嗅成鞘细胞提取液对阿尔茨海默病脑移植的影响

目的 探讨嗅成鞘细胞提取液对阿尔茨海默病(AD)脑移植的影响.方法 SD大鼠双侧海马注射Aβ1-40,建立AD大鼠模型.实验动物分为四组:正常对照组、空白对照组、人工脑脊液移植组、嗅成鞘细胞OECs提取液移植组,每组10只.两移植组分别加用人工脑脊液、OECs提取液培养胆碱能神经元,并移植到AD模型大鼠.运用行为学测试、NADPH-d组化、刚果红组织学染色结合积分吸光度测定等技术,观察、比较各组AD模型大鼠移植2个月后学习记忆能力、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数以及老年斑的变化.结果 ①行为学测试:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组大鼠达到学会标准所需训练次数(TN)、错误反应次数(EN)、潜伏期(D)、全天总反应时间(TRT)少且短于空白对照组(P＜0.05);OECs提取液移植组更为明显,与人工脑脊液移植组之间有显著差异(P＜0.05).②NADPH-d组化反应:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组NOS阳性神经元数较空白对照组明显增多(P＜0.05),且前两组之间有显著性差异.③刚果红染色:SP积分吸光度测定,三组间均有显著性差异(P＜0.05),OECs提取液移植组SP-IA值最小.结论 OECs提取液能明显提高AD脑移植的效果.     

嗅成鞘细胞的移植和迁移对脑梗死大鼠神经功能恢复的作用

目的探讨对脑梗死大鼠移植嗅成鞘细胞（OEC）促进神经功能恢复的作用及OEC迁移规律。方法从2．5个月龄SD大鼠嗅球取材，利用差异贴壁方法纯化OEC。移植前，用Hoechst 33342标记OEC。按双肾双夹方法制备易卒中型肾血管性高血压大鼠模型，模型制备成功后10周，电凝大脑中动脉制作大脑中动脉梗死（MCAO）模型。MCAO大鼠63只，按随机数字法随机分为梗死侧移植组、健侧移植组及双侧移植组，每组21只大鼠。于移植术前，移植术后第2和6周行大鼠神经运动功能、感觉功能检查；免疫组化法观察脑组织神经生长相关蛋白43（GAP-43）及神经丝蛋白（NF）的表达情况。移植后6周取移植部位脑组织行冷冻切片，荧光显微镜下观察OEC迁移情况。结果①梗死侧移植组、健侧移植组及双侧移植组移植前运动评分中位数评分均为2，移植后第2周分别为5、4、7，第6周分别为6，7、9；移植前感觉功能评价中位数3组均为6．67％，移植后第2周3组分别为20．00％、13．33％和33．33％，移植后第6周分别为26．67％、33．33％和46．67％。以上指标各时间点梗死侧移植组、健侧移植组比较差异无统计学意义；双侧移植组与其他两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。②免疫组化染色显示，各时间点梗死侧移植组、健侧移植组梗死灶边缘区GAP-43、NF阳性表达差异无统计学意义；双侧移植组与其他两组比较表达均增强，差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。③移植OEC后6周3组均观察到OEC向梗死灶及对侧的皮质迁移。结论脑梗死大鼠OEC健侧移植能够起到与患侧移植同样的促进神经功能恢复的作用，这种作用与OEC促进神经纤维再生及较强的自我迁移能力有关。     

