蒺藜皂苷诱导SD新生大鼠海马神经干细胞分化的实验研究

目的 探讨蒺藜皂苷对于诱导SD新生大鼠海马神经干细胞(neural stem cells, NSCs)分化的影响作用以及蒺藜皂苷培养液浓度变化对其的影响.方法 采用无血清和单克隆培养方法,将蒺藜皂苷加入离体的海马NSCs的培养液中,应用Nestin、BrdU、NF200、GFAP免疫荧光染色观察NSCs的形态及分化而来的神经元、神经胶质细胞形态,并检测由海马NSCs分化而来的细胞的数量.结果 海马NSCs在无血清培养下,可形成Nestin阳性细胞球.在诱导分化后,免疫荧光染色可见NF阳性细胞、GFAP阳性细胞,而其中20 mg/kg 蒺藜皂苷干预组海马NSCs向神经元的分化比例最高.结论 在蒺藜皂苷的作用下,海马NSCs向神经元分化的数量增多.     

神经干细胞移植抑制缺血再灌注大鼠脑内星形胶质细胞的激活和炎症反应

目的观察神经干细胞(NSCs)移植对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和炎症因子(IL-1β、TNF-α)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法大鼠随机分为脑组织缺血再灌注损伤模型组(MCAO组)和神经干细胞移植组(MCAO+NSCs组),每组16只,干细胞移植后进行神经功能损害评分(NSS),采用蛋白质免疫印迹法和免疫组织化学法检测脑组织GFAP表达,蛋白质免疫印迹法检测脑组织IL-1β、TNF-α的表达。结果移植后2周、4周神经功能评分显示MCAO+NSCs组显著优于MCAO组(P<0.05);MCAO+NSCs组Nestin、Brdu阳性细胞数多于MCAO组(P<0.05),GFAP阳性细胞数显著少于MCAO组(P<0.05);MCAO+NSCs组IL-1β、TNF-α表达水平显著低于MCAO组(P<0.05)。结论 NSCs移植可能通过抑制脑组织星形胶质细胞的激活、降低脑内炎症反应对大鼠缺血再灌注损伤脑组织发挥保护作用。     

大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察

目的:探讨大鼠脊髓背根神经节(DRG)内是否存在神经前体细胞.方法:取成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片,进行Brdu,Nestin,P75免疫荧光组织化学检测,分别取成年和胚胎大鼠DRG进行原代细胞培养,观察其增殖与分化情况,并行Nestin免疫组织化学和Brdu,P75,NF,GFAP免疫荧光组织化学鉴定.结果:在成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片上均见有Brdu/Nestin和Nestin/P75免疫荧光双标细胞.细胞培养观察到取自DRG的细胞有分裂增殖,呈Nestin免疫组织化学阳性反应和Brdu,P75免疫荧光组织化学阳性反应;培养第三代细胞加入胎牛血清后出现分化,分化细胞呈NF和GFAP免疫荧光组织化学阳性反应.结论:大鼠DRG内存在有分裂增殖的神经前体细胞,这些细胞可以分化为神经元和神经胶质细胞.     

rhG-CSF对缺氧脑瘫大鼠内源性神经干细胞增殖、迁移及分化的影响

目的:探讨人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对缺氧脑瘫大鼠内源性神经干细胞(NSCs)增殖、迁移及分化的影响.方法:制备缺氧脑瘫大鼠模型并随机分为治疗组(5 d组和21 d组各8只)、模型组(5 d组和21d各7只),同时设假手术组(5 d组和21 d组各4只).治疗组于造模12 h后腹腔注射rhG-CSF 40μg/(kg·d),模型组和假手术组则给予等量生理盐水,共3 d;腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)10 mg/kg;分别于BrdU注射5 d(5d组)和21 d(21 d组)后,免疫荧光组织化学法检测BrdU、GFAP、NeuN和PSA-NCAM的表达.结果:手术后5 d和21 d,模型组海马及大脑皮层BrdU阳性细胞增多,BrdU+GFAP、BrdU+NeuN及Brdu+PSA-NCAM双阳性细胞也增多(P<0.05);治疗组多于模型组(P<0.05).治疗组海马齿状回区域急性期(术后5 d)Brdu+NeuN双阳性细胞较稳定期(术后21 d)少(t=2.279,P=0.038),而Brdu+GFAP双阳性细胞较稳定期多(t=7.220,P<0.001).结论:rhG-CSF能促进缺氧脑瘫大鼠内源性NSCs的增殖、迁移和分化.     

