人苍白杆菌脂多糖的制备及致病性的初步研究

目的 对该院脑膜炎患者脑脊液中分离鉴定的人苍白杆菌进行脂多糖内毒素活性的初步研究。方法 用酚水法提取脂多糖作相关生物学活性试验。结果 人苍白杆菌脂多糖具有内毒素生物学活性,但其活性较大肠埃希菌脂多糖弱。结论 分离的人苍白杆菌脂多糖具有内毒素的活性,可能是该菌重要的致病因子,但其毒性低于大肠埃希菌脂多糖。     

嗜肺军团菌毒力岛基因聚合酶链反应分型鉴定

目的建立嗜肺军团菌毒力岛基因分型鉴定方法，探讨其致病特性和分布状况。方法根据GenBank公布的嗜肺军团菌核苷酸序列设计和合成嗜肺军团菌种和毒力岛基因鉴定引物，采用PCR法对25株军团菌属标准参考株，3株国内和20株广东分离嗜肺军团菌，53份临床标本和57份水样、进行嗜肺军团菌种和毒力岛基因分型鉴定。结果5株嗜肺军团菌标准株只有嗜肺军团菌1型（Philadelphia-1 ATCC 33152）12个毒力岛基因全阳性，其他4株只检出11个毒力岛基因。20株军团菌属中其他菌株，分别检出2—11个毒力岛基因；3株国内嗜肺军团菌检出11个毒力岛基因；广东地区分离的20株嗜肺军团菌，7株检出12个毒力岛基因，12株检出11个毒力岛基因，1株未检到毒力岛基因。53例病源不明性肺炎患者支气管洗液和痰液，PCR检测嗜肺军团菌DNA阳性5例（9．4％）。结论广东地区嗜肺军团菌广泛存在水源环境中，而且是医院感染性肺炎的重要病源之一。不同血清型嗜肺军团菌所含毒力岛基因不同，毒力岛基因与致病性相关。     

一种国产嗜肺军团菌抗原检测试剂盒的初步评价

目的:初步评价一种国产嗜肺军团茵抗原检测试剂盒.方法:采用细菌模拟标本,检测试剂盒的理论敏感性及特异性.结果:应用嗜肺军团茵抗原检测试剂可特异性地检测出嗜肺军团茵抗原,最低检出量为3×108 cfu/mL,与其他细茵抗原不发生交叉反应.结论:嗜肺军团茵抗原检测试剂具有简便快速的特点,有一定的特异性和敏感性.     

嗜肺军团菌主要毒力因子与细胞免疫反应

嗜肺军团菌是胞内的寄生菌,主要以细胞免疫为主,是引起社区获得性和医院内感染性肺炎的重要病原体,其致病性与毒力因子密切相关。Dot/IcmⅣ分泌系统是嗜肺军团菌的重要毒力因子,能诱发大量底物效应蛋白,激活免疫调控因子如NF-κB,调控嗜肺军团菌细胞内的生长繁殖。该细菌表面主要毒力因子如Mip蛋白、鞭毛蛋白和LPS脂多糖等,与嗜肺军团菌侵染和繁殖能力有关,在细胞免疫反应中具有重要作用。本文简要概述了嗜肺军团菌几个主要毒力因子、致病性以及与寄主免疫之间的相互关系。     

军团菌肺炎一例误诊

【病例】男,30岁。因咳嗽、咳痰、发热伴畏寒、气促20余天入院。入院前体温在38℃左右,曾在单位诊所拟诊为支气管炎,予麦迪霉素、对乙酰氨基酚、蛇胆川贝液治疗3天无效。1年前曾患肺炎已治愈。查体:体温37·6℃,脉搏90/m in,血压120/80 mmHg。消瘦体型,精神可,浅表淋巴结未触及;口唇甲床不发绀,无杵状指;胸廓呈桶状,右肺叩诊浊音,呼吸音减低,未闻及干湿性啰音;心界不大,律齐、无杂音;肝脾未触及,双下肢无水肿。实验室检查血、尿、粪常规及血红细胞沉降率、肝功能均未见异常。摄X线胸片示肺气肿,右下肺斑片状浸润影。诊断:急性支气管炎,肺部…     

