槲皮苷通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导胃癌SGC7901细胞凋亡

目的:探讨槲皮苷是否通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡。方法:选取SGC7901细胞作为研究对象,采用MTT法检测槲皮苷对SGC7901细胞的毒性作用并测定IC50值。实验分为对照组(不加药处理)、槲皮苷组(采用200μmol/L槲皮苷处理)、PI3K/AKT通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)组(采用100μg/L IGF-1处理)和槲皮苷+IGF-1组(采用200μmol/L槲皮苷+100μg/L IGF-1共处理)。处理48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测cleaved caspase-3、p-AKT(Ser473)、AKT、p-PI3K(Tyr508)和PI3K的蛋白水平。结果:从100μmol/L开始,随着槲皮苷处理浓度的逐渐升高,SGC7901细胞活力显著降低(P 0. 05),槲皮苷作用48 h的IC50值为275. 40μmol/L。200μmol/L槲皮苷作用SGC7901细胞48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白水平显著上升(P 0. 05),p-AKT和p-PI3K蛋白水平显著降低(P 0. 05),然而IGF-1与槲皮苷共同作用时,IGF-1可逆转槲皮苷对SGC7901细胞的作用效果。结论:槲皮苷能够诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

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目的:氧化苦参碱联合5-FU 对人胃癌SGC-7901 细胞生长的协同抑制作用及相关机制研究。方法:通过不同浓度的氧化苦参碱单独及联合应用5-FU 作用于SGC-7901 细胞24、48、72 h,采用MTT 法检测细胞活力,HOECHST 染色法检测细胞凋亡,免疫细胞法检测胃癌SGC-7901 细胞内血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,以逆转录聚合酶链式反应RT-PCR 法观察SGC-7901 细胞VEGF mRNA 的转录情况。结果:与空白组比,氧化苦参碱中剂量、高剂量组及其联合5-FU 组均能显著抑制人胃癌SGC-7901 细胞生长,并诱导其凋亡(P<0.01);与单独使用5-FU 组相比,联合用药组细胞增殖抑制率和凋亡率均显著增高(P<0.05);氧化苦参碱及联合5-FU 组中人胃癌SGC-7901 细胞的VEGF mRNA 转录及其蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:氧化苦参碱对5-FU 的胃癌SGC-7901 细胞的增殖抑制和诱导凋亡具有协同作用;促进氧化苦参碱对VEGF 的基因和蛋白表达抑制作用可能是其机制之一。     

Fas基因转导逆转胃癌耐药细胞的作用及其机制分析

目的　 观察Fas基因转导人胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR对化疗药物的敏感性 ,并初步探讨其机制。方法　 以流式细胞仪检测Fas基因转导和对照胃癌细胞在细胞周期中的分布 ;用MTT实验检查癌细胞对多种药物的敏感性 ;用免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞P 糖蛋白 (P gp)和拓扑异构酶II(TopoII)的表达。结果　与胃癌细胞SGC790 1和pBK SGC790 1/VCR相比较 ,Fas SGC790 1/VCR在G2期减少 ,S期增多 ,并出现明显的凋亡峰 ;Fas SGC790 1/VCR对DDP ,MMC和 5 Fu的敏感性增加 ,但对VCR和DOX的敏感性无明显变化 ;SGC790 1,pBK SGC790 1/VCR和Fas SGC790 1/VCRTopoII的表达无明显差别 ;Fas SGC790 1/VCRP gp的表达水平明显低于 pBK SGC790 1/VCR ,仅显示弱阳性。 结论　Fas基因可在一定程度上逆转人胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR的多药耐药性 (MDR) ,其涉及的相关机制可能是增强细胞对凋亡诱导剂的敏感性 ,以及降低细胞P gp的表达水平     

