健脾化瘀方对缺氧微环境下结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的 研究健脾化瘀方对体外模拟缺氧微环境下结肠癌SW480细胞生物学行为的影响.方法 CoCl2化学模拟结肠癌SW480细胞缺氧微环境,实验分为空白组、CoCl2组、健脾化瘀方不同浓度(0.2、0.4、0.8mg/mL)处理组.采用MTT法检测不同浓度健脾化瘀方对缺氧条件下结肠癌SW480细胞株增殖能力、黏附能力的影响,Transwell小室法观察对SW480细胞侵袭能力的影响.结果 缺氧条件下SW480细胞增殖能力有所下降,48 h时,中、高浓度健脾化瘀方对缺氧条件下SW480细胞的增殖有明显抑制作用,与CoCl2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);不同浓度的健脾化瘀方作用于缺氧条件下SW480细胞后,细胞黏附能力明显下降,并呈浓度依赖性;CoCl2组较空白组侵袭细胞数明显增多,各浓度的健脾化瘀方均能抑制SW480细胞体外侵袭能力,各浓度组穿过小室的细胞数随健脾化瘀方浓度的增大而减少,侵袭抑制率增大,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 健脾化瘀方在体外可明显抑制缺氧微环境下SW480细胞增殖、黏附及侵袭能力,具有一定的浓度依赖性.     

缺氧诱导因子1α对乳腺癌生物学行为的影响

目的 探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）在乳腺癌组织中的表达状态以及其与临床病理因素之间的关系。方法 对行乳腺癌根治术后甲醛固定的石蜡包埋组织进行连续切片和HIF-1α免疫组化染色。结果 45例乳腺癌的HIF-1α阳性率为82．22％；HIF-1α表达与乳腺癌的组织类型、PR标志、ER标志、TNM分期、癌性坏死之间无相关性，但与淋巴结是否转移、炎症反应程度及病程长短之间有一定关系。结论 HIF-1α过表达与乳腺癌不良生物学行为有一定关系。     

消癌解毒方对结肠癌的抑制作用及对Treg细胞的影响

目的?探讨消癌解毒方对结肠癌的抗肿瘤作用及作用机制。方法?皮下注射结肠癌细胞CT26于BALB/c小鼠右腋下,建立荷瘤小鼠模型,连续灌胃给药14?d后,处死小鼠,分离外周血单核细胞,流式细胞仪检测消癌解毒方对Treg细胞分布的影响,免疫组化检测消癌解毒方对肿瘤组织内Foxp3蛋白表达的影响。结果?消癌解毒方可以显著抑制结肠癌荷瘤的增长,降低CD4+Foxp3+Treg细胞在外周血及脾脏的分布,减少Foxp3蛋白在肿瘤组织内的表达。结论?消癌解毒方具有显著抑制结肠癌增殖的作用,其机制可能与减少外周血内Treg细胞的分布及肿瘤组织中Foxp3的表达进而影响其下游信号通路传导相关。      

健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体MIF调控肝Kupffer细胞TGF-β1表达的研究

目的 通过细胞实验研究健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体(CT26-exo)中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对肝Kupffer细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法 采用CT26-exo干预肝Kupffer细胞,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝Kupffer细胞中TGF-β1 mRNA表达;进一步采用小干扰核糖核酸(siRNA)干扰技术敲低CT26细胞MIF基因表达后,用其外泌体干预Kupffer细胞,RT-PCR及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Kupffer细胞TGF-β1表达;用不同浓度的健脾消癌方含药血清干预后,采用RT-PCR及蛋白免疫印迹法(WB)检测CT26细胞及其外泌体中MIF表达;用含药血清干预后的CT26-exo干预Kupffer细胞,RT-PCR及ELISA检测Kupffer细胞TGF-β1表达量。结果 CT26-exo干预后,小鼠Kupffer细胞TGF-β1 mRNA表达升高(P<0.05);敲低CT26细胞MIF基因表达后,其外泌体对Kupffer细胞中TGF-β1的上调作用减弱(P<0.05);20%的健脾消癌方含药...     