喂饲绞股蓝皂苷对Aβ1～40注射海马后大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构变化的影响

目的 探讨β淀粉样蛋白（Aβl。柏）海马注射后大鼠脑内细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase，COX）活性和线粒体超微结构变化及绞股蓝（GP）对其影响。方法 动物随机分为GP组、模型组、对照组。运用Aβ双侧海马注射，模拟阿尔茨海默病（AD）脑内Aβ对神经系统的损害。Y型迷宫测试大鼠学习记忆能力，组织化学、原位杂交法结合图像分析检测海马CA1区线粒体COX活性及细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基（COⅡ）mRNA表达，电镜观察CA1区神经细胞线粒体超微结构。并对AD模型大鼠给予GP灌胃，观察其对AD模型大鼠上述各项指标变化的影响。结果 与对照组比较，AD模型大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及COⅡ mRNA表达明显降低，线粒体数量减少，结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂；GP对上述各项指标有不同程度的改善。结论 GP具有改善AD模型大鼠学习记忆能力、海马COX活性和COⅡ mRNA表达及线粒体超微结构的作用，对AD模型大鼠有一定治疗和保护作用。     

嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠的治疗作用

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)对神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠阿尔茨海默病(AD)的影响。方法 SD大鼠双侧海马注射Aβ1～40,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:NSCs移植组、NSCs与OECs移植组、AD模型组、正常对照组,每组30只。从SD胎鼠(孕16～18 d)取材,在体外分别培养和共培养OECs与NSCs,并将共培养的OECs与NSCs移植于AD大鼠大脑;观察各组大鼠行为学、移植细胞存活、迁移和分化以及宿主脑海马突触素表达的变化。结果①行为学测试:NSCs与OECs移植组潜伏期明显缩短、过平台次数明显增加,与NSCs移植组、AD模型组有显著性差异(P<0.05)。②根据标记跟踪,植入的NSCs与OECs大量存活,从注射部位分别向两侧海马区及其周围皮质迁移。③免疫荧光检测:植入NSCs能在AD脑内分化为神经元、神经胶质细胞以及少量胆碱能神经元,NSCs与OECs移植组分化为神经元的分化率13.97%,与NSCs移植组8.35%差异显著(P<0.05)。④海马突触素表达:NSCs与OECs移植组IA值最高,与NSCs移植组、AD模型组有显著性差异(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞通过改善植入神经干细胞在AD脑内的存活、迁移和分化能力以及与宿主脑的联系,提高NSCs移植治疗大鼠AD的效果。     

年龄对嗅鞘细胞移植治疗大鼠脊髓损伤疗效影响的实验研究

目的研究嗅鞘细胞(OECs)对大鼠脊髓损伤的修复作用及年龄因素的影响。方法新生Wistar大鼠嗅球做OECs培养，制备2月龄大鼠脊髓半横断模型A、B组，老年(24月龄)大鼠脊髓半横断模型C、D组，B、D组行OECs移植，A、C组注入生理盐水作为对照，观察术后动物脊髓功能恢复情况。术后8w取材，了解OECs在体内成活情况及脊髓再生情况。结果OECs体内成活，B、D组BBB功能得分及脊髓损伤区再生的神经纤维数均显著性高于A、C组，B、D组间及A、C组无显著性差异。结论OECs移植能明显促进脊髓损伤的修复，年龄因素对修复无显著性影响。     

移植入阿尔茨海默病大鼠海马内神经干细胞的存活、迁移和分化

目的 观察新生大鼠海马齿状回的神经干细胞(NSCs)移植到阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内的存活、迁移和分化.方法 将HoechsT_33258标记的NSCs植入AD模型大鼠海马,移植2、4和6 w后,行Y迷宫检测大鼠的学习记忆能力,结合HoechsT_33258标记和荧光免疫组化技术,分析NSCs在AD大鼠海马中的存活、迁移和分化.结果 移植的NSCs在宿主脑内能够存活至少6 w,沿海马回向两侧迁移,NSCs移植2 w后,免疫荧光检测无明显神经丝蛋白-200(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸(Glu)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性反应,而移植后4、6 w,则可见免疫阳性反应细胞.Y迷宫测试结果显示移植NSCs 2、4、6 w后大鼠学习、记忆能力明显得到恢复,与AD模型组比较有统计学意义(P<0.05),与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 自新生大鼠海马齿状回分离培养的NSCs在AD模型大鼠海马内能够存活、迁移并分化为胆碱能、谷氨酸能神经元及神经胶质细胞.     

