胞内信号转导分子LIM矿化蛋白-1在人牙周膜细胞体外矿化过程中表达的实验研究

目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白-1在人牙周膜细胞体外矿化过程中的表达。方法:利用组织块法体外培养人牙周膜细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养14 d后,免疫细胞化学检测骨涎蛋白的表达;von Kossa染色检测矿化结节的形成。培养期间,采用半定量RT-PCR技术监测LIM矿化蛋白-1、碱性磷酸酶的表达,SPSS11.0软件分析结果。结果:培养14 d,实验组骨涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达,von Kossa染色阳性,矿化结节形成;对照组骨涎蛋白表达阴性,von Kossa染色阴性。RT-PCR结果显示碱性磷酸酶、LIM矿化蛋白-1在实验组和对照组各时段均表达。培养期间,实验组LIM矿化蛋白-1的表达显著高于对照组,其中培养第3 d、14 d时表达分别达到两个高峰,约为对照组的1.4倍、1.5倍。培养期间,碱性磷酸酶的表达显著增高,其中培养14 d时约为对照组的1.5倍。结论:首次发现LIM矿化蛋白-1与人牙周膜细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白-1可能在牙周膜细胞的分化、矿化中发挥一定作用。     

LIM矿化蛋白1在成骨分化前后人牙囊细胞中的表达

目的：研究人牙囊细胞成骨分化前后LIM矿化蛋白-1的表达。探讨LIM矿化蛋白-1在牙囊细胞向牙周组织分化过程中的作用。方法：组织块加酶消化法分离培养人牙囊细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养4周后,免疫细胞化学检测骨涎蛋白的表达;Von Kossa染色检测矿化结节的形成。矿化诱导前后,采用RT-PCR技术检测LIM矿化蛋白-1。结果：培养4周,实验组矿化结节形成,骨涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达, Von Kossa染色阳性;对照组未形成矿化结节,骨涎蛋白表达弱阳性,Von Kossa染色阴性。 RT-PCR结果显示LIM矿化蛋白-1在实验组强阳性表达,对照组弱表达。结论：LIM矿化蛋白-1与胚胎期人牙囊细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白-1可能在胚胎期牙囊细胞的分化、矿化中发挥一定作用。     

研究两种干细胞体外矿化过程中LIM矿化蛋白1的表达

目的 LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是一种胞内非分泌型蛋白,广泛存在于各种组织中,它不仅影响骨基质的矿化而且还是成骨细胞分化和骨形成过程中重要的调节因子。本实验通过检测LMP-1在牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化过程中的表达情况,来研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1对牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化的作用,为LMP-1作为成骨调节因子,影响骨基质矿化方面的研究提供参考。方法酶消化法体外培养牙髓干细胞,用挑克隆细胞团的方法对牙髓干细胞进行纯化传代培养。密度梯度离心法体外培养骨髓间充质干细胞。两种细胞分别设置实验组和对照组。实验组培养液中加入矿化诱导液,对照组不加矿化诱导液。分别于培养3、5、7、14天检测碱性磷酸酶的活性。培养21天茜素红染色检测矿化结节形成。培养期间,采用荧光定量PCR方法检测LIM矿化蛋白1、骨形态发生蛋白BMP-2、牙本质涎磷蛋白DSPP和Ⅰ型胶原蛋白COL-1、核心结合因子RUNX-2等成骨标志基因的表达,用SPSS 17.0对结果进行统计学分析。结果培养3、5、7、14天碱性磷酸酶的活性逐渐提高,且实验组碱性磷酸酶的活性显著高于对照组。培养21天实验组可见矿化结节形成。荧光定量PCR检测到实验组及对照组各个基因均表达,且实验组表达显著高于对照组。结论发现LIM矿化蛋白1与牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化过程相关,推测LIM矿化蛋白1可能作为检测牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞矿化的一个指标。     

