Co2+对红霉素生物合成过程的影响

研究了红霉素生物合成过程中糖代谢相关的关键酶:己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、磷酸果糖激酶和异柠檬酸脱氢酶,以及合成红霉内酯环前体甲基丙二酰CoA相关的酶:甲基丙二酰CoA异构酶和甲基丙二酰CoA羧基转移酶的时序变化,并测定了过程中有机酸的含量变化。实验表明:Co2 能大幅提高红霉素效价。这可能与Co2 能明显提高甲基丙二酰CoA异构酶与甲基丙二酰CoA羧基转移酶的比活,并在一定程度上促进糖代谢有关。     

缬氨酸对必特螺旋霉素生物合成的影响

在必特螺旋霉素基因工程链霉菌WSJ-1-195发酵生产必特螺旋霉素的摇瓶实验中,发酵36 h时向合成培养基中添加0.5 g/L的缬氨酸对必特螺旋霉素效价和组分的影响最为显著.实验结果表明:添加缬氨酸后,菌体在发酵48～60 h糖耗加快,达到1 g/(L·h),发酵液中丙酸和丁酸浓度先增后降,而发酵液中丙酮酸在胞内积累,丙酮酸羧化酶活性在48 h和60 h时分别增加20%和95%.由于糖耗加快,更多碳流可以通过甲基丙二酰CoA转羧基酶途径(MCT途径)将缬氨酸分解生成的丙酰CoA和丁酰CoA转化为内酯环合成所需要的直接三碳前体,最终效价比对照高出45.3%.添加缬氨酸后,由于大环合成增多,侧链前体的供应无法满足内酯环增加的需求,导致酰化组分含量总体下降,其中总异戊酰组分降低23%,乙酰螺旋霉素Ⅲ降低30.8%,丙酰螺旋霉素Ⅱ降低33%,丙酰螺旋霉素Ⅲ降低48.8%.同时缬氨酸代谢生成的丁酸也有可能会影响异戊酰基转移酶的活性.     

肾移植术后他克莫司血药浓度监测

目的监测他克莫司的血药浓度,分析肾移植术后他克莫司血药浓度与疗效及毒性的关系。方法采用微粒子酶免分析法监测116例肾移植术后患者他克莫司血药浓度,结合临床疗效进行统计、分析。结果他克莫司在肾移植术后<1,2～6,7～12,>12个月治疗浓度分别为(10.16±4.36),(7.99±2.87),(6.21±2.31),(5.15±2.05)μg/L;发生排斥反应时的浓度为(7.10±3.46)μg/L;出现肝或肾中毒反应时浓度为(24.92±7.34)μg/L。结论监测肾移植术后患者他克莫司血药浓度,有助于提高他克莫司的安全有效性。     

他可莫司联合小剂量激素治疗IgA肾病效果观察

目的: 观察他克莫司联合小剂量激素治疗IgA肾病的临床疗效。方法：将25例IgA肾病患者随机分为2组,单纯激素组(n=14)和联合治疗组(n=11);前者给予单纯激素治疗,后者给予他克莫司联合小剂量激素治疗。分别监测治疗前及治疗后10 d,1,2,4,6个月的血压、24 h尿蛋白量、血常规、肝功能、肾功能、不良反应以及他克莫司的血药浓度变化等,维持他克莫司血药浓度为3~5 μg/L。结果： 联合治疗组在起效时间、完全缓解率等方面均优于单纯激素治疗组;比较两组血压、血肌酐、血糖等,差异无统计学意义。在治疗各个阶段他克莫司血药浓度为3.76~4.35 μg/L,呈平稳波动。结论： 他克莫司的血药浓度控制在3.76~4.35 μg/L时,联合小剂量激素治疗IgA肾病起效快、临床缓解率高。     

