丙型肝炎病毒高变区1模拟表位7肽细胞免疫应答作用的研究

目的探讨丙型肝炎病毒高变区1模拟表位7肽在体外刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后的细胞增殖情况。方法选用经7肽皮下多点免疫和脾内直接注射两种免疫途径的免疫小鼠,无菌条件下分离脾淋巴细胞后,实验组分为刺激组与未刺激组,刺激组脾细胞再经7肽刺激,应用单溶液细胞增殖检测法体外检测7肽对免疫小鼠脾淋巴细胞在不同浓度和不同培养时间点增殖的影响。结果体外7肽刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后,刺激组的脾淋巴细胞增殖反应与未刺激组比较存在促进作用,与对照组比较出现了明显的增殖反应。结论丙型肝炎病毒高变区1合成肽在体外对免疫小鼠脾淋巴细胞具有一定的促增殖作用。     

人参皂苷Rg1免疫佐剂作用的研究

目的：探讨人参皂苷Rg1的免疫佐剂效应。方法：分别将人参皂苷Rg1以及氢氧化铝胶（Alum）作为佐剂和卵清白蛋白（OVA）抗原混合免疫BALB/c小鼠,二次免疫后2周采血和取脾脏,分离血清,观察免疫前后血清OVA诱导特异性抗体及亚类含量变化,以及淋巴细胞在抗原刺激下的体外细胞增殖反应。结果：Rg1和抗原混合物免疫小鼠后,未见任何不良反应;Rg1组小鼠血清抗体IgG,IgG1和IgG2a水平显著高于抗原对照组（P〈0.05）;人参皂苷Rg1免疫小鼠受刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）和OVA刺激产生的淋巴细胞体外增殖能力显著高于OVA组（P〈0.05）,Rg1组小鼠脾淋巴细胞受OVA刺激后培养上清检测细胞因子IL-5和IFN-γ浓度显著高于OVA组。结论：Rg1是一种能同时激活Th1和Th2型免疫反应的免疫佐剂。     

芫花根总黄酮抗肿瘤活性研究

目的研究芫花根总黄酮（TFRD）抗肿瘤活性及其作用机制。方法以S180小鼠实体瘤对ICR小鼠造模。TFRD设3个剂量（25、50、75mg·kg^-1）,分别在造模的7d前、7d后和造模同时对小鼠灌胃14d。MTT法检测TFRD对体外培养的肿瘤细胞的毒性、给药后荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖和NK细胞的杀伤活性。结果3个剂量的TFRD、3种给药模式对小鼠S180肿瘤均的生长都表现出显著的抑制作用,对荷瘤小鼠的淋巴细胞增值、NK细胞的杀伤活性都有明显的提升作用,对体外培养的肿瘤细胞的细胞毒活性明显大于对正常细胞K293-T的细胞毒活性。结论TFRD具有显著的抗肿瘤活性,其抗肿瘤活性是通过对肿瘤细胞的选择毒性和提升机体免疫力实现的。     

小分子化合物J2对小鼠淋巴细胞的影响

目的 探讨小分子化合物J2对小鼠淋巴细胞的影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为3组,并分别以空白液、CsA、J2、连续腹腔注射12 d.取脾细胞分别给予ConA和抗CD3mAb刺激细胞增殖,采用ELISA法测定细胞上清中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10等细胞因子的含量.比较各组细胞增殖指数及细胞因子含量.结果 ConA刺激后J2组细胞增殖指数较对照组降低,分别为空白组(9.61±2.20),J2组(6.53±3.21);J2组IL-2和IFN-γ的含量较对照组低,两组差异均有统计学意义.CsA组与J2组比较差异均无统计学意义.抗CD3mAb刺激后J2组细胞增殖指数较对照组降低,分别为空白组(9.52±2.44),J2组(3.27±1.33);J2组IL-2和IFN-γ的含量较对照组低,两组差异均有统计学意义.CsA组与J2组比较差异均无统计学意义.各组IL-4及IL-10的含量差异无统计学意义.结论 J2有抑制T细胞活化,减少Th1细胞因子分泌的作用.     