缺氧微环境下缺氧诱导因子-1α对前列腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的：探讨缺氧诱导因子-1α在缺氧的条件下对前列腺癌细胞发生上皮间质转化的影响。方法在缺氧的环境中培养前列腺癌细胞 PC3,并应用分子生物学的方法检测其是否是发生上皮间质转化的关键转录因子。结果缺氧微环境可以诱导前列腺癌细胞 PC3发生上皮间质转化,缺氧诱导因子-1α起关键的调节作用,并且可以增强前列腺癌细胞的侵袭能力。缺氧条件下抑制缺氧诱导因子-1α的表达可以阻止前列腺癌细胞发生上皮间质转化。结论缺氧微环境通过缺氧诱导因子-1α诱导前列腺癌细胞 PC3发生上皮间质转化。     

健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭的影响研究

目的:研究健脾消癌方含药血清对HCT116细胞迁移、侵袭的影响,并初步探讨其机制.方法:10％、15％、20％的健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞,划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测细胞内基质金属蛋白酶2( matrix metalloproteinase -2...     

抑癌方对小鼠肠癌移植瘤微血管生成及VEGF、HIF-1a表达的影响

目的:探讨抑癌方对小鼠结肠癌移植瘤微血管生成、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)影响。方法:用CT26结肠癌细胞建立小鼠结肠癌移植瘤模型,分阴性对照组、中药高、中、低剂量组及化疗药组5组,分别灌服生理盐水、中药及腹腔注射氟脲嘧啶(5-FU)。比较各组之间瘤重;采用免疫组化染色方法和显微图像分析技术检测不同浓度抑癌方对各组小鼠移植瘤微血管(MV)及VEGF、HIF-1a表达的影响。结果:与阴性对照组的瘤重相比较,抑癌方各组及5-FU组(阳性对照药,以下称化疗组)均有统计学差异(P<0.05);但中药各组瘤重均高于化疗组(P<0.05)。免疫组化染色结果显示阴性对照组癌巢间MV、VEGF及HIF-1a表达高于中药组和化疗组(P<0.05)。结论:抑癌方对小鼠移植瘤有一定抑制作用;能够减少肠癌移植瘤中血管形成及VEGF及HIF-1a的表达。     

缺氧诱导因子-1α的表达与卵巢浆液性癌生物学行为的相关性

目的:探讨HIF-1α在卵巢浆液性癌发生和发展中的作用。方法:用免疫组织化学方法检测HIF-1α蛋白在52例人卵巢浆液性癌组织中的表达,分析HIF-1α与临床病理参数的关系。结果:HIF-1α蛋白在卵巢浆液性癌和卵巢交界性浆液性囊腺瘤中的高表达率明显高于正常卵巢组织和卵巢浆液性囊腺瘤,其差异有显著性(P<0.001);低分化、III期+IV期和腹水阳性HIF-1α蛋白的高表达率明显高于高中分化、I期+II期和腹水阴性者,差异具有显著性(P<0.05);HIF-1α蛋白表达与年龄无关,差异无显著性(P>0.05)。结论:HIF-1α与卵巢浆液性癌血管生成密切相关,在卵巢浆液性癌的发生、发展中起着重要作用。     

缺氧诱导因子HIF-1a通过上调Isthmin1促进结肠癌增殖的作用机制

目的 Isthmin1蛋白(ISM1)参与肿瘤的发生发展过程,但其对于结肠癌发生发展的作用机制和功能仍未被阐明。明确ISM1在结肠癌组织以及细胞系中的表达情况及预后价值,并探讨缺氧诱导因子缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)通过上调Isthmin1促进结肠癌增殖的机制研究。方法 应用TCGA和Kaplan-Meier plotter数据库分别分析ISM1在结肠癌中的表达情况及其与结肠癌患者预后的关系。免疫组化和免疫荧光检测结肠癌、癌旁组织中ISM1、HIF-1a的定位及表达水平。Western blot检测人正常结肠上皮细胞HcoEpic、NCM460以及人结肠癌细胞系HCT116、HT29及SW620中ISM1的表达水平。构建ISM1过表达稳转株,SRB法和平板克隆法检测其对结肠癌细胞增殖活性的影响。缺氧处理后,Western blot检测ISM1的表达水平。结果 生物信息学分析结果显示,结肠癌组织中ISM1的表达明显高于正常结肠组织,且ISM1低表达的结肠癌患者比高表达的结肠癌患者总生存期更长(P<0.01)。ISM1在结肠癌组织和结肠癌组织细胞系中的表达水平明显高于对应的癌旁...     