嗅鞘细胞移植治疗EAE的研究

目的 探讨嗅鞘细胞（OECs）移植对实验性免疫性脑脊髓炎（EAE）的治疗 作用。方法 用新生wistar大鼠嗅球培养OECs。OECs移植组将OECs悬液注入EAE大鼠的侧脑室,假手术组注入等量生理盐水;观察两组大鼠运动功能评分、脑组织病理学变化及热休克蛋白70（HSP70）的表达。结果 OECs移植组运动功能评分显著优于假手术组（P〈0．05）;OECs移植组髓鞘修复明显优于假手术组;OECs移植组在各时间点上HSP70的表达均明显高于假手术组（P〈0．05）。结论 OECs移植可以促进EAE鼠的髓鞘修复,改善其运动功能,同时可使其脑组织HSP70大量表达,对损伤后的神经细胞有保护作用。     

脑室内移植嗅成鞘细胞改善大鼠阿尔茨海默病的症状

目的探讨嗅成鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）脑室内注射对大鼠阿尔茨海默病的影响。方法sD大鼠双侧海马注射ABl．40,建立AD大鼠模型。实验动物分为四组：正常对照组、AD模型组、OECs移植组、MCSF注射组,每组10只。体外原代培养嗅成鞘细胞并将其移植至AD大鼠侧脑室。运用行为学测试、组织化学、原位杂交结合图像分析以及电镜等技术,观察、比较各组大鼠学习记忆能力、海马CA1区线粒体细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase,COX）活性、细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基（COⅡ）mRNA表达、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）阳性神经元数,以及CA1区神经元线粒体超微结构等指标的变化。结果与正常对照组比较,AD模型组大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及CO II mRNA表达、NOS阳性神经元数明显降低或减少俨〈0．05）,线粒体数肇减少,结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂;嗅成鞘细胞移植明显上调上述指标俨〈0．05）,并对神经元线粒体超微结构有明显的保护作用。结论嗅成鞘细胞移植通过改善AD大鼠学习记忆能力、提高海马COX活性和CO1ImRNA、NOS阳性神经元表达以及保护神经元线粒体等作用,对大鼠阿尔茨海默病具有明显的治疗作用。     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤的修复作用及机制

目的探讨嗅鞘细胞（OECs）移植对损伤脊髓的作用及机制。方法取48只成年SD大鼠制备脊髓损伤模型,造模成功后将大鼠随机分为两组各24只,OECs组行OECs移植：取10μl的OECs悬液于脊髓损伤处及损伤段远、近端蛛网膜下腔分别注入8、1、1μl,并各留针2 min,缓慢退针;对照组予生理盐水10μl注入,其他操作同观察组。应用BBB运动功能评分比较两组行为学指标,HE染色、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化染色分别观察脊髓损伤组织学变化及T9星形胶质细胞增生情况。结果干预后2～8周OECs组运动功能恢复情况、BBB评分均显著高于对照组及干预前,P均〈0.01。干预后4周HE染色示对照组脊髓组织有较多空腔,神经纤维及细胞坏死,颜色较暗;而OECs组脊髓组织中无明显空腔,空泡小而少,色泽较亮。GFAP免疫组化染色示两组受损脊髓节段均出现星形胶质细胞反应性增生,但OECs组明显轻于对照组。结论 OECs对损伤脊髓具有修复和保护作用,其机制为促进损伤脊髓的轴突再生,减少星形胶质细胞增生。     

益智汤对阿尔茨海默病转基因小鼠海马超微结构的影响

目的 研究益智汤对转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑组织超微结构的影响,探讨益智汤治疗AD的作用机制.方法 APP695转基因小鼠分为AD模型组和益智汤治疗组,同月龄同背景转基因阴性小鼠为正常对照组.3个月后,使用电镜技术观察各组小鼠脑组织海马超微结构的变化.结果 与对照组比较,模型组小鼠海马神经细胞出现线粒体和突触损伤,血脑屏障结构异常.益智汤组小鼠神经细胞病理变化有所减轻.结论 APP695转基因小鼠脑组织超微结构出现病理变化,益智汤可通过减轻神经元线粒体和突触的损伤及改善血脑屏障的功能来维持神经细胞结构和功能的正常.     