姜黄素通过ATK/FoxM1信号通路调控胃癌干细胞增殖及凋亡

BACKGROUND:Curcumin has crucial inhibitory effects on various cancer cells and cancer stem cells. However, its effect on gastric cancer stem cells and the underlying mechanism of this effect are unclear. OBJECTIVE:To explore the effect of curcumin on gastric cancer stem cells and the underlying mechanism. METHODS:Tumor sphere-forming assay and gastric cancer stem cell markers (EpCAM and CD44) were used to separate gastric cancer stem cells from gastric cancer SGC7901 cell lines. Effects of curcumin on the proliferation and apoptosis of gastric cancer stem cells were determined by MTT and flow cytometry analysis, respectively. Western blot analysis was used to detect the expression levels of FoxM1, p-AKT, and AKT. LY294002, an inhibitor of the PI3K/AKT pathway, was used to determine the regulatory relationship between AKT and FoxM1 signaling pathways. RESULTS AND CONCLUSION:The EpCAM+/CD44+ gastric cancer stem cells were successfully isolated from SGC7901 cells. MTT assay showed that curcumin inhibited the proliferation of gastric cancer stem cells, while flow cytometry analysis showed that curcumin induced apoptosis in gastric cancer stem cells. In addition, the expression levels of p-AKT and FoxM1 were decreased by curcumin treatment. After being treated by LY294002, the expression levels of p-AKT and FoxM1 were down-regulated markedly. In conclusion, curcumin can inhibit cell proliferation and induce apoptosis in gastric cancer stem cells via the ATK/FoxM1 signaling pathway.     

全反式维甲酸增加胃癌细胞对放射的敏感性

目的:研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对胃癌细胞SGC-7901存活率与放射敏感性的影响,并讨论其可能的机制。方法:MTT法检测细胞存活率;平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测细胞的放射敏感性和细胞周期;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测细胞中Bax、Bcl-2、survivin与NF-κB的m RNA表达。结果:ATRA可降低SGC-7901细胞存活率,当浓度到达8μmol/L时,抑制作用达到最大;ATRA联合X射线处理后,与单纯放射处理相比,平均致死剂量(D0)和准阈剂量(Dq)显著变小(P0.05),且拟合的生存曲线明显下移;ATRA能显著降低放射诱导的细胞G_2/M期阻滞,下调SGC-7901细胞Bcl-2与survivin的m RNA表达(P0.05),上调Bax与NF-κB的m RNA表达(P0.05)。结论:ATRA能够增加胃癌细胞SGC-7901的凋亡及放射敏感性,可能与抑制细胞周期G_2/M期的阻滞作用、下调Bcl-2与survivin m RNA表达和上调NF-κB与Bax mRNA表达有关。     

PPZ与5-FU对胃癌细胞生长、自我更新能力的影响及相互作用

目的 探讨泮托拉唑（PPZ）、5-氟尿嘧啶（5-FU）在调控胃癌细胞及胃癌干细胞生长、自我更新能力中的影响及其相互作用。方法 将SGC-7901和HGC-27细胞分为3组实验:5-Fu处理组、PPZ处理组和5-Fu+PPZ组。通过细胞成球实验检测PPZ加药前后胃癌细胞系（SGC7901、HGC-27）中胃癌细胞及胃癌干细胞自我更新能力的变化,观察PPZ对胃癌细胞系成球能力干扰情况;MTT法检测PPZ、5-FU对胃癌细胞及胃癌干细胞增殖能力的影响,观察PPZ对5-FU药物敏感性的调节作用。结果 PPZ加入后胃癌细胞系（SGC7901、HGC-27）和胃癌干细胞系（SGC7901-SP、 HGC-27-SP）自我更新率比PPZ加入前的自我更新率下降（P＜0.01）;PPZ、5-FU对胃癌细胞（SGC7901、HGC-27）增殖均有抑制作用,而5-Fu+PPZ联合组抑制最为明显,抑制增殖的作用在24 h开始出现,96 h最低,均低于0 h。PPZ对胃癌干细胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖均有抑制作用,在48 h逐渐明显;加入PPZ后,胃癌干细胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）两个细胞系酶标仪检测到的吸光值在48 h、72 h、96 h时均下降。72 h和96 h时,加与不加PPZ的吸光值比较,统计学意义显著（P＜0.01）。不同浓度（0~50 μg/ml）5-FU对胃癌干细胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖抑制的差异不显著;而加入PPZ 100 μg/ml后,随着5-FU浓度的增加增殖抑制作用逐渐增强,在40~50 μg/ml浓度的5-FU对胃癌干细胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖抑制更加明显;加入PPZ 后,40 μg/ml及50 μg/ml浓度的5-FU作用下胃癌干细胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）酶标仪检测到的吸光值均降低。结论 PPZ能有效抑制胃癌细胞及胃癌干细胞的自我更新能力,抑制其增殖,并可提高其对5-FU的化疗敏感性。PPZ有望成为逆转胃癌耐药的一类联合治疗药物应用于临床。     