FHL2蛋白在人牙周膜细胞体外矿化过程中的表达

体外培养hPDLCs,实验组用矿化诱导液培养,对照组不加诱导液。培养0、14、28d后,茜素红染色检测矿化结节的形成;免疫细胞化学法检测hPDLCs矿化诱导0、14d时FHL2蛋白的表达;同时采用半定量RT-PCR方法检测hP-DLCs矿化诱导0、14、28d时FHL2 mRNA的表达。结果:诱导培养14、28d后,实验组茜素红染色阳性,矿化结节形成;对照组茜素红染色显示:无明显矿化结节形成。免疫细胞化学结果显示:实验组FHL2蛋白阳性表达     

模拟微重力影响人牙髓干细胞的矿化能力与RhoA-Rho激酶信号通路相关性研究

目的初步研究Rho A-Rho激酶信号通路在模拟微重力(Simulated Microgravity,SMG)影响人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)矿化过程中的作用。方法将经酶消化法分离、纯化后的人牙髓干细胞体外扩增培养,以1×106细胞接种于PLGA支架上,分别于模拟微重力下及普通重力下矿化诱导液中培养,72 h后收集细胞,采用Western Blot检测Rho A蛋白表达;此外,在重力条件下采用Rho激酶抑制剂Y-27632,以矿化诱导液培养组作为对照组,检测矿化诱导3、5、7、10d两组碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)活性变化,采用Western Blot检测矿化诱导10 d,成牙本质相关蛋白牙本质基质蛋白(dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)的表达,采用茜素红染色法检测矿化诱导21 d,矿化结节形成水平。结果模拟微重力下,人牙髓干细胞中Rho A蛋白的表达下调;在普通重力矿化诱导条件下,加入抑制剂Y-27632后,各时间点细胞AKP表达水平均较对照组有所降低;矿化诱导10 d,成牙本质相关蛋白DSP、DSPP、DMP-1表达明显下调,矿化诱导21 d,矿化结节形成同样有所减少。结论模拟微重力下,Rho A蛋白表达水平下调;抑制Rho激酶的表达,可降低h DPSCs矿化能力,提示Rho A-Rho激酶信号通路可能参与模拟微重力对h DPSCs矿化能力的影响。     

矿化液对人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的 探讨矿化液对人牙髓干细胞(DPSCs)生长特性的影响.方法 用含一定浓度的β-甘油磷酸钠、抗坏血酸和地塞米松的矿化液诱导人牙髓干细胞,通过倒置相差显微镜、透射电镜、免疫细胞化学染色、von Kossa染色方法,观察和检测矿化液诱导后细胞形态、超微结构、表型和矿化基质分泌的变化,以未诱导组为对照.结果 矿化液连续培养7d,人DPSCs细胞形态明显改变,呈牙本质样极化细胞表现,另一侧为增大的胞体;超微结构显示,诱导后的细胞体积增大,核浆比例下降,胞浆细胞器丰富;诱导前细胞不表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OC),诱导后均表达;连续培养21d,诱导组细胞形成多个矿化结节.结论 矿化液能诱导人DPSCs向成牙本质细胞样细胞分化并产生矿化基质.本研究从细胞水平上揭示了人DPSCs向成牙本质细胞分化机理,为人DPSCs应用于牙髓损伤的修复再生提供了依据.     

FHL2蛋白在人牙周膜细胞体外矿化过程中的表达

目的 探讨胞内信号转导分子FHL2蛋白在人牙周膜细胞(hPDLCs)体外矿化过程中的表达.方法 体外培养hPDLCs,实验组用矿化诱导液培养,对照组不加诱导液.培养0、14、28 d后,茜素红染色检测矿化结节的形成;免疫细胞化学法检测hPDLcs矿化诱导0、14d时FHL2蛋白的表达;同时采用半定量RT-PCR方法检测...     