嗅鞘细胞联合血管内皮生长因子促进周围神经再生的实验研究

目的探讨嗅鞘细胞(OECs)与血管内皮生长因子(VEGF)联合移植促进坐骨神经再生的协同作用。方法取SD大鼠60只,随机分成4组,即生理盐水(CON)组、VEGF组、OECs组和VEGF+OECs组。制作大鼠坐骨神经缺损模型,在再生室内分别注入CON、VEGF、OECs、VEGF+OECs。术后观察各组大鼠一般状态,并于术后4周和12周在光镜、电镜下观察再生室神经再生情况,检测大鼠坐骨神经电生理情况等。结果 VEGF组、OECs组和VEGF+OECs组坐骨神经单位横断面有髓神经纤维计数及其直径,电生理检测结果及腓肠肌湿质量均高于CON组(P均<0.05)。VEGF+OES组神经纤维的组织形态学优于VEGF、OECs组。结论 OECs移植联合VEGF对大鼠神经再生均有明显的促进作用,二者有协同作用。     

依达拉奉对血管性痴呆大鼠海马线粒体COX活性及基因表达的影响

目的 探讨依达拉奉对血管性痴呆(VD)大鼠海马组织的细胞色素C氧化酶(COX)活性及基因表达的影响.方法 采用双侧颈总动脉永久结扎法制备慢性前脑缺血大鼠模型,分依达拉奉治疗组(皮下注射,每日1次,3 mg/kg体重),甲磺酸阿米三嗪(都可喜,灌胃,每日1次,20 mg/kg体重)组和模型组,另取正常大鼠为正常对照组.自手术7 d起给药,共20 d后,各组分别取1及2个月为时间点,处死取脑,测定大鼠海马组织COX活性及基因表达并进行基因突变分析.结果 提取各组大鼠海马组织线粒体后,COX活性检测结果显示:术后1、2个月依达拉奉治疗组COX活性明显高于相应时间点模型组(P＜0.05),并有高于都可喜组趋势.依达拉奉治疗组COX表达量高于模型组(P＜0.05),与都可喜组无差异.依达拉奉组COX基因新出现3处基因突变,比正常组少3个突变位点,与模型组比新出现3处基因突变,少3处突变位点.COX基因依达拉奉组没有模型组的突变位点,也没有对照组突变位点,都可喜组突变频率较高既有正常对照组的突变位点,也有模型组的突变位点.结论 依达拉奉可以使VD大鼠海马组织COX活性升高,COX基因突变率减少,提示依达拉奉可以减轻自由基对mtDNA的氧化损伤,保护VD大鼠的神经功能.     

神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学及不同脑区细胞色素C表达的影响

目的探讨神经干细胞移植(NSCs)对阿尔茨海默病(AD)大鼠行为学及不同脑区细胞色素C(Cyt-C)表达的影响。方法通过切断Wistar大鼠海马穹隆伞制备AD模型大鼠;培养胎鼠的NSCs,并把该细胞移植入AD模型大鼠脑内;等量生理盐水注射设为对照组。1个月后进行morris水迷宫检测实验鼠学习记忆能力;5 d后处死实验鼠,用Western bolt检测不同脑区Cyt-C的表达。结果NSCs移植后AD模型大鼠的学习记忆能力明显改善,与生理盐水对照组相比差异显著(P<0.01),与正常组相比无显著差异(P>0.05);海马与额叶的Cyt-C表达显示生理盐水对照组与其他各组之间有显著差异(P<0.01);各实验组海马内的Cyt-C表达均高于额叶。结论NSCs移植可以改善AD模型大鼠的学习记忆能力,降低AD模型大鼠脑内的Cyt-C含量,NSCs移植可以改善AD模型大鼠的痴呆症状。     

