志贺菌敏感株与基因转移耐多药株蛋白组学分析

目的 对志贺菌敏感株与基因转移耐多药株全菌蛋白进行蛋白质组比较,寻找细菌耐多药相关蛋白.方法 采用接合基因转移实验对临床分离鉴定志贺菌敏感株进行基因转移耐多药试验;并对志贺菌敏感株及基因转移耐多药株全菌蛋白进行双向电泳;电泳图谱采用Image Master 2D Platinum软件分析,并对差异表达蛋白进行基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MOLDITOF-TOF)分析.结果 成功获得志贺菌基因转移耐多药株,在志贺菌敏感株与耐多药株全菌蛋白质图谱中分析别检出(946±37)和(1 013±157)个蛋白质斑点;经分析共发现43个差异表达的蛋白点,初步对其中7个差异表达蛋白进行质谱鉴定,基因转移耐多药株中发现2个新出现的耐多药相关蛋白分别为成簇插入的DNA重复序列(CRISPR)相关蛋白及Hsp60的分子伴侣蛋白(Groel-Groes-Adp7);ATP结合盒(ABC)转运蛋白、胱氨酸合成酶、预测的胞浆脂蛋白表达量上调;翻译延长因子Tu及DNA单链结合蛋白表达量下降.结论 对7个耐多药相关蛋白鉴定分析表明,供体菌中一些耐多药相关基因通过基因转移方式插入志贺菌敏感株中并大量表达,同时一些在细胞代谢中起重要作用的酶类表达量上调,ABC转运蛋白在志贺菌基因转移耐多药机制中也起重要作用.     

乌体林斯辅助治疗耐多药结核病的疗效观察

耐多药指的是致病结核分枝杆菌至少同时耐异烟肼和利福平这两种或这两种以上的药物.耐多药结核病(MDR-TB)的流行已明显影响了结核病的控制进程.为探索MDR-TB的有效治疗方法,我们采用乌体林斯辅助治疗,对32例耐多药结核病进行疗效观察,现报告如下.     

开封市涂阳肺结核患者耐多药情况调查

目的了解开封市涂阳肺结核患者的耐多药水平以及耐多药肺结核患者的病史特征,为制定耐多药结核病的防控策略提供参考依据。方法对开封市2011年3-9月登记的442例涂阳肺结核患者留取痰标本进行传统罗氏培养和药敏试验,并对被诊断为耐多药的19例肺结核患者进行关于病史情况的问卷调查。结果开封市涂阳肺结核患者的痰标本培养阳性率为95.5%(422/442),总耐多药率为4.5%(19/422),新涂阳和复治涂阳肺结核患者耐多药率分别为1.5%(5/331)和15.4%(14/91)。在耐多药涂阳肺结核患者中,47.4%(9/19)耐HRS,42.1%(8/19)耐HRES。在耐多药复治涂阳肺结核患者中,100.0%(14/14)的患者有≥1年的病史,78.6%(11/14)有>1个月的不规则治疗或中断治疗,50.0%(7/14)曾未完成规定疗程,50.0%(7/14)的既往治疗次数≥2次。结论虽然开封市涂阳肺结核患者的耐多药率低于全国平均水平,耐药谱较为集中,但复治涂阳肺结核患者的耐多药率仍然较高,耐多药的复治涂阳肺结核患者既往治疗依从性普遍较差,仍需要从提高基础DOTS质量方面进一步加强耐药结核病防治工作。     

福建省耐多药结核分枝杆菌MLVA分型分析

目的 了解福建省耐多药结核分枝杆菌分子流行病学特征,为控制耐多药肺结核提供参考依据.方法 采用多位点数目可变串联重复序列基因分型(MLVA)方法,对30个监测点纳入监测的所有耐多药结核分枝杆菌分离菌株DNA进行检测,使用BioNumerics(Version 4.5)软件进行聚类分析.结果 76株耐多药结核分枝杆菌被分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三大基因群,分别包含Ⅰ群5株(6.6％)、Ⅱ群68株(89.5％)、Ⅲ群3株(3.9％);在株水平基因分型上,有19株菌成7簇,各包含2～4株菌,成簇菌株来源于同一县区或不同县区.结论 福建省耐多药结核分枝杆菌菌株主要流行株为Ⅱ群菌株;部分菌株存在县区内,甚至跨县域的近期传播流行.     

