氧化低密度脂蛋白诱导人肾小球系膜细胞凋亡机制的研究

肾小球硬化的重要病理特征是进行性肾小球细胞外基质积聚和细胞的丧失。在肾小球炎症过程中 ,细胞过度凋亡导致细胞减少是肾小球硬化的重要原因[1] 。氧化低密度脂蛋白(Ｏｘ -ＬＤＬ)是引起肾小球硬化的重要因素[2 ,3] ,低浓度的Ｏｘ-ＬＤＬ(<10 0 μｇ/ｍｌ)抑制系膜细胞增殖 ,促进系膜细胞凋亡[4 ] ,但Ｏｘ -ＬＤＬ诱导系膜细胞过度凋亡的机制尚不清楚。我们利用体外培养的人肾小球系膜细胞进行实验 ,以探讨Ｏｘ-ＬＤＬ诱导系膜细胞凋亡的可能机制 ,为寻找延缓肾小球硬化的有效方法提供新思路。1　材料与方法1.1　实验材料　Ｂａｘ及Ｂｃ…     

小白菊内酯抑制高糖刺激的人肾小球系膜细胞炎症因子表达的研究

目的:观察小白菊内酯(parthenolide,PTN)对人肾小球系膜细胞炎症因子表达的抑制作用.方法:①以MTS方法检测PTN和厚朴酚(0~50μmol/L)在人肾小球系膜细胞中的安全浓度.②将系膜细胞与高糖(50mmol/L)及不同浓度小白菊内酯(0~50μmol/L)共同培养24h,24h后ELISA法检测培养上清液中TNF-α、TGF-β1、MIP-1α与MCP-1蛋白的表达水平.结果:①0~50μmol/L的PTN浓度未对系膜细胞的增殖活力产生影响,但更高浓度的PTN可明显降低系膜细胞的增殖活力.②50mmol/L高糖可显著增加炎症因子TNF-α、TGF-β1、MIP-1α及MCP-1的蛋白水平.PTN呈剂量依赖性地抑制高糖刺激的炎症反应作用.结论:PTN能有效抑制高糖刺激后人肾小球系膜细胞炎症因子的表达,从而削弱高糖所致的系膜细胞炎症反应,为进一步阐明PTN改善DN的作用机制提供了实验依据.     

和厚朴酚抑制CFP-10、ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症因子表达

目的 研究和厚朴酚(HNK)对早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为特异性抗原刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)炎症因子表达的抑制作用,探讨抗炎在结核病治疗中的潜在价值.方法 用MTS法检测HNK(0～80μmol/L)对A549细胞的毒性反应,确定合适的药物实验浓度.用ELISA法检测以CFP-10、ESAT-6(0～40μg/ml)为抗原刺激的A549表达IL-8水平,选择最适刺激浓度.将A549细胞与CFP-10,ESAT-6及不同浓度的HNK(0～20μmol/L)共同培养24h后收集培养上清液和细胞,用ELISA法检测各组培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的表达水平,分析HNK对细胞因子的剂量依赖抑制.结果 20μmol/L及以下的HNK浓度对A549细胞无明显毒性反应.抗原最适刺激浓度为5μmol/L.CFP-10,ESAT-6刺激可显著诱导A549细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的产生.HNK(0～20μmol/L)剂量依赖性地抑制CFP-10,ESAT-6诱导的炎症因子的表达.结论 HNK能有效抑制CFP-10,ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性细胞因子的表达.     

细胞因子诱导肾小球系膜细胞表达甘露糖受体

细胞因子诱导肾小球系膜细胞表达甘露糖受体刘志红黎磊石甘露糖受体是首先在巨噬细胞上发现的一种能与碳水化合物结合的膜蛋白，具有协助巨噬细胞吞噬和清除含有甘露糖残基的大分子物质的功能，在机体防御功能，清除大分子异物和调节免疫反应方面起重要的作用［１］。本项...     