LIM矿化蛋白1在大鼠牙髓损伤修复中的时空表达

目的:探讨LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)在大鼠磨牙牙髓损伤修复中的表达.方法:建立大鼠磨牙牙髓损伤修复动物模型,用免疫组织化学染色方法观察LMP-1在大鼠牙髓损伤修复中的表达,并用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件及单因素方差分析比较各组间的差异.结果:在正常大鼠牙髓组织中LMP-1表达阴性;在大鼠牙髓损伤后1d,LMP-1表达于成牙本质细胞及部分牙髓成纤维细胞;术后3 d,LMP-1表达于坏死牙髓下方的细胞增殖层;术后7d,LMP-1显著表达于增殖活跃的牙髓细胞及部分成牙本质细胞中.结论:LMP-1在牙髓损伤修复过程中呈时空特异性表达,可能参与成牙本质细胞及牙髓细胞的增殖、分化及修复性牙本质的形成.     

矿化液对体外培养的人牙囊细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨矿化液对体外培养的人牙囊细胞中碱性磷酸酶表达的影响。方法：取12～13岁患者因正畸原因拔除的下颌第三磨牙牙囊，原代培养人牙囊细胞，将第5代细胞加入矿化液培养，应用碱性磷酸酶组织化学方法染色、碱性磷酸酶试剂盒检测人牙囊细胞中碱性磷酸酶的活性。结果：培养的牙囊细胞呈长梭形、不规则多角形。免疫细胞化学染色显示抗波形丝蛋白染色阳性。矿化液诱导7d，碱性磷酸酶染色呈阳性，碱性磷酸酶活性检测第3、5、7d明显升高，与对照组均有显著性差异。结论：矿化液能增强体外培养的人牙囊细胞中碱性磷酸酶的表达。     

矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞向成骨细胞样细胞的分化

目的:探讨矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞(HDPSCs)向成骨细胞样细胞分化的潜力.方法:矿化液诱导前磨牙HDPSCs 28d,于诱导的第7、28天时,应用酶化学染色检测碱性磷酸酶(ALP)表达;第14、21、28天时,应用茜素红染色观察细胞矿化情况;于诱导的第0、3、5、7、14、21、28天时,采用RT-PCR法检测其ALP、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨涎蛋白(BSP)和骨钙素(OCN)的基因表达;Western印迹分析、免疫细胞化学染色检测BSP及OCN蛋白的表达.结果:经矿化液诱导后,前磨牙HDPSCs ALP染色阳性,形成钙结节.诱导第3天,细胞ALP mRNA呈高表达;DSPP始终不表达;BSP、OCN mRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高;BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致;第5天时OCN染色阳性.结论:前磨牙牙髓干细胞具有向成骨细胞样细胞分化的潜能,有望成为骨组织工程的种子细胞.     

Mineralization at the interface of implants

Osseointegration of implants is crucial for the long-term success of oral implants. Mineralization of the bone's extracellular matrix as the ultimate step of a mature bone formation is closely related to implant osseointegration. Osteogenesis at oral implants is a complex process, driven by cellular and acellular phenomena. The biological process of the maintenance and emergence of minerals in the vicinity of oral implants is influenced to a great extent by biophysical parameters. Implant-related structural and functional factors, as well as patient-specific factors, govern the features of osteogenesis. To understand the influence of these factors in peri-implant bone mineralization, it is important to consider the basic biological processes. Biological and crystallographic investigations have to be applied to evaluate mineralization at implant surfaces at the different hierarchical levels of analysis. This review gives insight into the complex theme of mineral formation around implants. Special focus is given to new developments in implant design and loading protocols aimed at accelerating osseointegration of dental implants.     

