用cDNA表达阵列分析遗传性癫痫易感性大鼠大脑皮质的基因表达

癫痫是常见的神经系统疾病 ,其分子发病机理迄今仍不十分清楚。我们采用目前国际上最新的 c DNA表达阵列技术 ,比较研究了遗传性癫痫易感性 P77PMC大鼠和正常 Wistar大鼠大脑皮质的基因表达谱 [1 ] ,旨在寻找其中的差异表达基因 ,从基因水平阐明癫痫的发病机理。1　材料与方法1.1　材料　 (1)标本来源　 8只成年遗传性癫痫易感性P77PMC大鼠由北京医科大学实验动物学部提供 ,9只正常成年 Wistar大鼠由我校实验动物学部提供。大鼠使用前 1周均予以 12 0分贝 (d B) /日铃声刺激 1min,8只 P77PMC大鼠惊厥反应 ～ 级 [1 ] ,而正常 Wist…     

颞叶癫痫大鼠海马差异表达基因和蛋白质的筛选研究

目的：寻找颞叶癫痫大鼠海马组织的差异表达基因和蛋白质，以期为进一步探讨颞叶癫痫的发病机制，寻找新的治疗靶点和研发新的治疗手段奠定基础。方法:运用cDNA微阵列、二维电泳和MALDI-TOF-MS技术，分析氯化锂-匹罗卡品（LiCl-PILO）致痫大鼠模型海马组织的基因表达谱和蛋白质表达谱，并对发现的差异表达基因和差异表达蛋白质进行分析和鉴定结果和。结论：发现LiCl-PILO致痫大鼠海马组织中192个基因差异表达，159条可在GenBank中登陆，其中表达上调的基因84条，表达下调的基因75条；筛选到78个差异表达蛋白质斑点，其中31个在癫痫组表达下调，47个在癫痫组表达上调。有5个蛋白质最终鉴定确认。本研究结果为运用蛋白质组学方法寻找癫痫治疗新靶点研究提供实验依据。     

苯妥英钠耐药鼠神经元保护基因的表达

目的：探索神经元自身保护基因在苯妥英钠耐药鼠和非耐药鼠中的差异表达。方法：选择成年Wistar大鼠用电刺激杏仁核方法建立耐PHT和非耐药癫痢大鼠模型，应用含有4096条人类全长基因的cDNA表达谱芯片，检测耐药与非耐药组神经元保护基因表达谱的差异。结果：发现10条神经元自身保护基因的表达在两组间存在差异。结论：神经元自我保护机制的降低可能是难治性癫痫形成的原因之一。     

2型糖尿病大鼠糖脂代谢相关基因表达谱

目的研究伴胰岛素抵抗2型糖尿病大鼠与正常大鼠内脏脂肪组织基因表达的差异。方法Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠22只,实验组[小剂量链脲佐菌素(25mg/kg)加高脂饲料]12只,对照组(常规饲料)10只。从脂肪组织中抽取总RNA,纯化mRNA并逆转录为cDNA,Cy5标记实验组cDNA,Cy3标记对照组cDNA,获得两组动物来源的cDNA探针。cDNA探针与基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。用逆转录-PCR对其中两条基因进行验证。结果丙酮酸脱氢酶磷酸酶同工酶2基因在2型糖尿病大鼠脂肪组织表达降低、磷酸化酶激酶催化亚单位基因表达增高;脂酰CoA脱氢酶、烯酰CoA水合酶、脂酰CoA氧化酶、β-酮脂酰CoA硫解酶基因表达增高,脂蛋白脂肪酶基因表达降低。应用逆转录-PCR验证,脂蛋白脂肪酶基因在实验组表达降低(P<0.01),而β-酮脂酰硫解酶基因在实验组表达增高(P<0.01),与芯片结果一致。结论糖代谢限速酶影响胰岛素敏感性;脂解作用增加在2型糖尿病胰岛素抵抗和β细胞功能减退中起重要作用。     

遗传性癫痫大鼠海马脑源性神经营养因子蛋白的异常变化

目的本研究通过分析比较遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)与正常大鼠(Wistar)海马中BDNF蛋白表达与定位差异,进一步阐明癫痫发病机制。方法以正常Wistar大鼠为对照组,应用PCR技术,筛选阳性自发性癫痫大鼠TRM作为实验组;通过Western blot技术分别对TRM及Wistar大鼠海马中BDNF蛋白进行半定量检测;免疫组织化学技术分别测定TRM及Wistar大鼠海马中BDNF蛋白的定位表达变化。结果与Wistar大鼠相比,TRM大鼠的海马中BDNF蛋白表达无明显变化;BDNF蛋白在海马DG区和CA1区定位表达减少。结论与Wistar大鼠相比,TRM大鼠海马DG区和CA1区BDNF蛋白定位表达减少,表明癫痫的发作可能与BDNF蛋白在海马区定位的异常变化有关。     