per2对睡眠剥夺前后脾淋巴细胞功能影响的初步研究

目的 探讨生物钟基因per2对72 h睡眠剥夺(SD)前后脾淋巴细胞功能的影响.方法 将C57小鼠随机分为野生型小鼠对照组(WT)和野生型小鼠睡眠剥夺组(WT-SD);per2基因敲除小鼠(per2-/-)随机分为per2基因敲除小鼠对照组(per2-/-)和per2基因敲除小鼠睡眠剥夺组(per2-/--SD).SD组小鼠使用睡眠剥夺仪进行连续睡眠剥夺72 h.小鼠麻醉后摘脾,使用淋巴细胞分离液分离获得淋巴细胞悬液,利用流式细胞术检测各组别CD4+T、CD8+T、CD3+T以及B220+B比例变化,并通过脂多糖(LPS)刺激3 d体外培养进行流式染色检测上述各淋巴细胞的比例变化,同时使用CCK-8法检测各组小鼠脾B细胞的增殖情况.结果 与WT组小鼠相比,per2-/-组小鼠脾CD4+T、CD8+T以及B220+B细胞比例无明显改变;在进一步的睡眠剥夺实验中发现,per2基因敲除影响T细胞,尤其是CD8+T的组成变化.在LPS刺激实验中,与WT组相比,SD组小鼠脾淋巴细胞增殖更加明显,且与WT-SD组相比,per2-/--SD组B220+B细胞比例增加.同样睡眠剥夺应激条件下,小鼠脾淋巴细胞增殖无明显变化,但与WT-SD组相比,per2-/--SD组脾B细胞降低同时对应T细胞比例升高.结论 per2对脾淋巴细胞的组成影响较小,但在一定程度上参与调节睡眠剥夺后B淋巴细胞对LPS的增殖反应.     

乙型肝炎患者外周血中淋巴细胞产生白细胞介素-2水平的检测

白细胞介素-2(IL-2)是机体免疫反应过程中的一个中心调节分子,参与各种免疫调节过程。IL-2可促使T细胞增殖,活化杀伤细胞,增强B细胞抗体分泌。IL-2在体内的活性变化与许多疾病的发生及转归有密切关系。因此,检测乙肝患者淋巴细胞在植物血凝素(PHA)刺激下产生IL-2水平,可以间接判断乙肝患者细胞免疫状态。作者采用IL-2依赖的细胞株(CytotoxicT-lymphocyte line,CTLL)检测各型乙肝患者淋巴细胞在PHA刺激下产生IL-2的     

白细胞介素2提高HBV-S DNA疫苗的免疫效应

目的观察IL-2真核表达载体对HBV-SDNA疫苗诱导BALB/c小鼠的特异性免疫应答的影响.方法肌肉注射基因疫苗及IL-2真核表达载体,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性.结果免疫8周后,单纯注射pCR3.1-S及共注射IL-2真核表达载体的小鼠血清450nmA值分别为1.24±0.10及1.98±0.17.CTL细胞杀伤活性分别为(50.5±6.4)%及(61.9±7.1)%,两组均有明显差异(P＜0.01).结论IL-2的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答.基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染.     