高糖诱导人肾小球系膜细胞SGK的表达

目的　研究高糖环境中人肾小球系膜细胞(human mesangial cells, HMC) 中血清和糖皮质激素诱导的激酶(serum and glucocorticoid inducible kinase, SGK) 3种亚型SGK1、SGK2和SGK3的表达及意义。方法　将培养的HMC分为正常组(5 5 mmol/L D 葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L D -葡萄糖) 和甘露醇对照组(19. 5 mmol/L甘露醇和5. 5 mmol/L D 葡萄糖)。采用RT PCR 方法检测SGK1、SGK2 和SGK3 mRNA 的表达, Western blot 方法检测SGK1蛋白的表达。结果　在高糖及甘露醇刺激下, HMC中SGK1、SGK2和SGK3 mRNA及SGK1 蛋白的表达明显上调(P<0. 05); 其中高糖上调SGK的表达明显高于甘露醇(P<0 .05)。结论　高糖能促进HMC的SGK1、SGK2 和SGK3mRNA及SGK1蛋白的表达, SGK1可能是高糖作用于HMC的细胞内信号通路中靶分子之一, 由它介导的高糖信号转导途径在糖尿病肾病的发生中可能起了重要作用。     

白果内酯调控细胞因子信号转导抑制因子2抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞中炎症与纤维化成分的表达

目的:研究白果内酯是否通过调控细胞因子信号转导抑制因子2(SOCS2)影响高糖诱导的肾小球系膜细胞中炎症与纤维化成分的表达。方法:人肾小球系膜细胞(HMC)进行如下分组：NG组(正常培养)、HG组(30mmoL/L葡萄糖)、HG+低、中、高白果内酯组(6μmoL/L、12μmoL/L、24μmoL/L白果内酯和30mmoL/L葡萄糖)、HG+高白果内酯+NC组(转染小干扰RNA阴性对照、24μmoL/L白果内酯和30mmoL/L葡萄糖)和HG+高白果内酯+干扰SOCS2组(转染针对SOCS2的小干扰RNA、24μmoL/L白果内酯和30mmoL/L葡萄糖)。利用Western blotting检测SOCS2和纤维化成分转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤连蛋白(FN)的蛋白表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-6(IL-6)表达。结果:与NG组相比,HG组肾小球系膜HMC细胞中TGF-β1[(0.82±0.04) vs (0.23±0.02)]、CTGF[(0.69±0.05) vs (0.12±0...     

肾小球系膜细胞的分离和培养

目的 分离、培养和鉴定正常人肾小球系膜细胞。方法 筛网滤过分离正常人肾小球系膜细胞，同时采用免疫荧光技术，利用异硫氰酸荧光素(FITC)间接标记单克隆抗体；抗Ⅷ因子相关抗原抗体、抗结蛋白抗体、抗角蛋白抗体、抗细胞角蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体对系膜细胞特有的中间微丝进行鉴定。并采用同期培养的同一来源的肾小球内皮细胞作对照。结果 抗Ⅷ因子相关抗原、抗角蛋白和抗细胞角蛋白抗体表达均为阴性，而抗结蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体为阳性，说明培养的细胞为系膜细胞。结论 该种方法分离培养的细胞经过免疫荧光染色鉴定为肾小球系膜细胞。     

肾小球内皮细胞对系膜细胞表达细胞粘附分子的影响

肾小球内皮细胞对系膜细胞表达细胞粘附分子的影响傅博程庆砾陈香美李文歌肾小球内皮细胞与肾小球基底膜、系膜细胞相毗邻，肾小球内皮细胞的损伤往往可以导致系膜细胞的病变［１］。为了探讨内皮细胞与系膜细胞相互关系在肾小球损伤演变过程中的作用，我们观察了肾小球内...     

祛风通络方对高糖诱导人肾小球系膜细胞炎症反应的影响

目的 观察祛风通络方对高糖诱导人肾小球系膜细胞炎症反应的影响.方法 体外培养人肾小球系膜细胞株,将其分为正常组(低糖DMEM培养液+正常大鼠血清)、模型组(高糖DMEM培养液+正常大鼠血清)、抑制剂组(高糖DMEM培养液+正常大鼠血清+5μmol/L SB203580预处理)、祛风通络组(高糖DMEM培养液+服用祛风通...     