牙周韧带细胞体外矿化的研究——骨唾蛋白与骨桥素在矿化过程中的表达

目的 :研究骨唾蛋白与骨桥素在体外培养的人牙周韧带细胞矿化过程中的表达。方法 :体外培养的人牙周韧带细胞 ,经地塞米松矿化液诱导 ,分别于不同的时间在相差显微镜下观察其矿化结节的形成 ,采用免疫细胞化学的方法观察骨唾蛋白与骨桥素的表达情况。结果 :矿化培养 1周细胞呈复层生长 ,骨桥素呈阳性染色 ;两周细胞密集呈结节状 ,骨唾蛋白与骨桥素均为阳性 ,胞浆染成黄褐色 ;3周出现矿化结节 ,矿化以后骨唾蛋白与骨桥素保持稳定表达。结论 :牙周韧带细胞在适当的条件下可以向成骨细胞表型分化 ,表达矿化相关蛋白 ,形成矿化结节。     

牙本质仿生矿化的研究进展

牙本质仿生矿化是口腔医学和生物材料学领域关注的热点.通过仿生矿化途径得到在组成、结构和功能等方面与天然牙本质高度一致的仿生材料,从而实现牙本质的仿生修复,具有重要的临床意义和和广阔的应用前景.本文就近年来牙本质仿生矿化的研究进展作一综述.     

A Mineral Trioxide Aggregate Sealer Stimulated Mineralization

The aim of this study was to evaluate the rat subcutaneous tissue response to implanted polyethylene tubes filled with Endo-CPM-Sealer (Portland Cement Modified Sealer) (EGEO S.R.L., Buenos Aires, Argentina) compared with Sealapex (SybronEndo, Glendora, CA) and Angelus MTA (Angelus, Londrina, Brazil). These materials were placed in polyethylene and dentin tubes and implanted into dorsal connective tissue of Wistar rats for 7, 15, 30, 60, and 90 days. The specimens were prepared to be stained with hematoxylin and eosin or Von Kossa or not stained for polarized light. Qualitative and quantitative evaluations of the reaction were performed. Both materials caused mild to moderate reactions at 7 days that decreased with time. The response was similar to the control on the 30th day with Endo-CPM-Sealer and Angelus MTA and on the 60th day with Sealapex. Mineralization and granulations birefringent to the polarized light were observed with all materials. It was possible to conclude that Endo-CPM-Sealer was biocompatible and stimulated mineralization.     

Mineralization in bovine dentin adjacent to glass-ionomer restorations

OBJECTIVES: To assess the uptake of fluoride as well as the increase in mineralization by bovine dentin after restoring an experimentally made cavity with conventional glass-ionomer cement or a polyacid resin composite. METHODS: Cylindrical cavities were prepared on the labial root surfaces in bovine dentin. The cavities were restored with the test material. The restored teeth were individually suspended in distilled water at 37 degrees C for 30 days. The teeth were sectioned and the superficial dentin cavity walls were analyzed for fluoride, calcium, and phosphorus by an EPMA device. The effects of the different fluoride-releasing materials on the hardness of the dentin were determined by indentation (20-microm intervals below the filled surface into the underlying sound dentin from the surface to a depth of 100microm). RESULTS: Conventional glass-ionomer cement had a significant effect on fluoride uptake. In addition, the calcium and phosphorus scan revealed the elevation of calcium and phosphorus levels in a deeper zone corresponding to the locations of the fluoride uptake at the surface of axial wall. However, the polyacid resin composite did not exhibit a zone of calcium and phosphorus elevation. The average dentin hardness under conventional glass-ionomer cement in the studied five distances ranged from 84.3 to 61.3KHN, however, that of the polyacid resin composite ranged from 62.5 to 64.9KHN. Analysis of variance for these data demonstrated a significant difference in hardness between the 20-microm depth and the other depths (P<0.01, ANOVA Fisher's PSLD). CONCLUSION: The present paper indicates that the fluoride penetrated deeper into the dentin with conventional glass-ionomer cement than the polyacid resin composite. Conventional glass-ionomer cement had a significant effect on fluoride uptake. In addition, hypermineralization occurred within the superficial dentin cavity wall region of conventional glass-ionomer cement.