中药蒲公英对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的　观察中药蒲公英对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法　利用氢化可的松导致小鼠免疫异常 ,观察蒲公英对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果　小鼠服用蒙古及碱地蒲公英的水煎剂 2 0g(生药 ) /kg后 ,可明显对抗氢化可的松所致的免疫抑制作用 ;两者对小鼠脾T淋巴细胞有显著的增殖作用 ,与模型组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,而对B淋巴细胞虽有一定的增加 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　蒲公英具有明显增加小鼠脾淋巴细胞增殖的作用 ,对氢化可的松所致的免疫抑制有保护作用 ,主要作用于T淋巴细胞 ,可增强细胞免疫功能。     

WST-8检测培养小鼠脾NK细胞增殖及杀伤活性的研究

目的采用WST-8检测培养小鼠脾NK细胞增殖活性,并探讨其杀伤活性.方法采用WST-8检测体外培养的不同细胞数量的小鼠脾NK细胞增殖活性,并采用乳酸脱氢酶法检测其杀伤活性.结果小鼠脾NK细胞在培养第3～5 d增殖最旺盛,第5 d进入平台期.1×106/孔的细胞数检测较敏感.培养5 d的NK细胞杀伤活性随着效靶细胞比例的增加而增加,在效靶比为20∶1时,杀伤活性最大.结论WST-8是一种理想的检测小鼠脾NK细胞增殖活性的方法,但其对NK细胞的敏感性较低,培养的NK细胞在效靶比为20∶1时杀伤活性最大.     

血小板第4因子对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用

目的：探讨血小板第4因子（plateletfactor4，PF4）对辐射损伤小鼠免疫系统的影响。方法：雄性BALB／c小鼠随机分为3组，第1组（单纯照射组）、第Ⅱ组（PF4保护组）、第Ⅲ组（正常对照组），第Ⅱ组在照射前26h及20h腹腔注射PF440μg／kg，全身一次性5Gy60Co—γ射线照射后瑞氏染色法计数外周血淋巴细胞百分数。胸腺、脾脏制成细胞悬液计数后，MTT比色法测定胸腺及脾细胞增殖能力。结果：第Ⅱ组小鼠外周血淋巴细胞百分数下降趋势较第1组明显减慢。胸腺、脾细胞计数，第Ⅱ组明显高于第1组。淋巴细胞增殖试验，第Ⅱ组与第1组相比，小鼠胸腺及脾细胞的增殖能力明显增强。结论：PF4对免疫系统有辐射保护作用，可明显增强辐射损伤小鼠的免疫功能。     

急性运动对小鼠免疫细胞功能的影响

急性运动后小鼠脾脏淋巴细胞对ConA分裂原和抗原的增殖反应明显增强;辅助性T细胞和抑制性T细胞的比值上升;脾淋巴细胞培养液中IL-2活性明显增强。     

CTLA4Ig基因修饰的骨髓基质细胞抑制淋巴细胞活化的实验研究

目的:研究CTLA4Ig基因修饰的骨髓基质细胞(BMSCs)对淋巴细胞活化的抑制效应。方法:CTLA4Ig重组腺病毒载体转染BMSCs,以RT-PCR、免疫细胞化学、蛋白印迹法检测CTLA4Ig的表达情况,MTT法、ELISA法观察转染上清对混合淋巴细胞反应(MLR)体系中淋巴细胞活化、增殖的抑制效应。结果:转染组及转染后传两代BMSCs中检测到CTLA4Ig基因的转录,CTLA4Ig弥漫表达于细胞浆;转染后检测培养上清CTLA4Ig即呈阳性,72h达高峰,传一代培养上清中仍可检测到;转染上清对淋巴细胞的增殖、IL-2分泌有明显的抑制作用。结论:CTLA4Ig重组腺病毒能有效介导CTLA4Ig基因在BMSCs中的表达。且CTLA4Ig能有效抑制淋巴细胞的活化、增殖。     

猴头菌多糖加胸腺素对骨髓移植小鼠免疫功能重建的疗效观察

给致死量照射的BALB/C小鼠移植同系小鼠2×10~7个骨髓细胞,移植15d后经腹腔注射猴头菌多糖(HEPS)200mg·kg~(-1)/d和人胚胸腺素(HFT)25mg·kg~(-1)/d,给药周期分别为10d和30d(短期治疗组和长期组治疗)。55d后对小鼠免疫功能和生存能力观测如下:长期治疗组小鼠脾细胞IL—2产生能力、对ConA刺激的增殖反应、混合淋巴细胞培养反应以及外周血白细胞数量均明显高于短期治疗组和各对照组;长期治疗组小鼠在普通环境中的生存能力也显著强于其它各组。     

