热休克蛋白70在异位子宫内膜细胞上皮间质化中的作用研究

目的 研究子宫内膜异位症患者在位内膜热休克蛋白70的表达及其对内膜细胞上皮间质化过程的影响。方法(1) 采用Real-time PCR法测定子宫内膜异位症患者在位及异位内膜组织,以及非子宫内膜异位症患者在位内膜组织中HSP70 mRNA表达量;(2) 采用半定量法分析上述三种组织HSP70蛋白含量;(3) 将HSP70与子宫内膜细胞共培养后使用免疫荧光法测定上皮间质化标志物E-cadherin和α-SMA蛋白表达量的变化,使用Real-time PCR法测定E-cadherin和α-SMA蛋白mRNA表达变化。结果(1) 内异症患者及非内异症患者分泌期内膜组织内HSP70 mRNA表达量和蛋白含量均高于增生期内膜组织(P＜0.05)。(2) 分泌期内异症患者在位和异位内膜组织内HSP70 mRNA表达量及蛋白含量高于非内异症患者(P＜0.05)。(3) 子宫内膜细胞与HSP70共培养后E-cadherin表达降低,α-SMA蛋白表达增加。结论 HSP70蛋白能够促进子宫内膜细胞上皮间质化,帮助异位内膜细胞种植转移。     

子痫前期对胎鼠肺成熟的影响及其机制研究

目的 探讨子痫前期对胎鼠肺成熟的影响及其机制.方法 将孕鼠分为子痫前期早产组(preeclampsia preterm group,PPG)、非子痫前期足月产对照组(non-preeclampsia fullterm group,NPFG)与非子痫前期早产对照组(non-preeclampsia preterm group,NPPG),使用N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)建立子痫前期动物模型,无菌操作取出胎鼠肺,每组随机取胎肺用于组织切片,进行苏木精-伊红染色,镜下观察胎鼠肺气管及肺泡的发育情况;应用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)及Western blot技术检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、表面活性蛋白B(SP-B)及表面活性蛋白C(SP-C)mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 组织切片染色显示子痫前期早产组胎肺血管及气管发育相对于非子痫前期早产对照组更好;组织Real-time PCR及Western blot检测结果 显示:非子痫前期足月产对照组HIF-1α、VEGF、SP-B与SP-C mRNA及蛋白表达水平明显高于非子痫前期早产对照组及子痫前期早产组,差异有统计学意义(均P＜0.05);子痫前期早产组HIF-1α与VEGF mRNA及蛋白表达水平比非子痫前期早产对照组升高,差异有统计学意义(均P＜0.05);子痫前期早产组SP-C 与SP-B mRNA及蛋白表达水平与非子痫前期早产对照组差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 子痫前期能促进胎肺的结构成熟,但对肺泡功能无明显影响.     

Caveolin-1在人类子宫肌瘤组织中的表达研究

目的:检测抑制血管平滑肌细胞增殖的caveolin-1( Cav-1)蛋白在人子宫肌瘤组织(HL)及原代培养细胞中的表达.方法:收集24例子宫肌瘤组织和与之配对的子宫肌组织(HM),进行原代细胞培养;Western Blotting和Real-time PCR的方法,检测Cav-1、Cav-2、Cav-3在HM和HL及原代培养细胞中蛋白及mRNA的表达.结果:Cav-1、Cav-2蛋白和mRNA在HL中表达降低,Cav-3蛋白在两种组织中均未检出;Cav-1蛋白和mRNA在培养的子宫肌瘤平滑肌细胞(HL-SMCs)中表达降低;17-β雌激素(E2)作用24 h后,培养的子宫平滑肌细胞(HM-SMCs)中Cav-1蛋白和mRNA的表达均增加,而HL-SMCs中其表达均降低.结论:Cav-1蛋白在HL及原代培养细胞中低表达,在培养的HL-SMCs中E2可以进一步降低Cav-1的表达.     

