3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立的3种方法对葡萄糖转运时效关系的影响

目的:对比3种不同方法(地塞米松、游离脂肪酸、高糖高胰岛素)诱导的胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖转运时效关系及对葡萄糖转运子4(Glut4)蛋白表达的影响.方法:采用3种不同方法诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,分别检测各组细胞12,24,36,48及60h时的葡萄糖转运率及各组细胞60 h后Glut4蛋白的表达.结果:在24 h内,造模组细胞的葡萄糖转运率与正常对照组相比均明显降低(P＜0.01);在24 h以后,游离脂肪酸组葡萄糖转运率与正常对照组相比无明显统计学差异(P＞0.05),地塞米松组葡萄糖转运率相比正常对照组明显降低(P＜0.05),而高糖高胰岛素组葡萄糖转运率较地塞米松组明显降低(P＜0.01);地塞米松组及游离脂肪酸组的Glut4蛋白表达水平较正常对照组明显降低(P＜0.01);相对于地塞米松组及游离脂肪酸组,高糖高胰岛素组的Glut4蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:高糖高胰岛素能够诱导3T3-L1脂肪细胞产生更强的胰岛素抵抗,这种抗性的产生可能是因为抑制了Glut4蛋白的表达获得的.     

不同时间缺氧对脂肪细胞炎症因子表达的影响

目的:探讨不同时间缺氧孵育后脂肪细胞炎症因子TNF-α和MCP-1表达的变化。方法:常氧(21%O2)和缺氧(1%O2)4、8、16 h孵育脂肪细胞,免疫印迹法检测葡萄糖转运子1(GLUT1)的表达,Real-time PCR法测定脂肪细胞TNF-α和MCP-1基因表达。结果:与常氧组相比,缺氧孵育的脂肪细胞GLUT1蛋白和TNF-α、MCP-1基因的表达均升高(P=0.002、P=0.016),并且随着缺氧时间的延长而显著升高。结论:缺氧造成脂肪细胞GLUT1和TNF-α、MCP-1的表达升高,缺氧时间越长,升高越明显。     

黄连与生地及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞脂联素与瘦素分泌的影响

目的：观察比较黄连、生地及其配伍含药血清对胰岛素抵抗（insulin resistance ,IR）3T3-L1脂肪细胞脂联素（adiponectin）、瘦素（leptin）分泌的影响,探讨黄连、生地及其配伍改善IR的作用机制,揭示黄连生地配伍原理。方法采用高糖联合高胰岛素诱导3 T 3-L1脂肪细胞产生IR ,分别给予黄连、生地、黄连＋生地、盐酸罗格列酮进行干预,以葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗量,ELISA 法检测脂联素和瘦素分泌水平。结果与正常组比较,模型组葡萄糖消耗量与脂联素水平显著降低（P＜0．01）,瘦素水平显著升高（P＜0．01）;与模型组比较,黄连组、生地组、黄连＋生地组、罗格列酮组葡萄糖消耗量均显著增加（P＜0．01）,其中黄连＋生地组葡萄糖消耗量显著高于黄连、生地各单药组（P＜0．05）;生地组、黄连＋生地组脂联素分泌显著升高（P＜0．01）,瘦素分泌显著降低（P＜0．05,P＜0．01）,黄连组脂联素、瘦素分泌均无明显差异（P＞0．05）,其中黄连＋生地组脂联素、瘦素分泌与单药生地组无明显差异（P＞0．05）。结论黄连、生地及其配伍能够促进IR脂肪细胞葡萄糖消耗量,改善IR ,其机制可能与促进脂联素分泌,减少瘦素分泌有关。此外,黄连、生地配伍改善 IR的作用强度优于各单药组,提示黄连、生地配伍具有协同作用。     

氯化钴诱导低氧对3T3-L1脂肪细胞脂连蛋白表达的影响

目的研究体外模拟低氧对小鼠3T3-L1脂肪细胞脂连蛋白（ADPN）表达的影响。方法体外培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞,将其诱导分化成为成熟的脂肪细胞,油红O染色鉴定脂肪细胞分化程度和脂质积聚情况。氯化钴（CoCl2）化学模拟脂肪细胞低氧环境,采用实时PCR（Real-TimePCR）检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和ADPNmRNA的表达,蛋白质印迹法（Westernblotting）检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的蛋白表达;酶联免疫吸附测定（ELISA）分析细胞培养上清液中ADPN蛋白的分泌水平。结果在CoCl,诱导3T3-L1脂肪细胞低氧的条件下,细胞内HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平均显著上调;细胞内ADPNmRNA表达和细胞培养上清液中ADPN蛋白的分泌水平均显著下降;HIF-1αmRNA与ADPNmRNA的表达水平呈显著负相关（r=-0．854,P〈0．001）。结论CoCl2诱导低氧能够下调3T3-L1脂肪细胞ADPN的表达,该作用可能与脂肪细胞代谢功能障碍和胰岛素抵抗有关。     