ZAC基因在奥曲肽抑制胃癌细胞体外增殖通路的作用

目的 探讨ZAC基因在生长抑素类似物奥曲肽（OCT）抑制胃癌细胞增殖通路的作用。方法 分别以不同浓度OCT处理胃癌细胞BGC823和 SGC7901不同时间,MTT法筛选其增殖抑制的有效条件。OCT处理胃癌细胞（有效浓度/不同时间,有效时间/不同浓度）,Western blotting检测
OCT对胃癌细胞ZAC基因的效应。设计3条ZAC基因RNA干扰片段,分别插入pSUPER-EGFP-I载体,构建3个ZAC-shRNA表达载体（pSUPER-EGFP-ZAC/1 pSUPER-EGFP-ZAC/2和pSUPER-EGFP-ZAC/3）。经酶切和序列分析鉴定后,分别转染胃癌细胞BGC823和SGC7901。经G418筛选,RT-PCR鉴定,建立
ZAC基因敲低（knock-down）的胃癌细胞系。以有效条件OCT孵育胃癌细胞（对照组）和ZAC基因敲低胃癌细胞（实验组）,MTT法检测OCT对胃癌 细胞的生长抑制效应。结果 OCT抑制胃癌细胞增殖的有效条件为10nmol/L 孵育24h;OCT以时间和浓度依赖的方式诱导胃癌细胞ZAC基因表达。酶切及序列分析鉴定表明ZAC-shRNA表达载体构建成功。转染shRNA-ZAC/2的胃癌细胞,其ZAC mRNA水平明显降低（P<0.05）,为ZAC基因敲低胃癌 细胞。ZAC基因敲低胃癌细胞的增殖明显高于对应的BGC823细胞和SGC7901细胞（P<0.05）。OCT孵育后,BGC823细胞和SGC7901细胞的增殖明显降低（P<0.05）。然而,ZAC基因敲低胃癌细胞的增殖无明显改变（P>0.05）。结论 OCT以时间和浓度依赖的方式诱导胃癌细胞ZAC基因表达;ZAC 基因在OCT抑制胃癌细胞增殖通路中具有重要作用。     

亚硒酸钠通过线粒体途径诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制

目的通过检测亚硒酸钠诱导人胃癌SGC-7901细胞系凋亡过程中Bax/Bcl-2、线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)表达的变化,探讨亚硒酸钠诱导胃癌细胞凋亡的作用机制。方法将人胃癌细胞系SGC-7901细胞加入不同浓度亚硒酸钠(2.5、5.0、10.0mol/L)的培养液中培养24h、48h,免疫细胞化学法和免疫印迹法(Western blotting)检测Bax/Bcl-2蛋白的表达;以罗丹明123(rhodamine123)为细胞染色剂,采用流式细胞技术检测细胞的线粒体膜电位的变化;Western blotting检测细胞质Cyt C和线粒体Cyt C蛋白含量的变化。结果免疫细胞化学法和Western blotting检测结果显示,亚硒酸钠能够能够提高Bax蛋白的表达(P0.05)、降低Bcl-2蛋白的表达(P0.05),且呈剂量依懒性;流式细胞术结果显示,亚硒酸钠能够降低细胞线粒体膜电位;提示:亚硒酸钠可以通过改变Bax、Bcl-2蛋白的含量,降低线粒体的膜电位来诱导细胞凋亡。Western blotting检测结果显示,亚硒酸钠能够提高细胞质Cyt C蛋白的表达(P0.05)并降低线粒体内Cyt C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内的Cyt C向细胞质内释放。结论亚硒酸钠通过上调Bax并下调Bcl-2蛋白表达,降低线粒体膜电位,促进Cyt C从线粒体释放到细胞质,通过线粒体途径诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