新生大鼠神经干细胞的体外培养方法

目的 探讨新生sD大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)适宜的体外分离培养方法.方法 从出生1～3d的SD大鼠脑组织中分离NSCs,采用不同的接种密度、传代方法,在体外培养NSCs,观察细胞的生长情况.巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫细胞化学法对NSCs进行鉴定.结果 培养的神经球Nestin表达阳性,血清诱导后可分化为NSE阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞,具有自我增殖和多向分化能力,是NSCs.当NSCs接种密度为1×106/mL时,细胞增殖速度快,神经球生成的数量多.传代的方法应视情况而定,传代时间为7d左右.结论 建立了简单、稳定的新生大鼠NSCs的体外培养方法,为进一步研究NSCs的生物学特征及组织移植奠定了基础.     

丙泊酚对大鼠胚胎神经干细胞增殖及分化的影响

目的探讨丙泊酚对体外培养大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响。方法采用孕14～16 d Wistar大鼠,进行NSCs原代培养并用Nestin鉴定,按以下给药分成六组:空白对照组(control)、脂肪乳对照组(introlipid)、丙泊酚不同浓度组[5、25、50、100μmol/l],用5-溴脱氧尿(Brdu)掺入法观察丙泊酚对胚胎神经干细胞增殖的影响。胚胎神经干细胞诱导分化过程中加入50μmol/l丙泊酚,采用NeuN、GFAP免疫组化法观察丙泊酚对胚胎神经干细胞分化的影响。结果分离培养的神经干细胞95%以上呈Nestin阳性,不同浓度丙泊酚组Brdu阳性细胞百分数没有差异,丙泊酚NeuN阳性细胞百分数(23.1±0.9%)明显高于对照组(13.4±0.8%)(P<0.05),而GFAP细胞阳性细胞数与对照组相比没有明显差异。结论临床相关剂量丙泊酚对体外培养大鼠神经干细胞增殖没有影响,但能诱导神经干细胞向神经元细胞分化。     

胚胎大鼠大脑额叶皮质神经干细胞的分离、培养与鉴定

目的：探讨从胚胎大鼠大脑额叶皮质分离培养神经干细胞（neural stem cell,NSCs）的方法及NSC。的特性。方法：将14．5d胎龄的大鼠额叶皮质脑组织制备成单细胞悬液,于含EGF和bFGF的DMEM／F12无血清培养液中培养,形成原代细胞球后,进行单细胞克隆传代扩增。免疫荧光组化方法检测克隆球Nestin、Map-2、GFAP抗体标记情况。结果：原代培养2周后,可形成大量悬浮生长的神经球,BrdU和Nestin检测呈阳性,诱导分化后呈Map-2、GFAP阳性。结论：可从胚鼠脑皮质中分离培养纯化、扩增传代获得NSCs,经诱导后可以分化为神经元和星形胶质细胞,可作为细胞替代治疗中枢神经系统疾病的供体来源。     

