曲尼司特对结缔组织生长因子刺激人肾小管上皮细胞胶原Ⅳ合成的影响

目的:研究曲尼司特(Tran)对重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)刺激人肾小管上皮细胞(HKCs)胶原Ⅳ合成的影响,以探讨其抗肾小管间质纤维化的机制。方法:将培养的HKCs分为三组:⑴对照组;⑵rhCTGF(20ng/mL)干预组;⑶rhCTGF(20 ng/mL)+Tran(100μmol/L)干预组。MTT法检测Tran对HKCs的毒性,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用RT-PCR方法评价胶原Ⅳα1mRNA的表达改变,用免疫荧光镜和Western Blotting方法评价胶原Ⅳα1蛋白的表达水平。结果:rhCTGF刺激48 h后,HKCs由正常的卵圆形变为梭形,细胞内胶原Ⅳα1mRNA和蛋白的表达均明显增高(P<0.05),而rhCTGF+Tran干预组,HKC大部分为卵圆形,部分仍为梭形,胶原Ⅳα1mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论:曲尼司特可能通过抑制CTGF诱导的细胞外基质的合成,从而减轻肾纤维化,发挥其肾脏保护作用。     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

曲尼司特对TGF-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化进程的影响

目的:观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)诱导的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化过程中转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达情况及曲尼司特对其转分化的影响.方法:应用TGF-β1(8 ...     

曲尼司特对转化生长因子-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化作用的影响及机制

目的:探讨曲尼司特对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化作用的影响及机制。方法:应用TGF-β1刺激NRK-52E,分为阴性对照组,TGF-β1诱导组和不同剂量曲尼司特干预组,用流式细胞仪观察曲尼司特干预后NRK-52E的转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况。结果:在TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化过程中,曲尼司特能剂量依赖性下调α-SMA表达,上调E-cadherin表达,两者表达呈负相关(r=-0.653)。结论:提示曲尼司特在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化中发挥保护作用。     

乙醛对人肾小管上皮细胞合成分泌TGF-β1的影响研究

目的 通过研究乙醛对体外培养的人肾小管上皮细胞合成分泌转化生长因子-β1 (TGF-β1)的影响,以探讨乙醛导致肾小管间质纤维化的机制.方法 选取人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养于含5％胎牛血清的DMEM/F12培养液中.以不同浓度的乙醛(0、50、100、200、400 μmol/L)刺激HK-2细胞24 h.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HK-2细胞中TGF-β1的基因表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中TGF-β1的蛋白表达.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中TGF-β1的水平.结果 RT-PCR和Western blot结果显示,乙醛呈剂量依赖性地增加HK-2细胞中TGF-β1基因和蛋白的表达;ELISA法结果显示,乙醛呈剂量依赖性地增加HK-2细胞培养上清液中TGF-β1的水平.结论 乙醛能够促进体外培养的人肾小管上皮细胞合成分泌TGF-β1,从而促进肾小管间质纤维化的进展.     

曲尼司特对阿霉素肾病大鼠肾脏CTGF、TGF—β1的影响

目的研究曲尼司特对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用，并探讨其可能的机制。方法雄性SD大鼠24只，随机分为正常对照组、模型组、曲尼司特组和安博维组。采用单侧肾脏切除加尾静脉注射阿霉素5mg／kg的方法建立阿霉素肾病模型。观察各组大鼠24h尿蛋白定量、BUN、Scr及肾脏病理的影响。应用免疫组化方法测定肾组织CTGF和TGF—β1的表达。结果曲尼司特能减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白，延缓Scr上升；减轻基质增生和肾小球硬化；曲尼司特下调阿霉素肾病大鼠肾组织中CTGF和TGF—β1的表达。结论曲尼司特下调阿霉素肾病大鼠肾组织中CTGF和TGF—β1的表达，调节细胞外基质的生成与降解，从而减轻肾脏病理损害，发挥其肾脏保护作用。     

结缔组织生长因子与肾小管间质纤维化

肾小管间质纤维化(tubu lointerstitial fibrosis,TIF)是各种肾脏疾病慢性进展,最后导致慢性肾功能衰竭的共同机制。它以肾小管损伤,肾间质单个核炎细胞浸润,间质纤维化为特点,以肾间质细胞外基质沉积为主要表现。多种细胞因子参与了肾小管间质纤维化的过程,转化生长因子-β(tr     