Cav1.2和Cav3.1在犬左心室不同部位中表达的比较

目的：研究犬左心室三层心肌L型钙通道（I（Ca-L））、T型钙通道（I（Ca-T））主要亚单位mRNA的表达情况,探讨其复极异质性的可能分子基础及意义．方法：应用RT—PCR半定量分析犬左心室外、中、内三层心肌I（Ca-T）,α亚单位（Cavl．2）、I（Ca-T）主要的亚单位（Cav3,1）mRNA的表达量．结果：Cavl．2 mRNA的表达在左心室中层、内层均明显高于外层（P〈0,05）,但在中层和内层之间无统计学差异（P〉0．05）,Cav3．1mRNA在外层几乎缺如,在中层、内层也只有少量表达且无明显统计学差异（P〉0,05）,结论：Cavl,2,Cav3,1 mRNA在犬左心室三层心肌中表达存在明显的差异,这种差异可能构成左心室三层心肌I（Ca-L）及I（Ca-T）分布差异的分子基础,在折返性心律失常的产生及药物治疗中可能起着重要的作用．     

T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋白在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的研究T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋自在宫颈癌患者中的阳性表达率及其与宫颈癌临床病理学特征的关系。方法将2012年6月—2014年12月行子宫切除术并经病理学检查确诊为宫颈癌患者74例作为宫颈癌组,同期因子宫肌瘤进行子宫切除术患者74例作为对照组,采用SP免疫组化染色对手术切除标本进行染色,观察2组患者T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋白的阳性表达率及其与宫颈癌Cav3.1、Cav3.2蛋白过表达率与临床病理特征的关系。结果宫颈癌组Cav3.1及Cav3.2的阳性表达率(94.59%、90.54%)均明显高于对照组(12.16%、14.86%),差异有统计学意义(x~2=101.029、85.005,P<0.01);Cav3.1、Cav3.2蛋白表达与患者年龄、病程、病理分型、肿瘤大小无关(Cav3.1:x~2=2.381、1.782、0.982、0.338,P>0.05;Cav3.2:0.773、0.673、0.862、0.762,P>0.05);与临床分期、细胞分化程度、淋巴结转移有关(Cav3.1:x~2=5.336、6.772、16.882,P<0.01;Cav3.2:10.934、12.762、6.542,P<0.01)。结论宫颈癌患者T-型钙通道Cav3.1、Cav3.2表达增高,T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋白可能成为宫颈癌的治疗靶点及肿瘤检测的分子生物学标记物。     

整合素和钙通道在人与小鼠钩端螺旋体主要宿主细胞上分布的差异

目的:了解人和小鼠钩端螺旋体(简称钩体)主要宿主细胞上整合素与钙通道表达情况及其差异.方法:采用免疫荧光和Westem blot法,检测人单核细胞株THP-1、小鼠单核-巨噬样细胞株J774A.1、人脐静脉内皮细胞株HUVEC、小鼠血管内皮细胞株EOMA、人肝细胞株L-02、小鼠肝细胞株Hepa 1-6、人肾小管上皮细胞株HEK-293、小鼠肾小球系膜上皮细胞株SV40-MES13、小鼠肾成纤维细胞株NIH/3T3、人及小鼠血小板的β1、β2、β3类整合素分子以及Cav3.1、Cav3.2、Cav3.3、Cav2.3电压门控型钙通道蛋白和P2X1、P2X2、P2X3、P2X4、P2X5、P2X6、P2X7受体门控型钙通道蛋白的分布差异.结果:整合素β1分子表达于J774A.1、THP-1、HUVEC、EOMA、L-02、Hepa1-6、HEK-239细胞以及人和小鼠血小板膜表面,β2分子表达于J774A.1、THP-1、HUVEC、EOMA和NIH-3T3细胞膜表面,β3分子表达于J774A.1、THP-1、HUVEC、EOMA、Hepa1-6、HEK-239、NIH-3T3细胞以及人和小鼠血小板膜表面.ATP依赖性受体门控型钙通道蛋白P2X1表达于人和小鼠血小板膜表面,P2X5表达于J774A.1、THP-1、L-02、Hepa1-6、HEK-239和HUVEC细胞膜表面,但未检测出上述细胞或血小板表达其它钙通道蛋白.结论:不同种类整合素分子和钙通道蛋白在钩体主要宿主细胞上表达明显不同,这可能与钩体对不同组织细胞致病性差异有关.     