惊厥对神经元缝隙连接蛋白基因表达的影响

神经元之间的缝隙连接蛋白Cx32是形成电突触的结构基础,电突触参与惊厥时神经元的同步化放电过程。为探讨惊厥对脑内神经元Cx32基因表达的影响,以遗传性癫痫易感大鼠P77PMC为模型,采用原位杂交的方法观察P77PMC大鼠听源性惊厥后脑内Cx32基因表达的变化。原位杂交结果显示：惊厥后在大脑皮层,海马脑区Cx32mRNA表达呈时间依赖性上调,惊厥后4h表达量明显增加,24h达高峰,结果提示：惊厥能上调神经元Cx32mRNA表达,从而可能使神经元之间的电突触联系增加,有利于神经元的同步化放电,加重惊厥的发生发展。     

D-半乳糖导致小鼠海马基因表达谱变化

本实验采用cDNA芯片研究D-半乳糖皮下注射小鼠海马的基因表达变化。小鼠皮下注射D-半乳糖[50m∥(kg．d)]60d造模，Morris水迷宫测试小鼠行为，分别提取模型组和对照组海马组织总RNA，掺入荧光分子Cy3和Cy5，经逆转录合成cDNA荧光探针与4000点小鼠cDNA基因芯片杂交。结果显示，在4000条待研究的基因中，两组小鼠海马间存在2倍表达差异的有76条，其中上调26条，下调50条。经分析，模型组基因表达谱与老年性痴呆(AD)相关基因表达谱在氧应激、能量代谢相关基因等方面有相似之处。提示D-半乳糖小鼠模型有可能作为拟AD病理模型。     

基因表达谱芯片筛选局灶性脑缺血大鼠脑相关基因的研究

目的:应用基因芯片技术研究局灶性脑缺血大鼠脑组织与假手术组大鼠脑组织基因表达谱的差异,探索局灶性脑缺血的发病机制。方法:将4096种大鼠基因PCR产物用CartesianPixsys7500点样仪按微矩阵排列制成基因芯片;按一步法抽提脑局灶性缺血大鼠脑组织与假手术组大鼠脑组织的总RNA;将等量的脑局灶性缺血大鼠脑组织与假手术组大鼠脑组织RNA分别逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA一链做探针,混合后与上述基因芯片杂交。用AxonGenepix4000B扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用GenepixPro4.0软件进行数字化处理和分析后比较两种组织基因表达谱的差异。结果:局灶性脑缺血大鼠与假手术组大鼠脑组织基因表达谱分析,发现211个差异表达基因,其中12个基因低表达,199个基因高表达。结论:本研究从脑局灶性缺血大鼠脑组织中筛选出大量的差异表达基因,说明这些基因可能参与局灶性脑缺血后脑损伤的发生及发展过程,从而为局灶性脑缺血的诊治提供新思路。     

神经肽Y在自发性癫痫大鼠海马内过表达

目的探讨自发性癫痫大鼠(SER)海马中,神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)的表达变化。方法 RT-PCR检测自发性癫痫大鼠和正常对照组Wistar大鼠海马中NPY mRNA表达,ELISA试剂盒法检测NPY蛋白浓度变化。结果自发性癫痫大鼠海马中NPY mRNA表达水平和NPY蛋白的浓度比正常对照组Wistar大鼠明显上调(P0.01)。结论 NPY mRNA和蛋白过表达可能与自发性癫痫发生机制有关。     

CML患者骨髓单个核细胞基因表达谱分析

目的 探讨慢性髓细胞性白血病(CML)的基因表达变化。方法 分别从正常人和CML患者骨髓样品中抽取骨髓单个核细胞,分离出cDNA片段,然后再逆转录成cRNA并标记后,与人的全基因组表达谱芯片杂交,ABI 1700芯片分析系统进行分析基因表达谱的差异。结果 总共发现差异表达的基因有6706个,其中与CML相关的差异基因有75个(上调19个,下调56个)。结论 全基因组寡核苷酸基因芯片在分析基因表达谱差异研究中具有广泛的应用价值。     

癫痫发作过程海马区脑源性神经营养因子及其相关蛋白的变化

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)与癫痫发作的关系。方法:将听源性癫痫鼠分成安静期、惊厥前期、惊厥期及惊厥后期4组,用免疫组织化学方法检测在惊厥不同阶段脑内海马区BDNF及相关蛋白,用图像分析仪比较各蛋白的阳性单位(PU)。Wistar大鼠作对照。结果:听源性癫痫鼠安静期BDNF显著低于对照组,受刺激兴奋后的惊厥前期、惊厥期及惊厥后期BDNF增高并略高于对照组;而BDNF受体(trkB)的表达在各阶段均增高,作为trkB激活的标志蛋白磷酸化酪氨酸(PY20)只在受刺激兴奋后的惊厥前期和惊厥期增高;具抑制性作用的神经肽(NPY)在惊厥前均处于低水平。结论:内源性BDNF可能分别通过调控NPY和激活受体trkB两个途径影响听源性癫痫鼠的神经兴奋性。     

卵巢良性肿瘤组织和卵巢上皮癌组织基因表达差异的研究

目的 探讨卵巢上皮癌组织相关基因的差异表达.方法 采用含384条肿瘤相关基因的cDNA阵谱检测了卵巢上皮癌组织及卵巢良性肿瘤的基因谱,分析卵巢上皮癌组织相关基因的差异表达.结果 在384条候选基因中,与卵巢癌相关的差异表达基因36条,其中23条表达上调,13条表达下调.结论 cDNA阵谱技术是筛查卵巢癌相关基因的有效方法.     