抑癌方对小鼠肠癌移植瘤微血管生成及VEGF、HIF-a表达的影晌

目的：探讨抑癌方对小鼠结肠癌移植瘤微血管生成、血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor,VEGF）及缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α）影响。方法：用CT26结肠癌细胞建立小鼠结肠癌移植瘤模型,分阴性对照组、中药高、中、低剂量组及化疗药组5组,分别灌服生理盐水、中药及腹腔注射氟脲嘧啶（5-FU）。比较各组之间瘤重;采用免疫组化染色方法和显微图像分析技术检测不同浓度抑癌方对各组小鼠移植瘤微血管（MV）及VEGF、HIF-1a表达的影响。结果：与阴性对照组的瘤重相比较,抑癌方各组及5-FU组（阳性对照药,以下称化疗组）均有统计学差异（P〈0.05）;但中药各组瘤重均高于化疗组（P〈0.05）。免疫组化染色结果显示阴性对照组癌巢间MV、VEGF及HIF-1a表达高于中药组和化疗组（P〈0.05）。结论：抑癌方对小鼠移植瘤有一定抑制作用;能够减少肠癌移植瘤中血管形成及VEGF及HIF-1a的表达。     

健脾解毒方对大肠癌细胞mTOR信号通路相关蛋白表达的影响

目的：探讨健脾解毒方对大肠癌细胞增殖的影响及可能作用机制。方法采用水提法制作健脾解毒方提取物,利用超高效液相-高分辨飞行时间质谱法分析健脾解毒方的主要成分,MTT法检测健脾解毒方对大肠癌细胞增殖的影响,Graphpad Prism5软件计算IC50值,流式细胞术检测细胞周期,Western Blot技术检测Phospho-mTOR、Phospho-P53和P21的蛋白表达。结果健脾解毒方能够抑制大肠癌细胞增殖,处理24、48、72 h 后四种大肠癌细胞系的 IC50值分别为 HCT116（6.894、5.668、3.648 mg/mL）、LoVo（14.65、8.737、7.849 mg/mL）、SW48（8.029、7.026、5.740 mg/mL）及HT29（13.06、9.646、8.448 mg/mL）;健脾解毒方使大肠癌细胞周期阻滞在G1期;并能够下调Phospho-mTOR蛋白表达（P<0.05）,上调Phospho-P53和P21蛋白的表达（P<0.05）,使大肠癌细胞周期阻滞在G1期。结论健脾解毒方可能通过mTOR-P53-P21途径抑制大肠癌细胞的增殖,这可能是健脾解毒方治疗大肠癌的作用机制之一。     

消癌解毒方治疗肠癌术后临床研究

目的 观察消癌解毒方对结直肠癌术后患者生活质量及化疗副作用的影响。方法 选取南京中医药大学附属医院肛肠科结直肠癌术后住院患者单盲随机分为对照组与治疗组各30例。对照组予术后肿瘤化疗和心理干预,治疗组在对照组治疗基础上,加服消癌解毒方。治疗12周后观察2组心理状态、生活质量、外周血细胞水平、免疫球蛋白水平、炎症细胞因子水平、肝功能损伤程度。结果 治疗后治疗组部分心理状态因子、卡氏评分等级明显改善（P<0.05~0.01）,优于对照组（P<0.01）;治疗组外周血细胞检验结果没有明显变化,优于对照组（P<0.05~0.01）;治疗组白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达明显下降（P<0.01）,优于对照组（P<0.01）;治疗组肝功能损伤情况明显轻于对照组（P<0.05）。结论 消癌解毒方能够改善结直肠癌术后患者的心理状态及生活质量、减轻化疗的不良反应。      