慢性房颤患者心房肌L型钙通道α1c亚基mRNA表达的观察

目的比较慢性房颤与窦性心律心房肌L型钙通道α1c亚基mRNA的表达改变,探讨房颤心房肌L型钙通道的离子重构特点.方法选择43例接受心脏瓣膜置换的风心病患者,慢性房颤者24例,窦性心律者19例,于体外循环建立初采集右心房游离壁组织,应用半定量RT-PCR测定α1c 亚基Ⅰ-Ⅱ跨膜区连接对应的mRNA片段表达.结果慢性房颤心房肌L型钙通道α1c亚基mRNA的表达较窦性心律心房肌无明显差异.结论房颤心房肌L型钙通道的离子重构可能与α1c亚基的亚型表达改变有关.     

辛伐他汀防治心肌细胞肥大效应及其与钙通道关系的研究

目的：探讨辛伐他汀对心肌细胞肥大的防治作用及其与钙通道活动的关系。方法：采用血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型。应用改良Lowry法测定心肌细胞总蛋白含量。相差显微镜测定心肌细胞表面积。CCK-8法检测心肌细胞活力变化。westernblot方法检测心肌细胞L-型钙通道亚单位Cav1.2（α1C）、T-型钙通道亚单位Cav3.1（α1G）、Cav3.2（α1H）蛋白表达的变化。应用激光共聚焦显微镜技术检测[Ca^2＋]i的变化。结果：（1）辛伐他汀能明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量及细胞表面积的增加,同时提高心肌细胞活力;（2）辛伐他汀能明显降低心肌细胞T-型钙通道α1G、α1H蛋白表达,但对L-型钙通道α1C蛋白表达无明显影响;（3）辛伐他汀可呈剂量依赖性抑制心肌细胞肥大所致的钙离子超载。结论：辛伐他汀对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大具有明显的防治作用,其作用机制可能与辛伐他汀抑制T-型钙通道α1G、α1H蛋白的重新再表达有关,并与其抑制细胞内钙超载密切相关。     

ATP敏感性钾通道在人类妊娠不同状态的子宫平滑肌的表达

目的:探讨ATP敏感性钾通道(KATP )亚基在人类2种不同功能状态下(临产和未临产)子宫平滑肌中的表达情况。方法:实验分为足月临产组(TL组)和足月未临产组(TNL组),均12例。采用RT-PCR和实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测了人类2种妊娠状态下子宫平滑肌KATP 3种亚基mRNA的表达,并用免疫组织化学法检测KATP 3种亚基蛋白表达情况。结果:Kir6.1、Kir6.2、SUR2B mRNA在临产和未临产子宫平滑肌上均有表达,TNL组SUR2B mRNA的含量高于TL组(P<0.05);3种亚基的受体蛋白在人未临产和临产的子宫平滑肌细胞胞质中都有表达。结论:KATP在子宫平滑肌上有表达;在人类的妊娠子宫平滑肌上可能是通过SUR2B水平的改变起到调节平滑肌收缩的作用。     

慢性多重应激大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位表达变化研究

目的研究慢性多重应激大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位表达变化及L-型钙通道阻滞剂维拉帕米的拮抗作用。方法建立大鼠慢性多重应激心律失常模型,以维拉帕米作为干预,试验结束后取心房组织,用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（real-time PCR）方法测定L-型钙通道α1c亚单位mRNA的表达水平,以Western blot方法检测L-型钙通道α1c亚单位蛋白的表达水平。结果应激大鼠出现了房性心律失常,应激＋维拉帕米组房性心律失常出现时间和发生次数低于应激组（P〈0.01）;应激组和应激＋维拉帕米组大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0.01）;应激组大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位蛋白表达水平低于应激＋维拉帕米组（P〈0.01）。结论慢性多重应激导致大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位mRNA和蛋白表达水平下调。维拉帕米对慢性多重应激诱导的大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位表达下调有拮抗作用,可抑制慢性多重应激诱导的房性心律紊乱。     

小鼠结肠平滑肌大电导钙激活钾通道的剪切与表达

目的检测小鼠结肠平滑肌大电导钙激活钾通道(large conductance calcium activated potassium channels,BKCa)mRNA的全长结构,探明该基因在结肠平滑肌的剪切形式,并对BKCaα亚基在消化道各节段的表达进行半定量比较。方法采用RT-PCR和Western blotting方法检测消化道各段平滑肌BKCa基因和蛋白的表达,用RT-PCR的方法分段检测小鼠结肠平滑肌上BKCa基因各个剪切位点的剪切形式。结果在小鼠无论在mRNA还是在蛋白水平,胃和结肠平滑肌BKCa的表达均比十二指肠、回肠部位丰富。结肠平滑肌上BKCaα亚基mRNA缺失第19号外显子即应激调控外显子(stress-regulated exon,STREX),在其他位点未检测到外显子剪切。结论在小鼠消化道各节段,结肠平滑肌上BKCa的含量比较高,其α亚基未表达第19号外显子序列,其表型为缺失应激调控外显子型,即ZERO型。     