志贺菌临床分离株耐多药与调控基因突变关系

目的 研究志贺菌的耐多药性及其耐多药调控基因acrR、marOR的变异性.方法 对56株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、环丙沙星、诺氟沙星等5种药物的药敏试验,对其acrR、marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,TaqI限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析.结果 筛选出35株耐多药株与11株敏感野生株.56株临床分离的志贺菌属细菌的耐多药率为62.5%;35株耐多药株与11株敏感野生株均扩增出acrR、marOR基因,未发现基因缺失株;单链构象多态性分析发现,acrR基因突变率为6.52%,marOR基因突变率为10.87%,11株敏感野生株均未检出以上2种基因突变.结论 志贺菌耐多药率较高,acrR、marOR基因突变可能是其耐多药的调控机制之一.     

耐多药肺结核患者心理健康状况及其影响因素调查研究

目的了解耐多药肺结核患者心理健康状况及其影响因素。方法对70例耐多药患者、58例敏感患者、57例健康人群进行问卷调查,采用症状自评量表(SCL-90)进行测评。比较耐多药患者、敏感患者和健康人群的心理健康状况。结果耐多药患者的心理健康状况差于敏感患者和健康人群(χ2=19.77,P0.01)。单因素分析发现,耐多药肺结核患者心理健康状况与年龄、婚姻状况和自感经济负担等有相关性。结论耐多药患者的心理健康状况较敏感患者和健康人群差,年龄、婚姻状况和自感经济负担是耐多药肺结核患者不良心理健康状况的影响因素,在今后的耐多药防治工作中要针对这些影响因素加强对耐多药患者的心理支持和关怀。     

342例痰培养阳性肺结核菌株耐药特征分析

目的了解肺结核患者对利福平、异烟肼、氧氟沙星、卡那霉素四种药物耐药分布情况,为肺结核的临床治疗与预防控制提供依据。方法对2012-2013年分离的结核分枝杆菌培养,采用比例法进行利福平、异烟肼、氧氟沙星、卡那霉素药敏试验,并分析耐药分布情况。结果 342例结核菌株耐药率为31.3%,耐多药率为20.5%。初治和复治患者耐药率分别为12.2%和70.5%,耐多药率分别为2.6%和57.1%,差异均有统计学意义。男性(占17.2%)女性(占30.9%)之间耐多药差异有统计学意义。耐多药率有随年龄增长而下降的趋势。耐任何抗结核药物以异烟肼(25.2%)、利福平(21.9%)、氧氟沙星(18.7%)等为主。复治患者耐≥1种药物、任何耐异烟肼、任何耐利福平、任何耐氧氟沙星、耐≥2药物和耐多药均高于初治患者。复治耐多药肺结核患者特征构成主要为复治失败(42.2%)、初治失败,6种治疗结局的分布不均衡,差异有统计学意义。任何耐利福平和任何耐异烟肼患者,耐多药和多耐药的比例分别为97.3%和81.4%,差异有统计学意义。结论复治肺结核患者作为重点人群筛查是一种高效的耐多药筛查策略;快速检测利福平耐药可以作为耐多药肺结核患者初步诊断的重要依据。     

成都市结核分支杆菌4688株耐药情况分析

耐药结核病尤其是耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)是目前结核病防治工作中的重点.来自WHO和国际抗结核肺病联合会(IUATLD)的76个国家3年(1999-2002)实施的耐药检测结果报告显示,耐多药结核病的中位患病率为1.1%.2008年WHO发布的第四次全球耐多药监测报告估计全球每年将有49万耐多药新发病例,其中近5万例为广泛耐药结核病例.     

河北省五市结核分枝杆菌耐药情况及耐多药菌株对利奈唑胺的敏感性

目的了解河北省结核分枝杆菌耐药情况,以及耐多药结核分枝杆菌对利奈唑胺的敏感性,指导临床治疗耐多药结核病。方法收集河北省五市六所医院2016年1—12月974例结核病患者分离菌株及患者临床信息,检测结核分枝杆菌对抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KM)的敏感性,采用分层随机法选取100株耐多药结核分枝杆菌,检测其对利奈唑胺的敏感性。结果结核病初治患者的耐药率和耐多药率分别为26.6%(200/753)和13.5%(102/753),复治患者的耐药率和耐多药率分别为59.7%(132/221)和53.4(118/221),复治患者耐药率和耐多药率均高于初治患者(χ~2值分别为83.7、93.5,均P0.01)。一线抗结核药物INH、RFP、SM和EMB的耐药率分别为25.8%、23.7%、16.7%和7.1%;二线抗结核药物OFX和KM的耐药率为4.7%(37/782)和4.0%(31/782);耐多药结核分枝杆菌对利奈唑胺的敏感率为80.8%(59/73)。结论结核病复治患者耐药率和耐多药率高于初治患者,利奈唑胺体外对耐多药结核分枝杆菌具有良好的抗菌活性。     