Nucleostemin基因在姜黄素抑制胃癌SGC-7901细胞增殖中的意义

目的探讨NS基因在姜黄素抑制胃癌SGC-7901细胞株增殖和诱导凋亡中的作用。方法不同浓度姜黄素作用于胃癌SGC-7901细胞株,利用MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测姜黄素作用前后NS基因表达量的变化,流式细胞仪法检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果姜黄素能显著抑制体外培养的胃癌SGC-7901细胞株增殖,并呈量效和时效关系;流式细胞术显示G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,检出亚二倍体凋亡峰;RT-PCR显示NS基因表达量下降。结论姜黄素显著抑制胃癌SGC-7901细胞株增殖,并促进凋亡,其发生可能与NS基因表达下降有关。     

上皮间质转化在胃癌SGC7901细胞向胃癌干细胞转化过程中的作用

BACKGROUND: Studies have found that epithelial-mesenchymal transition is closely related with tumor invasion, metastasis, and drug resistance, but studies on the role of epithelial-mesenchymal transition in the transformation process of gastric cancer cells SGC7901 to gastric cancer stem-like cells are rarely reported. OBJECTIVE: To explore the effect of epithelial-mesenchymal transition in the transformation process of gastric cancer cells SGC7901 to gastric cancer stem-like cells. METHODS: Vincristine-induced SGC7901 cells were cultured and screened to prepare gastric cancer stem-like cells. CD44 phenotype, morphological changes, stem cell-related markers, and epithelial-mesenchymal transition related molecules were detected. RESULTS AND CONCLUSION: After passage, vincristine-induced SGC7901 cells presented with morphological changes, and clonal cell spheres generated after serum-free suspension culture. Meanwhile, the proportion of SGC7901 cells positive for CD44 was decreased. Expression levels of SOX2, OCT4, Snail1 mRNA, Twist mRNA and Vimentin mRNA were significantly higher in the gastric cancer stem-like cells than SGC7901 cells, but the expression level of E-caderin was lower in the gastric cancer stem-like cells than SGC7901 cells. These findings indicate that gastric cancer cells SGC7901 can be successfully transformed into gastric cancer stem-like cells, and the epithelial-mesenchymal transition is involved in this transforming progress.       

藤黄酸增强人胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨藤黄酸（GA）对人胃癌SGC7901/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其分子机制。方法 采用顺铂（DDP）浓度梯度递增法构建人胃癌顺铂耐药株SGC7901/DDP细胞,采用细胞计数盒-8（CCK-8）法检测藤黄酸和顺铂对SGC7901/DDP细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法定量评价藤黄酸和顺铂的联合作用效果,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、Survivin、多药耐药相关蛋白2（MRP2）、磷酸化氨基末端蛋白激酶（p-JNK）（Thr183/Tyr185）和JNK的蛋白水平。结果 藤黄酸与顺铂各自单独作用48 h的IC₅₀分别为2.94 μmmol/L和39.76 μmmol/L;当抑制率超过20%时,两者联合应用呈协同效应;藤黄酸可协同增强顺铂诱导的细胞凋亡（P<0.05）,下调Survivin和MRP2蛋白水平（P<0.05）,上调Bax蛋白水平（P<0.05）,抑制JNK磷酸化（P<0.05）;JNK特异性抑制剂SP600125可下调MRP2蛋白水平（P<0.05）。结论 藤黄酸可增强人胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性,这可能与藤黄酸通过抑制JNK信号通路下调MRP2蛋白表达,以及上调Bax蛋白表达和下调Survivin蛋白表达有关。     