大鼠神经干细胞体外培养的研究

目的：比较两种不同的分离培养方法对大鼠神经干细胞（NSCs）增殖的影响。方法：分离新生24小时内的SD大鼠脑组织细胞,采用无血清培养技术进行体外扩增培养,分别以机械吹打法和胰酶消化法两种方法进行扩增培养、传代。免疫细胞化学法对NSCs 及其分化后的细胞进行Nestin,NSE,GFAP,CNP的鉴定。结果:分离培养的细胞具有自我更新和增殖能力及Nestin 表达阳性,诱导后可分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。无论第一代或第二代比较,胰酶消化组NSCs 的增殖明显高于机械吹打组。结论:实验中分离培养的细胞为具有自我更新和增殖能力的NSCs ,可诱导分化为终末神经细胞。在两种分离培养方法中,以胰酶消化法培养可获得更多的NSCs 。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生SD大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的探讨在离体细胞水平下高压氧(HBO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时新生SD大鼠神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法采用Rice-Vannucci法制成HIBD模型,分别制备正常及HIBD时SD大鼠脑组织匀浆,将传至2～3代的SD大鼠NSCs根据处理的不同随机分为空白对照组(CON组)、与正常脑组织匀浆共培养组(NC+N组)、与HIBD脑组织匀浆共培养组(NC+HIBD组)、与HIBD脑组织匀浆共培养1h后给予HBO处理组(NC+HIBD+HBO组)和与正常脑组织匀浆共培养1h后给予HBO处理组(NC+N+HBO)5组。5组细胞在同一时间行免疫荧光染色,分别进行NSE、GFAP、O4染色,荧光显微镜下计数各组NSCs分化为NSE阳性细胞、GFAP阳性细胞和O4阳性细胞的百分率,并进行比较。结果与CON组相比,NC+N+HBO组、NC+N组、NC+HIBD组分化为神经元和少突胶质细胞的百分比明显增加(P<0.05),其中HIBD组增加最多,在此基础上再给予HBO处理,NSCs向神经元的分化会进一步增加,向少突胶质细胞的分化也相应增加;与CON组相比,NC+N组、NC+HIBD组、NC+HIBD+HBO组分化为星形胶质细胞的百分比明显减少(P<0.05)。结论在离体细胞水平,HBO可促进HIBD大鼠NSCs分化为神经元和少突胶质细胞而抑制其向星形胶质细胞分化。     

胚胎干细胞源性与海马源性神经干细胞培养与分化的特性比较

【目的】探讨胚胎干细胞(ESCs)源性神经干细胞(NSCs)与海马源性NSCs的培养条件与分化特性,并进行比较研究。【方法】将拟胚体阶段视黄酸及视网膜Muler细胞诱导的ESCs和自60只BALB/c胎鼠海马组织分离的细胞(每次实验取10只),分别在NSCs选择性培养基中进行NSCs培养筛选,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测Nestin基因表达,免疫细胞化学法检测Nestin等NSCs特异性标志物,对其分化后细胞检测Map2、Gap43、NF200、S100、GFAP神经组织细胞标志抗原,并对6次诱导结果进行观察比较。【结果】初级诱导的ESCs及海马细胞,在NSCs选择性培养基中培养,均形成大量呈Nestin抗原阳性,整合BrdU,表达Nestin基因的神经球样结构,且具有体外扩增传代及分化为神经元及神经胶质样细胞的能力。但ESCs源性NSCs增殖力更强,且分化细胞中NF200阳性细胞率42.1％±3.6％高于海马源性NSCs分化细胞中NF200阳性细胞率18.7％±5.1％,P<0.01。【结论】体外诱导可获得ESCs源性NSCs,与海马源性NSCs相比有更强的增殖力和向神经元分化的潜能,可作为干细胞移植治疗青光眼等神经变性疾病研究新的种子细胞。     

音乐治疗在脑瘫患儿康复中的作用探讨

目的:探讨不同的音乐治疗形式在脑瘫患儿康复治疗过程中的作用。方法:将150例脑瘫患儿随机均分为三组:主动参与式音乐治疗组采用教唱儿歌等主动形式结合传统康复方法治疗,被动感受式音乐治疗组采用音响播放儿歌等被动形式结合传统康复方法治疗,传统组采用药物、理疗、作业训练等传统康复方法治疗。治疗前后依据脑瘫儿童综合功能评定表进行疗效评定。结果:康复训练3个月后,三组患儿综合功能均显著提高,主动参与式音乐治疗组优于其他两组;而传统组与被动感受式音乐治疗组无明显统计学差异。结论:采用音乐治疗结合传统康复治疗脑瘫优于传统的康复治疗可提高患儿的认知功能,主动参与组的效果更为明显。     

脑瘫患儿脑脊液氨基酸类神经递质的变化

目的：研究痉挛型脑瘫患儿肌痉挛形成的机制。方法：采用丹酰氯-聚酰胺薄膜层析法,测定45例痉挛型脑瘫患儿和30例非神经系统疾病儿童脑脊液中兴奋性及抑制性氨基酸水平。结果：脑瘫组脑脊液中γ-氨基丁酸明显低于对照组,谷氨酸、天冬氨酸明显高于对照组,甘氨酸与对照组比较差异无显著性;谷氨酸的水平与患者肌张力呈等级正相关(rs=0.642, P<0.05)。 结论：兴奋性突触功能上升,突触前抑制和突触后抑制下降,脊神经后根传入侧支出芽突触重建可能在痉挛型脑瘫肌痉挛的形成中起重要作用。     