内源性结缔组织生长因子介导转化生长因子β1对肾小管上皮细胞的转分化效应

目的：探讨内源性结缔组织生长因子（CTGF）在人肾小管上皮细胞（HK2）转分化过程中的作用。方法：将HK2细胞分为4组：对照组;转化生长因子β1（TGF-β1）5ng／ml刺激组;TGF-β1 5ng／ml刺激4-CTGF反义0DN 3 mmol／L干预组;TGF-β1 5ng／ml刺激＋CTGF正义ODN3mmol/L对照组。用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化,用RT-PCR检测各组细胞中CTGF、上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）mRNA表达变化。结果：TGF-β1刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形;下调E-cadherinmRNA表达。上调CTGF、α-SMA和FNmRNA表达．且CTGFmRNA表达变化在时间上早于E-cadherin、α-SMA和FNmRNA表达变化;CTGF反义ODN可对抗TGF-β1引起的细胞形态学改变和E-cadherin、CTGF、α-SMA、FiNmRNA表达变化效应。结论：内源性CTGF介导了TGF-β1对HK2细胞的转分化效应。     

TGF-β1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾间质炎症进展中的作用.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),用不同浓度(0～10 ng/mL)TGF-β1刺激24 h或用5 ng/mL TGF-β1刺激不同时间(0～48 h),荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白(RANTES)的mRNA和蛋白表达的变化.结果 TGF-β1能诱导HK-2细胞MCP-1、IL-8、RANTES的表达上调,且呈剂量和时间依赖效应.2 ng/mL TGF-β1作用24 h即可诱导MCP-1和IL-8 mRNA明显升高,5 ng/mLTGF-β1作用时达高峰.MCP-1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36 h和24 h达高峰.2 ng/mL和5 ng/mL TGF-β1均可诱导RANTES mRNA明显升高,2 h时RANTES mRNA表达开始升高,24 h达高峰;RANTES蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1作用24 h时RANTES蛋白分泌开始升高,36 h达高峰.结论 TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌.因此,有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一.     

TGF-β1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾间质炎症进展中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),用不同浓度(0~10 ng/mL)TGF-β1刺激24 h或用5 ng/mL TGF-β1刺激不同时间(0~48 h),荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白(RANTES)的mRNA和蛋白表达的变化。结果TGF-β1能诱导HK-2细胞MCP-1、IL-8、RANTES的表达上调,且呈剂量和时间依赖效应。2 ng/mL TGF-β1作用24 h即可诱导MCP-1和IL-8 mRNA明显升高,5 ng/mLTGF-β1作用时达高峰。MCP-1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36 h和24 h达高峰。2 ng/mL和5 ng/mL TGF-β1均可诱导RANTES mRNA明显升高,2 h时RANTES mRNA表达开始升高,24 h达高峰;RANTES蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1作用24 h时RANTES蛋白分泌开始升高,36 h达高峰。结论TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌。因此,有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一。     

结缔组织生长因子与转化生长因子β1在肝纤维化组织中的表达

目的:研究结缔组织生长因子与转化生长因子β1在肝纤维化组织中的表达及其相关性。方法:用CCl4皮下注射法制备肝纤维化模型,用免疫组化方法动态检测结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子β1(TGFβ1)、I、III型胶原在肝纤维化组织中的表达。将免疫组化结果行图像扫描半定量分析后进行统计学分析。结果:正常对照组CTGF不表达,TGFβ1微量表达,I、III型胶原主要分布在门静脉、中央静脉内皮下以及Disse间隙。随着CCl4注射时间的延长,肝纤维化程度的加深,上述4种蛋白质在肝纤维化组织中的表达逐渐增加,且CTGF与TGFβ1之间存在着显著的相关性。结论:结缔组织生长因子与转化生长因子β1相伴表达,且与肝纤维化的发生密切相关,可作为肝纤维化治疗的新靶点。     

水飞蓟宾对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子及Ⅲ型胶原表达的影响

目的:了解水飞蓟宾(silibinin)对转化生长因子(TGF)-β_1诱导的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)表达及Ⅲ型胶原分泌的影响。方法:将体外培养的HK-2细胞分为3组:①对照组;②TGF-β_1组(TGF-β_1的终浓度为5 ng/ml);③TGF-pβ_1 水飞蓟宾组(TGF-β_1的终浓度为5 ng/ml,水飞蓟宾终浓度分别为5、10、20μg/m1)。48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内CTGFmRNA的水平,ELISA方法检测培养上清中胶原Ⅲ及CTGF的浓度。结果:与对照组比较,TGF-β_1刺激使HK-2细胞CTGF基因表达和蛋白分泌及Ⅲ型胶原分泌均显著增加(P<0.01)。与TGF-β_1组比较,加用5～20μg/ml水飞蓟宾可以抑制TGF-β_1刺激所诱导的CTGF基因表达和蛋白分泌及Ⅲ型胶原分泌(P<0.01),以20μg/ml水飞蓟宾效果最显著。结论:水飞蓟宾能部分抑制TGF-β_1诱导CTGF的基因和蛋白的表达及Ⅲ型胶原分泌,提示水飞蓟宾可能通过阻抑CTGF表达及减少细胞外基质的积聚,具有潜在的抗肾纤维化作用。     

肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的应用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化,研究肝细胞生长因子(HGF)对肾小管上皮细胞的表型重塑的作用和机制。方法在正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E细胞株)培养液中分别加入TGF-β1及HGF,应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态变化;免疫组织化学方法检测肌纤维母细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;ELISA法分析测定培养细胞上清液中纤维连结蛋白(FN)的含量;RT-PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达。结果1TGF-β1诱导肾小管上皮细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态;α-SMA的表达、上清液FN含量、细胞CTGFmRNA表达明显增加(P<0.05)。2单纯HGF对细胞形态学、α-SMA的表达及FN含量与空白对照组无明显影响;不同浓度HGF组的CTGFmRNA表达较空白对照组均增加(P<0.05)。3HGF能抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态学改变;α-SMA的表达、FN水平均比诱导组TGF-β1明显下降(P<0.05);HGF抑制了TGF-β1诱导的CT-GFmRNA表达(P<0.05)。结论HGF能够负性调控TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化作用,减少FN分泌;HGF对TEMT的负性调节作用可能是通过减少CTGF表达来实现的。     

曲尼司特对STZ糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的 观察曲尼司特(tranilast,Tra)对糖尿病心肌纤维化及转化生长因子-β1表达的影响,探讨其对糖尿病心肌的保护作用及机制.方法 健康SD大鼠40只,随机取10只为正常对照组(NC),余30只一次性给予链脲佐菌素30 mg·kg - 1·尾静脉注射制备糖尿病大鼠模型.随机分为糖尿病模型组(DM)、曲尼司特低剂量组(Tra1)及高剂量组(Tra2)(100、200 mg/(kg·d))各10只.饲养12周,测定血糖、心脏质量指数(HMI);Masson染色观察心肌形态学变化,测算心肌胶原容积分数(CVF);免疫组织化学法检测心肌TGF-β1蛋白表达水平.结果 与NC组相比,DM组大鼠血糖、HMI明显增高(P<0.01),+dp/dtmax和-dp/dtmax显著降低(P<0.01);与DM组相比,HMI明显下降(P<0.01),+dp/dtmax、-dp/dtmax显著升高(P<0.05).DM组大鼠心肌肌纤维排列紊乱,胶原纤维明显增多,CVF明显升高(P<0.01).与DM组相比,曲尼司特各剂量组上述变化均有改善,CVF呈现不同程度下降(P<0.01).与NC组相比,DM组大鼠左室心肌TGF-β1蛋白表达增加(P<0.01).与DM组相比,曲尼司特各剂量组心肌TGF-β1蛋白表达减少(P<0.01),以曲尼司特高剂量组改善明显(P<0.01).结果 曲尼司特可抑制心肌纤维化,对糖尿病心肌具有保护作用,其保护作用可能与减少糖尿病心肌TGF-β1蛋白表达有关.     

shRNA干扰β-catenin对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用

目的构建特异性针对β-catenin基因的shRNA干扰载体,转染TGF-β1诱导的人近端肾小管上皮细胞株HKCs,研究其对肾小管上皮细胞转分化的影响。方法将构建的shRNA-β-catenin干扰载体转染TGF-β1诱导的HKC细胞,RT-PCR、Western blot检测β-catenin的mRNA及蛋白表达水平,筛选抑制效果最佳载体;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot检测肾小管上皮细胞转分化相关蛋白E-cadherin、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平。结果经酶切和测序鉴定,成功构建的shRNA-β-catenin表达载体转染HKC细胞,β-catenin在mRNA及蛋白表达水平均低于转染空白载体组(P<0.05),并筛选shRNA-β-catenin-1进入实验组;转染shRNA-β-catenin-1组细胞β-catenin在mRNA及蛋白表达水平均低于TGF-β1诱导组和空载体组(P<0.05),且β-catenin转核显著减弱(P<0.05);E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平较TGF-β1诱导组和空载体组显著上调(P<0.05)、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平较TGF-β1诱导组和空载体组显著下调(P<0.05)。结论运用shRNA-β-catenin干扰载体转染TGF-β1诱导的HKC细胞,能够抑制肾小管上皮细胞-间充质转分化。     

