阶段的大鼠牙胚中提取总RNA和蛋白,应用RT- PCR和Western blot检测ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中mRNA和蛋白的表达情况。结果ClC- 5在牙胚发育的过程中存在时空特异性表达,其mRNA和蛋白都主要在牙胚发育的钟状晚期表达。结论ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中的这种时空特异性表达,提示其可能在牙齿发育的过程中发挥一定的作用。     

BSP、OPN在小鼠牙胚发育中的表达

目的:探讨骨涎蛋白(Bone sialoprotein,BSP)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在Balb/c小鼠牙胚发育各期的时空分布特点及两者在牙齿矿化过程中的作用。方法:采用免疫组化法观察Balb/c小鼠出生前后牙胚及颌骨中BSP、OPN的表达与分布。结果:BSP、OPN在牙胚发育中的时空分布模式存在差异。OPN在蕾状期的表达弱于BSP,两者在成釉器早期的发育中作用微弱;在帽状期、钟状期及牙体硬组织(牙冠、牙根)分泌形成期,OPN的表达范围及强度高于BSP,尤其在牙体硬组织形成期,OPN在牙胚各类细胞及骨组织中均呈强阳性表达。结论:BSP、OPN参与牙胚的发育及牙体硬组织的矿化成熟,在牙齿发育中发挥关键作用。     

人牙胚发育过程中Smad2分子的表达与分布变化

目的 观察转化生长因子β（transforming growth factor－β，TGF－β）特异的细胞内信号转导分子Smad2在人牙胚发育过程中的表达与分布变化，探讨Smad2在牙发育过程中的作用。方法 制备人牙胚发育各期标本，免疫组化方法检测Smad2分子的表达。结果 Smad2在牙胚发育的各个时期存在特异的时空分布模式，其分布与TGF－β有相似之处。结论 首次观察到Smad2信号分子在人牙胚发育过程中的表达，Smad2作为TGF－β细胞内信号分子，可能参与上皮－间充质的信号诱导，同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化本质细胞原分化以及牙釉质和牙本质的形成。     

Smad4在人牙胚发育各期的表达与分布

目的：观察转化生长因子β超家族（transforming growthfactor-βsuperfamily,TGF-β superfamily)细胞因子细胞内共同的信号转导分子Smad4在人牙胚发育过程中的表达与分布变化,探讨Smad4在牙齿发育过程中的作用。方法：制备人牙胚发育各期标本,免疫组化方法观察。结果：Smad4在牙胚发育的各个时期在特异的时空分布模式。结论：首次观察到Smad4信号分子在人牙胚发育过程中的表达,Smad4作为TGF－β超家族细胞内信号分子,可能参与上皮间充质的相互作用,同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化以及牙釉质和牙本质的形成。     

bFGF在大鼠牙齿发育过程中表达的研究

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)在大鼠牙齿发育过程中的表达和分布变化,探讨bFGF在大鼠牙齿发育过程中的作用。方法:选用5、10、15、20、25d的大鼠,制备大鼠牙齿发育组织标本,采用免疫组织化学方法观察bFGF在大鼠牙齿不同阶段的表达情况。结果:在大鼠牙齿发育早期bFGF主要在成釉细胞表达,而在中间层和牙乳头表达较少。随着牙齿的发育,在成釉细胞、成牙本质细胞、前期牙本质和牙乳头表达逐渐加强。结论:bFGF可能与大鼠前期牙本质的沉积,牙釉质和牙本质的发育形成有关。