奥曲肽联合NSAIDs对结肠癌细胞生长的影响及作用机制

目的研究奥曲肽与非甾体类抗炎药物(NSAIDs)塞来昔布联合用药对人结肠癌细胞生长的影响及作用机制。方法 CCK-8法测定塞来昔布、奥曲肽单用及两者联合应用对人结肠癌细胞SW480增殖的影响;流式细胞技术检测细胞周期变化及细胞凋亡率的变化;Western blot检测未折叠蛋白反应(UPR)的标志分子BiP蛋白的表达。结果奥曲肽与塞来昔布联合应用与各自单用相比,细胞增殖减少,凋亡增加(P<0.05),各细胞时相的比例G2M期无明显变化(P>0.05),G0G1期增加(P<0.05),S期减少(P<0.05)。0、20、40、60、80μmol/L塞来昔布作用后细胞BiP表达量逐渐增加,80μmol/L塞来昔布与0、0.25、0.5、1、2mg/L奥曲肽作用后细胞BiP的表达量均减少。结论奥曲肽与塞来昔布联合应用能增强塞来昔布的抗肿瘤作用,其作用机制与奥曲肽抑制塞来昔布引起的UPR相关。     

白花蛇舌草多糖对Lewis肺癌小鼠肿瘤抑制作用及机制研究

目的:白花蛇舌草多糖对Lewis肺癌小鼠肿瘤抑制作用及机制研究.方法:选取C57BL/6J小鼠,建立Lewis肺癌模型,随机分为空白组、模型组、顺铂组(6 mg.kg -1 )、白花蛇舌草多糖高、中、低剂量(200 mg ? kg-1、100 mg ? kg-1、50 mg ? kg-1)组,各组小鼠给予相应药物灌胃,...     

Kiss-1与结肠癌SW480细胞增殖的关系

目的以结肠癌细胞SW480为模型,初步探讨Kiss-1基因过表达与结肠癌细胞增殖的关系。方法采用脂质体转染的方法将Kiss-1/pEGFP-N1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株;根据细胞分为3组：阴性对照组（转染pEGFP-N1空载体）、实验组（转染pEGFPN1-Kiss1）及空白对照组（未转染）。Western blot检测转染后细胞中Kiss-1表达量的变化;采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,western blot检测出阴性对照组和空白对照组中显示Kiss-1低表达,实验组Kiss-1表达量增加,CCK8试验表明实验组细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论 Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖率。     

健脾益气化瘀解毒方含药血清对结肠癌 HCT116细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的探讨健脾益气化瘀解毒方含药血清对人结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关蛋白Bcl-x L和Bax蛋白表达的影响。方法 10%、15%、20%健脾益气化瘀解毒方含药血清处理HCT116细胞12、24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖;不同浓度含药血清处理24、48 h后,碘化丙啶染色法检测细胞周期及凋亡率。蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞内Caspase-3,Bcl-x L和Bax蛋白的表达;对照组均予以相同浓度空白鼠血清及10%胎牛血清(FBS)。结果细胞增殖:12 h后15%、20%含药血清与相同浓度鼠空白组比较,对HC116细胞的抑制作用具有统计学意义(P0.05),72 h对HCT116细胞的抑制作用最强(P0.05),健脾益气化瘀解毒方含药血清对HCT116细胞增殖具有良好的抑制作用,并与时间、浓度呈正相关。细胞周期:10%及15%含药血清组G2期细胞减少,而G1期与S期细胞增多,20%含药血清组G1期与S期细胞减少,而G2期细胞增加,48 h作用明显,而空白鼠血清细胞周期则无明显变化,说明含药血清能阻滞细胞周期,与时间呈正相关。细胞凋亡:与相应浓度对照组比较,含药血清处理24、48 h后,HCT116细胞晚期凋亡率增加,并且随浓度、时间增加凋亡率增加(P0.05),说明含药血清能促使HCT116细胞凋亡,与时间、浓度呈正相关。Western blot检测显示,与空白鼠血清组相比,15%含药血清可上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3、Bcl-x L的蛋白表达(P0.05)。结论健脾益气化瘀解毒方可能通过将结肠癌HCT116细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,通过上调凋亡相关蛋白Bax,下调Caspase-3、Bcl-x L蛋白的表达诱导细胞凋亡。     

健脾养胃方联合新辅助化疗对胃癌患者临床疗效的影响及机制研究

目的 观察健脾养胃方配合新辅助化疗对胃癌患者临床疗效的影响及机制研究.方法 按照随机数字表法将56例胃癌患者随机分为对照组(29例)和治疗组(27例).对照组给予以奥沙利铂和替吉奥为主的SOX术前新辅助化疗方案,治疗组在新辅助化疗基础上配合健脾养胃方治疗.观察2组患者术前辅助化疗疗效(TRG分级)、中医证候积分的变化;...