酶增强免疫分析法监测他克莫司血药浓度质控评估

目的：探讨用酶增强免疫分析法监测他克莫司血药浓度的质量,确定适合于本实验室的他克莫司药物监测质控规则。方法：以标准质控为样本,分析用酶增强免疫法测定他克莫司血药浓度方法的稳定性和准确性,并对我院2009年的质控结果进行评价、分析,建立新的质控规则。结果：在本实验室条件下,他克莫司测定值为20℃、21℃、23℃、24℃时,与22℃时测定值比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;他克莫司高中低三个浓度的RSD为3．4％～10．1％,回收率为96．1％-105．4％,均符合《中国药典》对生物样品检测规定;本实验室新的质控规则为12g/13g/22g/418。结论：用酶增强免疫分析法检测他克莫司血药浓度的方法稳定性和准确性较好,可以在临床中推广应用,但合理质控规则的建立是此方法实施的保障。     

他克莫司治疗对母乳喂养的影响

背景:因为免疫抑制剂的安全性尚未确定,对实体器官移植的受者产妇通常不建议进行母乳喂养。有限的资料显示婴儿通过乳汁接受的他克莫司的量很少。本报道分析了1例肾移植患者,使用浓度-时间曲线下面积计算乳汁和血液中他克莫司的含量比。病例:女性,29岁,每日服用他克莫司4m g及一些与移植相关的药物,其婴儿健康,3个月大,为纯母乳喂养。他克莫司在乳汁和血液中的含量比是0.23,乳汁中的平均浓度是1.8μg/L。婴儿的吸收量约为母亲用药剂量的0.5%(校正体重后)。结论:婴儿接触乳汁中的他克莫司量很少,提示母亲应用他克莫司治疗与母乳喂养不矛盾。…     

IL-31和他克莫司对Hacat细胞NT4表达的影响

目的:探讨白介素-31(interleukin-31,IL-31)、他克莫司对角质形成细胞神经营养素-4(neurotrophin-4,NT4)表达的影响。方法:培养人角质形成细胞株(Hacat细胞),采用不同浓度他克莫司作用24 h,噻唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖活性。IL-31、他克莫司单独或共同作用于Hacat细胞24 h后,采用real-time PCR法检测NT4 m RNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测12、24 h各组细胞上清液中NT4含量。结果:低浓度他克莫司(10、100)ng/ml对细胞活性无明显影响(P>0.05),高浓度(1 000 ng/ml)时细胞活性受到抑制(P=0.002)。IL-31作用Hacat细胞后,其NT4m RNA表达和上清中NT4含量均增加(P<0.05);100 ng/ml他克莫司作用24 h后他克莫司组和联合作用组细胞NT4 m RNA表达量和细胞上清中NT4含量均分别低于对照组和IL-31组(P<0.05)。结论:IL-31可促进角质形成细胞NT4表达,他克莫司可能通过降低角质形成细胞NT4表达水平而发挥其抗瘙痒作用。     

肝移植1例的他克莫司全血浓度监测

目的为了避免他克莫司的不良反应,对使用他克莫司的肝移植患者实施治疗药物监测。方法用微粒子酶免疫法测定肝移植患者口服他克莫司后的全血谷浓度,并观察排斥反应的发生及药物的不良反应。结果他克莫司的血药浓度在术后一月后应维持在15～20μg.L-1。当肝移植患者被给予他克莫司、泼尼松和骁悉,其浓度与剂量存在正相关。结论对于肝移植患者,他克莫司的全血药物浓度监测是很必要的。     

他克莫司治疗难治性IgA肾病的有效性和安全性

目的 探究他克莫司治疗难治性IgA肾病的有效性和安全性.方法 纳入2008年6月至2013年9月第二军医大学长征医院收治、经病理确诊的IgA肾病患者共9例,均经肾素-血管紧张素系统(RAS)阻断剂和激素治疗无效后给予他克莫司治疗.观察患者用药后的缓解情况(完全缓解和部分缓解)及达到缓解所需时间、复发次数、他克莫司给药剂量和药物不良反应.结果 他克莫司的起始给药剂量为(1.89±0.33) mg/d.经6个月的他克莫司治疗后,6例患者获得完全缓解、2例部分缓解、1例治疗抵抗,大多数患者在治疗后的前2个月内获得缓解.患者的24 h尿蛋白定量下降[(3.05±1.35)g vs (0.85±1.54)g,P＜O.05],血清白蛋白水平升高[(27.oo±8.37) g/L vs(37.33±8.08) g/L,P＜0.05].1例患者给予他克莫司治疗后表现为高血压加重,其他患者未见不良反应.8例蛋白尿缓解的患者中,3例出现复发,在调整激素剂量和他克莫司剂量后均得到缓解.结论 他克莫司可使难治性IgA肾病患者的蛋白尿症状缓解,且不良反应少.     