白术附子肉桂合剂对老年小鼠脑线粒体细胞色素C氧化酶、细胞色素C的影响

目的　从能量代谢及抗氧化系统的角度探讨白术、附子、肉桂合剂 (简称合剂 )对老年小鼠脑作用的机制。方法　检测脑线粒体丙二醛 (MDA)、细胞色素C(CC)含量以及锰 超氧化物歧化酶 (MnSOD)、细胞色素C氧化酶 (CCO)活性 ,以合剂灌喂老年小鼠 ,并检测其对上述指标的影响。结果　老年小鼠脑线粒体MDA、CC含量降低 ,MnSOD和CCO活性增高。结论　合剂具有抗氧化作用 ,并能增加细胞功能。     

癫痫大鼠海马线粒体COXⅠ和COXⅣ表达的变化

目的探讨癫痫对大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶（COX）的mtDNA和nDNA编码亚基Ⅰ、Ⅳ表达的影响。方法成年雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、癫痫持续状态（SE）后急性期（3h）、静止期（7d）、慢性期（45d）组和注射匹鲁卡品（PILO）但未出现SE组。免疫组化并荧光实时定量PCR检测海马线粒体COXⅠ、Ⅳ阳性染色及其mRNA的表达。结果COXⅠ阳性细胞数在SE后3h明显增加,7d降到对照组水平,45d显著降低;COXⅣ阳性细胞数SE后3h稍有增加,但较对照组无显著性差异,7和45d时COXⅣ染色变化与对照组相似;注射PILO但未出现SE组COXⅠ、Ⅳ的表达与对照组类似。COXⅠmRNA在SE后3h表达明显升高（P〈0.001）,7d时降到对照水平,45d显著降低（P〈0.001）;COXⅣmRNA在3h时表达较对照组升高,但差异无显著性,7和45d时下降至对照组水平。注射PILO但无SE组与对照组结果类似。结论颞叶癫痫海马COX功能紊乱与痫性发作相关,线粒体编码的基因更易受痫性发作的影响。     

移植小胶质细胞对阿尔茨海默病大鼠脑内β-淀粉样蛋白的吞噬作用

目的观察移植小胶质细胞是否可聚集在大鼠脑内β淀粉样蛋白（Aβ）周围并吞噬Aβ颗粒。方法在大鼠左右侧海马内分别注射Aβ42与生理盐水，3d后经颈内动脉将体外培养的持续表达增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）的小胶质细胞注入大鼠体内，小胶质细胞注射后3d分别计数双侧海马内荧光细胞并在共聚焦显微镜下观察移植小胶质细胞是否吞噬Aβ颗粒。结果移植小胶质细胞聚集在Aβ沉积物周围，荧光显微镜下计数Aβ注射侧的EGFP阳性细胞数明显高于生理盐水注射侧的细胞数（P〈0．05）。部分移植小胶质细胞吞噬Aβ沉积物，细胞内出现Aβ信号。结论移植小胶质细胞聚集在大鼠海马区Aβ沉积物周围，并摄取部分Aβ。     