基于潜变量与空间统计理论的耐多药结核病空间流行病学模型研究

目的 探讨耐多药结核病及其影响因素间的关系.方法 利用全球耐多药结核病监测资料,基于潜变量分析理论和空间统计学方法,首先通过证实性因子分析从耐多药结核病影响因素中提取综合潜在影响因子,然后采用Kriging法估计综合潜在影响因子及耐多药率的空间分布,在此基础上分别构建耐多药率与其综合潜在影响因子之间的多元线性回归模型(全局模型)和GWR模型(局部模型),探讨耐多药率与综合潜在影响因子间的关系.结果 经证实性因子分析共提取了6个综合潜在影响因子.全局模型显示,6个潜在影响因子均与耐多药率有关(P值均小于0.01);GWR 局部模型显示,各模型的R2及参数估计值均呈显著的空间变异,其拟合效果优于全局模型.结论 GWR模型揭示综合潜在影响因子对结核病耐多药率的影响存在空间变异性;应根据各综合潜在影响因子的空间特征及其与耐多药率间的局域关系制定区域化的耐多药结核病监测规划和防控策略.     

Molecular snapshot of drug-resistant and drug-susceptible Mycobacterium tuberculosis strains circulating in Bulgaria

We report results of the first study on the molecular basis of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis strains currently circulating in Bulgaria. The study panel consisted of 133 (including 37 drug-resistant) isolates recovered from newly diagnosed, adult pulmonary TB patients from different regions of Bulgaria in 2005-2006. Three types of the rpoB mutations were found in 20 of 27 RIF-resistant isolates; rpoB S531L was the most frequent. Eleven (48%) of 23 INH-resistant isolates had katG S315T mutation. inhA -15C>T mutation was detected in one INH-resistant isolate (that also had katG315 mutation) and three INH-susceptible isolates. A mutation in embB306 was found in 7 of 11 EMB-resistant isolates. Comparison with spoligotyping and 24-VNTR locus typing data suggested that emergence and spread of drug-resistant and MDR-TB in Bulgaria are not associated with any specific spoligotype or MIRU-VNTR genotype.     

福建省耐多药结核分枝杆菌相关耐药基因突变特征分析

目的分析福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB、katG和rpsL的突变特征,为建立快速分子药敏方法提供科学依据。方法收集监测点的痰培养分离菌株进行菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增rpoB、katG和rpsL的基因片段,测序,比对分析。结果全敏感株rpoB和rpsL基因未检测到突变。耐多药菌株rpoB、katG和rpsL基因的突变率分别为91.30%,80.43%,30.43%。耐多药菌株三个基因的突变率均高于全敏感株的突变率,差异均有统计学意义(χ2值分别为46.67,4.29和11.58,P均<0.05)。katG、rpoB基因同时存在突变的耐多药菌株占80.43%,三个耐药基因均有突变的耐多药菌株占30.43%。结论福建省耐多药结核分枝杆菌的常见突变位点为rpoB531和rpoB526,katG315,rpsL43。     

福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征

目的初步分析福建耐多药结核病(multi-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药相关基因突变情况。方法自福建福州肺科医院收集耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株,采用PCR测序技术测定利福平和异烟肼耐药相关基因,包括rpoB、katG、inhA和mabA-inhA,并与标准菌株基因序列比对,分析基因突变特点。结果共对67株MDR-TB菌株进行了分析,91.04%的菌株在rpoB81 bp RRDR区发生突变,其中,88.06%(59/67)的MDR-TB菌株在rpoB531、526和516位发生突变;79.10%的菌株在katG、inhA或mabA-inhA上发生突变,59.70%(40/67)的菌株在katG315或者mabA-inhA(-15)位发生突变,没有检测到同时在inhA结构基因和基因调节区发生突变的菌株。结论 PCR-DNA测序分析技术可以用于检测MDR-TB临床分离菌株对RFP和INH的药物敏感性。     