他克莫司联合糖皮质激素治疗膜性肾病的临床研究

目的探讨他克莫司联合糖皮质激素治疗膜性肾病的疗效。方法选取2012年12月至2013年12月聊城市人民医院收治的49例膜性肾病患者为研究对象,按照随机数字表法分为他克莫司组(25例)和环磷酰胺组(24例)。他克莫司组患者给予他克莫司联合糖皮质激素治疗,他克莫司起始剂量为0.05 mg/(kg·d),分2次于餐前1 h口服;环磷酰胺组患者给予环磷酰胺联合糖皮质激素治疗,环磷酰胺0.6~1.0 g+5%葡萄糖250 m L,静脉滴注,时间>1 h,每月1次。治疗后随访患者12个月,比较两组患者的24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血肌酐、三酰甘油及总胆固醇的水平;动态分析1个月、3个月、6个月、9个月、12个月时的24 h尿蛋白定量以及血清白蛋白的水平;计算两组患者的总缓解率以及不良反应发生情况。结果两组血肌酐治疗后无明显变化,三酰甘油和总胆固醇较治疗前降低(P<0.01);治疗后,他克莫司组三酰甘油、总胆固醇低于环磷酰胺组[(1.8±0.6)mmol/L比(2.5±0.8)mmol/L;(6.3±2.4)mmol/L比(8.6±2.6)mmol/L](P<0.01)。他克莫司组24 h尿蛋白定量呈逐渐下降趋势,而环磷酰胺组在治疗后1个月升高,随后又呈下降趋势,两组血清白蛋白均呈升高趋势,两组在组间、不同时点间以及组间·不同时点间比较,差异均有统计学意义(P<0.01);他克莫司组临床总缓解率高于环磷酰胺组[(88.0%(22/25)比62.5%(15/24)](P<0.05),粒细胞减少、血糖升高、恶心呕吐及脱发不良反应发生率均低于环磷酰胺组[4.0%(1/25)比25.0%(6/24)、4.0%(1/25)比25.0%(6/24)、4.0%(1/25)比29.2%(7/24)、4.0%(1/25)比29.2%(7/24)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论他克莫司联合糖皮质激素治疗膜性肾病效果安全有效,能有效缓解蛋白尿,提高血清白蛋白水平,值得在临床上推广。     

正丙醇、铜离子、烟酰胺对红霉素合成的作用

在摇瓶培养过程中，发酵初期加入正丙醇可使红霉素的效价提高49．31％，正丙醇提高了丙酸激酶的比活力，表现出对该酶诱导作用，而对丙酰CoA合成酶比活力无影响。加入铜离子和烟酰胺可使红霉素效价分别提高24％和179／5。用HPLC测定发酵液中有机酸含量，分析测定结果认为发酵过程可分为3个阶段：积累期、转折期和生产期。     