靳三针疗法结合康复训练治疗痉挛型脑瘫患儿的临床研究

【目的】观察靳三针疗法结合康复训练对痉挛型脑瘫患儿的治疗作用及其机制。【方法】采用简单随机法将135例患儿随机分为3组。治疗组45例给予靳三针疗法结合康复训练治疗,对照1组45例单纯以靳三针疗法治疗,对照2组45例则以康复训练治疗。观察3组患儿的症状改善、日常生活活动能力（ADL）及事件相关电位（ERP）P300潜伏期（ERP）和波幅（VAMP）的改变情况。【结果】治疗后3组的ADL评分均明显提高（与治疗前比较,P〈0．05或P〈0．01）。对照1、2组与治疗组治疗后比较,差异有显著性意义（P〈0．01）;对照1组与对照2组治疗后比较,差异也有显著性意义（P〈0．05）,提示靳三针疗法结合康复训练对于痉挛型脑瘫患儿日常生活活动能力的改善明显优于单纯靳三针疗法或康复训练。治疗组ERPP300潜伏期及波幅的改善均明显优于对照1、2组（P〈0．05或P〈0．01）。【结论】靳三针疗法结合康复训练治疗痉挛型脑瘫有显著疗效。     

电针对窒息脑瘫幼鼠海马、纹状体和运动皮质GAP 43表达的影响

目的观察电针对窒息性脑性瘫痪（CP）新生大鼠海马、纹状体和运动皮质内神经生长相关蛋白(GAP 43)表达的影响,探讨电针治疗脑瘫的意义及机制。方法7日龄新生Sprague Dawley (SD) 大鼠72只,随机分为假手术组、CP造模组、CP+电针组3组,每组24只。结扎大鼠左侧颈总动脉后,置于氧气浓度为8％、氮气浓度为92％的密闭氮氧仓中缺氧2?h,建立CP模型。电针组于造模后24?h开始治疗。3组均于造模后第3,7,14,21?d随机处死6只大鼠取脑,行HE染色和免疫组织化学染色(SABC法),应用Image Pro Plus图像分析软件测定左脑海马、纹状体和运动皮质GAP 43在以上各组中表达的平均光密度和阳性面积率,观察GAP 43表达的变化。结果假手术组大鼠在各时间点各部位GAP 43均有表达。造模组和电针组大鼠左脑海马、纹状体和运动皮质GAP 43的表达明显高于假手术组（P＜0.01）;电针组在大多数时间点GAP 43的表达均高于造模组(P＜0.05或P＜0.01)。结论电针早期介入对脑瘫的治疗有积极作用;增强GAP 43长时程表达,促进神经细胞再生和突触重建,可能是针刺治疗窒息性脑瘫的重要机制。     

引导式教育与整体护理相结合的护理模式在脑瘫患儿康复中的应用

目的研究引导式教育与整体护理相结合的护理模式在脑瘫患儿康复中的作用。方法随机选取98例脑瘫患儿进行分组比较研究,研究组（n=50）采用整体护理模式与引导式教育的原理和方法对患儿进行护理;对照组（n=48）采用常规护理方法,研究前后均对患儿进行疗效评价以及向患儿家长进行4项问卷调查。结果研究组与常规组相比能显著提高疗效,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论引导式教育与整体护理相结合的护理模式有利于脑瘫患儿更好地康复和回归社会,值得临床推广应用。     