地高辛对人胃癌SGC7901细胞生长和凋亡的影响

目的:探究地高辛对人胃癌SGC7901细胞生长和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人胃癌细胞SGC7901作为研究对象,采用CCK-8法检测地高辛的细胞毒作用并测定IC_(50),采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,采用Western blot法检测c-Src、p-c-Src(Tyr416)、Akt、p-Akt(Ser473)、ERK1/2和p-ERK1/2(Tyr204)的蛋白水平,采用RT-PCR法检测c-Src的mRNA表达水平。结果:随着地高辛浓度逐渐升高,自50nmol/L开始,SGC7901细胞的存活率逐渐降低(P0.05),当地高辛浓度达到500 nmol/L时SGC7901细胞的存活率降至最低(P0.05),地高辛作用24 h的IC_(50)为191.45 nmol/L;200 nmol/L地高辛作用SGC7901细胞24 h后,与对照组相比,细胞凋亡率显著升高(P0.05),G_0/G_1期细胞比例明显升高(P0.05),c-Src、ERK1/2和Akt蛋白的磷酸化水平显著下降(P0.05),c-Src的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05),细胞迁移率降低(P0.05)。结论:地高辛可在体外诱导人胃癌细胞SGC7901的凋亡和G0/G1期阻滞,这可能与其下调c-Src基因表达以及抑制ERK1/2和Akt蛋白磷酸化有关。     

Study on Optimisation of Extraction Process of Tanshinone IIA and Its Mechanism of Induction of Gastric Cancer SGC7901 Cell Apoptosis

The objective of this paper was to investigate the extraction process of tanshinone IIA and its mechanism of induction of gastric cancer SGC7901 cell apoptosis. Extraction process of tanshinone IIA was optimised by orthogonal experimental method, and its effect on gastric cancer SGC7901 cell apoptosis was observed using MTT assay and electron microscopy. The optimum extraction process of tanshinone IIA was as follows: addition of a 10-fold amount of 80% ethanol, one-time extraction, and extraction time of 45 minutes. The study concluded that tanshinone IIA can induce apoptosis of gastric cancer SGC7901 cells.     

胃癌干细胞CSC-G在胃癌侵袭和转移中的作用

BACKGROUND: Studies have shown that cancer stem cells play an important role in tumor invasion and metastasis, but studies on the role of gastric cancer stem cells in invasion and metastasis of gastric cancer cells were rarely reported. OBJECTIVE: To study the effect of gastric cancer stem cells CSC-G on invasion and metastasis of gastric cancer cells. METHODS: Gastric cancer stem cells CSC-G and gastric cancer cells SGC7901 were cultured in vitro for 10 days followed by spherical colony formation assay, western blot assay for detecting OCT4, SOX2, E-cadherin and CD44 protein expression levels in gastric cancer stem cells CSC-G and gastric cancer cells SGC7901, and Transwell assay for detecting the invasion and migration of gastric cancer stem cells and gastric cancer cells SGC7901. RESULTS AND CONCLUSION: Gastric cancer cells SGC7901 in RPMI1640 medium presented with adherent growth and were quadrilateral or polygonal after passage; gastric cancer stem cells CSC-G in serum-free medium presented with suspension growth, and adherent gastric cancer stem cells were spindle-shaped or round. Compared with gastric cancer cells SGC7901, the protein expressions of OCT4, SOX2 and CD44, the number of cancer cell spheres and the number of trans-membrane cells were significantly increased in the gastric cancer stem cells CSC-G (P < 0.05), and the expression of E-cadherin protein was significantly decreased (P < 0.05). These findings indicate that the gastric cancer stem cells CSC-G can be successfully cultured in vitro, and have enhanced invasion and migration compared with the gastric cancer cells SGC7901, which play an important role in gastric cancer invasion and metastasis.      