他克莫司对大鼠肝脏组织蛋白磷酸酶2A和P-AKT表达的影响

目的 通过观察他克莫司对大鼠血糖、胰岛素水平、肝脏组织蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT表达的影响,进一步探究他克莫司导致血糖升高的机制。方法 将60只雄性SD大鼠（89.83?.44g）随机均分为他克莫司组和对照组,他克莫司组（n=40）,每日空腹（禁食水8小时）灌胃给药,剂量为4mg/kg?d;对照组（n=20）,每日空腹灌胃给予等量生理盐水,每月测量大鼠体重、空腹血糖, 5个月后处死大鼠,心脏穿刺取血,;取胰腺组织和肝脏组织,测大鼠血清胰岛素水平,行胰腺组织病理组织学观察,并对肝脏行组织处理和免疫组织化学技术检测肝细胞浆质中蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT的表达。结果 用药2个月后,他克莫司组大鼠的血糖水平明显高于对照组（P＜0.05）,他克莫司组大鼠的胰岛素分泌指数、胰岛素敏感指数和均明显低于对照组（P＜0.05）;胰岛素抵抗指数明显增高（P＜0.05）。他克莫司组大鼠与对照组相比,其肝细胞浆质内PP2A表达明显增加,磷酸化的AKT表达明显减少。结论 他克莫司导致胰岛细胞坏死,胰岛细胞数量减少,胰岛素的分泌降低、胰岛素敏感性下降、胰岛素抵抗增加,从而导致大鼠血糖升高。他克莫司增加大鼠肝脏组织PP2A的表达,减少肝脏组织磷酸化的AKT的表达,可能通过PI3K/AKT信号转导途径参与胰岛细胞凋亡和胰岛素抵抗,引起血糖的升高。     

甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤

目的 研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)在体内和体外对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠足细胞以及PAN诱导小鼠足细胞氧化应激损伤的作用.方法 (1)建立PAN肾病大鼠动物模型,给予SPE和他克莫司干预,分别在第5、10、15、21天留取肾组织标本,WT1染色计数足细胞数目,免疫荧光观察8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)荧光强度.(2)体外采用PAN致足细胞损伤模型,PAN作用小鼠足细胞24 h,分别加入含SPE、丹酚酸B(SalB)、迷迭香酸(RA)及他克莫司的培养基培养6、12、24、48 h,观察足细胞骨架相关蛋白F-actin的表达,流式细胞仪分析细胞内活性氧(ROS)荧光强度.结果 (1)肾小球WT1细胞计数结果显示,PAN组第5天时足细胞数已开始下降,第15天达(14.4±0.7)个/肾小球切面,较正常组(37.2士1.5)个/肾小球切面减少(P＜0.05),SPE组与阳性对照组(他克莫司组)各时间点足细胞数量高于PAN组;第15天时,阳性对照组肾小球WT1细胞计数与SPE高剂量组较为接近(P＞0.05).第5天时PAN组大鼠肾组织8-OHdG荧光强度较正常组增强,第10天上升至高峰,而后开始减弱,第15天时仍高于正常组;给予药物干预后,大鼠肾组织的8-OHdG荧光强度降低,其中阳性对照组与SPE高剂量组8-OHdG荧光强度较为接近.(2)体外研究发现,PAN作用24 h后,F-actin几乎完全解聚,少数细胞尚有残存的被切断的丝状结构,给予SPE、SalB、RA及他克莫司治疗后,PAN诱导的足细胞损伤明显减弱,细胞内重新出现极性分布的微丝.与正常组相比,PAN作用小鼠足细胞24 h后ROS荧光强度增加(P＜0.05).给予药物干预后足细胞内ROS荧光强度降低,24 h SPE低剂量组、SalB高剂量组和RA高剂量组与阳性对照组足细胞内ROS的荧光强度降低程度相近(P＞0.05),24 h SalB降低足细胞内ROS荧光强度效果优于RA,且与药物剂量呈正相关.结论 本研究从体内及体外证实,SPE对PAN所致足细胞氧化应激损伤具有保护作用.     

芦荟苷-绿原酸混合液对变异链球菌抑制作用的体外研究

目的 探讨芦荟苷与绿原酸联合应用对变异链球菌生长、产酸、黏附及生物膜形成的影响.方法 微量液体二倍稀释法分别测定芦荟苷、绿原酸对变异链球菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),棋盘稀释法测定芦荟苷与绿原酸混合液对变异链球菌的MIC值,通过分级抑制浓度(fractio...     