缺氧对3T3-L1脂肪细胞脂代谢的影响

目的 研究缺氧状态下,脂肪细胞脂代谢的变化.方法 缺氧[1％氧(O2)、94％氮(N2)、5％二氧化碳(CO2)]处理分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,Western-blotting观察不同时间点激素敏感型脂肪酶(HSL)、磷酸化HSL、磷酸化AMPK、脂肪酸合成酶(FASN)蛋白表达水平变化;收集培养液上清酶法测定甘油,分光光度法测定三酰甘油、游离脂肪酸、ATP脂肪细胞代谢产物.结果缺氧降低分化成熟的3T3-L1脂肪细胞ATP的产生;增加甘油及游离脂肪酸含量;激活AMPK,抑制FASN的蛋白表达,但缺氧对HSL蛋白表达无明显影响.结论 缺氧使脂肪细胞脂解增加,FFA水平升高.提示缺氧可能在肥胖炎症发生过程中起着重要作用.     

罗格列酮对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞脂联素、瘦素及抵抗素的分泌及mRNA表达的影响

目的 研究罗格列酮对胰岛素抵抗(IR) 3T3-L1脂肪细胞脂联素、瘦素及抵抗素的分泌及mRNA表达的影响.方法 将3T3-L1脂肪细胞分为5组:A组为对照组,B、C、D、E组为不同水平罗格列酮处理的IR组,分别给予终浓度为0、0.1、0.5、1.0 μmol/L的罗格列酮.检测各组细胞培养液的葡萄糖消耗量,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-RT-PCR)检测瘦素、脂联素及抵抗素的分泌及mRNA表达水平.结果 与B组比较,D、E组细胞分泌的疫素及抵抗素水平及其mRNA表达水平均降低,分泌的脂联素及其mRNA表达水平与葡萄糖消耗量均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).B组与C组细胞分泌的瘦素、脂联素及抵抗素水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 罗格列酮可以通过调节瘦素、脂联素及抵抗素的表达及分泌减轻脂肪细胞的IR.     

代综方对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型瘦素、抵抗素及肿瘤坏死因子α的影响

目的 观察中药代综方对棕榈酸(Palmitic acid, PA)诱导胰岛素抵抗(Insulin resistance, IR)的3T3-L1脂肪细胞中细胞因子瘦素、抵抗素、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。方法 采用传统“鸡尾酒式”诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成熟,用0.5 mmol/L PA建立IR模型。分为空白对照组、模型组、代综方低浓度组(含代综方生药量0.5 mg/ml)、代综方高浓度组(含代综方生药量2.0 mg/ml),干预48 h。葡萄糖氧化酶法检测培养上清中的葡萄糖浓度,计算葡萄糖基础消耗量(G_Basic)和胰岛素刺激下消耗量(G_Ins),评价胰岛素敏感性指数(ISI)。ELISA检测上清中瘦素、抵抗素、TNF-α的含量,Real-Time PCR检测瘦素、抵抗素、TNF-α的mRNA表达。结果 与空白对照组比较,模型组GIns、ISI均明显降低(P<0.01);与模型组比较,代综方高、低浓度组G_Basic、G_Ins、ISI...     

脂肪细胞因子与胰岛素抵抗关系的研究进展

现在研究认为脂肪组织是胰岛素抵抗(IR)产生的始发部位。脂肪组织除了能调节人体能量代谢平衡外,还可以分泌多种细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、瘦素、脂联素和抵抗素等。在已发现的脂肪细胞因子中,瘦素、TNF-α和脂联素等与IR密切关联。瘦素可抑制胰岛素分泌,TNF-α的分泌与胰岛素调节的葡萄糖代谢存在高度负相关。脂联素对于维持胰岛素敏感性和正常的糖代谢是必需的。同时,亦有一些细胞因子与IR的关系有待证实。本文就脂肪因子与胰岛素抵抗之间的关系进行综述。     

葡萄糖和胰岛素对脂肪细胞内脂素表达的作用

 目的  观察脂肪细胞经不同浓度葡萄糖和胰岛素干预后内脂素表达的改变,探讨内脂素在糖尿病发病过程中的作用。 方法  培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化成成熟脂肪细胞。采用不同浓度葡萄糖、胰岛素孵育脂肪细胞48h,RT-PCR和western blot技术检测3T3-L1脂肪细胞中内脂素mRNA和蛋白的表达水平 结果  与对照组比较,随着葡萄糖浓度的增加,3T3-L1脂肪细胞内脂素mRNA和蛋白的表达量下降（P均＜0.05）;在不同浓度胰岛素作用下,3T3-L1脂肪细胞内脂素mRNA和蛋白的表达量改变无统计学意义（P＞0.05）。  结论  高糖状态可抑制体外培养的脂肪细胞内脂素的表达,胰岛素浓度的改变对内脂素表达无影响。     