醋酸铅对体外培养人肾小球系膜细胞的凋亡作用

目的探讨醋酸铅对人肾小球系膜细胞（HRMC）的凋亡作用。方法醋酸铅处理HRMC后,HE染色法观察细胞形态学变化;细胞免疫组织化学法检测p53、bax、bcl-2的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10、20μmol/L醋酸铅处理24 h后,HE染色均显示出醋酸铅组细胞成凋亡形态学改变。HRMC的细胞免疫组织化学结果显示醋酸铅组的p53和bax阳性表达升高,而bcl-2的阳性表达下降。流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可促进HRMC凋亡,进而影响肾脏正常功能。     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的人肾脏系膜细胞增殖

目的观察叶酸对同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）诱导的人肾脏系膜细胞增殖作用的影响及其可能机制。方法人肾脏系膜细胞采用含5％胎牛血清的RPMl1640培养,采用不同浓度Hcy（200、400、600、800、1000“mol／L）处理细胞,MTT法观察Hcy对人肾脏系膜细胞增殖的影响。选取理想的Hcy浓度,加入不同浓度叶酸（50、100、200、400υmol／L）处理细胞,观察叶酸对细胞增殖的干预作用。相同方法处理细胞后提取总蛋白,Western blot检测转化生长因子～p（transforming growth factor-β,TGF-β）和细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）表达。结果Hcy能诱导人肾脏系膜细胞的增殖,促进TGF-β和ERK蛋白表达,呈现剂量依赖性。叶酸干预后能抑制Hcy诱导的细胞增殖,下调TGF-β和ERK蛋白表达。结论叶酸能抑制Hcy诱导的人肾脏系膜细胞增殖,可能与抑制TGF-β和ERK蛋白表达有关。     

肾综合征出血热病毒对体外培养的人胚肾小球系膜细胞的影响

观察肾综合征出血热病毒Ａ９株（ＨＦＲＳＶ－Ａ９）对体外培养的人胚肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）的影响以及病毒唑、磷甲酸钠对病毒感染的抑制作用。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、间接免疫荧光法（ＩＦＡ）、免疫酶组化法和电镜等技术检测ＭｓＣ中病毒、抗原与培养上清液中的病毒滴度。结果：ＨＦＲＳＶ－Ａ９感染ＭｓＣ７天后细胞中便有病毒抗原表达；电镜下胞浆中见到病毒颗粒和包涵体：病毒唑与磷甲酸钠能降低病毒抗原表达     

雷公藤T_4单体对体外培养的肾小球系膜细胞增殖及白介素－1产生的影响

无菌条件下分离提取人胚胎肾小球体外培养，以传代３～５次的系膜细胞，采用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（￣３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法和胸腺细胞增殖法观察在不同浓度和不同作用时间雷公藤单体Ｔ_４对系膜细胞增殖及其白介素－１（ＩＬ－１）产生的影响。结果显示，雷公藤单体Ｔ_４明显抑制系膜细胞增殖及ＩＬ－１产生，其抑制作用的强弱呈剂量和时间依赖关系。本实验为进一步探讨雷公藤的免疫抑制作用和治疗肾小球疾病的机理提供了新的、有意义的实验依据。     

多球壳菌素对激活的大鼠肾小球系膜细胞增生的抑制作用

目的 探讨多球壳菌素（ISP-Ⅰ）对体外激活的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的调控作用。方法 分别采用MTT法及流式细胞术检测IL-1、IL-6对GMC的激活作用及ISP-Ⅰ对激活后GMC增生的抑制作用。结果 MTT法结果显示10U／ml IL-1及1000U／ml IL，6刺激GMC24、48h后，反映细胞增生程度的吸光度（A）值较对照组增高（P〈0．05）；激活的GMC在25～500μg／ml ISP-Ⅰ作用24、48h后的A值较对照组低（P〈0．05）。流式细胞术检测的结果与MTT法一致，即GMC被激活12、24、36h时的细胞增生率高于对照组（P〈0．05）；激活的GMC在100μg／ml ISP-Ⅰ作用下，细胞增生率低于对照组（P〈0．05）。结论 ISP-Ⅰ对激活后的GMC有明显抑制作用。     

紫草素对人胎肾小球系膜细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的：研究紫草素对人胎肾小球系膜细胞(MC)增殖、凋亡及细胞外基质的影响。方法：采用人胎肾细胞培养法、MTT法、流式细胞仪及免疫组化的方法。结果：紫草素0．05、0．10、0．50及1，00mmol／L浓度对培养24、48、72h人MC有明显抑制作用；紫草素明显抑制高糖诱发的人MC细胞凋亡；紫草素0．05、0．10、0．50μg/ml显著抑制系膜基质层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)及胶原Ⅳ(CoⅣ)的生成。结论：紫草素具抑制人MC增殖、细胞外基质生成及细胞凋亡作用。