甲基莲心碱对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性的逆转

目的:研究甲基莲心碱(Nef)逆转耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测长春新碱(VCR)的细胞毒性;PI染色流式细胞计数测定VCR诱导细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞P-gp和MRP的表达。结果:Nef(5、10μmol·L^-1)对人胃癌细胞(SGC7901)和耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)无显著毒性作用,VCR对敏感株SGC7901的IC₅₀为0.06mg·L^-1,而对MDR细胞株SGC7901/VCR的IC₅₀为2.32mg·L^-1,SGC7901/VCR较SGC7901对VCR耐药39倍,Nef(2.5、5、10μmol·L^-1)能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC₅₀从2.32mg·L^-1依次下降至0.34、0.12、0.05mg·L^-1,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8。Nef(2.5、5、10μmol·L^-1)能降低SGC7901/VCR细胞对VCR的凋亡抗性,其作用强于维拉帕米(VRP)。SGC7901/VCR细胞较SGC7901细胞高表达P-gp、MRP,Nef(10μmol·L^-1)处理24h后,SGC7901/VCR细胞P-gp、MRP的表达明显低下。结论:Nef具有逆转耐长春新碱人胃癌细胞的MDR作用,其作用机理与下调P-pg和MRP表达有关。     

RegⅠ在胃泌素促胃癌细胞体外增殖通路中的作用

目的 探讨再生蛋白I (RegⅠ)在胃泌素刺激胃癌细胞增殖通路中的作用.方法 根据RegⅠ cDNA已知序列,在线设计3个小干扰RNA,并经基因库同源性比较,构建其RegⅠ-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-REG/1、pSUPER-EGFP-REG/2和pSUPER-EGFP-REG/3),利用脂质体2000转染试剂分别转染胃癌细胞BGC823细胞株、SGC7901细胞株,同时设转染空质粒的实验对照组和无质粒转染的空白细胞组.后经G418筛选建立稳定转染细胞株.RT-PCR检测RegⅠ基因mRNA的转录水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胃泌素孵育对胃癌细胞增殖的效应.结果 酶切及测序鉴定,插入片段正确,3个RegⅠ-shRNA表达载体构建成功;RT-PCR显示,pSUPER-EGFP-REG/1可有效抑制RegⅠ mRNA在胃癌细胞BGC823、SGC7901的转录.Western boltting结果显示,BGC823和SGC7901细胞的RegⅠ蛋白表达率分别下调到空载体对照组的(45±4)%和(53±4)%;MTT结果显示,RegⅠ基因表达抑制胃癌细胞系的增殖效率均降低(P＜0.05).胃泌素孵育后,胃癌细胞BGC823、SGC7901的增殖效率均增加(P＜0.05),而RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系增殖效率则无明显改变(P＞0.05).结论 实验成功建立了RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系; RegⅠ基因可能对胃泌素促胃癌细胞的增殖有促进的作用.     

新型光敏剂治疗敏感及耐药胃癌的实验研究

目的 探讨一种新型光敏剂DTP对敏感胃癌细胞(SGC7901)及长春新碱耐药胃癌细胞(SGC7901/VCR)的光动力学治疗作用.方法 采用荧光显微镜间接确认SGC7901及SGC7901/VCR细胞膜上P-糖蛋白(P-gp)的表达情况,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测DTP对SGC7901及SGC7901/VCR细胞的光动力学杀伤作用,荧光分光光度计测定两种细胞内的DTP吸收量,激光共聚焦显微镜观察DTP在两种细胞内的分布位置.结果 SGC7901细胞膜上几乎无P-gp分布,而SGC7901/VCR细胞膜上存在P-gp高表达.新型光敏剂DTP对SGC7901及SGC7901/VCR细胞均具有较强的光动力学杀伤作用,其中对SGC7901/VCR细胞的作用相对较弱(P＜0.05),且P-gp抑制剂维拉帕米或环孢素A的存在均不能增强DTP光动力学治疗对SGC7901/VCR细胞的杀伤作用(均P＞0.05).SGC7901细胞内的DTP吸收量高于SGC7901/VCR细胞(P＜0.05),且P-gp抑制剂维拉帕米和环孢素A均不能增加SGC7901/VCR细胞内的DTP吸收量(均P＞0.05).DTP分布于SG-C7901细胞的溶酶体以及SGC7901/VCR细胞的溶酶体和线粒体内.结论 新型光敏剂DTP并非多药转运蛋白P-gp的底物,其对SGC7901/VCR细胞较弱的光动力学杀伤作用与其细胞膜上过表达的P-gp无关,可能与DTP在两种细胞内的分布位置不同有关.     