Effect and mechanism of tacrolimus on melanogenesis on A375 human melanoma cells

Background Topical tacrolimus has been used for vitiligo as a common treatment option for more than ten years while the underlying mechanism is still uncertain.The aim of this study was to investigate the direct effects of tacrolimus on the melanogenesis and migration on human A375 melanoma cells.The expression of c-KIT mRNA and protein of human A375 cells were also investigated.Methods The cultured A375 human melanoma cells were randomly assigned to control and tacrolimus treatment groups （10,102,103and 104 nmol/L）.The cell proliferation was measured with Cell Counting Kit-8 assays.Melanin content was measured with NaOH method.Transwell migration assay was used to measure cell migration.The expression of c-KIT mRNA and protein were measured with real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction and immunohistochemistry respectively.Results The cell proliferation of the 103 and 104 nmol/L tacrolimus groups were significantly lower （0.666±0.062 and 0.496±0.038） as compared with the control （0.841±0.110,P 〈0.05）.The mean melanin content in all groups treated with different concentration of tacrolimus （10,102,103,104 nmol/L） increased compared with the control group （P 〈0.05）.Dosedependent increase in cell migration were seen in all tacrolimus-treated groups （P 〈0.01）.The expression of c-KIT mRNA level in A375 cells exposed to tacrolimus （103and 104 nmol/L） had significantly increased by 3.03-fold and 3.19-fold respectively compared with the control （P 〈0.05）.Conclusions Although tacrolimus had no effects on cell proliferation on A375 human melanoma cells,it could increase the melanin content and cell migration.The expression of c-KIT mRNA and protein increased dose-dependently in tacrolimus-treated groups as compared with the control.Our study demonstrated that tacrolimus could enhance the melanogenesis and cell migration on A375 cells.     

来氟米特与他克莫司合用抑制大鼠心脏移植术后IL-2的产生

目的评价他克莫司和来氟米特联合应用对大鼠心脏移植排斥反应及IL-2产生的抑制作用。方法采用套管法大鼠心脏颈部异位移植模型，将心脏移植后的大鼠随机分为对照组，他克莫司组，来氟米特组，他克莫司和来氟米特联合用药组，观察各组供心存活时间并检测血清IL-2水平。结果供心存活时间联合用药组明显长于单独用药组（P〈0．05）。术后7d，外周血IL-2水平联合用药纽明显低于单独用药组（P〈0．05）。结论他克莫司和来氟米特联合应用对大鼠心脏移植排斥及IL-2产生的抑制作用优于相同剂量下的单一用药。     

他克莫司缓释剂治疗儿童原发性肾病综合征的药代动力学特点

目的 他克莫司是一种新型钙调磷酸酶抑制剂,目前被广泛应用于成人肝或肾移植术后,也被逐渐广泛应用于肾病综合征患儿。他克莫司缓释胶囊是每日单次口服的缓释剂型,本研究目的是初步探讨他克莫司缓释剂治疗儿童原发性肾病综合征的药代动力学特征。方法 8例受试者系北京大学第一医院2011年6—8月原发性肾病综合征患儿。晨起单次口服不同剂量他克莫司缓释胶囊,给药剂量分别为0.02 mg/kg(n=2)、0.05 mg/kg(n=2)、0.10 mg/kg(n=4),在服药前及服药后1、2、4、6、8、10、12 h分别取静脉血1~2 mL,受试者不用影响他克莫司浓度的其他药物、食物及饮料。采用酶放大免疫分析法,测定他克莫司血药浓度,以Phoenix计算其药代动力学参数。结果 药代动力学数据采用非房室模型分析。3个剂量组(0.02 mg/kg,0.05 mg/kg和0.10 mg/kg)药代动力学参数如下:血药峰浓度分别为(1.7±1.0) μg/L,(3.1±1.9) μg/L,(8.0±3.5) μg/L;药物浓度-时间曲线下面积分别为(47.2±47.1) h·μg/L,(84.0±13.1) h·μg/L,(175.6±107.1) h·μg/L;表观清除率分别为(0.8±0.9) L/(h·kg),(0.4±0.1) L/(h·kg),(1.9±1.3) L/(h·kg);经剂量归一化的表观分布容积分别为(7.0±3.4) L/kg,(12.4±8.4) L/kg,(73.6±68.6) L/kg。0.05 mg/kg剂量组经剂量归一化的血药峰浓度和经剂量归一化的药物浓度-时间曲线下面积的平均值均高于0.02 mg/kg及0.10 mg/kg剂量组。3个剂量组的药物浓度-时间曲线均呈现2次高峰,第一次高峰出现在服药后约2 h,服药后约12 h出现次级高峰;0.10 mg/kg剂量组药物浓度出现两次峰值的现象较0.02 mg/kg及0.05 mg/kg剂量组更显著。结论 他克莫司缓释剂治疗原发性肾病综合征患儿的药代动力学存在个体间差异,本研究初步探讨了他克莫司缓释剂治疗儿童原发性肾病综合征的药代动力学特征,为后续大样本的研究提供了参考依据。     