肾元颗粒对db/db糖尿病肾病小鼠血管钙化的改善作用及其机制

目的：通过高磷诱导db/db糖尿病肾病（DN）小鼠血管钙化,探讨肾元颗粒对db/db DN小鼠血管钙化的改善作用及其可能机制。方法：将20只SPF级db/db小鼠随机分为模型组和肾元颗粒组（n=10）,同系背景野生型（WT）小鼠作为空白组（n=10）。给药12周后,取各组小鼠血清、肾脏和胸主动脉组织。ELISA法检测各组小鼠血清FGF23水平,HE和von Kossa法检测各组小鼠胸主动脉病理形态表现以及钙盐沉积情况,实时荧光定量PCR （Real-time PCR）法检测各组小鼠肾脏组织中KlothomRNA和胸主动脉组织中Pit-1、Runx2及SM22α mRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠肾脏组织中Klotho蛋白和胸主动脉组织中Pit-1、Runx2及SM22α蛋白表达水平,免疫组织化学法检测各组小鼠胸主动脉组织中Pit-1蛋白表达水平,免疫荧光法检测各组小鼠胸主动脉组织中SM22α和Runx2蛋白表达水平。结果：与空白组比较,模型组小鼠血清FGF23水平明显升高（P<0.05）,肾脏组织中Klotho mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,胸主动脉组织中Pit-1和Runx2 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,SM22α mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,胸主动脉组织中Pit-1和Runx2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,SM22α蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与模型组比较,肾元颗粒组小鼠血清FGF23水平降低（P<0.05）,肾脏组织中Klotho mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,胸主动脉组织中Pit-1和Runx2 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,胸主动脉组织中SM22α mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：肾元颗粒可通过上调小鼠肾脏组织中Klotho蛋白表达水平,减少Pit-1表达水平,抑制FGF23/Pit-1信号通路,调节血管平滑肌细胞（VSMC）的表型转化,达到血管保护作用。     

腹泻型肠易激综合征大鼠结肠L-型钙通道α1C及α1D亚基的表达变化

目的 探讨L-型钙通道α1C亚基(Cav1.2)及α1D亚基(Cav1.3)在腹泻型肠易激综合征(D-IBS)大鼠结肠的表达变化.方法 成年Wismr大鼠30只,随机分为模型组与正常组,每组15只.采用番泻叶灌胃结合传统束缚应激加冷刺激建立D-IBS大鼠模型;观察大鼠的粪便性状、颗粒数及含水量;运用免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Cav1.2和Cav1.3在大鼠结肠的表达.结果 模型组大鼠粪便颗粒数及含水最均明显多于正常组(6.8±1.4比3.2 ±0.8、80%±4%比47%±5%,P=0.032、0.018).正常组与模型组大鼠结肠均有Cav1.2及Car1.3的表达,主要分布在肌层,少量分布在黏膜和浆膜层.模型组大鼠结肠Cav1.2及Cav1.3的免疫组化评分值均高于正常组(3.43 ±0.92比2.82±0.60、4.32 ±0.51比3.75±1.05,P=0.034、0.039);两组中Cav1.3表达的免疫组化评分值均高于Car1.2(P=0.003、0.005).RT-PCR结果表明D-IBS大鼠结肠Car1.2及Cav1.3的mRNA表达均高于正常组(1.18±0.15比1.06 ±0.12、1.32 ±1.13比1.23 ±0.13,P=0.023、0.033);且Cav1.3的表达均高于Cav1.2(P=0.038、0.012).结论 D-IBS大鼠结肠组织L-型钙通道Cav1.2及Car1.3的表达出现不同程度的升高,且Car1.3的表达明显高于Cav1.2,提示其发生了离子通道重构,并且可能是电重构所致结肠动力紊乱的分子基础.     