军团菌选择性分离培养基及其实用性比较研究

目的探讨与改进嗜肺军团菌选择性分离培养基及其临床实用性评价。方法在BCYEα基础培养基中添加3种不同抗生素组合:CCCV、DGVP(含自配特种染料)和GVPC,以不含抗生素的BCYEα平板作对照,采用菌落计数法比较添加3种不同抗生素和染料的选择性分离平板对嗜肺军团菌生长的影响,同时比较3种选择性分离平板对空调冷凝塔水中嗜肺军团菌的分离率。结果在BCYEα DGVP和BCYEα GVPC平板上菌落计数(菌液稀释度在105~107之间)和BCYEα平板结果相类似,差异无统计学意义(P>0.05)。在BCYEα CCCV平板上生长菌落数只有前3种平板的1/2,差异有统计学意义(P<0.05)。从9个中央空调冷凝塔水中分离嗜肺军团菌,用BCYEα DGVP和BCYEα GVPC平板分离出5株嗜肺军团菌,而BCYEα CCCV平板仅分离出2株,不加抗生素的BCYEα平板未分离出军团菌。结论常规用BCYEα CCCV平皿对杂菌有较强的抑制作用,但对嗜肺军团菌亦有一定抑制作用,因而在实际应用中降低了嗜肺军团菌的分离率;BCYEα DGVP和BCYEα GVPC平皿(自制)对嗜肺军团菌的抑制作用微弱,而对杂菌有较强的抑制作用,提高了嗜肺军团菌的分离率。     

浅谈对军团菌病的研究

1军团菌病概述 1．1该病首发于1976年的美国一次军人聚会，故称作军团病。次年从死者肺组织中分离出一种新的病原体，1978年国际上正式将该病原体命名为嗜肺军团菌。随后欧洲、澳洲等不同国家和地区相继发现军团菌病例。1982年，我国南京首次证实了军团菌病，1989年北京、1994年上海也出现了军团菌病例。随着认识的不断加深，人们对军团菌病的警惕性不断提高。国际上多个国家已将军团菌肺炎定为法定传染病之列。     

佳木斯地区部分肺科现患嗜肺军团菌感染的血清学调查

本文用试管凝集法对佳木斯地区部分肺科病人进行了嗜肺军团菌（ＬＰ）血清学调查。共调查了１０２例，阳性２３例，抗体总阳性率２２．５４％。本地区以ＬＰ１、ＬＰ６、ＬＰ８、ＬＰ１２血清型为主，其中ＬＰ１型抗体阳性率高于其它各型。肺炎和ＣＯＰＤ阳性率最高。血清抗体滴度阳性率与年龄呈正相关。性别间无显著差异（Ｐ＞０．０５）。总之，本地区通过血清学证实有ＬＰ感染和ＬＰ病人存在。提示肺科现患，特别是年老体弱的肺内感染、ＣＯＰＤ病人应开展军团菌血清学监测，以便及时诊断和合理治疗。     

抗脂多糖单克隆抗体的制备及功能研究

摘 要 目的：制备广谱结合活性抗脂多糖单克隆抗体,并探讨其保护活性。 方法：用噬菌体展示技术筛选出模拟脂多糖保守结构的多肽;将模拟肽与蓝载体交联后免疫BALB/c小鼠并制备单克隆抗体;间接ELISA与免疫荧光检测其结合活性;小鼠体内、外实验检测其保护活性。结果：经过三次融合,筛选到一株具广谱结合活性的抗脂多糖单克隆抗体SMU-3A8;间接ELISA与免疫荧光检测显示其可以和4种商品化脂多糖及6种G-菌发生交叉反应;体外实验显示SMU-3A8可以部分抑制脂多糖刺激小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7产生NO;体内实验表明其可以延长致死量鼠伤寒杆菌感染BALB/c小鼠的生存时间、提高生存率。结论：在本实验中,我们成功制备了一株具广谱结合活性,对鼠伤寒菌感染小鼠模型有保护作用的抗脂多糖单克隆抗体;为脂多糖相关研究提供了一个有力工具。 关键词 脂多糖 单克隆抗体 噬菌体展示 模拟肽     