人肾小管上皮细胞在转化生长因子β1诱导下桩蛋白表达研究

目的 探讨不同浓度重组人转化生长因子β1（human recombinant transforming growth factor β1,rhTGFβ1）对人近端肾小管上皮细胞株（human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKC）表达桩蛋白（paxillin,Pax）的影响。方法 将体外培养的HKC随机分为3组：对照组（C组）：无血清培养基（free serum mudium,FSM）培养;TGFβ1培养组（T1、T2组）：分别用含不同浓度的TGFβ1（T1组：5ng／ml,T2组：10ng／ml）的FSM培养,48h后分别用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）、免疫组化方法和Western blot检测HKC的Pax mRNA及蛋白表达情况。结果 ①C组：Paxillin mRNA及蛋白有基础的表达;②T1和T2组：Pax mRNA及蛋白表达均明显增加,T2组和T1组相比,Pax的mRNA及蛋白表达量增加更显著（P〈0．01）。结论 TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HKC合成Pax。     

肝细胞生长因子在大鼠肾小管间质纤维化中的表达及意义

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在肾小管间质纤维化过程中的表达及意义。方法雄性3月龄SD大鼠60只,随机分为对照组和模型组各30只,以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,对照组以等体积的2%淀粉溶液灌胃,分别于实验第7周、12周、17周时随机处死10只大鼠,进行血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN),24 h尿蛋白定量和尿NAG酶检测,光镜下观察肾组织的病理变化及免疫组织化学法检测肾脏HGF、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)的表达情况。结果与对照组比较,模型组各时相点大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高(P<0.01);7周时模型组即有肾小管间质损害,随着病程进展,肾小管间质损害逐渐加重;肾脏HGF表达7周、12周时增加,17周时降低;与TGF-β1、α-SMA表达呈负相关(r=-0.999,P<0.01;r=-0.980,P<0.01)。结论肾小管间质纤维化过程中,肾脏HGF的表达早期上升是一种有益的防御反应。HGF抑制TGF-β1、α-SMA的表达,发挥其抗纤维化作用。     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸抑制TGFβ1诱导人肾小管上皮细胞转分化

目的探讨转化生长因子β-1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)过程中结缔组织生长因子(CTGF)的表达和作用.方法在用MTT比色、荧光分析证明阳离子脂质体(DOTAP)介导CTGF反义寡核苷酸(AS)转染HKC可行的基础上,将培养的HKC分为4组正常对照组(C组);TGFβ1组(T组);TGFβ1加AS组(T+AS组);4、TGFβ1加CTGF错义寡核苷酸组(T+SC组).分组处理96h后,分别采用免疫组化、Western blot和RT-PCR技术检测各组CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并分析CTGF和α-SMA表达量的相关性.结果C组CTGF和α-SMA表达阴性;T组CTGF和α-SMA表达阳性;T+AS组CTGF和α-SMA表达阳性,但皆显著低于T组(P＜0.01)T+SC组CTGF和α-SMA表达皆和T组无显著差异(P＞0.05).相关分析CTGF和α-SMA在表达量上皆呈较强的线性相关性.结论CTGF的AS能有效地抑制TGFβ1所诱导的TEMT,提示CTGF是TGF β1诱导TEMT所必需的成份.     

结缔组织生长因子协同转化生长因子β1的促肾纤维化效应

目的　探讨结缔组织生长因子 (CTGF)和转化生长因子 β1(TGF β1)对肾脏成纤维细胞合成和分泌基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )和细胞表型转化的影响。方法　将大鼠肾成纤维细胞分为对照组、CTGF刺激组、TGF β1刺激组、CTGF加TGF β1联合刺激组 ,以明胶酶谱法和Western印迹方法分别检测细胞上清中MMP 2活性和蛋白的变化 ,实时定量 聚合酶链反应 (PCR)方法检测细胞中MMP 2mRNA的水平。Western印迹方法检测成肌纤维细胞标志蛋白α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达水平和细胞上清中细胞外基质成分纤黏连蛋白 (FN)的水平。结果　MMP 2的活性和蛋白水平在刺激 2 4h时 ,各组之间无明显差异 ;刺激 4 8h ,10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组明显属于对照组 (P <0 0 5 ) ;而不同浓度的CTGF加TGF β1联合刺激组分别低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 ,其中 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1、5 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1均分别明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (P <0 0 5 )。上述各组细胞刺激 12h ,MMP 2mRNA水平在 10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组均明显高于对照组 (1 72 ,1 6 8vs 1 2 9,P <0 0 1) ,而 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1联合组明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (0 6 7v