幽门螺杆菌对胃癌细胞线粒体DNA编码的细胞色素氧化酶基因表达的影响

既往研究表明胃黏膜细胞核基因组有线粒体DNA（mtDNA）片段整合,且这种整合与幽门螺杆菌（H. pylori）感染有关,并参与胃癌的发生.mtDNA片段与核基因整合后,是否会引起所编码基因表达的改变,这种改变是否与H.pylori感染有关尚不明确.目的：观察H.pylori作用于胃癌细胞后线粒体编码基因细胞色素氧化酶（COX）Ⅰ、COXⅡ和COXⅢmRNA表达的变化,探讨H.ptkiri致胃癌的分子机制.方法：将6μl/ml H.pylori培养滤液与胃癌细胞分别作用4 h、8 h和12 h,收集细胞,提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各时间点COXⅠ、COXⅡ和COXⅢmRNA的表达.结果：H.pylori作用4 h后,线粒体COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢmRNA的表达有所降低,8 h时下降更明显,12 h时段下降速度减缓;除COXⅡ4 h时与对照组无差异外,其余各时间点的表达量均显著低于对照组（P＜0.05）.结论：H.pylori可引起胃癌细胞线粒体编码基因COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢmRNA表达下调,影响线粒体的功能.     

电针对帕金森病模型大鼠黑质细胞线粒体复合物活性的影响

目的通过检测帕金森病(PD)模型大鼠黑质细胞线粒体复合物活性的改变,探讨电针治疗对黑质细胞线粒体功能的影响,以期揭示电针治疗PD的机制。方法将48只SD雄性大鼠随机分成4组:正常组、溶剂对照组、模型组、电针治疗组;采用鱼藤酮颈背部皮下注射法制备模型,按行为学评分标准记分;治疗结束后采用免疫组织化学技术检测中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目;同时采用紫外分光光度法检测线粒体复合物Ⅰ～Ⅳ的活性。结果与模型组相比较,电针治疗组行为学异常明显改善(P<0.05)。电针治疗组黑质TH阳性神经元数目较模型组显著增加(P<0.01)。模型组的线粒体复合物Ⅰ的活性明显低于正常组(P<0.01),电针治疗组的线粒体复合物Ⅰ的活性明显高于模型组(P<0.01)。各组线粒体复合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ无显著差异。结论粒体复合物Ⅰ功能障碍在PD发病中占有重要的地位,并可能是针刺治疗作用的靶点之一。     

非糖尿病大鼠急性心肌梗死后急性高血糖对心肌细胞线粒体膜电位和细胞色素C的影响

目的 研究急性心肌梗死后急性高血糖对大鼠心肌细胞线粒体膜电位和细胞色素C的影响.方法 结扎40只雄性SD大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型后随机分为4组:生理盐水组、高糖1组、高糖2组和胰岛素组,另取10只SD大鼠为假手术组,术中监测血糖水平,实验终点观察各组大鼠细胞凋亡指数、线粒体和胞浆内细胞色素C表达以及线粒体膜电位变化.结果 与假手术组比较,余各组细胞凋亡指数表达均增高,线粒体膜电位均降低;胞浆细胞色素C表达增加而线粒体内细胞色素C表达减少(P<0.05).与高糖2组比较, 其余各组细胞凋亡指数显著减低,线粒体膜电位显著增高,细胞色素C胞浆表达显著减少而线粒体表达显著增加(P<0.05).生理盐水组组、胰岛素组、高糖1组细胞凋亡指数、线粒体膜电位、胞质和线粒体中细胞色素C表达量差异无显著性(P>0.05).结论 急性心肌梗死后急性高血糖可能通过线粒体途径显著促进细胞凋亡,注射胰岛素降低血糖能有效地减少细胞凋亡.     

缺血预处理对大鼠冷保存供肝线粒体胆固醇含量和细胞色素C释放的影响

肝脏移植中供肝的缺血再灌注损伤一直是影响肝脏移植效果的重要因素之一.如何尽可能地减轻供肝的缺血再灌注损伤一直是器官移植研究的热点及难点问题,其中缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)的内在保护效应在不同种属的动物和不同器官均得到证实[1-4].但缺血预处理的作用机制至今仍不十分清楚,其是否通过线粒体途径对抗细胞凋亡至今仍未明确.本实验旨在探讨缺血预处理能否对抗线粒体凋亡及其可能的机制.