反义人钙周期素结合蛋白编码基因转染对胃癌细胞多药耐药性的影响

目的 研究hCacyBP编码基因在胃癌多药耐药机制中的作用。方法 采用Northern杂交，检测SGC7901细胞及SGC7901／ADR细胞中hCacyBP mRNA表达水平的差异。将hCacyBP cDNA克隆到pcDNA3.1中，构建反义核酸真核表达载体pcDNA3.1/hCacyBP-，并转染耐阿霉素人胃癌细胞，用RT－PCR检测转染细胞中hCacyBP mRNA水平的变化。用MTT比色法和FCM，分别检测SGC7901／ADR细胞，pcDNA3.1/hCacyBP-和pcDNA3.1分别转染的SGC7901／ADR细胞，对ADR的药物敏感性和胞内ADR的蓄积浓度。结果 Northern杂交证实，SGC7901／ADR细胞中hCacyBP mRNA表达的水平显著高于SGC7901细胞。成功地构建了pcDNA3.1/hCacyBP-。以pcDNA3.1/hCacyBP-转染的SGC791／ADR细胞中hCacyBP mRNA的表达水平，显著低于空载体转染及未转染的SGC791／ADR细胞。MTT检测表明，转染pcDNA3.1/hCacyBP-细胞，对ADR的药物敏性较空载体转染及未转染的SGC7901／ADR细胞有所增高，生存率较后两者为低。FCM显示，转染pcDNA3.1/hCacyBP-的SGC7901／ADR细胞，转染pcDNA3.1及未转染的SGC7901／ADR细胞内ADR的蓄积浓度，分别为6．72，5．62和5．54。结论 hCacyBP编码基因对胃癌细胞的MDR有一定的影响，CacyBP可能是一种胃癌细胞MDR中的重要分子。     

胃癌SGC7901/DDP细胞microRNA的表达谱分析及其在耐药逆转中的作用

 目的：分析胃癌SGC7901/DDP细胞microRNA表达谱及其耐药特性,研究筛选出的microRNA-200c对SGC7901/DDP细胞耐药的影响。方法：采用MTT法检测细胞的药物敏感性;应用microRNA芯片进行表达谱分析;运用生物信息学对筛选出的microRNA进行靶点预测和生物学进程分析。采用实时荧光定量RT-PCR检测microRNA-200c的表达;采用细胞转染分析microRNA-200c对SGC7901/DDP细胞药物敏感性的影响。结果：SGC7901/DDP细胞对顺铂、阿霉素、5-氟脲嘧啶及紫杉醇的IC50均显著高于SGC7901细胞(P<0.05)。与SGC7901细胞相比,SGC7901/DDP细胞中表达上调和下调超过2倍的microRNA分别有5和14个。microRNA高低表达组预测的靶点均广泛参与信号传导、细胞周期、分化、凋亡、增殖等生物学进程。实时荧光定量RT-PCR分析证实microRNA-200c在SGC7901/DDP细胞中的表达显著降低(P<0.05),microRNA-200c能够显著降低SGC7901/DDP细胞对顺铂、阿霉素、5-氟脲嘧啶及紫杉醇的IC50(P<0.05)。结论：SGC7901/DDP细胞的多药耐药特性可能与microRNA表达谱的改变有关,其耐药表型的逆转可能与microRNA-200c的表达有关。