New insight into the molecular characterization of isoniazid and rifampicin resistant Mycobacterium tuberculosis strains from Saudi Arabia

Data on the genetic variation of isolates of Mycobacterium tuberculosis and spectrum of mutations determining resistance to principal anti-tuberculosis drugs isoniazid (INH) and rifampicin (RIF) have not yet been studied in Saudi Arabia. One hundred and fifty-one clinical isolates of M. tuberculosis from different regions in the country showing resistance to RIF and INH were subjected to drug susceptibility testing, characterization of mutations conferring drug resistance and genotyping. Phenotypically 17 (11.3%) isolates were resistance to RIF, 75 (49.6%) were resistant to INH and 59 (39.1%) were resistant to both RIF and INH, respectively. Sixteen (10.6%), 74 (49%) and 56 (37.1%) were determined as resistant to RIF, INH and to both by line probe assay. High frequency of rpoB 531 mutations (67.1%) in RIF resistant strains and katG 315 mutations (65.2%) in INH resistant strains were found. Mutations responsible for INH resistance, katG 315 (P value<0.001, odds ratio: 1.81, 95% CI [1.51, 2.18]) and inhA-15 (P value - 0.004, odds ratio: 1.48, 95% CI [1.22, 1.8]) were predominant among the newly diagnosed cases. Beijing strains were significantly associated with multi drug resistance and mutations in combination of rpoB531 and katG315 (P value - <0.001, odds ratio: 6.83, 95% CI [2.65, 17.58]). In addition multi drug resistance was significantly associated with treatment history (P value<0.001, odds ratio: 3.16, 95% CI [2.14, 4.67]). Furthermore, a higher rate (39.3%) of clustering among the multidrug resistant strains particularly with Beijing family (52.9%) was observed. Saudi Arabia harbors highly diverse drug resistant M. tuberculosis population with an ongoing transmission which needs to be immediately managed.     

利福霉素耐药结核分枝杆菌rpoB突变与利福布丁耐药水平的关系

目的研究利福霉素耐药结核分枝杆菌 rpoB基因突变与利福布丁耐药水平的相关性。方法倍比稀释法测定64株利福霉素耐药及6株敏感菌株对利福布丁的最低抑菌浓度(MIC),并分析其对异烟肼的耐药情况。同时对rpoB全基因扩增后测序,分析rpoB突变位点和突变性质与利福布丁MICs高低及多重耐药的关系。结果6株敏感株rpoB未突变,MICs为 0.25～0.50 mg/L。64株耐药株rpoB突变率为100％。37株利福布丁高度耐药(MICs≥4 mg/L)株中,S531L突变27株,H526R突变和Y389C突变各2株,S531W、H526Y、Q513K、V176F、D516Y联合Q253R突变与D516G联合L511P突变各1株。17株中度耐药 (MICs 2～4 mg/L) 株中,S531L突变16株,D516G联合L511P和S509R突变1株。10株低度耐药（MICs 0.25～1 mg/L）株中,L533P、H526L、H526S、D516V、D516Y单点突变各2株。93.75％(60/64)的利福霉素耐药株对异烟肼耐药。结论检测rpoB突变即可初步筛选多重耐药结核分枝杆菌;中、高水平利福布丁耐药株以S531L突变占绝对优势,rpoB突变位点及突变类型与利福布丁耐药水平有一定相关性。     

Molecular detection and drug resistance of Mycobacterium tuberculosis complex from cattle at a dairy farm in the Nkonkobe region of South Africa: a pilot study

Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) causes tuberculosis (TB) in humans and animals. We investigated the presence of MTBC in cattle milk and its drug resistance using polymerase chain reaction (PCR). Two hundred samples (100 mL each) were obtained from a dairy farm in the Nkonkobe region of South Africa. The samples were processed using the modified Petroff method. DNA was isolated using a Zymo Bacterial DNA kit and amplified using Seeplex(?) MTB Nested ACE assay. The Genotype(?) Mycobacterium tuberculosis-multidrug resistantplus (MTBDRplus) assay was used to perform drug susceptibility and detection of mutations conferring resistance to isoniazid (INH) and rifampicin (RIF). Eleven samples tested positive for MTBC DNA using the Seeplex(?) MTB Nested ACE assay. The Genotype(?) MTBDRplus assay showed that 10/11 samples were resistant to both INH and RIF i.e., multi-drug resistant (MDR). The most and least frequent rpoB mutations detected in RIF resistant samples were H526Y (9/10) and D516V (2/10) respectively. None of the INH resistant samples harbored mutations in the katG gene. However, all of them harbored the T8A mutation in the inhA gene. These results have clinical and epidemiological significance and calls for further studies and necessary actions to delineate the situation.     