北京地区282例疑似军团病例血清学检查结果的初步分析

对北京地区各大医院送检的血清标本进行了实验室检查并对结果做了初步分析。发现在送检的282份血清标本中，军团菌抗体阳性率为20%。军团菌感染率按年龄、性别组别和季节无显著的差别。在58例阳性病例中．嗜肺军团菌12型(Lp12)为36%，Lp6型为31%，Lp1型为20%。其余血清型合计为13%。     

社区获得性军团菌肺炎21例临床分析

目的探讨社区获得性军团菌肺炎（CALP）的临床特征、诊断及治疗。方法分析我院2003年1月～2006年10月经免疫荧光法及血微量凝集法（MAT）检测军团菌血清抗体诊断明确的21例CAI。P的临床症状，实验室检查，影像学改变，阿奇霉素或莫西沙星的疗效。结果①21例CALP患者中，重症肺炎占57％。无基础疾病11例，糖尿病患者4例，慢性阻塞性肺病病患者4例。②主要临床症状发热≥38．0℃，干咳，头痛，肌肉关节酸痛，胸痛，多汗，腹痛、腹泻。血白细胞〉10×10^9／L72．7％，CRP〉100mg90．9％，低钠血症及丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、乳酸脱氢酶、血尿素氮增高〈50．0％。③胸部CT表现为肺实变、间质改变、渗出、网织状阴影及胸腔积液。病变累及2叶以上多见。④21例CALP患者经血清抗体检测分别为血清型Lp6，Lp3，Lp1，Lp4。⑤21例CALP患者（包括12例重症肺炎）经阿奇霉素500mg／d或莫西沙星400mg／d序贯治疗后痊愈。结论当重症社区获得性肺炎合并多系统损害时要考虑军团菌肺炎的可能。早诊断，尽早选用合适的抗菌药治疗至关重要，新大环内酯类抗生素和呼吸喹诺酮类抗菌药物是治疗军团菌肺炎的一线用药。     

嗜肺军团菌momp基因疫苗的制备及其免疫原性研究

目的构建真核重组质粒GFP-momp作为核酸疫苗,已构建的原核重组质粒pET-momp表达的蛋白作为蛋白疫苗,二者联合免疫BALB/c雌性小鼠,观察其免疫原性。方法 (1)以嗜肺军团菌DNA作为模板,扩增得到momp基因,并克隆至pEGFP-C1载体获得重组质粒GFP-momp。鉴定正确后,将其转染到NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察GFP-momp的表达。(2)选取BALB/c雌性小鼠60只,平均分为4组,即磷酸盐缓冲液(PBS)组(A组)、空质粒pEGFP-C1组(B组)、DNA疫苗组(C组)、联合疫苗组(D组)。以重组质粒GFP-momp作为DNA疫苗,重组质粒GFP-momp和MOMP蛋白作为联合疫苗,第1天A组肌肉注射PBS 50μL,B组注射pEGFP-C1 50μg,C、D组各注射GFP-momp50μg;第14天各组以相同剂量追加免疫1次;第21天A、B、C组用相同剂量再追加免疫1次,D组注射10μg纯化的MOMP蛋白。借助对各试验组小鼠的抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性等指标的动态检测,来评价DNA疫苗与蛋白疫苗的免疫原性。结果扩增出831bp的momp基因,构建重组质粒GFP-momp,转染入NIH3T3细胞并在细胞内表达出绿色荧光蛋白。在淋巴细胞增殖试验中:A组和B组比较差异无统计学意义(P0.05);C组和D组淋巴细胞增殖活性均高于B组,差异有统计学意义(P0.05);C组高于D组,差异有统计学意义(P0.05)。间接ELISA测定血清中抗原特异性抗体水平结果显示,A、B两组比较差异无统计学意义(P0.05);C、D两组均高于B组,差异有统计学意义(P0.05);D组抗体滴度高于C组,差异有统计学意义(P0.05)。CTL杀伤活性试验结果显示,A、B两组比较差异无统计学意义(P0.05);C、D两组均高于B组,差异有统计学意义(P0.05);D组杀伤活性高于C组,差异有统计学意义(P0.05)。结论成功构建momp基因的真核表达载体并在NIH3T3细胞中得到表达,并进一步得出嗜肺军团菌momp基因诱导产生的DNA疫苗和DNA-蛋白疫苗均能产生细胞免疫和体液免疫,具有免疫原性。     