不同出生体重新生大鼠胰腺ghrelin和钙通道表达的研究

目的：探讨宫内营养环境对大鼠胰腺ghrelin和胰岛细胞团上L型钙通道（Cav1．2、Cav1．3）相对丰度的影响。方法：建立不同出生体重新生大鼠模型，分别取新生第1天大鼠胰腺或分离的胰岛细胞团组织，用实时荧光定量RTPCR观察不同出生体重组胰腺ghrelinmRNA表达的变化和胰岛细胞团上Cav1．2、Cav1．3mRNA的差异；同时，对胰岛细胞团上ghrelin、Cav1．2、Cav1．3蛋白进行免疫组织化学染色。结果：实时荧光定量RTPCR显示：新生大鼠小于胎龄儿（SGA）组胰腺ghrelinmRNA水平高于适于胎龄儿（AGA）组的表达（P〈0．05）。胰岛细胞团上Cav1．2ITIRNASGA组和大于胎龄儿（LGA）组表达量均小于AGA组，Cav1．3ITIRNASGA组小于AGA组（P〈0．05）。免疫组化积分光密度数据显示与实时荧光定量RT—PCR结果呈相同趋势。结论：早期宫内营养状况过剩或缺乏可能导致胰腺分化和成熟障碍，并引起胰岛细胞团上ghrelin和钙通道表达差异。     

钙通道在大鼠逼尿肌不稳定膀胱中的表达及变化

目的　探讨电压依赖钙通道与逼尿肌功能变化之间的关系。方法　根据膀胱压力容积测定结果将动物分为稳定组 ( 2 9只 )和不稳定组 ( 9只 ) ,其中稳定组分为BOO( 11只 )、SCI模型 ( 9只 )和对照组 ( 9只 ) ,通过RT PCR技术测定逼尿肌中L型和T型钙通道mRNA表达及变化。结果　正常大鼠中逼尿肌不稳定发生率为 2 4.3 %。L型和T型钙通道在逼尿肌中均有表达。正常对照组膀胱逼尿肌L型钙通道mRNA含量明显多于T型钙通道mRNA ,两者之比约 2 .1∶1;BOO组、SCI组和不稳定组中L和T型mRNA含量均有不同程度增加 ,T型钙通道mRNA增加更明显 (P <0 .0 1) ,两者比值明显缩小 ,分别为 1.5 3、1.41和 1.83。结论　钙通道的表达增加可能是导致平滑肌细胞自发性除极易化、兴奋性增高、引起逼尿肌不稳定的重要原因 ,其中T型钙通道起着重要的作用     

姜黄素对宫内感染性小鼠早产的防治作用

目的研究活化的激活蛋白1（Activator protein-1,AP-1）和单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractantprotein-1,MCP-1）在感染性早产孕鼠中的表达,从而探讨抑制AP-1的药物姜黄素（Curcumin,CUR）对感染性早产的预防和治疗作用。方法大肠杆菌腹腔注射建立感染性早产动物模型。将100只C57BL/6孕鼠随机分为模型组（E组）、对照组（NS组）、姜黄素组（CUR组）、治疗组（E＋CUR）、预防组（CUR＋E组）,每组20只。其中每组分8只观察潜伏期（菌液注射至分娩第一胎儿的时间）和活产率。于干预后3、6、12、24h各时间点处死3只孕鼠,免疫组化检测孕鼠子宫AP-1及MCP-1蛋白表达分布;Western blotting检测孕鼠子宫AP-1表达;ELISA检测孕鼠血清MCP-1蛋白分泌量。结果 CUR预防及治疗组能显著降低AP-1,MCP-1mRNA及蛋白的表达（P〈0.001）。CUR治疗感染性早产小鼠潜伏期延长为34.5h（对照15.1h）,CUR预防性给药则延长为45.3h;CUR作用于感染性早产小鼠可使妊娠时间延长。活产率提高（87.5%vs39.2%）。结论 CUR对大肠杆菌诱发的小鼠早产有预防和治疗作用,可能是通过抑制妊娠组织AP-1/MCP-1的活化。     