生存素对3T3-L1脂肪细胞中载脂蛋白E表达和分泌的影响

目的: 探讨生存素（Survivin）对3T3-L1脂肪细胞中载脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）表达和分泌的影响。方法: 构建Survivin过表达慢病毒载体及其对照载体，分别感染3T3-L1前脂肪细胞并进行分化培养。在分化第8天对细胞进行转录组分析。采用实时定量PCR检测3T3-L1脂肪细胞中ApoE mRNA的表达，蛋白质印迹法检测胞内及分泌的APOE蛋白表达水平。结果： 建立了稳定过表达Survivin的3T3-L1前脂肪细胞株，分化培养至第8天，过表达Survivin不影响脂肪细胞分化。转录组分析结果显示ApoE具有较高表达丰度，并且载脂蛋白家族中只有ApoE发生明显下调。Survivin过表达组细胞ApoE mRNA水平（t=9.676，P<0.01）以及蛋白水平（t=4.183，P<0.05）均显著低于对照组，并且细胞培养上清液中APOE分泌蛋白的表达水平同样显著低于对照组（t=5.683，P<0.01）。结论： Survivin在3T3-L1脂肪细胞中过表达时，能够在转录以及蛋白水平特异性下调3T3-L1脂肪细胞ApoE的表达。     

醛固酮对3T3-L1脂肪细胞PTEN及p-Akt蛋白表达的影响

目的 观察胰岛素抵抗（IR）的脂肪细胞中Aktser473磷酸化（p-Akt）水平和与张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶基因（PTEN）蛋白的表达,以及醛固酮和螺内酯处理后上述蛋白表达的变化,从而探讨醛固酮在IR发病机制中的作用。方法 通过地塞米松与胰岛素共同诱导3T3 L1前脂肪细胞建立IR模型,western blots方法检测正常分化及IR的脂肪细胞PTEN蛋白和p-Akt水平,观察醛固酮和螺内酯对细胞PTEN蛋白表达及p Akt水平的影响。结果 IR脂肪细胞PTEN的蛋白水平较正常分化脂肪细胞显著升高［（0.83±0.11）vs（0.63±0.06）,P＜0.05］,高浓度醛固酮可增加PTEN蛋白表达,经螺内酯处理后PTEN蛋白表达明显下调（P均＜0.05）;IR脂肪细胞模型p-Akt水平明显低于正常分化脂肪细胞［（0.52±0.12）vs（0.78±0.12）,P＜0.05］,高浓度醛固酮可下调p-Akt水平,螺内酯可部分逆转醛固酮的抑制作用（P均＜0.05）。结论 醛固酮可能通过PI3K-AKT通路导致IR的发生。     

3T3-L1脂肪细胞与胰岛素抵抗脂肪细胞miRNAs表达谱的差异性分析

目的探讨正常3T3-L1脂肪细胞和胰岛素抵抗(IR)脂肪细胞微小RNA(miRNAs)的差异性表达,并进行初步分析。方法采用高糖(25 mmol/L葡萄糖)/高胰岛素液(1μmol/L)处理3T3-L1脂肪细胞24h,通过葡萄糖摄取实验判断IR脂肪细胞模型的建立;接着通过miRNA芯片技术,检测脂肪细胞和IR脂肪细胞中miRNAs的表达,并对其分析;随后借助生物信息学方法,对显著变化的2个miRNAs(miR-320和miR-21)寻找并筛检其可能调控的靶基因。结果共获得79个IR相关miRNAs(29个低表达,50个高表达,其中miR-320显著上调,miR-21显著下调),且筛选出与IR或糖尿病相关的靶基因共13个。结论获得了3T3-L1脂肪细胞和IR脂肪细胞miRNAs的差异性表达谱,为进一步研究这些miRNAs在IR和糖尿病的发病机制中的作用奠定了基础。     

杨梅素联合围脂滴蛋白对脂肪细胞脂解的影响

目的 研究杨梅素（Myric）与围脂滴蛋白（PLIN1）联合作用对3T3-L1 脂肪细胞脂解的影响。 方法 常规培养及诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,筛选出Myric 最佳干预浓度和时间。Myric 联合sh-RNA 干 扰载体对已诱导分化成熟的3T3-L1 脂肪细胞进行联合干预,实验共分为四组：联合干预组（Myric+sh-RNA）、 转染组（sh-RNA）、杨梅素组（Myric）和空白组。采用油红O 进行脂滴染色,观察脂滴形态;采用酶学方法 检测细胞中三酰甘油（TG）和甘油含量,了解细胞脂解情况;采用Western blot 检测脂肪细胞中PLIN1A、三 酰甘油脂肪酶（ATGL）和激素敏感性脂肪酶（HSL）的表达量。结果 以浓度为100 μmol/L 的Myric 干预 72 h 时,细胞内TG 含量最低,甘油含量最高,脂解效果最佳,与其他浓度和干预24 h 比较,差异有统计学意义 （P <0.05）。联合干预后,与Myric 组和sh-RNA 组比较,Myric+sh-RNA 组细胞内TG 含量下降,甘油含量升 高,脂滴形态变小,数量减少,差异有统计学意义（P <0.05）。同时,Myric+sh-RNA 组PLIN1A 蛋白表达量降低, ATGL 和HSL 蛋白表达量升高,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 Myric 联合PLIN1 可以更有效降低PLIN1 表达量,提高ATGL 与HSL 的表达量,从而提高脂解效率。