“益寿回春汤”对运动小鼠细胞免疫机能的影响

本实验研究了“益寿回春汤”对运动小鼠细胞免疫机能的影响，结果表明：“益寿回春汤”使ＣｏｎＡ刺激的Ｔ淋巴细胞增殖反应明显高于安静对照组，使ＬＰＳ刺激的Ｂ淋巴细胞增殖反应既高于安静组又高于运动组；ＩＬ－２活性测定在“益寿回春汤”＋运动训练组明显高于安静对照组，比运动对照组有升高趋势；“益寿回春汤”＋运动训练组的ＣＤ４／ＣＤ８比值明显高于运动训练组。     

小鼠胸腺和牌细胞对淋巴因子反应的辐射剂量效应关系

作者研究了Ｃ５７ＢＬ／６小鼠经０．１～８．０ＧｙＸ射线全身照射后淋巴因子效应细胞反应性的变化．结果发现，照后２４小时胸腺细胞对ＩＬ－１反应的剂量效应曲线由两个斜率不同的成分组成，其Ｄ３７，分别为１．６５和４．０９Ｇｙ；照后１２和２４小时脾细胞对ＩＬ－２反应的Ｄ３７分别为５．５８和３．４６Ｇｙ；ＣＴＬＬ－２细胞在为０．５～１０Ｇｙ剂量范围内，对ＩＬ－２反应性呈剂量依赖性降低，Ｄ３７为８．７７Ｇｙ。提示ＩＬ－２效应细胞的辐射抗性高于ＩＬ－１效应细胞．     

Nrp1~+T细胞对淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响

目的 探讨表达神经纤毛蛋白质1(Nrp1)的T细胞(Nrp~+ T细胞)对体内外反应性淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响.方法采用流式细胞术分选近交系C57BL/6j小鼠脾脏中的Nrp1~+ T细胞作为调节细胞,在刀豆蛋白A(Co-hA)的刺激下与标记了羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)的C57BL/6j小鼠脾脏单个核细胞等比例共培养5d,对比观察反应细胞的增殖情况.采用流式细胞术分选C57BL/6j小鼠脾脏的Nrp1~+T细胞、CD4~+ CD25~+ Treg细胞和CD4~+ CD25~- T细胞各1×10~6个,分别经尾静脉注入到以Balb/C小鼠作为供者,以C57BL/6j小鼠作为受者行皮肤移植的小鼠体内,另外建立供、受体均为C57BL/6j小鼠的同品系对照组(注入等体积的RPMI 1640培养基).对比观察各组移植皮肤的存活情况.结果 加入Nrp1~+ T细胞的实验组增殖指数为50.92%±2.30%,明显低于未加入调节性T细胞的对照组(90.31%±1.83%,P=0.0169).实验组移植皮肤存活时间注入Nrp1~+ T细胞者为20.66±1.1ld,注入Nrp1~- T细胞者为13.20±0.76d,注入CD4~+ CD25~+ Treg者为17.67±1.0d,均明显高于对照组(9.70±1.23d,P<0.01).结论 Nrp1作为一种新型的T细胞表面分子,在淋巴细胞增殖体系中起着重要作用;与注入CD4~+ CD25~+ Treg相比,注入Nrp1~+ T细胞可明显延长小鼠移植皮肤的存活时间.     