miR-103及其靶基因Cav1.2在低氧预适应提升小鼠学习记忆中的表达

目的:探究miR-103和Cav1.2在低氧预适应改善学习记忆能力中的表达变化，阐明miR-103调控Cav1.2在低氧预适应内源性神经保护中的作用机制。方法:使用ICR雄性小鼠作为实验对象，构建正常组(Control)、低氧组(Hypoxia)、低氧预适应组(HPC),通过Morris水迷宫分别评估各组小鼠的学习记忆能力；通过Real-time PCR和Western bolt技术检测小鼠海马组织中miR-103和Cav1.2的表达变化，通过双荧光素酶报告基因检测miR-103和Cav1.2之间的调控关系。结果:小鼠随着低氧次数的增加，低氧耐受时间显著增强。与Control组相比，HPC组小鼠的潜伏期时间明显降低(P<0.05),目标象限时间的百分比增加(P<0.05),平台穿越次数明显增加(P<0.05)。与Control组相比，HPC组小鼠海马组织中miR-103在第1 d表达下调(P<0.000 1)。miR-103-3p通过与Cav1.2的3’UTR结合从而靶向Cav1.2。与Control组相比，HPC组小鼠海马组织中Cav1.2蛋白在第2 d表达升...     

早产子宫平滑肌组织中前列腺素合成酶-2表达的调控机制

目的 初步研究早产子宫平滑肌组织中调控PGHS-2表达的分子机制.方法 采用胶原酶原代培养早产子宫平滑肌细胞,Western blot检测该细胞中调控PGHS-2表达的信号分子NF-κB p65蛋白的表达和迁移情况;检测子宫平滑肌组织中MAPK信号分子的表达情况.结果 采用胶原酶消化法,成功培养原代子宫平滑肌细胞并免疫组化鉴定;与对照组比较,PGE2显著抑制子宫平滑肌细胞中NF-κB p65蛋白的表达(P＜0.05),呈时间依赖性;LPS和IL-1β刺激细胞后,NF-KB p65蛋白由细胞质向细胞核迁移,参与PGHS-2转录活化;加入PGE2后,该迁移效应被显著抑制;在早产子宫平滑肌组织中,MAPK信号分子JNK1/2/3与p38激酶的磷酸化水平较足月产显著增加(P＜0.05).结论 早产子宫平滑肌组织中,PGE2显著抑制NF-κB P65蛋白的表达和活化;PGHS-2的表达调控可能与MAPK信号通路直接相关.     

多质粒共转染建立Cav1.3 L-型钙通道的研究模型

目的:提高多质粒转染效率,建立钙离子通道的研究模型。方法:在传统的脂质体转染过程中,通过不断调整细胞密度、转染质粒DNA的量,将含Cav1.3L-型钙通道相关亚基的质粒DNA转染至HEK293T细胞,采用全细胞膜片钳技术检测Cav1.3L-型钙通道的电流表达。结果:转染后的HEK293T细胞在荧光显微镜下可见明显的绿色荧光;全细胞膜片钳技术检测出Cav1.3 L-型钙通道电流的表达。结论:通过调整细胞密度和转染质粒DNA的量,可以提高脂质体介导多质粒共转染HEK293T细胞的效率,建立钙离子通道的研究模型。     

RCAS1在子宫内膜癌组织中的表达及其与雌激素受体亚型相关性研究

目的探讨RCAS1与雌激素受体亚型在正常子宫内膜、增生症内膜和内膜癌组织中的表达及相关性,分析它们在内膜癌发生发展中的作用。方法采用免疫组化、RT—PCR法检测20例正常子宫内膜组织、42例子宫内膜增生症组织及50例内膜癌组织中RCAS1和雌激素受体α（ERα）雌激素受体β（ERβ）的表达,免疫印迹法检测各组内膜中RCAS1蛋白的表达。结果免疫组化显示RCAS1在正常、简单型和复杂型增生内膜中均为P表达模式,不典型增生内膜中30％（6／20）为D表达模式,内膜癌中均为D模式。正常内膜、简单型和复杂型增生、不典型增生、内膜癌RCAS1蛋白高水平表达率分别为0％（0／20）,9．1％（2／22）,45．0％（9／20）,68．0％（34／50）,各组间差异有统计学意义（P〈0．05）。RCAS1蛋白高表达与患者肌层侵犯深度、脉管侵犯、ERα阳性相关（P〈0．05）。免疫印迹法、RT—PCR结果与免疫组化结果一致。RCAS1mRNA的表达水平与ERamRNA呈显著正相关,而与ERβmRNA表达未显现相关性。结论RCAS1高表达与表达模式的改变可能参与子宫内膜从良性到恶性转变的过程,RCAS1协同ERα表达与子宫内膜癌的发展、浸润转移有关。