侧脑室注射神经节苷脂钠对脑瘫模型大鼠学习记忆能力的影响

目的 探讨神经节苷脂钠(GM)侧脑室注射对脑瘫模型大鼠学习记忆能力的机制,为临床治疗脑瘫提供理论依据.方法 将36只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组和GM组.模型组和GM组大鼠通过切除大脑皮质及部分脑组织建模.成模后1d、10d、20 d、30 d用大鼠脑定位仪经大鼠侧脑室注射GM给药.在成模后和未次给药后用水迷宫仪进行空间探索实验、定位航行、悬吊、斜坡等实验,比较大鼠学习记忆能力及运动能力改变,并采用ELISA测定脑海马区乙酰胆碱(Ach)及眶静脉血乙酰胆碱脂酶(AChE)活性;脑组织液钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)及钙调蛋白(CaM).结果 与模型组比较,GM组大鼠治疗后找到平台时间及斜坡实验时间显著缩短;悬吊时间、第一象限和中环停留时间明显延长;定位航行中潜伏期、游泳距离缩短,脑海马区Ach含量降低、AChE活性增强;脑组织液CaMKⅡ及CaM增高(P＜0.05).结论 GM可明显抑制脑瘫模型大鼠脑组织液CaMKⅡ和CaM合成,降低神经细胞钙蛋白水解和钙内流,并通过阻断CaMKⅡ这一信号传导通路,提高AChE活性,抑制Ach释放来降低大鼠因脑缺血缺氧对中枢神经造成的损伤,使受损脑神经纤维修复和再生,进而促进中枢神经纤维功能恢复来提高学习记忆能力.     

低出生体重儿死亡率与脑性瘫痪患病率的研究

目的 评估低出生体重儿新生儿期死亡和脑瘫患病风险。方法 利用安徽省两个城市1995～1999年围生儿登记资料和围生期死亡监测记录，结合脑瘫的现患调查，分析低出生体重儿新生儿期死亡情况以及脑瘫患病率。结果 低出生体重儿脑瘫占所有脑瘫病例的28．9％。在低出生体重儿中，随出生体重的下降，早期新生儿死亡率和新生儿死亡率上升；出生体重为2000～2499g、l500～l999g以及l500g以下的活产儿脑瘫患病率分别为9．29‰、18．87‰和30．30‰，与出生体重3500～3999g新生儿相比，3组低出生体重儿脑瘫患病的OR值分别为13．9、28．5和46．3。结论 低出生体重儿存活率低于发达国家，但脑瘫患病率与发达国家接近。随着极低出生体重儿存活率的上升，儿童脑瘫患病率可能会上升。     

脑性瘫痪高危儿早期干预与预后的临床研究

目的 探讨早期干预对6个月以内脑性瘫痪（脑瘫）高危儿预后的影响.方法 将100例脑瘫高危儿分为干预组50例,对照组50例.干预组接受系统的干预治疗,对照组随访及家庭指导未做干预.2组患儿的随访及智力测定由专人进行.结果 干预组脑瘫、智力低下、运动障碍、癫（疒间）的发病率明显低于对照组,差异有显著性（P〈0.01）.干预组智力发育和运动发育均明显优于对照组（P〈0.01）.结论 对脑瘫高危儿实施早期干预能有效地改善预后,降低脑瘫等后遗症的发生率.     

大鼠内囊电毁损痉挛模型的构建及电针干预作用研究

目的：构建一种新的痉挛动物模型以期最大程度地模拟痉挛后的病理生理改变;观察并研究电针的干预作用。方法：应用脑立体定位仪,精确地进行深部内囊的损伤定位,采用电毁损内囊的方式制造大鼠痉挛模型;采用电针督脉＂大椎＂、＂命门＂的方式进行电针治疗。结果：内囊电毁损后,模型组、电针组与空白组和假手术组比较大鼠痉挛侧上肢伸直幅度明显降低,有统计学意义（P〈0.01）;电针治疗后,电针组与模型组比较明显升高,有统计学意义（P〈0.01）。结论：电毁损内囊可作为制作大鼠痉挛性瘫痪的一种优选方案;电针可以使内囊电毁损大鼠增高的肌张力降低,对痉挛有治疗作用。     

针刺治疗糖尿病动眼神经麻痹的临床研究

目的:观察针刺治疗糖尿病动眼神经麻痹的临床疗效。方法:将134例糖尿病动眼神经麻痹患者随机分为治疗组(针刺+药物治疗)58例和对照组(药物治疗组)74例,两组治疗30天后观察疗效。结果:治疗组总有效率为89.2%,对照组总有效率53.%,两组相比有显著性差异(P<0.01)。结论:针刺治疗糖尿病动眼神经麻痹的疗效较好。