dsRNA对X射线照射小鼠脾细胞增殖反应和UDS的影响

本文报道了不同浓度ｄｓＲＮＡ对１．５ＧｙＸ射线照射后小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ和ＬＰＳ诱导增殖反应和ＵＤＳ的影响。结果表明，当受照小鼠皮下注射ＲＮＡ浓度大于６．２５ｍｇ／ｋｇ体重时与单纯照射组相比脾细胞对ＣｏｎＡ和ＬＰＳ诱导的增殖反应明显增强（Ｐ＜０．０５），ＵＤＳ亦明显的增加（Ｐ＜０．０５）。提示，ｄｓＲＮＡ可以增强受照细胞对ＣｏｎＡ和ＬＰＳ诱导的增殖反应能力，并能抑制Ｘ射线诱发程序外ＤＮＡ合成的下降。     

IL-21通过 SENP1调控 NK细胞生物学特性

目的 探讨IL-21对小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1(SENP1)表达的影响及其对NK细胞生物学特性的调控作用.方法 以NK92细胞系为模型,采用慢病毒介导的Senp1基因干涉策略,抑制NK92细胞SENP1的表达.实时荧光定量PCR和Western印迹检测SENP1表达水平;利用CCK-8细胞增殖检测试剂盒测定细胞增殖活性;Annexin Ⅴ-APC/PI标记检测细胞凋亡.将K562细胞与NK92细胞共培养,荧光素酶报告基因方法检测NK92细胞的杀伤活性.结果 IL-21处理上调NK92细胞SENP1的表达;慢病毒介导Senp1-shRNA转染显著降低NK92细胞内Senp1 mRNA和蛋白表达水平.Senp1干涉组NK92细胞增殖能力较对照组明显降低.同时,干涉Senp1能促进NK92细胞凋亡,但对NK92细胞杀伤K562活性无显著影响.结论 IL-21上调NK92细胞SENP1的表达;干涉Senp1能抑制NK92细胞增殖,促进细胞凋亡,同时影响穿孔素表达和对肿瘤细胞的杀伤活性.     

骨性关节炎的联合基因治疗研究

目的:探讨白细胞介素1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)及白细胞介素10双基因转染在关节中的表达及在骨性关节炎(OA)治疗中的作用。方法:构建PLXRN-IL-1Ra、PLXRN-IL-10逆转录病毒载体,体外转染同种异体原代滑膜细胞,将转染了外源基因的滑膜细胞注射入兔骨性关节炎膝关节腔。外源基因注射后第7天,用PBS灌洗兔膝关节,ELISA分析转基因表达;外源基因注射后第14天处死动物,ELISA及免疫组化分析转基因表达,软骨滑膜常规石蜡切片观察病理改变,并进行软骨组织学评分。结果:外源基因转移后14天表达尚很稳定,治疗基因在受体关节的滑膜衬里部位表达。只接受人IL-1Ra基因治疗的兔膝关节软骨损坏明显减轻;单纯人IL-10基因治疗膝关节也有一定效果;两种基因同时导入时,有非常明显的抑制软骨破坏和软骨基质降解的作用。结论:以逆转录病毒为载体将IL-1Ra、IL-10同时转移入早期骨关节炎关节内,有稳定的外源基因表达,且联合基因治疗效果明显优于单独转移入其中任何一种基因,提示靶向于多种炎性因素的治疗更为有效。     

12周游泳运动对老龄小鼠免疫细胞功能的影响

对游泳１２周后的老龄Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾脏Ｔ细胞对ＣｏｎＡ的增殖反应能力、ＮＫ细胞活性及ＩＬ－１活性进行了研究。结果：（１）与年轻小鼠相比,老龄小鼠Ｔ淋巴细胞对ＣｏｎＡ的增殖能力、ＮＫ细胞活性、ＩＬ－１活性略有下降,但无显著差异（Ｐ＜０．０５）。（２）１２周训练后,隔天训练的老龄鼠Ｔ淋巴细胞对ＣｏｎＡ的增殖反应能力显著升高。（３）每天训练的老龄小鼠Ｔ淋巴细胞的增殖反应能力下降（Ｐ＜０．０５）。（４）１２周的训练没有使ＮＫ亚细胞和ＩＬ－１的活性发生显著性变化。