Effects of salvianolic acids on endothelial cells against damage induced by cholestane-3β-5α-6β-triol

Objective To investigate the effects of salvianolic acids on human umbilical vein endothelial cells(HUVEC) against damage induced by cholestane-3β-5α-6β-triol (chol-triol).Methods The viability of HUVEC was measured by MTT method. The apoptosis of HUVEC induced by chol-triol was detected by flow cytometry and TUNEL assay. The production of malondialdehyd (MDA) in HUVEC was tested by thiobarbaturic acid (TBA) assay.Results The viability of HUVEC treated with chol-triol 100μmol/L decreased by 39. 8% while salvianolic acids 100μg/ml increased by 27. 9%. The apoptotic rate of HUVEC measured by PI staining increased from 6% -8% to 17% -20% after chol-triol treatment for 12 h. Salvianolic acids100μg/ml reduced the apoptotic rate to 10% -14% after treatment HUVEC for 1 h prior to chol-triol treatment. In another experiment, chol-triol increased the number of TUNEK-positive cells 5 times, but salvianolic acids 10μg/ml and 100μg/ml reduced the number of TUNEL-positive cells by 36. 9% and 61.2%, respectively. The production of MDA in HUVEC increased by 120. 7% after chol-triol treatment for 12 h. Salvianolic acids 10 gg/ml and 100 pg/ml also decreased the concentration of MDA by 28.7% and 39. 8%, respectively.Conclusion Salvianolic acids has protective effect on endothelial cells against damage induced by chol-triol.     

灵芝真菌发酵生产灵芝多糖和灵芝酸

提出了灵芝真菌同时高效生产灵芝多糖和灵芝酸的发酵过程。在摇瓶中考察了氮源、接种量、起始葡萄糖浓度和装液量对灵芝细胞生长及灵芝多糖和灵芝酸生产的影响。结果表明 ,酵母膏和蛋白胨复配作为氮源有利于细胞生长。接种量对细胞量有一定影响 ,但是对产物积累量影响更大。在 50 g/ L起始糖浓度下 ,细胞干重达到 1 6.7g/ L,胞内多糖、胞外多糖和灵芝酸分别达 1 .1 9g/ L,0 .854g/ L和 2 1 2 .3mg/ L。考察装液量发现 ,小装液量有利于提高细胞生长速率和产物的生产速率     

他克莫司治疗老年激素抵抗型肾病综合征的临床效果观察

目的：探讨他克莫司治疗老年激素抵抗型肾病综合征的临床效果。方法选取2010年1月-2013年6月收治的激素抵抗型肾病综合征患者60例，将所有患者将所有患者按照就诊先后顺序分为观察组和对照组，观察组在常规治疗的基础上给予他克莫司,首次剂量为0.1 mg/（kg＆#183;d），2次/d治疗，对照组在常规治疗的基础上给予环磷酰胺,剂量为0.2 g，行静脉注射，2 d,进行1次治疗，治疗前后对两组患者的总胆固醇、白蛋白、24 h尿蛋白指标进行测定比较。结果治疗后观察组的总胆固醇下降至（4.49±3.05）mmol/L、白蛋白上升至（46.08±3.26）g/L，24 h尿蛋白下降至（0.57±0.24）g，与对照组治疗后比较差异显著（P〈0.05），且观察组总有效率（86.7%）明显大于对照组（P〈0.05）。结论他克莫司在老年激素抵抗型肾病综合征的治疗中具有较好疗效，可显著改善患者临床症状。