乌鲁木齐市耐多药结核分枝杆菌基因突变特征分析

目的 了解耐四种一线抗结核药物结核分枝杆菌的有关基因突变特征。方法 对19例耐多药结核病患者和254例全敏结核病患者痰液标本中分离的结核分枝杆菌进行药物敏感性试验,提取其DNA进行PCR扩增,对扩增产物测序并与标准株H37Rv进行比对。结果 19株耐多药结核杆菌和254株全敏结核杆菌均未检测到耐异烟肼基因inhA突变;耐多药组突变率最高的为耐异烟肼katG基因,突变位点为315;耐利福平的突变基因是rpoB,耐药位点为526和531,531位点突变率高于526位点;耐乙胺丁醇的突变基因是embB,耐药位点为206;耐链霉素的突变基因是rpsL和rrs,耐药位点分别为43和1401,rpsL基因的突变率高于rrs基因。结论 耐多药结核分枝杆菌耐异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素的突变基因分别为katG、rpoB、embB、rpsL和rrs,这对今后乌鲁木齐市耐多药结核病的快速诊断和控制提供了理论依据。     

rpoB基因突变与结核分枝杆菌利福平耐药相关性研究

目的 探讨临床患者痰标本中分离的结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药之间的关系. 方法 对115株结核分枝杆菌应用L-J药敏培养法,检测对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的耐药情况;根据rpoB基因序列设计包含利福平耐药决定区（RRDR）的扩增引物,PCR法进行扩增,运用生物信息学方法对耐药决定区扩增产物序列进行比对分析,对耐药株与非耐药株基因突变率进行统计学分析. 结果 115株结核分枝杆菌经比例法药敏试验,RIF耐药株53株,占所有菌株的46.09％;53株RIF耐药株中39株rpoB基因存在不同位点的变异,突变率为73.58％,突变位点包括531、526、522、516、513、511,最主要的突变位点集中在531位,引起氨基酸呈Ser531Gln、Ser531Leu、Ser531Trp 3种形式改变;RIF敏感株62株,其中有2株检测到rpoB基因的突变,敏感株与耐药株突变率经McNemar统计检验,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 岳阳地区rpoB基因变异与利福平耐药呈高度相关,rpoB基因最主要的突变位点位于531位和526位.     

某院结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因特征

目的了解某院结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpo B及异烟肼耐药相关基因kat G、inh A的突变特征,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。方法收集83例结核病患者痰标本,分离培养MTB,采用BD960液体法检测利福平、异烟肼耐药性,提取菌株DNA,采用聚合酶链反应扩增rpo B、kat G、inh A全基因,对扩增产物进行测序分析。结果 83株样本中,39株对利福平耐药,51株对异烟肼耐药。耐利福平菌株rpo B基因突变率为97.44%(38/39),531位点突变率60.53%(23/38),526位点突变率23.68%(9/38),32株出现多位点联合突变。耐异烟肼菌株kat G基因突变率为98.04%(50/51),共发现16种突变类型,其中以kat G 315位点突变为主,占70.00%(35/50),1株为kat G与inh A联合突变。结论该院耐多药MTB产生耐药性与rpo B和kat G基因突变相关,检测MTB耐多药相关基因突变可为早期快速诊断耐药结核病提供参考依据。     

福建省46株耐多药结核分枝杆菌katG基因突变特征研究

目的:了解福建省耐多药结核分枝杆菌临床分离株katG基因的突变特点,为建立适合我省快速检测异烟肼耐药方法提供参考。方法:对福建省9个监测点进行耐药性调查,收集菌株经菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增katG高突变区域的基因片段,测序后比对分析。结果:15株全敏感株未检测氨基酸突变。46株耐多药结核分枝杆菌katG基因的突变率为80.43%,katG 315的突变率为54.35%,联合突变率为52.17%。结论:福建省耐多药结核分枝杆菌杆不同耐药谱katG基因突变率不同,最常见的点突变发生于315位,463位具有等位基因多态性。