热适应差异表达基因消减文库的筛选

目的：研究热适应大鼠的肝细胞基因差异表达，探讨热适应的分子机制。 方法： 构建热适应差异表达基因消减文库［1］，扩增并克隆T/A载体形成重组质粒，转化感受态细胞后分离获得目的基因，采用PCR-select differential screening技术筛选差异表达基因，测序后所得序列与GenBank中的已知序列进行比对，确定其可能的功能。 结果： 确认8个上调表达基因，与GenBank中已知序列进行比较，证实其中有3种已知基因，5个新序列表达标签（EST）。 结论： 相关基因表达水平上调可能参与生物体热适应的信号转导通路，而p53可能是热适应分子环路的又一节点。     

听源性惊厥易感大鼠上丘突触素P38表达的研究

目的：探讨听源性惊厥易感大鼠上丘突触密度的变化情况。方法：免疫细胞化学方法和计算机图像分析技术。结果：P77PMC听源性惊厥易感大鼠上丘浅层和深层的P38免疫反应产物校正光密度值均显著高于正常Wistar大鼠,结论P77PMC大鼠上丘突触密度的改变可能与听源性惊厥易感性密切相关。     

重型乙型肝炎与无症状HBsAg携带者免疫相关基因表达差异的研究

目的：应用基因芯片研究重型乙型肝炎（FHB）与无症状HBsAg携带者（ASC）外周血单个核细胞（PBMC）免疫相关基因表达差异，方法：应用含8192条人cDNA的微阵列芯片和来自外周血单个核细胞标记的cDNA，分析了10例重型乙肝和10例无症状HBsAg携带者基因表达谱。通过应用GenePix4000扫描仪和ImaGene3.0分析软件比较Cy5标记的FHB来源cDNA与Cy3标记的ASC来源cDNA的杂交结果，获得个体基因的相对表达比值。结果：在8192个基因中，初筛出21个（0．25％）表达差异2倍以上的免疫相关基因。结论：在乙型肝炎病毒（HBV）感染机体致慢性重型肝炎过程中，全面改变了宿主细胞内免疫相关基因表达，这些差异表达基因可能与慢性重型肝炎的发生有关。     

Expression profile of microRNAs in rat hippocampus following lithium-pilocarpine-induced status epilepticus

Although microRNAs are expressed extensively in the central nervous system in physiological and pathological conditions, their expression in neurological disorder of epilepsy has not been well characterized. Here we investigated microRNA expression pattern in post status epilepticus rats (24h after status). Rat MicroRNA array and differential analysis had detected 19 up-regulated microRNAs and 7 down-regulated microRNAs in rat hippocampus, and four randomly selected deregulated microRNAs (microRNA-34a, microRNA-22, microRNA-125a, microRNA-21) were confirmed by qRT-PCR, then their expression alterations in rat peripheral blood were analyzed. We found that these four deregulated microRNAs were also differentially expressed in rat peripheral blood, and trends for their blood expression alterations were just the same as their counterparts in rat hippocampus. Thus, our results have not only characterized the microRNA expression profile in post status epilepticus rat hippocampus but also demonstrated that some rat hippocampal microRNAs were probably associated with rat peripheral blood microRNAs. Moreover, targets of these deregulated microRNAs were analyzed using bioinformatics and the identified enriched MAPK pathway and long-term potentiation pathway might have been involved in molecular mechanisms concerning neuronal death, inflammation and epileptogenesis.     

听源性惊厥易感大鼠惊厥和点燃后前脑结构内的c—fos表达

为探讨听源性惊厥点燃和前脑结构的关系，用免疫细胞化学方法结合体视学分析，研究Ｗｉｓｔａｒ种系的听源性惊厥易感大鼠惊厥和点燃后，前脑结构内ｃ－ｆｏｓ表达的差异。结果显示，１．正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠接受一次强音刺激后，海马，齿状回，杏仁核，内嗅皮质，嗅周皮质和额－顶皮质内未见Ｆｏｘ阳性神经元；２．Ｐ７７ＰＭＣ大鼠一次惊厥后，除海马，齿状回外，上述被检各区内可见广泛的Ｆｏｓ阳性神经元，其分布具有区域差异．