环境水系分离嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳的分型研究

目的初步揭示中国环境水系嗜肺军团菌分离株的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型特征。方法分别以SfiI和AscI为限制性内切酶,使用PFGE对菌株进行分型和聚类分析。结果单独使用SfiI、AscI和联合使用两种内切酶分别将78株嗜肺军团菌分为47、48和60个型别,分型得到的Simpson差异指数分别为0.9833、0.9817和0.9933;同一水系中分离的菌株既有带型相同或者相似者,又有带型差异较大者;相同型别的菌株可在同一水系中跨年份存在。结论PFGE对嗜肺军团菌具有很好的分辨率;多个克隆系的菌株可以在同一水系中共存,某些克隆系的菌株可以跨年份存在;环境水系中存在优势克隆系,这些优势克隆系应该在今后军团菌的监测中引起注意。     

广东省惠州市集中空调系统冷却水及冷凝水中嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳分型分析

目的 分析广东省惠州市公共场所集中空调系统冷却水及冷凝水中分离的嗜肺军团菌的基因特征,初步建立惠州市嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型数据库。方法 采用PFGE技术,对2012-2016年惠州市公共场所集中空调系统冷却水及冷凝水中分离的35株嗜肺军团菌进行电泳分析获得指纹图谱,并用BioNumerics 6.6软件对其进行聚类分析。结果 35株嗜肺军团菌分为29种不同的PFGE带型,菌株间带型相似系数为21.70%~100.00%。每种带型包含1~3株菌,存在5组带型一样的菌株,不存在优势型别;相同PFGE型别的菌株均来源于同一场所;同一场所存在2种以上不同PFGE型别;部分场所的冷却水和冷凝水中分离的菌株存在相同PFGE型别;相同血清型别的菌株经PFGE分型后得到不同的图谱,各菌株间PFGE图谱差异较大。结论 惠州市公共场所集中空调冷却水及冷凝水中分离的嗜肺军团菌呈现基因多样性。     

嗜肺军团菌血清1型上海环境分离株的脂肪酸成分分析及其应用

目的分析上海不同地区和场所分离的嗜肺军团菌血清1型（LP1型）的菌体脂肪酸组成成分,并探讨利用脂肪酸组成分析对实验菌株进行鉴定和分型的可行性。方法应用气相色谱技术对36株LP1型上海环境分离株进行菌体脂肪酸成分分析,并利用MIDI公司的Sherlock软件系统对实验菌株进行鉴定和聚类分析。结果 36株LP1型上海环境分离株均被鉴定为嗜肺军团菌嗜肺亚种,其主要脂肪酸成分为异构16∶0酸、反异构15∶0酸、16∶0酸、2-羟基异构15∶0酸和w7c 16∶1酸。聚类分析结果为所有上海环境分离株的欧氏距离〈10。结论气相色谱法简便、快速,结合Sherlock软件系统可用于嗜肺军团菌的脂肪酸检测分析和鉴定。不同地区和场所分离的各实验菌株的脂肪酸组成无明显区别。